肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在卵巢上皮癌中的表达

卵巢癌位于女性生殖系统三大恶性肿瘤之首,死亡率最高,严重威胁妇女生命.近年来,为癌症患者寻求新的化疗药物靶点、提高化疗疗效已成为研究热点.肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是肿瘤坏死因子(TNF)超家族新成员,有广谱的抗瘤作用,且对正常组织细胞无毒性[1],因此有望应用于肿瘤基因治疗.Lancaster等[2]检测了109例晚期卵巢患者的TRAIL表达,研究发现TRAIL高表达患者的生存率更长.本文研究了不同临床分期及组织病理分级卵巢癌组织中TRAIL的表达,探讨其在抑制卵巢癌细胞增殖中的作用.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在大肠癌中的表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)在大肠癌组织中的表达情况及其与临床病理的关系。方法采用免疫组化SP法和流式细胞分析方法对41例大肠癌组织和9例癌旁正常组织TRAIL的表达情况进行检测并比较。结果TRAIL蛋白免疫组化染色定位于细胞膜和细胞浆,癌组织中阳性表达率为24.4%,明显低于正常组织的66.7%(P<0.05);流式细胞分析该蛋白表达量,癌组织平均荧光指数为0.92±0.09,亦明显低于正常组织的1.05±0.12(P<0.05)。癌组织中,TRAIL蛋白表达随着分化程度的降低呈逐步下降趋势(P<0.05);淋巴结转移与否的表达无统计学差异。结论大肠癌组织中TRAIL表达下降,并与组织分化程度有关。     

可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在原发性胆汁性肝硬化患者血清中的表达及意义

目的观察人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（sTRAIL）在原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者外周血中水平的表达,并探讨sTRAIL在PBC发病机制中的作用。方法用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测PBC患者26例（PBC组）,慢性肝炎肝硬化患者27例（慢性肝炎肝硬化组）以及健康体检者25例（正常对照组）的sTRAIL并同时测定IgG、IgA、IgM,观察各指标在PBC中的改变。结果PBC组和慢性肝炎肝硬化组sTRAIL浓度均显著高于正常对照组（158．73±42．45）pmol／L,（108．13±41.60）pmol／L vs（73．83±8．60）pmol／L（P〈0．01）。PBC组sTRAIL也较慢性肝炎肝硬化组明显升高（P〈0．01）。结论sTRAIL在PBC患者及慢性肝炎肝硬化患者血清中均升高,但二者升高程度比较差异有统计学意义,检测sTRAIL对PBC患者的,临床诊断中具有辅助作用并有助于PBC发病机制的研究。     

肿瘤坏死因子凋亡诱导配体蛋白对前列腺癌及膀胱癌细胞抑制作用的研究

目的研究重组并纯化的肿瘤坏死因子凋亡诱导配体蛋白(TRAIL)对前列腺癌(PC-3)及膀胱癌细胞(5637)的抑制作用。方法 PC-3和5637细胞分为对照组(仅加培养液)和实验组(加入40 ng/ml的TRAIL蛋白处理),细胞培养12 h后加入TRAIL蛋白,24 h后应用PCR、Western blot技术检测细胞内抗凋亡蛋白Bcl-2及凋亡信号通路中Caspase-3和Caspase-8基因和蛋白的表达。结果应用SPSS统计分析软件,组间比较采用t检验,结果显示:PC3和5637细胞在TRAIL蛋白作用24 h后Bcl-2基因和蛋白表达水平均降低,而Caspase-8、Caspase-3基因和蛋白表达则增加。与对照组相比,其差异具显著性意义。结论 TRAIL蛋白通过下调抗凋亡基因Bcl-2的表达,增强Caspase-8、Caspase-3的表达从而诱导两种肿瘤细胞的凋亡达到抑癌效应。     

血清可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体检测的临床意义

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factorrelated apoptosis-inducing ligand,TRAIL)是TNF超家族成员之一,其最早由Wiley等[1]于1995年从人心肌c DNA文库中克隆并命名。TRAIL具有膜结合型和可溶型(s TRAIL)2种形式,在金属蛋白酶作用下,可被水解形成s TRAIL,s TRAIL保留了死亡受体结合域及功能域,与膜型TRAIL具有相同的生物学活性。目前大量研究表明,在自身免疫性疾病、肝病、     

IFN-γ对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体诱导正常人骨髓单个核细胞凋亡的影响

目的以正常人骨髓单个核细胞(BMMNC)为细胞模型,探讨IFN-γ对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)诱导BMMNC凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法流式细胞仪检测对照组、TRAIL组、IFN-γ组、IFN-γ+TRAIL组细胞的凋亡率及IFN-γ作用0、6、12和24 h后,细胞表面膜结合型TRAIL及其受体DR5蛋白的表达。结果对照组、TRAIL组、IFN-γ组、IFN-γ+TRAIL组,流式细胞仪检测BMMNC的凋亡率分别为(23.50±2.170)%,(23.85±1.44)%,(29.97±1.16)%,(38.00±2.21)%,差异有统计学意义(P<0.05);IFN-γ作用0、6、12和24 h后,流式细胞仪检测BMMNC表面TRAIL的平均荧光强度分别是20.29±1.07、24.91±0.40、28.55±0.81、33.26±2.00,及其受体DR5的平均荧光强度分别是14.51±0.82、17.59±1.31、24.61±0.88、32.49±2.61,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IFN-γ和TRAIL联合作用能显著提高BMMNC的凋亡率,其机制可能与IFN-γ能上调TRAIL及其受体DR5蛋白的表达有关。     

重组pichia pastoris高密度发酵表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的研究

目的优化rhsTRAIL(重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体)毕氏酵母工程菌在5升Braun发酵罐中的发酵表达工艺参数。方法研究培养基种类、种细胞密度、甘油含量、pH值、甲醇浓度、甲醇流加速率及诱导时间等参数对酵母菌生长与目的蛋白表达的影响。结果在无机盐培养基中，按10％接种OD600=8-12的种菌后，24h酵母菌增殖至OD600=76；甘油含量为1％时，菌体生长速度快(OD600=160)；培养基pH值=5．0，甲醇终浓度为1％时，诱导96h表达量最高达到120mg／L。结论rhsTRAIL在毕氏酵母中发酵工艺参数为：无机盐培养基，pH值：5．0，接种10％ OD600=8-12的种菌，甘油含量1％，甲醇终浓度1％，诱导96h。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达及意义

为了检测肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达，并探讨其在白血病治疗中的意义，采用RT-PCR方法及流式细胞术，对39例急性髓系白血病细胞(患者组)、18例完全缓解白血病细胞(缓解组)和21例正常人骨髓或外周血单个核细胞(对照组)表面TRAIL及其受体的表达进行检测。结果表明：①患者组和缓解组TRAIL、DR4和DR5表达高，而DcR1和DcR2表达低。②缓解组DR5的表达高于患者组。③患者组和缓解组DR5的表达均高于DR4。④患者组AML不同亚型表达TRAIL及其受体相似。结论：TRAIL及其受体在急性髓系白血病细胞中的表达具有明显的差异性：DR5在TRAIL介导的急性髓系白血病细胞凋亡中起重要的作用。     

增殖诱导配体在细胞免疫调节及疾病中的作用

本文介绍增殖诱导配体（APRIL）及其受体在自身免疫性疾病及肿瘤中的作用。APRIL是肿瘤坏死因子配体家族的新成员。研究发现，APRIL及其受体（TACI、BCMA）在调节细胞免疫方面有一定的作用，在促进T细胞增殖、T细胞非依赖型免疫反应方面起到一定的功能。虽然其作用机理未被精确定义，但是关于它在自身免疫性疾病及肿瘤发生、凋亡的研究屡见不鲜，值得关注。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体联合顺铂对小鼠移植型肝癌抑制作用的研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）联合顺铂（DDP）对小鼠移植型肝癌的抑制作用。方法 H22肝癌移植瘤小鼠随机分为生理盐水（对照）组、TRAIL组、TRAIL＋DDP组和DDP组,称取瘤重分析其抑瘤作用、流式细胞检测细胞凋亡率。结果 （1）与对照组相比,TRAIL、DDP对小鼠移植性肝癌生长均有明显的抑制作用（P〈0.01）,TRAIL与DDP联用有增效作用（P〈0.05）。TRAIL组、DDP组及TRAIL＋DDP组的抑瘤率分别为45.14%、57.98%和77.23%。（2）与单一用药组相比,TRAIL与DDP联用可明显提高肿瘤细胞的凋亡率。结论 TRAIL与DDP联用对小鼠H22肝癌移植瘤的生长具有协同抑制作用。     

肝病患者血清肿瘤标记物含量及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体表达在癌变中的临床意义

目的 探讨血浆透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型胶原(ⅢC)、Ⅳ型胶原(ⅣC)、甲胎蛋白(AFP)和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体-2(DR5)、诱捕受体-1(DcR1)的表达与肝纤维化及肝癌变的关系.方法 用ELISA方法测定正常对照组(A 组)、肝炎组(B 组)及肝硬化并发肝癌组(C 组)的HA、ⅢC、ⅣC 及LN 和AFP 的含量,用WesternBlotting 检测肝癌手术的癌组织、癌旁组织AFP、DR5 和DcR1 的表达.结果 HA、LN、ⅢC、ⅣC 和AFP 的血清含量由高到低:C 组＞B 组＞A 组;(1)ⅢC、ⅣC、LN 的相关性:A、B、C 组ⅢC、ⅣC、LN 表达呈正相关,r 分别为0.623、0.651、0.714 (P 均＜0.05).(2)C 组的各个观察指标均高于B 组和A 组,特别是血清AFP 和HA 含量,在A 组和B 组之间尽管也有统计学的意义(P ＜0.05),但是C 和A、B 组比较,这两者的含量显著性升高(P ＜0.001).(3)Western Blotting 分析显示,癌旁组织的AFP 和DcR1 表达明显低于癌组织(P 均＜0.05);而DR5 在癌旁组织表达则明显高于癌组织(P 均＜0.05).结论 由肝炎到肝硬化、肝癌的过程中HA 的累聚以及LN、ⅢC、ⅣC 和AFP 的表达是一个渐进的基因激活过程;AFP、DR5 和DcR1 在肝癌组织的表达变化预示癌细胞耐受凋亡诱导.     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对胶质瘤细胞的诱导凋亡作用

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosisfactor related apoptosis-inducingligand,TRAIL）可以诱导多种肿瘤细胞发生凋亡,并且对正常细胞没有明显的毒性作用,因此在美国已进入临床Ⅱ期药物开发阶段。     

肾同种移植排斥患者血清可溶性TNF相关凋亡诱导配体及多种细胞因子水平变化的临床意义

目的:观察肾同种移植排斥患者血清可溶性TRAIL(sTRAIL)、sTNFR-I、sTNFR-II、sFas、sFasL的水平变化与临床意义。方法:采用酶联免疫双抗体夹心法测定。结果:受试组(n=29)与健康对照组(n=29)比较sTRAIL、sTNFR-I、sTNFR-II、sFas差异有显著性(P<0.01)。受试组与对照组(n=58)sFasL比较差异无显著性(P>0.05)。结论:肾同种移植排斥患者血清sTRAIL、sTNFR-I、sTNFR-II、sFas水平比对照组显著升高,提示血清这些细胞因子的含量变化在肾同种移植排斥病理过程中起着重要作用。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对骨髓基质细胞的毒性作用

背景:已证实肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)能选择性诱导白血病细胞凋亡,并且不影响正常造血干/祖细胞的功能。但TRAIL对作为造血微环境核心的骨髓基质细胞的毒性作用如何,据作者查新检索目前尚未见系统报道。目的:通过观察TRAIL对骨髓基质细胞的凋亡诱导效应及其造血支持功能的影响,继而评价TRAIL对骨髓基质细胞的毒性作用。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2006-03/10在解放军沈阳军区总医院中心实验室完成。材料:血常规、骨髓涂片细胞检查正常的骨髓标本11份,取自解放军沈阳军区总医院血液科。化疗药物柔红霉素为浙江海正药业股份有限公司产品,国药准字H33020925。方法:Percoll 贴壁法体外分离培养骨髓基质细胞,达80%融合时胰蛋白酶消化扩增,取处于对数生长期的细胞,分为4组,空白对照组不进行任何干预,柔红霉素组加入0.5μmol/L柔红霉素作用24h,TRAIL组加入200μg/L TRAIL作用18h,联合组加入0.5μmoL/L柔红霉素作用6h后再以200μg/L TRAIL作用18h。取第2代骨髓基质细胞,60Co射线照射消除内源性造血集落,接种后去除悬浮细胞,TRAIL组以200μg/L TRAIL作用基质细胞层18h,按1×105/孔将骨髓单个核细胞接种于基质细胞层,扩增5d后加入甲基纤维素培养体系,于37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度条件下培养10d。主要观察指标:荧光显微镜观察诱骗受体在骨髓基质细胞的表达及定位,流式细胞仪检测柔红霉素对骨髓基质细胞诱骗受体表达的影响,AnnexinⅤ/PI标记TRAIL对骨髓基质细胞的凋亡诱导作用及对其造血支持功能的影响。结果:诱骗受体DcR1和DcR2在骨髓基质细胞中均有表达,主要定位于胞膜及胞浆。0.5μmol/L柔红霉素作用24h后,基本不影响诱骗受体DcR1和DcR2的表达水平。与空白对照组细胞凋亡率比较,TRAIL组无明显变化(t=0.973,P>0.05);柔红霉素组、联合组均显著升高(t=5.141,P=0.001;t=4.187,P=0.002),此两组间比较差异无显著性意义(t=1.222,P>0.05)。与空白对照组比较,TRAIL组骨髓单个核细胞数、粒-巨噬集落形成单位均无明显变化(t=1.313,P>0.05;t=1.172,P>0.05)结论:TRAIL的诱骗受体DcR1及DcR2在骨髓基质细胞均有表达,使骨髓基质细胞免于TRAIL的凋亡诱导效应,且TRAIL不增强柔红霉素对骨髓基质细胞的细胞毒性作用。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对类风湿关节炎滑膜细胞的影响

目的探讨重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(hTRAIL)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASF)的作用。方法原代培养RASF,不同浓度hTRAIL(0、100、200、400、800、1000 ng/ml)干预4 h,检测hTRAIL对RASF的增殖和凋亡及其相应受体DR5 mRNA和蛋白表达的影响。结果 100、200、400、800、1000 ng/ml hTRAIL干预可抑制RASF增殖;可上调DR5 mRNA(0.801±0.036、0.947±0.032、0.969±0.048、1.052±0.031、0.992±0.072)和蛋白(0.650±0.118、0.803±0.142、0.968±0.130、0.945±0.136、0.864±0.160)表达(F=78.478,F=18.627,均P<0.01);高浓度hTRAIL(400、800、1000 ng/ml)可诱导RASF发生凋亡[(5.82±0.43)%、(7.32±0.49)%、(8.78±0.81)%](F=304.573,P<0.01)。结论 hTRAIL可诱导类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体及其在骨髓增生异常综合征和白血病方面的研究进展

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)是TNF超家族新成员，它可以选择性诱导肿瘤细胞凋亡，而对正常细胞无毒性作用，这种特性使其可能在肿瘤治疗中发挥巨大潜力。本文就TRAIL及其在骨髓增生异常综合征和白血病方面的研究进展作一综述。     

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体及其在骨髓增生异常综合征和白血病方面的研究进展

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)是TNF超家族新成员,它可以选择性诱导肿瘤 细胞凋亡,而对正常细胞无毒性作用,这种特性使其可能在肿瘤治疗中发挥巨大潜力。本文就TRAIL及其 在骨髓增生异常综合征和白血病方面的研究进展作一综述。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合三氧化二砷对急性髓系白血病细胞凋亡的影响

我们观察了肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)和三氧化二砷(As2O3)分别和联合对急性髓系白血病(AML)细胞凋亡的影响，旨在探讨TRAIL与As2O3联合应用治疗白血病的临床价值。     

肝细胞生长因子在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体作用下对原代肝星状细胞增殖及凋亡的影响

背景:活化的肝星状细胞是肝纤维化的关键因素,研究表明肝细胞生长因子能促进星状细胞凋亡,其具体机制可能与增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导星状细胞凋亡有关。目的:观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体作用下,肝细胞生长因子对原代肝星状细胞增殖、凋亡的影响并初步探讨其可能机制。方法:将SD大鼠原代肝星状细胞复苏、传代,细胞增殖明显时用于实验。实验分为4组:空白对照组为单纯肝星状细胞培养;肝细胞生长因子组:将100μg/L肝细胞生长因子作用于肝星状细胞;TRAIL组:将2mg/L的TRAIL作用于肝星状细胞;肝细胞生长因子+TRAIL组:将肝细胞生长因子预先刺激肝星状细胞24h,再加入2mg/LTRAIL。结果与结论:MTT检测显示肝细胞生长因子及TRAIL分别在50～200μg/L、0.5～1.5mg/L各浓度下对肝星状细胞增殖抑制率无影响,TRAIL在2mg/L作用下对肝星状细胞有抑制作用。流式细胞仪检测肝细胞生长因子+TRAIL组的中晚期凋亡率明显高于空白对照组及肝细胞生长因子组(P<0.05);肝细胞生长因子+TRAIL组DR5荧光强度明显高于其他3组(P<0.01)。提示在TRAIL作用下,肝细胞生长因子能促进肝星状细胞的凋亡、抑制其增殖。可能与肝细胞生长因子上调活化肝星状细胞表面DR5表达有关。     

构建含肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因慢病毒载体

背景：腺病毒的表达时间有限,会限制目的基因的表达时间和表达量,不利于实验的持续进行,故文章选择慢病毒作为载体,与目的基因大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因片段进行基因重组。 目的：探讨构建含有大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因慢病毒载体的方法。 方法：根据GenBank中大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体序列（NM 145681.1）,设计出该基因的特异性引物Trail-AgeⅠ-F和Trail-AgeⅠ-R,用PCR法从大鼠cDNA文库中扩增出目的基因,AgeⅠ酶切将该基因克隆入真核表达载体GV218中,产生目的重组质粒,用脂质体 Lipofeetamine 2000包裹构建的重组质粒和辅助包装载体,3个质粒共同转染293T细胞,产生含有表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白的慢病毒颗粒,收集病毒进行滴度鉴定,收集细胞提取蛋白进行基因表达情况的检测。 结果与结论：筛选出的克隆阳性菌测序获得肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因,全长861 bp,与GenBank中发表的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体核苷酸序列完全一致。包装后的病毒LV-mTrail在转染2 d后收集病毒液,经PCR和Western blot方法鉴定,从基因和蛋白的层面均证实携带有目的基因肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因。孔稀释法及实时荧光定量PCR病毒滴度测定法测定结果为2×109 TU/mL。提示大肠杆菌同源重组法能有效和方便地构建出含有肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因的慢病毒载体。