芹菜素对大鼠脑缺血再灌注后VEGF表达的影响及意义

目的:探讨芹菜素对大鼠脑缺血再灌注后VEGF的表达及意义。方法:实验选用91只雄性SD大鼠,随机分为假手术组(S组)、模型组(M组)、芹菜素组(A组)和地塞米松组(D组),后3组按照再灌注时间不同分为再灌注6 h、24 h、72 h、7 d各4小组,共13组。采用改良线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型,对大鼠进行神经行为学评分,脑组织TTC染色,应用免疫组织化学法检测大鼠脑切片VEGF的表达。结果:M组、A组和D组均出现不同程度的神经行为功能异常,A7 d组神经行为功能恢复明显好于其它2组(P0.05)。脑切片TTC染色显示M组、D组和A组均出现白色梗死灶,主要位于皮层和纹状体区;A24 h组白色梗死灶缩小。免疫组化结果显示大鼠脑缺血再灌注后M组、A组和D组各时点VEGF表达较S组增多(P0.05);A组与M组比较VEGF表达增多。结论:芹菜素改善脑缺血再灌注损伤,上调脑缺血再灌后VEGF的表达,促进大鼠脑缺血再灌后神经功能的恢复。     

脑缺血再灌注后大鼠血脑屏障通透性的免疫组织化学研究

目的:研究脑缺血再灌注后大鼠血脑屏障(BBB)通透性改变。方法:采用线栓法大鼠大脑中动脉闭塞的局灶性脑缺血模型,缺血1h后再灌注,分别于再灌注后0h、3h、5h、12h、及24h,采用免疫组织化学SABC法,观察内源性免疫球蛋白G(IgG)在脑组织中的表达。结果:再灌注0h、3h时,脑组织中未见IgG的表达。再灌注5h时,缺血侧大脑半球纹状体有局灶性的IgG表达。再灌注12h时,缺血侧纹状体及新皮层可见有广泛的IgG的表达。再灌注24h时,表达更加明显。结论:缺血1h再灌注3~5h时,BBB开始受损开放,通透性增加。纹状体的BBB较新皮层更易受损。再灌注12h、24h,外渗的血清蛋白累积增加。     

高血糖和脑缺血对树鼩皮层不同区域VEGF表达的影响

目的：研究高血糖及局灶性脑缺血条件下,树鼩皮层不同区域VEGF表达的变化,探讨脑缺血、高血糖与VEGF之间的相互关系。方法：用链脲佐菌素复制树鼩高血糖模型,并建立光化学诱导皮层局灶性脑缺血,观察缺血4 h、24 h及72 h的病理形态学改变并计数海马神经元密度,用免疫组化法测定上述时间树鼩缺血中心区、半暗带、对侧皮层VEGF表达的动态变化。结果：形态学观察显示,光化学反应后4 h照射区皮层可见梗塞灶;24 h病损达高峰;72 h伴随胶质细胞增生等修复性反应。相应时点高血糖加缺血组的损伤大于缺血组,以缺血后24 h(P<0.01)和72 h(P<0.05)尤为显著。免疫组化染色表明,缺血后4 h皮层缺血半暗区可见VEGF表达增加, 24 h达高峰,72 h减弱;单纯高血糖也使VEGF表达上调;高血糖加缺血组VEGF表达强于单纯高血糖组(P<0.05),但高血糖加缺血组与缺血组的同期值比较,无显著差异。结论：(1)在低等灵长类动物树鼩体内注射链脲佐菌素,并结合血栓性局部脑缺血方法学的应用能成功复制出实验性高血糖及脑缺血模型;(2)实验证明高血糖对局灶性脑缺血有恶化加重作用;(3)脑缺血及高血糖均可分别作为独立因素诱导VEGF的表达;但缺血与高血糖相加对VEGF表达未显示出叠加效应。     

黄芪注射液抑制脑缺血再灌注大鼠海马组织Apaf-1表达

 目的： 观察黄芪注射液对脑缺血再灌注大鼠海马组织凋亡蛋白酶激活因子1（Apaf-1）蛋白及其mRNA表达的影响。方法： 将健康雄性SD大鼠120只随机分为假手术组、脑缺血再灌注组、黄芪注射液干预组和溶剂对照组。采用四血管阻断法制备大鼠脑缺血再灌注模型,除假手术组外其余3组根据再灌注不同时点再分为0 h、0.5 h、2 h、6 h、24 h、72 h和120 h 7个亚组,于再灌注相应时点提取脑组织。采用免疫组织化学和Western blotting检测大鼠海马组织Apaf-1蛋白的表达,RT-PCR法检测Apaf-1 mRNA的表达。结果： 除0 h和120 h外,脑缺血再灌注组各个时点Apaf-1蛋白及mRNA表达均较假手术组增加 (P<0.05);与脑缺血再灌注组相比,黄芪注射液干预组各个时点Apaf-1蛋白及mRNA表达均显著减少 (P<0.05),而溶剂对照组各时点与脑缺血再灌注组相比则均无显著变化 (P>0.05)。结论： 黄芪注射液能抑制大鼠海马组织Apaf-1蛋白及mRNA表达,从而抑制脑缺血再灌注大鼠海马神经元的凋亡。     

黄芪对脑缺血再灌注损伤c-fos表达和细胞凋亡的影响

目的探讨黄芪注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的保护作用。方法采用线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉(MCA)血流2h,再灌注24h制成局灶性脑缺血再灌注损伤模型。将24只Wistar雄性大鼠随机分成假手术组、缺血再灌注组、黄芪组。造模前1h时黄芪组给与黄芪200mg/kg腹腔注射。假手术组、缺血再灌注组给予等剂量生理盐水。再灌注24h后断头取脑、切片,进行HE染色、c-fos免疫组化染色和细胞凋亡检测。结果缺血2h再灌注24h后,黄芪组和缺血再灌注组大鼠缺血侧皮层可检测到细胞凋亡细胞,黄芪组凋亡细胞数明显少于缺血再灌注组,假手术组未见凋亡细胞;黄芪组和缺血再灌注组大鼠缺血侧皮层c-fos阳性细胞数均高于假手术组,与缺血再灌注组相比,黄芪组大鼠缺血侧皮层c-fos表达降低。结论黄芪可抑制缺血再灌注损伤后缺血侧皮质的细胞凋亡。     

降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马Fas mRNA表达的调节作用

目的研究外源性降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马Fas mRNA表达的影响,探讨降钙素基因相关肽对缺血再灌注脑神经组织的作用。方法用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,应用原位杂交和显微图象分析方法检测局灶性脑缺血再灌注大鼠海马Fas mRNA的表达。结果假手术组大鼠海马未见Fas mRNA阳性表达;缺血再灌注组(缺血再灌注不同时间段6 h,12 h,24 h,48h,72 h)海马Fas mRNA明显过表达;注射CGRP后海马区Fas mRNA阳性表达细胞平均光密度值明显低于缺血再灌注组(P<0.01)。结论经颈动脉注入外源性CGRP下调缺血神经元Fas mRNA的表达,可能是外源性CGRP对缺血神经元保护作用的机制之一。     

丹酚酸B 诱导血管新生和缓解氧化应激对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织损伤的保护作用

目的:探究丹酚酸B(Sal B)对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织血管生成、氧化应激反应的影响以及对脑组织损伤的保护作用。方法:将40只SD大鼠分成4组:健康组(Ctrl);加药组:健康大鼠腹腔注射丹酚酸B 50 mg/kg体重;模型组:参考文献建立局灶性脑缺血再灌注(MCAO)大鼠模型;模型加药组(MCAO+Sal B):在建模前3 d向大鼠腹腔注射Sal B50 mg/kg BW,每天1次,再灌注后2 h给药;各组大鼠在建模后24 h处死。苏木素伊红(HE)染色检测各组大鼠脑组织病理损伤。TUNEL染色检测脑组织细胞凋亡。试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量。免疫组化检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达情况。Western blot检测血管内皮生长因子(VEGF)及其受体VEGFR2的表达,检测p38、Hsp27的磷酸化水平。结果:与对照组相比,模型组大鼠脑组织出现显著的组织病变;凋亡细胞比率明显升高(P0. 01); SOD含量明显下降,MDA和LDH的含量明显上升(P0. 01); ICAM-1的表达显著上调(P0. 01); VEGF及受体分子VEGFR2的表达显著下调(P0. 01); p38和Hsp27的磷酸化水平显著降低(P0. 01)。模型加药组与模型组相比较,大鼠脑组织病理损伤明显减轻;凋亡细胞显著减少(P0. 01); SOD含量显著上升,MDA和LDH的含量显著下降(P0. 01); ICAM-1蛋白表达显著下调(P 0. 01); VEGF和VEGFR2的表达显著上调(P 0. 01); p38和Hsp27的磷酸化水平显著提高(P 0. 01)。结论:丹酚酸B可能通过诱导血管新生、缓解氧化应激反应,对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织具有保护作用。     

缺血再灌注大鼠脑内促红细胞生成素表达的变化

探讨缺血再灌注大鼠脑内促红细胞生成素（erythropoietin,Epo）表达的变化,揭示短暂缺血时神经系统发生内源性脑保护的机制。采用线栓法制作大鼠局灶性缺血再灌注模型,以免疫组织化学和逆转录聚合酶链式反应（PT-PCR）技术,检测缺血再灌注不同时间脑内Epo的表达变化。脑缺血再灌注不同时间Epo蛋白在脑内表达广泛,主要颁布在缺血侧基底节区、海马和部分皮层。在缺血再灌注1h和6h,基底节区Epo蛋白和mRNA表达较高,再灌注12h,基底节区Epo表达减少,额顶皮质Epo表达增加,再灌注24h,额顶皮质Epo表达达到高峰,48h开始下调。因此,促红细胞生成素在缺血再灌注大鼠脑内表达的变化,可能是机体发生内源性脑保护的机制之一。     

大鼠脑缺血/再灌注损伤后梗死灶周围水通道蛋白4与血脑屏障通透性的动态变化

目的： 研究大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤对梗死灶周围脑组织水通道蛋白4（AQP4）的表达及血脑屏障通透性的影响。〖HJ1.7mm〗方法: 健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为脑缺血/再灌注6 h、24 h、48 h、7 d组及相应时点的假手术组，每组各6只。采用线栓法阻塞大脑中动脉（MCAo）建立局灶性脑缺血/再灌注模型，于相应时点进行神经症状评分后断头取脑，采用免疫组织化学方法检测大鼠脑缺血/再灌注后不同时点梗死灶周围AQP4的表达及IgG的渗出以评价血脑屏障通透性的改变。结果: (1)大鼠脑缺血/再灌注损伤后神经功能缺失症状较假手术组明显（P<0.01），6-48 h呈逐渐加重趋势，72 h后有所缓解，7 d恢复正常；(2)大鼠脑缺血/再灌注6 h时AQP4表达增加不明显，至再灌注24 h后表达明显增加（P<0.05），7 d仍处于表达高峰；(3)再灌注6 h时IgG渗出不明显，再灌注24 h后开始增加（P<0.05），于再灌注48 h IgG渗出达高峰后开始下降; (4)大鼠脑缺血/再灌注损伤后血脑屏障通透性的增强与AQP4表达的增加呈显著相关(P<0.01)。结论: 大鼠脑缺血/再灌注损伤后AQP4表达增加与血脑屏障通透性增强密切相关，两者是脑缺血/再灌注损伤后脑水肿发生的重要因素。     

复方丹参对大鼠脑缺血再灌注后大脑皮层神经细胞凋亡和Bcl-2 mRNA表达的影响

为了探讨中药复方丹参对大鼠局灶性脑缺血再灌注后大脑皮层神经细胞凋亡及Bcl-2mRNA表达的影响和保护作用,本研究采用大脑中动脉内栓线阻断法(MCAO)造成局灶性脑缺血再灌注模型,应用原位末端标记(TUNEL)和原位杂交技术检测大鼠大脑皮层神经细胞凋亡和神经细胞Bcl-2mRNA的表达,并进行图像分析。结果显示:缺血再灌注组凋亡神经细胞主要位于缺血侧大脑皮层缺血边缘区(半暗区);缺血侧大脑皮层缺血边缘区神经细胞Bcl-2mRNA的表达在缺血再灌注2h后升高,随着缺血再灌注时间的延长逐渐增强;复方丹参保护组神经细胞Bcl-2mRNA的表达明显强于缺血再灌组(P<0.01),凋亡神经细胞数明显低于缺血再灌组(P<0.01)。上述结果说明复方丹参可通过上调神经细胞Bcl-2mRNA的表达,抑制神经细胞凋亡,减轻缺血再灌注对大鼠大脑皮层神经细胞的损伤。     

主动脉弓手术停循环与脑灌注期间脑区域氧饱和度监测

目的:明确深低温停循环(DHCA)与脑灌注相结合进行主动脉弓手术期间脑区域氧饱和度监测(rSO2)的价值.方法:28位病人的rSO2被监控,数据被统计分析.结果:DHCA的平均停循环时间是(59±17.1)min,外科手术的结果比较满意,住院期间死亡2例,死亡率(5.6%).虽然全部病人兼有脑灌注支持,rSO2在DHCA期间仍然逐渐下降,平均降到(47±9.7)%,在复温末期又恢复到它的最初水平.有2位病人rSO2降低最明显,在长达83和88min的DHCA之后rSO2分别从57%和56%下降到27%和29%,这2位病人最终发展永久的神经系统损害.我们同时考察了End-rSO2和△-rSO2两个参数,在DHCA期间,脑灌注的灌注流速和这两个参数都存在线性相关.结论:(1)尽管DHCA和一定方式脑灌注的结合能提供大脑更有效的保护,这种保护措施仍然有一个安全的时限;(2)NIRS能实时监控脑rSO2,可用于监测大脑保护是否充分,有利于DHCA下脑灌注参数的凋整.     

Decision strategies for cerebral dysfunction IV: Determination of cerebral dysfunction

The present study examined the contribution of tests that compose the Impairment Index with regard to their ability to predict brain impairment. The investigation further examines the ability of various other tests, chosen because of their observed usefulness in detecting brain impairment. Subjects composing the brain damaged group (n = 298) were found to be impaired on both CT and EEG examinations. The pseudo-neurological control group (n = 193) consisted of patients referred for testing yet all non-neuropsychological tests were normal. Discriminant analyses were conducted to determine the weightings of each test as well as to determine the overall prediction accuracies of three groupings of tests. These analyses demonstrate that tests, not comprising the Impairment Index, are of predictive value in determining dysfunction: Thurstone Word Fluency and a 60 minute delayed recall from the WMS. Overall prediction accuracies of the various test groupings ranged from 73.52% to 78.02%. No statistically significant reduction of accuracy resulted with cross validation. All tests of statistically predictive value and all prediction results with their corresponding discriminant formulas are reported as well as a discussion of the application of these findings.     

Physiopathology of cerebral ischemia

In spite of significant advances made in the technology to image the intracranial contents and to measure the metabolic activity of discrete brain sites, the factor(s) responsible for the death of ischemic neurons remains unresolved. Several potential culprits have been tried: (1) "energy failure", or depletion of high-energy phosphates, occurs very quickly after ischemia, but energy metabolites recover even in tissues where functional return does not occur; (2) "tissue lactacidosis" enhances ischemic cell necrosis, but this factor is not the indispensable cause of neuronal necrosis because acidosis is minimal or nonexistent under conditions of hypoglycemia and seizures; (3) "impairment of the microcirculation" may be a contributing factor, but such microcirculatory impairment cannot be the initiating event as it is known that irreversible neuronal injury precedes the development of microcirculatory abnormalities; (4) the effects of "excitatory neurotransmitters", especially glutamate, may explain the "delayed neuronal death" or the protracted necrosis of neurons in the CA1 sector of the hippocampus; (5) ionic pump alterations: studies of experimental myocardial ischemia tend to support a contributory role of Ca2+ in the aggravation of cell necrosis; however, lack of an experimental model in which steady-state conditions can be maintained has left unresolved the potential participation of calcium ions in ischemic cell necrosis; (6) the same statement, concerning the lack of an experimental model, can be made about the role of free-radical species; oxygen free radicals and superoxides are abundant in the reperfusion stage of ischemic injury, but it is unclear how significant their contribution might be as initiators of ischemic necrosis; and (7) the "ischemic penumbra" is a zone or portion of brain tissue that is sufficiently hypoperfused as to be functionless, but where the cells are likely to recover once normal perfusion is reestablished. Further understanding of the "penumbra" may prove crucial in future studies of brain ischemia.     

Pathology of cerebral infarction

Classification of cerebral infarctions is presented in connection with their etiology and pathogenesis. The zones of cerebral infarction, the ultrastructural and synthesizing characteristics of clear, dark, and pyknomorphic neurons are described in detail. The results of pathological examinations of cerebral infarctions are compared with experimental data obtained in hypoxia conditions of the nervous system by means of electron microscopy and ultrastructural autoradiography.     

Effects of leu-enkephalin analog on cerebral circulation in cerebral ischemia of different severity

Leu-enkephalin analog reduces cerebral circulation in mild and has no effect in moderate ischemia, while in severe cerebral ischemia it causes periodic compensatory enhancement of cerebral circulation in experimental animals, instead of its monotonous reduction, thus ensuring 100% survival during a 6-h period, whereas in the control group 60% animals die within 3 h. Translated fromByulleten' Eksperimental'noi Biologii i Meditsiny, Vol. 126, No. 11, pp. 516–519, November, 1998     

构建大脑中动脉阻塞脑缺血模型大鼠的类型分析

背景：线栓法造成短暂性大脑中动脉阻塞是研究大鼠局灶性脑缺血普遍使用的模型制作方法。但制作大鼠脑缺血模型的类型存在一定差异,可能导致实验结果的偏差。 目的：分析大脑中动脉阻塞线栓法制作大鼠脑缺血模型的类型及其影响因素。 方法：雄性SD大鼠166只,参照Longa线栓法造模,术后24 h行MRI扫描,根据扫描结果将大鼠分成皮质梗死组、皮质下梗死组及无梗死组,分析造模时线栓插入的深度。 结果与结论：皮质梗死组、皮质下梗死组和无梗死组大鼠的线栓插入深度分别为(19.9±0.9),(19.0±1.1)和(17.7±1.3) mm,皮质梗死组大鼠的线栓插入最深,而无梗死组的线栓插入最浅(P < 0.01)。提示插入深度不同导致的大鼠脑梗死的类型也不同,线栓插入越深,皮质梗死的概率可能越大。