人卵巢癌细胞特异CTL系的免疫学特性初步研究

目的 探讨人卵巢癌细胞体外刺激、诱导的肿瘤特异细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对靶细胞的杀伤活性。方法 应用建株的人卵巢癌细胞（OVA－319），在体外定期刺激、诱导肿瘤患者外周血淋巴细胞，经微量淋巴细胞毒试验和流式细胞术分别测定扩增的淋巴细胞组织相容性白细胞抗原（HLA）Ⅰ类分子表型和膜表面免疫标志物，并通过4－甲基偶氮唑盐（MTT）法分析其对肿瘤细胞的杀伤活性。结果 经卵巢癌细胞刺激、诱导3周后扩增的淋巴细胞主要为T细胞抗原受体（TCR）－α、β及CD8阳性的CTL，具有明显特异性杀伤肿瘤细胞的作用，并发现经OVA－319细胞刺激、诱导后不同个体的卵巢癌患者CTL的杀伤活性与效靶细胞的HLA－A、B位点相同数成正比。结论 肿瘤细胞体外激活的CTL具有特异杀伤靶细胞作用，提示CTL特异杀伤作用与刺激细胞、靶细胞及本身CTL表型的HLA－A、B位点密切联系。     

多发性骨髓瘤细胞体内生长特性的实验研究

目的:为建立人多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)荷瘤SCID小鼠模型,研究人多发性骨髓瘤在SCID小鼠体内生长的特性。方法:体外培养IL-6依赖的人MM细胞株XG7,接种于SCID小鼠皮下;观察肿瘤生长状态,通过流式细胞技术监测肿瘤细胞表型。结果:成瘤后的肿瘤细胞CD28、CD138等分子的表达与接种前没有明显变化。结论:通过研究人MM细胞的体内生长特性可为MM的治疗奠定良好的基础。     

转B7—1基因的人多发性骨髓细胞XG—7在激发杀肿瘤细胞CTL？…

为调查Ｂ７－１分子在人多发性骨髓瘤细胞的表达是否可诱导出具有抗肿瘤作用的ＣＤ＾＋８的ＣＴＬ，我们用含Ｂ７－１基因逆转录病毒载体ＰＴＧ５１９２的包装细胞２９３Ｅ培养上清，感染人多发性骨髓瘤细胞系ＸＧ－７（不表达Ｂ７－１分子）用新霉素Ｇ４１８选择并经流式细胞仪筛选，获得了稳定高表达式Ｂ７－１分子的ＸＧ－７细胞（命名为ＸＧ－７－Ｂ７细胞）在体外增殖实验中，ＸＧ－７－Ｂ７细胞显示出比母系细胞ＸＧ－７对外周     

从CD28/B7-1探讨雷公藤多甙治疗多发性肌炎的机制

目的通过CD28/B7-1激活T细胞这一途径探讨雷公藤多甙治疗多发性肌炎的分子免疫学机制.方法应用免疫荧光流式细胞计检测PM患者外周血CD4 和CD8 T细胞上CD28/B7-1分子蛋白的表达;RT-PCR法检测CD28/B7-1mRNA的表达.结果PM患者外周血CD4 和CD8 T细胞明显升高,且以CD8 T为主,分子蛋白及mRNA表达增加;经TWP干预后,CD4 和CD8 T细胞数减少CD28/B7-1,CD28/B7-1表达受抑制.结论PM表现为以CD86 T细胞介导的细胞毒作用为主的细胞免疫反应异常,CD28/B7-1与PM的发病密切相关.TWP可能通过抑制CD28/B7-1的表达发挥其治疗效应.     

人多发性骨髓瘤荷瘤SCID小鼠模型的建立及其生长特性

为研究人多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma，MM)在SCID小鼠免疫重建前后体内生长的特性和免疫细胞对肿瘤的作用，建立人多发性骨髓瘤(MM)荷瘤SCID小鼠模型。体外培养IL-6依赖的人MM细胞株XG7，接种于SCID小鼠和用人淋巴细胞重建的SCID小鼠皮下；监测成瘤状态，通过免疫组化观察细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocytes，CTLs)杀伤。结果表明：成瘤后的肿瘤细胞CD28、CD138等分子的表达与接种前没有明显变化；免疫重建后的SCID小鼠成瘤潜伏期延长，瘤体积小；免疫重建后的SCID小鼠肿瘤组织中，有人CD3 T细胞的浸润。结果提示：SCID小鼠是建立肿瘤模型和肿瘤免疫研究的良好动物；免疫重建后的SCID小鼠体内肿瘤生长受抑制：人MM细胞在小鼠体内的生长状态与淋巴细胞免疫有关。     

T细胞亚群及共刺激分子表达与系统性红斑狼疮免疫病理的关系

目的：探讨T细胞亚群及共刺激分子表达与系统性红斑狼疮免疫病理的关系。方法；采用免疫荧光标记技术和流式细胞仪检测技术对系统性红斑狼疮（SLE）患者和正常人外周血T细胞亚群及外周血单个核细胞膜表面共刺激分子的表达进行分析。结果：（1）与正常人相比，SLE患者CD3^ ,CD4^ T细胞亚群显著减少，CD4／CD8比例失调，双标记CDr^ CD28^ ,CD8^ CD28^ T细胞亦显著减少；（2）患者共刺激分子CD28表达显著降低，4－1BB分子表达显著增高；（3）患者T细胞CD4／CD8与抗核抗体呈负相关，共刺激分子4－1BB与抗核抗体，尿蛋白呈正相关，而与CD4^ CD28^ T细胞亚群呈负相关。结论：T细胞亚群及共刺激分子表达异常在系统性斑狼疮发病机制中可能具有重要作用。     

脐血树突状细胞的超微结构及其抗肿瘤效应的实验研究

目的 观察脐血来源的树突状细胞(dendritic cell，DC)的超微结构，并研究其在肿瘤免疫中的作用。方法 从脐血中分离单个核细胞，在含有粒单细胞集落刺激因子(GM～CSF)、白细胞介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子α(TNFα)及人AB型血清的RPMI1640培养基中培养，流式细胞仪检测其表型。并与同基因型T细胞共同培养72h，检测激发的T细胞对多发性骨髓瘤细胞株XG-7细胞的抑制作用。结果 透射电镜观察表明，细胞表面有大量不规则树枝状突起(粗细不等)，细胞核不规则，核仁小；DC可诱导特异性CTL的产生，肿瘤细胞生长受到明显抑制。结论 脐血中的DC前体细胞可在体外诱导成为功能性DC，并可诱导肿瘤特异性CTL的产生。     

CD_(28):CTLA-4/B7及CD_(40)/CD_(40)L与多发性硬化

共刺激分子CD28:CTLA-4/B7及CD40/CD40L对T细胞的活化、调节、B细胞的增殖、分化具有重要作用,共刺激分子在多发性硬化中的表达发生明显变化,它们对多发性硬化的发生、发展起着重要的促进作用,选择性阻断共刺激分子可控制疾病的发展,对多发性硬化治疗具有重要的意义。本文综述了CD28:CTLA-4/B7和CD40/CD40L生物学特性、功能,在多发性硬化的发生、发展中的作用以及相关的治疗前景。     

外周血造血干细胞体外定向诱导树突状细胞及功能鉴定

目的：以实体瘤患外周造血干细胞（PBSC）为来源，建立体外诱导扩增树突状细胞（DC）的方法，工进行表型鉴定及功能检测。方法：以血细胞分离机分离经动员的外周造血干细胞，加入rhGM-CSF,rhIL-4和nrhTfNF-α培养7－9d成为树突状细胞，进行细胞形态学、表型及刺激T细胞增殖能力分析。结果：PBSC经诱导培养后，倒置显微镜和电镜显示典型的树突状细胞形态和超微结构；流式细胞术分析显示细胞表面抗原高表达，其中CD1a 38.28%,CD11c 66.77%,共刺激分子CD80和CD86分别为51．05％，67．58％，MHCⅡ类分子HLA－DR为72．09％，为典型的DC表型特征，同种混合淋巴细胞反应结果显示DC具有高效的刺激T淋巴细胞活化增殖的能力。结论：实体瘤患PBSC可成功诱导为具有典型形态特征及功能的树突状细胞。     

激发型抗CD40单抗介导恶性肿瘤细胞凋亡及其机制探讨

目的 探讨激发型CD40单克隆抗体对人B淋巴细胞恶性肿瘤的生物学效应及其机制。方法 将激发型CD40单克隆抗体5C11加入肿瘤细胞的体外培养体系，采用细胞计数，流式细胞仪等方法分析单克隆抗体5C11对不同肿瘤细胞株的作用。结果 5C11能引起CD40表达的多发性骨髓瘤（MM）细胞株XG2和恶性淋巴瘤细胞株Daudi发生同型聚集，抑制其生长并介导凋亡；CD40分子介导的XG2和Daudi细胞凋亡作用与可溶性TNF产生无关。结论 激发型CD40单克隆抗体通过诱导B细胞恶性肿瘤细胞的凋亡。抑制肿瘤细胞的体外生长。     

Mcl- 1 mediates cytokine deprivation induced apoptosis of human myeloma cell line XG- 7

Objective To investigate apoptosis in XG- 7, a human myeloma cell line, induced by IL- 6 d eprivation and the function of three anti- apoptotic Bcl- 2 proteins (Bcl- 2, Bc l- xL, Mcl- 1) in the apoptotic process.Methods Apoptosis in XG- 7 myeloma cells induced by IL- 6 withdrawal was determined by f low cytometry with propidium iodide (PI) nuclear staining. Expressions of thre e Bcl- 2 proteins in XG- 7 cells were monitored by immunoblotting assay.Results In the absence of IL- 6 for a certain time, a significant percentage of apoptiot ic XG- 7 cells can be observed, as well as down- regulated expression of one of the three anti- apoptotic proteins (Mcl- 1) in XG- 7 cells.IL- 6 re- stimulat ion in XG- 7 cells following cytokine removal up- regulated the expression of Mc l- 1 and inhibited cell apoptosis.Conclusion Mcl- 1,instead of Bcl- 2 and Bcl- xL, plays an important role in IL- 6 depriva tion induced apoptosis in XG- 7 human myeloma cells.      

人B7-2基因修饰的食管癌细胞瘤苗抗肿瘤的免疫效应

目的:研究人B7-2基因修饰的食管癌细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法:将真核荧光表达载体pEGFP-C3-B7-2,通过脂质体转染技术转染人食管癌细胞株EC9706。外周血来源的树突状细胞(DC)负载肿瘤抗原后,与自体T淋巴细胞共培养3d,获得细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对转染和未转染pEGFP-C3-B7-2的人食管癌细胞EC9706的杀伤活性。结果:CTL对转染pEGFP-C3-B7-2的肿瘤细胞的杀伤活性大于转染pEGFP-C3和未转染细胞的杀伤活性(P<0.05)。结论:人B7-2基因修饰的EC9706肿瘤细胞瘤苗,可诱导出明显的抗EC9706细胞的免疫效应。     

胺碘酮对家兔在体心脏心室复极及复极离散度影响的研究

为探讨胶碘酮抗心律失常的细胞电生理机制，采用同步记录心室外股不同部位单相动作电位的方法，观察健康家兔静注胶碘酮前后心室复极及复极离散度的变化。结果显示：胺碘酮对正常心肌可延长心室复极，但对其复极离散度则无显著影响。结论：胺碘酮能同步均一地延长心室复极，可以提高心电稳定性。     

IL—4、γIFN及TNF对人骨髓瘤细胞系（U266、XG—7）与血管内皮细胞粘附效应的影响

５１Ｃｒ标记多发性骨髓瘤细胞系的方法，分析它们与血管内皮细胞间的粘附效应和细胞团子（ＩＬ－４、ｒＩＦＮ、ＴＮＦ）对该粘附的调控作用，并探讨这３种因子对正常血管内皮细胞粘附分子表达及可溶性因子分泌的影响．结果表明：（１）ＩＬ－４、ｒＩＦＮ、ＴＮＦ之间的联合应用可显著提高Ｕ２６６ＸＧ—７与血管内皮细胞的粘附能力．（２）ＩＬ—４、ｒＩＦＮ、ＴＮＦ可提高血管内皮细胞表面ＣＤ５４、ＣＤ４４的表达，并不同程度地促进了内皮细胞分泌ＩＬ—６、Ｇ—ＣＳＦ和ＴＮＦ等因子。提示这３种细胞因子可能有助于多发性骨髓瘤细胞的转移扩散．     

小鼠膜型B7-H1分子激活同种异体Tr1细胞介导免疫抑制

目的:观察小鼠膜型B7-H1分子对同种异体CD4+T细胞分化和功能的影响,探讨B7-H1诱导免疫抑制的作用机制。方法:用经稳定转染而高表达膜型B7-H1分子的小鼠1B4.B6细胞刺激同种异体小鼠初始CD4+T细胞,检测被激活的CD4+T细胞的细胞因子分泌格局、免疫功能及Foxp3的表达。结果:与转染空载体的对照细胞相比,高表达B7-H1的1B4.B6细胞刺激同种异体CD4+T细胞产生高水平白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)和干扰素γ(interferonγ,IFN-γ)、极低水平IL-4和IL-2。活化的CD4+T细胞具有免疫抑制活性,不表达Foxp3。结论:稳定转染B7-H1的1B4.B6细胞可通过其表面高表达的B7-H1分子诱导同种异体Ⅰ型调节性T细胞(type 1 regulatory T cells,Tr1)的分化。     

人B7-H4基因转染细胞株的构建及其对T细胞的作用

目的克隆人B7-H4基因,构建人B7-H4基因转染细胞株并初步研究其对T细胞的作用。方法通过RT-PCR的方法获得人B7-H4分子的基因,将目的片段双酶切(EcoRⅠ和BamHⅠ)后与pIRES2-EGFP真核表达载体连接,构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP-B7-H4并进行鉴定;脂质体转染法将重组载体导入L929细胞,经G418加压筛选并通过流式细胞术和RT-PCR检测表达载体是否转入L929细胞中,通过检测活化T细胞上CD25,CD69的表达及T细胞增殖实验对B7-H4转基因细胞的生物学功能进行初步研究。结果从外周血活化单核细胞中扩增出目的基因,构建重组表达载体pIRES2-EGFP-B7-H4并将其转染至L929细胞,构建了一株稳定表达人B7-H4分子的基因转染细胞株,对其生物学功能的研究显示B7-H4分子可以下调活化T细胞上CD25,CD69的表达,并且对T细胞的活化增殖起到抑制作用(P<0.05)。结论成功构建了稳定表达B7-H4分子的基因转染细胞株,为进一步研制B7-H4分子的单克隆抗体提供了有效的免疫原。     

3种T细胞系细胞毒作用的比较

目的 探讨Ｔ细胞的杀伤机制。方法 采用＾５１Ｃｒ释放试验,检测了３种Ｔ细胞系（ＯＥ４,４Ｑ１１,ＢＫ１）对瘤细胞ＴＡ３的细胞毒作用。结果 ＣＤ４＾＋Ｔ细胞系ＢＫ１,４Ｑ１１也具有特异的杀伤作用。结论 除ＣＤ８＾＋ ＣＴＬ外,还存在ＣＤ４＾＋,ＣＴＬ,其杀伤作用依赖于Ｆａｓ／ＦａｓＬ途径。     

CD 80(B7-1) expression on human tumor cell lines and its costimulatory signals for T cell proliferation and cytokine production.

ＣＤ８０（Ｂ７１）ｅｘｐｒｅｓｉｏｎｏｎｈｕｍａｎｔｕｍｏｒｃｅｌｌｉｎｅｓａｎｄｉｔｓｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｓｉｇｎａｌｓｆｏｒＴｃｅｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｃｙｔｏｋｉｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎＹａｎＪｕｎ严俊，ＭａＢａｏｌｉ马宝骊...     

B7.1转基因肿瘤疫苗与大蒜素联合治疗膀胱癌的初步研究

目的初步估计大蒜素与B7.1转基因肿瘤疫苗对膀胱肿瘤的联合抗肿瘤效果.方法采用脂质体将B7.1基因导入鼠膀胱肿瘤(MBT-2)细胞.B7.1分子的表达经免疫荧光染色而测得.利用混合淋巴细胞培养MTT法,观察MBT-2-B7.1细胞刺激脾淋巴细胞的增殖作用.用MTT法测定了大蒜素对肿瘤细胞体外生长的影响.通过动物实验测定该肿瘤疫苗与大蒜素对膀胱肿瘤的联合治疗效果.结果转染了B7.1基因的肿瘤细胞能有效地刺激脾淋巴细胞增殖.当与大蒜素联合应用时,明显延迟了肿瘤的发生,并有效抑制了肿瘤的生长.结论大蒜素与转基因肿瘤疫苗治疗相结合能显著增强抗肿瘤效果.     

Roles of a metastasis-associated molecule, RTVP-1,in cancer immunosurveillance

Objective: To elucidate distinct functions of a recently identified cancer metastasis-associated molecule, related to testes-specific, vespid, and pathogenesis protein-1 (RTVP-1) in the mammalian immune system. Methods: Immunohistochemical assays and functional analysis on the immune system were performed on RTVP-/- mice and RTVP-1 / mice, Protein-protein interaction (PPI) was used to predict the functions of RTVP-1. Results: Abnormal lymphocyte growth kinetics and reduced numbers of CD8 T cells were revealed in lymph nodes of RTVP-1-/- mice. Expression of phenotypic markers of maturation in bone marrow-derived dendritic cells (DC) was impaired in RTVP-1-/- DC following antigenic stimulation in vitro and RTVP-1-/- DC failed to provide normal CD4 T cell stimulatory activities in vivo. RTVP-1-/- mice failed to generate normal CTL or antibody responses in vivo after vaccination. In vivo tumor challenge experiments using a mouse cancer cell line demonstrated that the growth rate of subcutaneous tumors in RTVP-1-/- mice was significantly increased and CD8 T cell infiltration significantly reduced compared to RTVP-1 / mice. PPI showed that RTVP-1 protein closely interacted with molecules associated with immune response and cancer metastasis. Conclusion: RTVP-1 might function as a tumor metastasis suppressor and immunosurveillance molecule in cancer.