基于PI3K/Akt信号通路探讨姜黄素诱导A549细胞凋亡的机制

目的 观察并探讨姜黄素对非小细胞肺癌A549细胞的作用及其机制。方法 将A549细胞分为空白组(正常培养)和低、高剂量实验组(分别用40、80μmol·L^-1姜黄素干预48 h)及激动药+低、高剂量实验组(先用50μmol·L^-1 Recilisib Sodium干预24 h后，再分别用40、80μmol·L^-1姜黄素干预48 h)、抑制药+低、高剂量实验组(先用25μmol·L^-1 PI3K-IN-1干预24 h后，再分别用40、80μmol·L^-1姜黄素干预48 h)。用MTT法测定细胞增值率；用流式细胞术测定细胞凋亡情况；用实时荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(Akt)mRNA的相对表达水平；用蛋白质印迹法检测PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平。结果 空白组、低剂量实验组、高剂量实验组、激动药+低剂量实验组、抑制药+低剂量实验组、激动药+高剂量实验组、抑制药+高剂量实验组的细胞活力分别为(100...     

雷公藤多苷抑制 PI3K/AKT信号通路对肺腺癌细胞迁移和血管形成的影响

目的 探讨雷公藤多苷(TWP)对肺腺癌A549细胞迁移、血管生成及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路的影响.方法 人肺腺癌细胞株A549体外培养,分别用TWP(0、20、40、80μmol/L)处理24、48和72 h,采用CCK-8法、流式细胞仪和Transwell法分别检测A549细胞的增殖、凋亡和迁移情况,Matrigel胶小管形成实验检测血管生成情况,蛋白质印迹法(Western blotting)检测A549细胞中PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达情况.结果 随培养时间延长,20、40、80μmol/L TWP组A549细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.05);20、40、80μmol/L TWP组A549细胞凋亡率[(8.78±0.69)％、(10.36±1.13)％、(21.68±2.11)％]均显著升高(P<0.05),穿膜细胞数[(122.08±30.72)、(83.34±19.75)、(43.58±13.29)个]、p-PI3K/PI3K比值[(0.76±0.13)、(0.55±0.12)、(0.36±0.09)]、p-AKT/AKT比值[(0.53±0.14)、(0.35±0.09)、(0.21±0.05)]均显著降低(P<0.05);0、20、40、80μmol/L TWP组A549细胞诱导静脉内皮细胞(HUVEC)成管数量较对照组均显著升高[(35.85±8.72)、(24.13±6.86)、(15.34±4.66)、(9.15±2.25)个比(6.31±1.49)个,P<0.05],A549细胞诱导HUVEC成管数量均随TWP浓度升高而显著降低(P<0.05).结论 TWP可能通过抑制PI3K/AKT信号通路激活,抑制肺腺癌A549细胞的增殖、迁移、血管生成行为,并诱导细胞凋亡.     

S型与R型人参皂苷Rh2诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的体外研究

目的探讨人参皂苷Rh2(S型与R型)能够诱导人肺腺癌A549细胞凋亡。方法采用MTT实验测定细胞增殖能力;台肦蓝染色法检测细胞存活率;碘化丙啶(PI)单染流式细胞仪分析细胞周期中各时期的细胞百分数;电镜观察细胞凋亡。结果 30μg/mL的S型和R型人参皂苷Rh2作用于A549细胞48h后,死亡率均明显高于正常组细胞(P<0.05);20(S)-Rh2能阻滞细胞周期于G1期,并且2(S)-Rh2型的抗肿瘤活性明显强于20(R)-Rh2;电镜结果显示染色质浓集、断裂,核固缩并出现凋亡小体。结论 S型和R型人参皂苷Rh2均具有促进A549细胞凋亡的生物学功能。     

阿立哌唑对Aβ_(25-35)诱导的神经PC12细胞损伤的影响及机制

目的:研究阿立哌唑对Aβ淀粉样蛋白(Aβ_(25-35))诱导的神经PC12细胞损伤的影响及其机制。方法:将PC12细胞随机分为正常对照组、模型组(20μmol/L Aβ_(25-35))和阿立哌唑低、中、高浓度组(5、10、20μmol/L阿立哌唑+20μmol/L Aβ_(25-35)),加入含相应药物的培养基培养48 h,每组6个复孔。MTT法检测细胞活力(光密度值),Hoechst染色法检测细胞凋亡情况,分光光度法检测细胞中天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)、Caspase-9活性,Western blot法检测细胞中B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)蛋白表达及蛋白激酶B(Akt)磷酸化水平。结果:与正常对照组比较,模型组细胞光密度值降低,凋亡率增加,Caspase-3、Caspase-9活性和Bax蛋白表达均增强,Bcl-2、PI3K蛋白表达和Akt磷酸化水平均降低(P<0.01)。与模型组比较,阿立哌唑低、中、高浓度组细胞光密度值增加,凋亡率减少,Caspase-3、Caspase-9活性减弱,Bcl-2、PI3K蛋白表达和Akt磷酸化水平均增加;阿立哌唑中、高浓度组细胞Bax蛋白表达减弱(P<0.05或P<0.01)。结论:阿立哌唑可明显抑制Aβ_(25-35)诱导的PC12细胞凋亡,其作用可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。     

地塞米松和淀粉样β蛋白片段25-35对PC12细胞损伤和凋亡的影响

目的探讨地塞米松(DEX)和淀粉样β蛋白片段25-35(Aβ25-35)联合作用对PC12细胞损伤和凋亡的影响。方法采用单独或联合应用DEX 0.1～10μmol.L-1和Aβ25-35 1～5μmol.L-1作用PC12细胞24 h,MTT法测定细胞活力;膜联蛋白-Ⅴ,PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,PI单染流式细胞仪检测细胞凋亡峰;逆转录-PCR检测胱天蛋白酶3 mRNA的表达水平。结果 MTT结果显示,与正常对照组相比,DEX 5和10μmol.L-1,Aβ25-35 1,5和10μmol.L-1,DEX 5+Aβ25-35 1,5和10μmol.L-1及DEX 10+Aβ25-35 5,10μmol.L-1组均可明显降低PC12细胞存活率,而DEX联合Aβ25-35能明显减少PC12细胞数(P<0.01)。流式细胞仪结果显示,DEX 5μmol.L-1和Aβ25-35 1μmol.L-1单独作用对PC12细胞凋亡率和亚二倍体凋亡峰有一定的增加作用(P<0.05),两者联合作用能明显增加PC12细胞早期和中晚期凋亡率,增加亚二倍体凋亡峰(P<0.01);RT-PCR结果显示,DEX 5μmol.L-1和Aβ25-35 1μmol.L-1单独作用对PC12细胞胱天蛋白酶3 mRNA的表达水平没有明显影响,它们联合作用能明显增加PC12细胞胱天蛋白酶3mRNA的表达水平(P<0.05)。结论 DEX和Aβ25-35联合作用能明显增加对PC12细胞的损伤,促进胱天蛋白酶3 mRNA表达,诱导PC12细胞凋亡。     

犬颜面复合组织移植及皮肤附属器变化的观察

目的建立犬颜面部复合组织移植实验动物模型,进一步研究组织瓣移植后皮肤及附属器的变化。方法用3只杂种犬进行解剖学研究,观察犬头颈部动静脉血管的走行、大小及变异情况。2只比格犬作异体移植[免疫抑制剂使用环孢素A（Cs—A）和强的松],术后70、100d于移植皮瓣与受体皮肤吻合处取材,光镜和电镜观察皮肤及附件变化。结果犬头颈部血管走行与人极为相似。比格犬术后皮瓣血运良好,无毛发脱落,皮瓣观察窗毛发生长,1例术后4d见皮瓣红斑,调整Cs—A用量后未再现排斥反应;70、100d,光镜见附属器较正常增多、结构正常;电镜见毛囊部分线粒体肿胀,汗腺线粒体结构正常,无明显炎性细胞浸润。结论Cs—A和强的松能有效预防和控制犬颜面移植后排斥反应。移植后皮肤毛囊、皮脂腺和汗腺数量会增多。     

PI3K抑制剂对肺癌AKT2、MMP9表达的抑制作用的研究及意义

目的探讨PI3K抑制剂LY294002对肺腺癌AKT2及基质金属蛋白酶9(MMP9)表达的作用及意义。方法不同浓度(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L)LY294002处理肺腺癌A549细胞24h后,分别用免疫细胞化学法和Western blot法检测AKT2、MMP9蛋白表达。人肺癌A549细胞接种于裸鼠皮下,建立肺癌裸鼠移植瘤模型并予LY294002治疗,计算LY294002的抑瘤率,Western blot法测定裸鼠移植瘤组织AKT2、MMP9蛋白的表达。结果肺腺癌细胞株A549细胞中存在AKT2、MMP9蛋白的高表达,应用P13K抑制剂LY294002可抑制该细胞株细胞中AKT2、MMP9蛋白的表达,而且其表达呈浓度依赖型降低。LY294002可有效抑制裸鼠移植瘤的生长,其抑瘤率为40.30%。LY294002治疗组裸鼠移植瘤组织MMP9及VKT2蛋白水平均显著低于对照组(P均<0.01)。结论 LY294002可抑制AKT2活性及下调MMP9蛋白的表达,该作用可能是PI3K抑制剂LY294002发挥抗肿瘤生长及及转移的机制之一。PI3K可能成为肺癌治疗的靶点。     

原花青素对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨原花青素对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡的影响及其可能机制.方法 分别用原花青素0、10、20、40、60、100μmol/L干预软骨细胞48 h,采用CCK-8法检测原花青索对软骨细胞活性的影响.将软骨细胞分为IL-1β处理组(A组)、IL-1β+原花青素处理组(B组)和空白对照组(C组),采用RT-PCR和Western blot法分别检测软骨细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、Akt、Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表达,Hoechst/碘化丙啶染色检测软骨细胞凋亡,并观察乳酸脱氢酶(LDH)释放情况.结果 原花青素浓度为40μmol/L时,软骨细胞活性达峰值(P＜0.01).与C组相比,A组软骨细胞LDH释放量、细胞凋亡以及Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达均增加(P＜0.01),PI3K、Akt和Bcl-2 mRNA和蛋白表达降低(P＜0.01);而B组加入原花青素处理后能逆转上述各指标的变化过程(P＜0.05或P＜0.01).结论 原花青素可以抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡;其保护机制可能与激活PI3K/Akt通路、上调Bcl-2以及下调Bax和Caspase-3的表达有关.     

重组苦瓜子抗HIV植物蛋白30对BGC-823细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨重组苦瓜子抗HIV植物蛋白30(MAP30)对人胃癌BGC-823细胞增殖与凋亡的影响。方法将BGC-823细胞分为对照组(A组)和MAP30 10、20、30、40、50、60μg/ml实验组(分别为B1、B2、B3、B4、B5、B6组)。MTT、集落形成和裸鼠致瘤实验观察细胞增殖的抑制作用,光镜、电镜、荧光染色和流式细胞术检测细胞凋亡。结果与A组相比,MAP30呈剂量依赖性地抑制BGC-823细胞增殖,IC50为51.67μg/ml。B3组光镜下细胞变圆缩小,细胞膜发泡,可见凋亡小体;电镜下细胞表面微绒毛消失,细胞核和细胞质浓缩,核膜褶皱,染色质凝集。荧光染色和流式细胞术检测显示,B3组BGC-823细胞凋亡率较A组增加(P<0.05)。结论 MAP30可抑制BGC-823细胞增殖,并可诱导其凋亡。     

RISK信号通路在β_2-肾上腺素受体激动剂Clenbuterol减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用

目的研究β2-肾上腺素受体激动剂clenbuterol对原代培养的心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用及其是否与激活再灌注损伤挽救激酶(reperfusion injury salvage kinase,RISK)信号通路有关。方法将原代培养的新生Wistar大鼠乳鼠心肌细胞分为8组,1正常培养组;2缺氧/复氧(A/R)组;3clenbuterol(1μmol·L-1)+A/R;4ICI118,551(10μmol·L-1)+clenbuterol(1μmol·L-1)+A/R组;5美托洛尔metoprolol(10μmol·L-1)+clenbuterol(1μmol·L-1)+A/R组;6 metoprolol(10μmol·L-1)+A/R组;7 PD98059(20μmol·L-1)+clenbuterol(1μmol·L-1)+A/R组;8LY294002(10μmol·L-1)+clenbuterol(1μmol·L-1)+A/R组。采用MTT法测定各组细胞存活率;比色法检测心肌细胞培养液的乳酸脱氢酶(LDH)含量;Hoechst 33342荧光染色法检测细胞凋亡率;分子探针DCFH-DA检测细胞内活性氧的水平;Western blot检测心肌细胞缺氧/复氧后ERK及p-ERK1/2蛋白的表达水平。结果与A/R组比较,clenbuterol+A/R组明显增高细胞存活率,降低LDH含量,降低细胞凋亡率,ROS产生减少,p-ERK1/2蛋白表达水平增高,而选择性β2受体阻断剂ICI 118,551可取消clenbuterol的上述作用,β1受体阻断剂Metoprolol对clenbuterol的作用无影响,PI3K抑制剂LY294002和ERK1/2抑制剂PD98059可阻断clenbuterol对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。结论clenbuterol能够减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,加入选择性β2受体阻断剂ICI 118,551,PI3K抑制剂LY294002和ERK抑制剂PD98059均使clenbuterol的保护作用取消,表明clenbuterol可通过激动β2肾上腺素受体,激活RISK信号通路发挥抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的作用。     

蟾蜍血清高密度脂蛋白(HDL)的分离鉴定及对梭曼的水解作用

用阶段密度梯度超速离心法,从蟾蜍血清中分离出7个组份,somanase(A酯酶)的活性在第3组份(35 ml离心管),或分成10个组分,则活性在第5组份(10 ml离心管),提纯12倍,对重复加入的梭曼水解较快。用苏丹黑预染聚丙烯酰胺凝胶电泳法,油红“0”脂蛋白染色琼脂糖电泳法,均显示脂蛋白染色呈阳性反应的一条区带,并求出K_m,V_(max)和相关系数值。在含蔗糖—KBr的介质中稳定性好,60℃3d未失活。对脂质部分的定量分析、分子量测定、电镜检查、及飘浮系数值均符合HDL的特征,因此,血清中的梭曼水解酶是HDL的一种成分。     

石胆草碳苷B改善阿尔茨海默病小鼠模型的研究

目的:探究石胆草碳苷B(CB)对淀粉样β蛋白片段25-35(Aβ_25-35)诱导阿尔茨海默病(AD)的干预作用及其作用机制,为临床治疗AD提供实验基础。方法:将40只雄性昆明小鼠随机分为正常组、模型组、多奈哌齐组(10 mg·kg^-1)、CB组(10 mg·kg^-1)。除正常组外,其余各组小鼠脑内注射Aβ_25-35(300μmol·L^-1)建立AD小鼠模型。Y迷宫、新物体识别实验检测小鼠学习记忆能力;HE染色、尼氏染色和电镜观察海马病理变化;酶联免疫吸附法检测脑内Aβ_1-42/Aβ_1-40、磷酸化Tau蛋白(p-Tau)水平;生化法检测血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量或活性;流式细胞术检测脑内活性氧(ROS)水平;蛋白免疫印迹法(WB)检测脑内LC₃B,Beclin-1和P62相关自噬蛋白水平。体外培养PC-12细胞,结合自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA...     

1例心肌梗死合并室壁瘤并发室颤的抢救护理

在山东省立怪院急诊科监护室进修学习期间,我们9次用电除颤成功地抢救了一名糖尿病发生急性前壁心肌梗死合并室壁瘤并发室颤的病人。现将其抢救及护理体会总结如下。 1 临床资料及抢救过程 1.1 患者,男,64岁,因胸闷、憋气半个月,加重伴心前区不适1天,于1995年8月9日7am入院,心电图示V_1～V_4QS波,S—T抬高>3mm,室上性心动过速,心率130次/分。门诊以“急性前壁心肌梗死、心律失常”收入ICU病房。既往糖尿病史8年。入院查体:T36.4℃,P130次/分、R20次/分、BP12/10kPa,双肺底有湿性罗音,HR130次/分,心音低钝,可闻及Ⅱ/Ⅵ级收缩期杂音。治疗计划:(1)心电监护、吸氧、镇静、卧床;(2)改良极化液加硝酸甘油,FDP;(3)纠正心律失常及心衰。 1.2 患者入院后查尿糖 — ,心肌酶谱各项指标正常,心脏彩超示左室壁一巨大室壁瘤。患者于入院后第二天10am突然出现阵发性室性心动     

8-溴-7-甲氧基白杨素对人卵巢癌A2780 细胞凋亡的作用及其机制

目的探讨8-溴-7-甲氧基白杨素（8-bromo-7-methoxychrysin, BrMC）诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡的作用及其可能机制.方法采用不同浓度（2.5、5.0和10.0μmol·L^-1）的BrMC处理体外培养的A2780细胞,通过碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）和ELISA法检测细胞凋亡的情况,Western Blot检测Bim和caspase-3蛋白的表达水平.结果不同浓度（2.5、5.0和10.0μmol·L^-1）BrMC均可促进A2780细胞的凋亡,且细胞凋亡率随BrMC浓度的升高而上升.不同浓度（5.0和10.0μmol·L^-1）BrMC作用的A2780细胞中Bim蛋白的表达均较正常对照组显著增加,而通过siRNA干扰下调Bim蛋白的表达能显著抑制BrMC诱导的A2780细胞凋亡.结论 BrMC可诱导人卵巢癌A2780细胞凋亡,促进Bim蛋白的表达可能是其作用机制之一.     

潘生丁及VK、联合治疗秋季腹泻100例观察

轮状病毒是引起秋季腹泻的主要病因。目前尚无特效疗法,近2年我们应用潘生丁及V_(K(?))治疗秋季腹泻100例取得了良好效果。临床资料:观察对象为1989年1月至1991年1月住院及门诊患儿,均为6月—2岁的婴幼儿。病程在3天以内的40例,4—5天的60例。呕吐、发热、腹痛、哭闹不安、大便为水样或蛋花汤样,每日5—20次,多伴有不同程度的脱水及酸中毒或上呼吸道感染症状,大便镜检无红白细胞,可见脂肪球,血象多正常,由于条件所限未做培养及病毒分离。     

盐酸瑞芬太尼复合丙泊酚在全麻无痛人流术中的应用

目的观察盐酸瑞芬太尼复合丙泊酚在全麻无痛人流术中应用的麻醉效果。方法选择自愿要求行无痛人工流产的早孕妇女400人,年龄在18至40岁,随机分为丙泊酚组（A组）和瑞芬复合丙泊酚组（B组）A组给予丙泊酚2～2．5μg/kg静脉注射,注射速度为40mg／10s,术中根据肢体活动情况追加丙泊酚0．3—0．4μg/kg。B组先给予盐酸瑞芬太尼1～2μg／kg静脉注射,而后给予丙泊酚2～2．5μg／kg静脉注射,手术开始,术中严密监测SBP,DBP,HR,SpO2,呼吸频率和幅度,有无呼吸抑制,恶心,呕吐,面色苍白,出冷汗等症状,手术结束后回恢复室,待完全清醒,能辨认时间和地点,能站立行走,无眩晕,恶心,呕吐,出血等症状时方可离院。结果两组孕妇的年龄,孕周,流产次数无统计学差异,B组麻醉效果明显优于A组。（P〈0．05）,B组ARRS的发生率明显低于A组（P〈0．01）,两组清醒时间的比较无统计学差异。结论盐酸瑞芬太尼复合丙泊酚麻醉用于全麻人工流产术中,安全,有效。     

SPE-UPLC-ELSD法测定柴胡中柴胡皂苷a、d的含量

目的：应用超高效液相色谱-蒸发光散射（UPLC—ELSD）检测柴胡中柴胡皂苷a、d的含量。方法：采用Waters Acquity UPLC BEH C18色谱柱（2．1mm×100mm,1．7μm）;以乙腈（A）-水（B）为流动相梯度洗脱（0－3min,43％A;3～9min,43％A→63％A）;流速：0．2mL．min-1：柱温：30℃;ELSD检测器漂移管温度为40℃,气体压力为40psi,测定柴胡中柴胡皂苷a、d的含量。结果：柴胡中柴胡皂苷a在浓度为64．2-385．2Dg·mL—1（r=0．9994）内线性范围良好：柴胡皂苷d在浓度为67．3～403．8μg·mL-1（r=0．9992）内线性范围良好。结论：该方法简便、灵敏、可靠、准确、重现洼好,可作为柴胡的质量控制方法。     

七种仪器测量中央角膜厚度的比较

目的探讨A型超声角膜测厚仪、眼前段光学相干断层扫描仪（anterior segment -optical coherence tomography, AS - OCT）、角膜内皮镜、Orbscan、Pentacam、超声生物显微镜（ultrasound biomicroscope,UBM）和共焦显微镜（confocal microscope）7种仪器测量中央角膜厚度（CCT）的差异和相关性。方法选取无其他眼部疾病的屈光不正患者265例（530眼）,分别用A型超声角膜测厚仪、AS—OCT、角膜内皮镜、OrbscanⅡ、Pentacam、UBM和共焦显微镜7种仪器测量CCT,对7组CCT值采用配对t检验分析其他6种仪器与A型超声之间测量中央角膜厚度之间的差异,采用简单线性相关描述其他6种仪器与A型超声测量中央角膜厚度之间的相关性。结果A型超声、AS—OCT、角膜内皮镜、Orbscan、Pentacam、UBM和共焦显微镜7种方法测量CCT值分别为（546．3±32．4）μm、（534．6±30．6）μm、（537．9±29．2）μm、（544．7±34．5）μm、（548．1±40．7）μm、（545．5±32．8）μm和（544．2±28．3）μm。结论与A型超声相比较,AS—OCT、角膜内皮镜、OrbscanⅡ、Pentacam、UBM和共焦显微镜6种仪器的相关性都较高,都可以用来测角膜厚度,但OrbscanⅡ、Pentacam、UBM及共焦显微镜的测量结果和A型超声更接近。     

经颅多普勒对精神分裂症及躁狂症患者脑血流检测和研究

目的探讨精神分裂症及躁狂症患者脑血流的特征。方法用经颅多普勒超声(TCD)检测100例精神分裂症患者(A组)及100例躁狂症患者(B组)的双侧大脑中动脉(MCA)、大脑前动脉(ACA)及大脑后动脉(PCA)动脉和椎动脉-基底动脉(VA-BA)血流速度,以及搏动指数(PI)、阻力指数(RI)等脉动性指标。并与60例正常人(对照组)进行对照分析。结果A、B组3条大脑动脉的血流速度较对照组加快,椎-基底动脉血流速度呈A组减慢、B组加快。检查结果异常者在A组有82%,在B组有88%;而PI和RI值均属正常。结论精神分裂症和躁狂症患者3条大脑脑动脉的血流速度加快,提示脑动脉痉挛。对精神分裂症患者,椎—基底动脉血流速度减慢,可导致脑供血减少,这些血流动力学上的特征可能为改善患者脑血流循环的治疗提供线索。     

2型糖尿病大鼠心肌PI3K/Akt/mTOR信号通路的改变及Sirt1的调控机制研究

目的检测Sirt1及PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白在糖尿病大鼠心肌及高糖培养的H9C2细胞中的表达变化,明确其在糖尿病心肌病发生发展中的作用。方法高脂饮食联合链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,实验将大鼠分为糖尿病2周、4周、8周模型组和对照组,超声心动图检测大鼠心功能变化,Western blot检测大鼠心肌Sirt1、PI3K、Akt、mTOR、S6K1蛋白表达变化。将H9C2细胞分为正常对照组、DMSO组(78.12 mmol·L~(-1))、高糖(HG)组(33 mmol·L~(-1))、白藜芦醇(Res)组(20μmol·L~(-1))、尼克酰胺(Nam)组(40 mmol·L~(-1)),Western blot及qRT-PCR研究心肌细胞Sirt1、PI3K、Akt、mTOR、S6K1相关蛋白基因转录及表达,研究Sirt1对该信号通路的调控机制。结果在动物实验中,与2周DM大鼠比较,8周DM大鼠心肌Sirt1蛋白表达明显增加。2周模型组大鼠相对于正常对照组心肌PI3K、Akt、mTOR、S6K1表达明显增加,且S6K1表达4周模型组比2周模型组增加更明显,但8周表达降低。在高糖培养的H9C2细胞中,与对照组相比,高糖组Sirt1,PI3K,Akt,mTOR和S6K1表达明显增高。Nam处理组Sirt1表达明显降低,PI3K,Akt,mTOR和S6K1表达增高。Res处理组Sirt1表达明显增高,而PI3K,Akt,mTOR和S6K1表达降低。结论 Sirt1通过负调控PI3K/Akt/mTOR信号通路参与糖尿病心肌损伤,参与早期糖尿病心肌病的发生发展。