白细胞介素—12和白细胞介素—13在儿童哮喘中作用的研究

目的：研究白细胞介素－12（IL－12），白细胞介素－13（IL－13）在哮喘发病中的作用。方法：用逆转录（RT）－聚合酶链反应（PCR）法半定量分析了哮喘急性发作期及正常对照组儿童外周血单个核细胞（PBMC）中IL－12，IL－13mRNA表达水平的变化，同时对IgE水平进行了检测。结果：哮喘组IL-12mRNA表达减少，IL－13mRNA表达增多，病情越重，IL－12mRNA表达越少，IL－13mRNA表达越多，无论IgE升高与否，与对照组比较，IL－12，IL－13mRNA表达均存在显差异，结论：IL－12，IL－13可能是构成气道慢性炎症的各类因素之一。     

白细胞介素-1和白细胞介素-10基因多态性与脓毒症发病的相关性研究

目的：探讨脓毒症患者白细胞介素-1（IL-1）和IL—10基因单核苷酸多态性（SNP）的频率分布以及与脓毒症易感性的相关性，观察不同多态性基因型对细胞因子表达的影响。方法：选择2001年10月至2004年12月在该院普通外科住院的181例患者，分为脓毒症组（100例）和全身炎症反应综合症（SIRS）组（81例），以150例健康人群作为对照组。取外周血白细胞提取基凶组DNA，用PCR扩增限制性内切酶长度多态性的方法，检测IL-1基因上＋3953T、IL-10基因上-592A和-1082A，共3个SNP。在诊断为SIRS或脓毒症24h内取外周血单个核细胞提取总RNA，用RT—PCR法检测IL-1和IL-10mRNA的表达；同时取血浆用ELISA法检测细胞因子蛋白表达。结果：SIRS组和脓毒症组中，＋3953T、-592A出现的频率明显高于对照组。在脓毒症早期，IL-1mRNA及蛋白的表达水平在＋3953C／T组明显高于C／C组；而IL-10两个SNP对脓毒症早期的IL-10表达水平，无明显的影响作用。结论：该研究显示，IL-1及，IL-10基因上SNP差异可能是脓毒症患者易感的原因之一。在脓毒症发生机制中，有促炎介质和抑炎因子的共同参与，其表达水平与SIRS及脓毒症的发生和严重程度相关。     

诱导痰技术在检测哮喘气道炎症中的应用

目的：探讨诱导痰技术在哮喘气道炎症检测方面的应用价值。方法：对12例正常人,11例缓解期哮喘患者及10例急性发作期哮喘患者进行痰液诱导测试,并对受试者血浆及诱导痰白细胞介素－8（IL－8）、嗜酸细胞阳离子蛋白（ECP）、丙二醛（MDA）水平进行测定比较。结果：33例受试者中32例完成了测试;急性发作期哮喘患者的血浆及诱导痰IL－8水平、ECP水平、MDA水平与缓解期哮喘患者相比显著增高（P均小于0．01）：而缓解期哮喘患者的血浆及诱导痰IL－8、ECP、MDA水平仍明显高于正常志愿者（P均小于0．05）;且哮喘患者诱导痰的IL－8、ECP、MDA水平明显高于其血浆的IL－8（P＜0．05）、ECP（P＜0．01）、MDA（P＜0．01）水平。结论：诱导痰技术安全、可靠;诱导痰IL－8、ECP、MDA水平可用于监测哮喘气道炎症。     

哮喘患儿诱导痰中嗜酸粒细胞与白介素-5改变意义研究

目的探讨哮喘患儿诱导痰中嗜酸粒细胞（EOS），白介素-5（IL-5）与哮喘发病的关系，并评价诱导痰在小儿哮喘研究中的应用。方法对30例住院的急性支气管哮喘患儿（哮喘组），30例健康儿童（对照组），15例经规范化糖皮质激素吸入治疗6～12月的哮喘缓解儿童（缓解组）用5％高渗盐水进行超声雾化诱导痰液，以酶联免疫法（ELISA）测定诱导痰中IL-5水平，并同时进行诱导痰中EOS计数。结果EOS与白介素-5在哮喘患儿诱导痰中有过度表达，提示EOS与IL-5在哮喘发病中起十分重要的作用。诱导痰检查具有安全，简单，结果重复性强的优点，能较好的反映患儿气道慢性炎症，对于小儿哮喘的研究具有较大的价值。     

哮喘急性发作与白介素-6、白介素-8及可溶性细胞间黏附分子-1关系的临床研究

目的：探讨白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）及可溶性细胞间黏附分子-1（sICAM-1）与支气管哮喘（哮喘）急性发作的关系。方法：对哮喘急性发作组和缓解组患者取静脉血,离心后取血清,采用酶联免疫法（ELISA）测定IL-6、IL-8及sICAM-1水平,同时以20例正常人作为对照组。结果：哮喘急性发作组血清IL-6、IL-8及sICAM-1较缓解组及对照组明显升高,差异有统计学意义（P〈0.01）,缓解组血清IL-8和sICAM-1水平比对照组高,差异有统计学意义（P〈0.01）,缓解组血清IL-6水平与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：IL-6、IL-8及sICAM-1参与哮喘的气道炎症反应,而且哮喘缓解期患者的气道炎症反应持续存在。     

白细胞介素-9在哮喘诱导痰中的表达及意义

目的探讨白细胞介素-9（IL-9）在支气管哮喘气道炎症中的作用。方法收集支气管哮喘患者31例，正常对照组15例。用夹心酶联免疫吸附法测定诱导痰上清液IL-9、IL-5及IL-8浓度；用CAP系统通过酶联免疫荧光法测定嗜酸细胞阳离子蛋白（ECP）的浓度。结果哮喘发作期组IL-9、嗜酸粒细胞（EOS）、IL-5和ECP水平明显高于哮喘缓解期组（P均〈0．01）；哮喘发作期组和缓解期组的IL-9、IL-5、ECP及EOS明显高于正常对照组（P均〈0．01）。哮喘发作期组IL-9浓度分别与EOS和IL-5浓度呈正相关（r=0．39，P=0．025；r=0．542，P=0．001），哮喘发作期组IL-8浓度与中性粒细胞百分比呈正相关（r=0．881，P〈0．001）；在哮喘发作期的中、重度患者中，IL-9与IL-8水平呈正相关（r=0．528，P=0．002）。结论IL-9与哮喘气道内的EOS、IL-5及ECP水平密切相关，在哮喘发作期尤为明显，表明IL-9参与哮喘患者气道炎症过程。     

哮喘患者诱导痰白细胞介素-17A与基质金属蛋白酶-9水平测定及其意义

目的测定不同严重程度支气管哮喘患者诱导痰上清液白细胞介素17A（IL-17A）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、白细胞介素-8（IL-8）的水平,探讨气道慢性炎症的特点及可能机制。方法按标准纳入慢性持续哮喘患者41例：健康对照者15例,采用诱导痰技术对痰炎性细胞进行分类并采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测痰上清液IL-17A、IL-8、MMP-9水平,并进行相关性分析。结果重度组患者诱导痰中性粒细胞比值[（62．6±15．7）％]与正常对照组[（26．3±10．3）％]、轻度组[（42．3±18．7）％]及中度组[（46．1±14．3）％]比较差异均有统计学意义（P〈0．01或0．05）;重度哮喘患者嗜酸性粒细胞比值[（8．2±3．9）％]与轻度组[（4．9±3．4）％]及对照组[（1．0±0．8）％]比较增高（P〈0．01或0．05）,与中度组[（5．4±3．3）％]比较差异无统计学意义（P〉0．05）;诱导痰上清液IL～17A水平轻度组[（154±91）pg／ml]和对照组[（55±23）pg／ml]与重度组[（262±162）pg／ml]比较差异有统计学意义（P〈0．05）,且各组哮喘患者与正常对照组比较均增高（P〈0．01）;重度组MMP-9水平[（451±251）ng／ml]与轻度、中度组患者[（166±99）ng／ml,（189±110）ng／ml]及对照组[（158±109）ng／ml]比较差异均有统计学意义（P〈0．01）;轻度、中度和重度哮喘患者诱导痰IL-8水平[（387±227）pg／ml,（390±194）pg／ml,（480±217）pg／ml]与健康对照者[（203±104）pg／ml]比较差异有统计学意义（P〈0．01）。诱导痰中性粒细胞比值与IL-17A、IL-8、MMP-9呈正相关（r=0．323,P〈0．05;r=0．493,P〈0．01;r=0．344,P〈0．01）。结论中性粒细胞浸润性气道炎症是重度持续性哮喘的重要特征,IL-17A、IL-8、MMP-9构成的复杂炎症介质网络可能是气道损伤的关键机制之-。     

咳嗽变异性哮喘患者激发试验后白介素水平的变化

目的研究咳嗽变异性哮喘（CVA）患者激发试验后外周血单核细胞中白介素-4、5及白介素-13水平，探讨患者体内炎症改变。方法变异性哮喘患者接受组织胺支气管激发试验后取血，应用ELISA测定外周血单核细胞（PBMC）中白介素水平。结果CVA组的PBMC中的interleukine（IL）-5水平增高，IL-4、IL-13水平降低，IL-2水平改变不明显。结论CVA患者激发试验后几-4、IL-5、IL-13水平异常。     

川芎嗪对哮喘大鼠Th2型细胞因子作用的研究

目的 探讨川芎嗪对哮喘大鼠白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-13（IL-13）水平的影响及其防治哮喘的作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松组、小剂量及大剂量川芎嗪组、联合用药组，以卵蛋白致敏和激发制备大鼠哮喘模型，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL4、IL—13的水平。结果 哮喘模型组BALF中IL-4、IL—13水平均高于正常对照组（P〈0．001）；地塞米松组和川芎嗪治疗各组均显著低于哮喘模型组（P〈0．001）；川芎嗪大剂量组和联合用药组降低IL-4和IL—13的作用与地塞米松组无显著性差异（P〉0．05）；川芎嗪大剂量组降低IL-4的作用与川芎嗪小剂量组无显著性差异（P〉0．05），川芎嗪大剂量组降低IL—13的作用优于川芎嗪小剂量组（P〈0．05）；BALF中IL-4和TL—13水平呈显著正相关（r=0．714，P〈0．01）。结论 川芎嗪通过抑制IL-4和IL—13的水平而抑制哮喘气道炎症。     

Th17转录因子RORγt和BATF及Th17相关细胞因子在中性粒细胞亚型哮喘发病中的作用

目的：检测中性粒细胞亚型哮喘（NA）患者痰上清中辅助性T细胞17（Th17）特异性转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt（RORγt）、B细胞转录激活因子（BATF）及外周血中Th17细胞相关细胞因子白细胞介素8（IL-8）、白细胞介素17（IL-17）和白细胞介素22（IL-22）表达水平,探讨其在NA发病中的作用。方法：以56例支气管哮喘患者为研究对象,4.5%生理盐水雾化诱导痰,经细胞MGG染色进行哮喘的炎症亚型分型,分为嗜酸性粒细胞亚型哮喘（EA）组（26例）和NA组（30例）,以常规体检者为健康对照组（NC组,28人）。实时荧光定量PCR（RT-PCR）法检测痰上清中BATF和RORγt mRNA表达水平。空腹抽取各组研究对象肘静脉血10 mL,Ficoll密度梯度离心后分离外周血单个核细胞（PBMC）,ELISA法测定血清中IL-8、IL-17和IL-22蛋白表达水平,流式细胞术检测PBMC中Th17细胞（CD4⁺IL-17⁺细胞）的百分率。结果：与NC组和EA组比较,NA组患者血清中IL-8、IL-17和IL-22表达水平均明显升高（P<0.05）;与NC组比较,EA组患者血清中IL-8、IL-17和IL-22表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。与NC组和EA组比较,NA组患者痰上清中BATF和RORγt mRNA表达水平明显升高（P<0.01）。与NC组和EA组比较,NA组患者PBMC中Th17细胞百分率均明显升高（P<0.01）;与NC组比较,EA组患者PBMC中Th17细胞百分率差异无统计学意义（P>0.05）。结论：IL-17转录因子RORγt和BATF参与了NA患者气道炎症发生过程,且Th17细胞及其相关细胞因子IL-17和IL-22的异常表达与NA的全身反应有关联。     

R848对哮喘患儿外周血中IFN-γ、IL-33和IgE表达的影响及临床意义

目的:检测R848对哮喘患儿外周血中干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-33（IL-33）和IgE表达的影响及临床意义。方法:收集2018年6月—2020年5月在我院接受治疗的急性发作期哮喘患者125例,临床缓解期患者40例,分离培养外周血单个核细胞（PBMC）。ELISA实验检测PBMC分泌IFN-γ、IL-33和IgE的水平,qRT-PCR检测急性发作期哮喘患者PBMC中Toll样受体（TLR）7/8 mRNA的相对表达水平,Pearson分析急性发作期哮喘患者IFN-γ、IL-33和IgE与TLR7/8 mRNA的相对表达水平的相关性。ELISA实验检测不同浓度R848（0 mg/L、0.1 mg/L、1 mg/L、10 mg/L、100 mg/L）刺激急性发作期哮喘患者PBMC 24 h后IFN-γ、IL-33和IgE的水平。分析R848 10 mg/L刺激急性发作期哮喘患者PBMC细胞6 h、12 h、24 h、36 h、48 h后IFN-γ、IL-33和IgE水平的变化。结果:急性发作期哮喘患者外周血中PBMC分泌IFN-γ的水平低于临床缓解期,分泌IL-33和IgE的水平高于临床缓解期（均P<0.05）;IL-33水平与TLR7/8 mRNA相对表达水平呈负相关（r=-0.887,P<0.001;r=-0.910,P<0.001）,IFN-γ水平与TLR7/8 mRNA相对表达水平呈正相关（r=0.818,P<0.001;r=0.808,P<0.001）,IgE水平与TLR7 /8 mRNA相对表达水平呈负相关（r=-0.850,P<0.001;r=-0.838,P<0.001）。R848刺激PBMC细胞24 h后,IL-33和IgE水平在R848 1 mg/L时降低至R848 10 mg/L后趋于平稳（F=56.231、42.310,均P<0.05）。IFN-γ水平在R848 0.1 mg/L时逐渐升高至R848 10 mg/L后趋于平稳（F=62.352,P<0.05）。R848 10 mg/L刺激PBMC 6~48 h,IL-33和IgE水平在12 h时逐渐降低至36 h后趋于平稳（F=32.658、36.521,均P<0.05）,IFN-γ在12 h时逐渐增加至36 h后趋于平稳（F=42.321,P<0.05）。结论:R848可抑制急性发作期患者外周血中PBMC分泌IL-33和IgE,促进IFN-γ的分泌,具有一定的抗炎作用,有望应用于哮喘的治疗。     

哮喘中IL—5和IL—10基因表达及其相关性研究

３１只健康豚鼠分为哮喘组、地塞米松干预组及对照组。测定各组豚鼠肺泡灌洗液细胞成分,应用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测支气管组织白细胞介素－５（ＩＬ－５）和白细胞介素－１０（ＩＬ－１０）ｍＲＮＡ表达强度。结果显示,哮喘组豚鼠肺泡灌反。ＩＬ－５ｍＲＮＡ表达与ＥＯＳ百分比呈正相关,而与ＩＬ－１０ｍＲＮＡ表达呈负相关。说明ＥＯＳ,ＩＬ－以正相关参与了哮喘发病。哮喘时ＩＬ－１０表达受抑制,这可能是炎症细胞因子ＩＬ－５     

射干麻黄汤对哮喘豚鼠气道EOS凋亡、IL-5mRNA及IL-10mRNA表达的影响

目的 探讨中药射干麻黄汤对哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞(EOS)凋亡、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)水平、白细胞介素(IL)-5mRNA及IL-10mRNA表达水平的影响.方法 40只健康雄性Hartley系豚鼠随机分为射干麻黄汤组、地塞米松组、哮喘组和正常对照组.采用原位末端标记技术(TUNEL)、荧光酶标记法和RT-PCR技术检测BALF中EOS凋亡、ECP水平、IL-5mRNA及IL-10mRNA表达水平.结果 射干麻黄汤组BALF中的EOS明显较哮喘组低,EOS凋亡率明显较哮喘组高(P＜0.01); ECP水平明显较哮喘组低(P＜0.05);IL-5mRNA水平明显较哮喘组低,IL-10mRNA水平明显较哮喘组高(P＜0.05).结论 射干麻黄汤可以通过减少IL-5mRNA的表达,增加IL-10mRNA的表达有效抑制哮喘豚鼠气道EOS的上升,增加EOS的凋亡;降低ECP水平.     

中药循经敷贴对哮喘豚鼠肺组织IL-10 mRNA表达的影响

目的:探讨中药循经敷贴治疗哮喘的作用机制。方法:采用Hutson法豚鼠模型,治疗组隔日诱喘后用中药敷贴30 min,对照组隔日诱喘后采用生理盐水浸润纱布敷贴,比较记录诱喘潜伏期时间。两周后处死豚鼠,取肺组织,用半定量RT-PCR法比较IL-10mRNA的表达。结果:中药循经敷贴能显著延长豚鼠诱喘潜伏期,提高哮喘豚鼠肺组织IL-10mRNA的表达。结论:提高IL-10mRNA的表达可能是中药循经敷贴治疗哮喘的重要机制之一。     

Expression of Interleukin-17 in Lung and Peripheral Blood of Asthmatic Rats and the Influence of Dexamethasone

The expression of interleukin-17(IL-17) in lung and peripheral blood of asthmatic rats and the influence of dexamethasone,and the role of IL-17 in the pathogenesis of asthma were investigated.Thirty Sprague-Dawley(SD) adult rats were randomly divided into three groups(n=10 in each group):normal group,asthmatic group,and dexamethasone-interfered group.Rat asthmatic model was established by intraperitoneal(i.p.) injection of 10% ovalbumin(OVA) and challenge with 1% OVA via inhalation.Rats in dexamethasone-interfered group were pretreated with dexamethasone(2 mg/kg,i.p.) 30 min before each challenge.The expression of IL-17 protein in serum and bronchoalveolar lavage fluid(BALF) was detected by ELISA.The expression of IL-17 mRNA in peripheral blood mononuclear cells(PBMC) and BALF cells was semi-quantitatively detected by RT-PCR.The expression of IL-17 protein in serum and BALF of asthmatic rats was significantly elevated as compared with normal rats and dexamethsone-interfered rats(P<0.01),and there was significant difference between normal rats and dexamethsone-interfered rats(P<0.05).The expression of IL-17 mRNA in PBMC and BALF cells of asthmatic rats was markedly increased as compared with normal rats and dexamethsone-interfered rats(P<0.01),and significant difference was found between normal rats and dexamethsone-interfered rats(P<0.05).It was concluded that the expression of IL-17 was increased significantly in asthmatic rats and could be inhibited partly by dexamethasone,suggesting that IL-17 might play an important role in the pathogenesis of asthma as an inflammation regulation factor.     

IL-17在哮喘小鼠模型中表达及其对肥大细胞IL-6分泌的影响

目的 :研究白细胞介素(interleukin,IL)-17在哮喘小鼠模型中的表达,观察其对肥大细胞IL-6分泌的影响。方法:BALB/c小鼠随机分为对照组和哮喘组,分别用等量磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution,PBS)和卵清蛋白(ovalbumin,OVA)干预,检测肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中细胞总数及嗜酸性粒细胞(eosnophils,EOS)数验证模型的成功建立。应用逆转录-聚合酶链反应法、酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测两组小鼠肺组织中IL-17m RNA、BALF及血清中IL-17的表达差异。细胞实验分为对照组和IL-17组,分别予等量培养基和IL-17干预小鼠肥大细胞株(P815)后收集上清,用ELISA检测IL-6的水平。结果 :哮喘组BALF中细胞总数及EOS计数较对照组显著升高(P<0.05),模型建立成功。哮喘组肺组织中IL-17 m RNA、BALF及血清中IL-17表达较正常组显著升高(P<0.05)。细胞水平的研究发现IL-17组P815上清中IL-6表达较正常组显著升高(P<0.05)。结论 :IL-17在OVA诱导哮喘小鼠模型中表达升高。IL-17刺激肥大细胞分泌IL-6,可能在哮喘的发病中起促进作用。     

哮喘患者血清G-CSF和IL-10的变化

目的探讨哮喘患者血清粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和白细胞介素10(IL-10)的变化.方法采用Elisa双抗体夹心法检测患者血清G-CSF和IL-10水平.结果哮喘患者血清G-CSF明显高于对照组(P＜0.01):合并肺炎组血清G-CSF最高;治疗后血清G-CSF明显下降(P＜0.01);血清IL-10明显低于对照组(P＜0.01);而治疗后血清IL-10明显上升(P＜0.01);血清C-CSF与IL-10呈负相关(r=-0.732,P＜0.01).结论哮喘患者血清G-CSF升高,IL-10降低,二者参与哮喘病理炎症发展:检测G-CSF和IL-10对临床治疗有一定指导意义.     

哮喘患者外周血调节性T细胞和Th17细胞数量及其转录因子的变化

[摘要] 目的： 观察哮喘患者外周血CD4+CD25+Foxp3+、CD4+IL-17+细胞的百分比和Foxp3、白介素-17(IL-17)、RORγt mRNA的表达水平的变化与哮喘发病的关系。方法： 分别取23例哮喘缓解期患者、25例哮喘急性发作期患者和20例健康人（对照组）的外周血单个核细胞（PBMC）,免疫磁珠阴选CD4+T细胞,采用Foxp3、IL-17胞内染色的方法,通过流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+以及CD4+IL-17+细胞的百分比,应用RT-PCR检测Foxp3、IL-17、RORγt mRNA水平。结果： 免疫磁珠阴选CD4+T细胞纯度达90％以上。急性发作组患者外周血CD4+CD25+Foxp3+细胞百分比以及Foxp3 mRNA水平较对照组和缓解组明显降低（P＜0.01）,而缓解组和对照组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;急性发作组CD4+IL-17+细胞比例以及IL-17、RORγt mRNA表达较对照组和缓解组明显增高（P＜0.01）,而缓解组亦明显高于对照组（P＜0.05）。结论： Treg/Th17失衡可能和哮喘发病密切相关。