RNAa与肿瘤

小分子RNA在基因表达调控方面起着至关重要的作用.10年前研究发现小分子双链RNA(dsRNA)进入细胞后能导致同源性基因表达沉寂,即RNA干扰现象(RNAi).RNAi是由与靶基因具有同源性的dsRNA诱发的,这些dsRNA可产生于细胞内,由RNA酶Dicer将长的双链RNA分子切割成21个碱基对片断而生成;也可以在细胞外人工合成,然后引入细胞.     

小分子非编码RNA基因激活研究进展

RNA 激活（RNA activation,RNAa）是一种独特的小分子非编码 RNA（ncRNA）对基因表达的正向调控机制。2006年 Li 等在研究针对基因启动子DNA 序列的小双链 RNA（dsRNA）分子对基因表达的调控过程中,发现特定序列的 dsRNA 可以特异性地将某些沉默或低表达基因激活,其将这个现象称之为“RNA 激活暠,具有激活功能的 dsRNA 分子称之为小激活 RNA （saRNA）,并予以首次报道。     

RNA干扰技术及其在肝癌治疗中的应用

RNA干扰(RNAi)是指生物体内由双链RNA(dsRNA)介导同源mRNA的特异性降解,从而导致基因沉默的现象.随着研究的不断深入,RNAi在肝癌治疗中的应用也取得了积极的进展,显示着巨大的潜力,本文就此予以综述.     

p21基因的saRNA表达质粒的构建及功能研究

目的构建可表达具有RNA激活功能的小激活RNA(saRNA)质粒表达载体,并对其激活前列腺癌细胞PC-3中p21WAF1/CIP1(p21)基因表达的功能进行相关研究。方法人工合成与p21基因启动子特定序列相应的DNA片段及同样长度的随机DNA序列,利用DNA重组技术将这些片段构建到真核小分子双链RNA(dsRNA)表达质粒pGenesil-1中,构建成能表达dsRNA片段的表达质粒载体(dsRNAp21-pGenesil-1)和随机对照dsRNA片段的表达质粒载体(dsRNACon-pGenesil-1)。采用脂质体介导方法,分别将dsRNAp21-pGenesil-1(实验组)、dsRNACon-pGenesil-1(随机对照组)及空白质粒pGenesil-1(空白对照组)转染到体外培养的PC-3细胞,通过荧光染色检测转染效率,采用RT-PCR和免疫组化技术检测各组细胞p21蛋白表达的差异。结果成功构建目的表达载体dsRNAp21-pGenesil-1及随机对照载体dsRNACon-pGenesil-1,将各组质粒转染到PC-3细胞后,实验组p21基因表达明显增强,而随机对照组和空白对照组无明显变化。结论本研究构建的dsRNA表达质粒载体能成功表达saRNA分子,并激活p21基因及蛋白的表达,为研究的激活效应提供有效工具。     

RNA干扰技术及其在前列腺癌基因治疗研究中的应用

RNA干扰(RNA i)是指生物体内由双链RNA(dsRNA)介导同源序列mRNA的特异性降解,从而导致基因沉默的现象。近年来,随着对RNA i研究的不断深入,其作用机制正逐步阐明;同时作为阻断基因表达的新手段,RNA i技术也日趋完善和成熟。它具有高效性和特异性,为RNA i在肿瘤的基因治疗方面的应用提供了有力的工具。本文综述RNA i技术的有关研究进展及其在前列腺癌基因治疗研究中的应用。     

RNA干扰与肿瘤治疗的研究进展

RNA干扰(RNA interference，RNAi)指与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA(double—stranded RNA，dsRNA)导入细胞时，该序列mRNA发生特异性的降解，并导致基因表达的沉默。小干扰RNA(small—imerfering RNA，siRNA)是RNAi作用的主要介质。其可经体外合成再转入细胞，也可通过各种载体内源性表达。RNAi在基因功能研究选择上具有独特的价值，在疾病的治疗上也有良好的应用前景。     

RNAi在大肠癌微转移中的研究进展

RNA干扰(RNA interference,RNAi)现象是指内源性或外源性双链RNA(dsRNA)介导细胞内的mRNA发生特异性降解,导致靶基因的表达沉默,产生相应的功能表型缺失。它能够高度特异性、高效性地抑制基因的表达,被广泛运用于肿瘤研究。检测大肠癌微转移的基因标记物也越来越多,RNAi能够在肿瘤浸润和转移的多个步骤中抑制其表达,从而影响大肠癌微转移。     

RNA干扰与肿瘤治疗的研究进展

RNA干扰 (RNAinterference ,RNAi)指与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA(double -strandedRNA ,dsRNA)导入细胞时 ,该序列mRNA发生特异性的降解 ,并导致基因表达的沉默。小干扰RNA(small-interferingRNA ,siRNA)是RNAi作用的主要介质。其可经体外合成再转入细胞 ,也可通过各种载体内源性表达。RNAi在基因功能研究选择上具有独特的价值 ,在疾病的治疗上也有良好的应用前景。     

RNA干扰技术的进展及应用

RNA干扰是近年来出现的一种利用小双链RNA(dsRNA)高效、特异的促使mRNA降解 ,从而阻断体内特定基因表达 ,诱使细胞表现出特定基因缺失表型的一种技术。本文主要对RNA干扰的发现、机制、优越性以及在基因敲除和病毒防治等方面的应用的最新进展作以综述 ,并对其未来发展作以预计     

dsRNA介导的PTEN基因表达上调及其与启动子区甲基化的关系

目的 观察以启动子区非CpG岛序列为靶点的dsRNA促进PTEN基因的表达,并探讨RNAa现象对PTEN基因启动子区DNA甲基化的影响.方法 将与PTEN基因启动子区非CpG岛DNA序列互补的双链RNA分子(dsPTEN) 转染入A549和H292肺癌细胞中,采用real-time聚合酶链反应(PCR)检测PTEN的表达,筛选能够促进PTEN基因表达的有效dsRNA序列.通过甲基化特异性PCR(MSP)产物测序,检测dsRNA转染前后启动子区甲基化程度的变化.结果 经多条dsRNA分别转染肺癌细胞,证实针对PTEN基因-57到-38的序列(dsPTEN2-2)转染H292肺癌细胞后出现PTEN基因表达的明显上调,上调最高达5.1倍(与对照dsRNA比较,P<0.05),证实了RNAa现象的存在;使用5-Aza处理后的A549和H292细胞与空白组比较CpG点甲基化明显减少(5±3比10±4、6±3比9±3,P均<0.05),而转染PTEN2-2 dsRNA后的两个细胞株CpG点甲基化情况与未转染组比较无明显变化(9±2比10±4、9±3比9±3,P均>0.05).结论 dsRNA可以促进PTEN基因表达的上调,RNAa现象并不改变PTEN基因启动子区甲基化程度.

Abstract：

Objective To evaluate the phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten (PTEN) gene activation induced by double-standed RNA (dsRNA) in lung cancer cell line and its correlation with CpG island methylation in the promoter region. Methods Specific dsRNA complementary to the non-CpG island sequence in the promoter of PTEN gene was designed and transfected into H292 and A549 cell lines, and the expression of PTEN mRNA was determined by real-time quantitative polymerase chain reaction (PCR). The methylation status of the CpG island in the promoter region was tested by DNA sequencing on the bisulfate modified DNA. Results By testing several dsRNA sequences targeting promoter region of PTEN, a dsRNA named PTEN2-2 (target on -57 to -38 of the PTEN) was identified, which could upregulate the PTEN expression by 5.1 times at most (P<0.05, controlled with the dsControl). Epigenetic analysis of PTEN promoter region confirmed DNA hypermethylation. PTEN2-2 dsRNA transfection turned on the expression of PTEN without affecting the methylation status of promoter DNA (9±2 vs 10±4, 9±3 vs 9±3, both P>0.05), as the DNA methyltransferase inhibitor did (5±3 vs 10±4, 6±3 vs 9±3, both P<0.05). Conclusion The expression of PTEN mRNA could be enhanced by inducing the dsRNA into the cells, but no evidence was found that dsRNA could affect the methylation status of the CpG island in the promoter region of this gene.     

RNA干扰技术简介

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double—stranded RNA，dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。近几年来RNAi研究取得了突破性进展，被((Science))杂志评为2001年的十大科学进展之。一，并名列2002年十人科学进展之首。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域。     

dsRNA激活PTEN基因对肺癌细胞生物活性的影响

目的 探讨双链RNA分子(dsRNA)促进肺癌细胞中PTEN基因表达后,肺癌细胞生物活性的改变.方法 根据前期研究结果,利用针对PTEN基因启动子区域非CpG岛序列的dsRNA,将其转染入肺癌肿瘤细胞A549和H292,绘制生长曲线,探讨转染后细胞增殖变化通过Transwell小室法检测侵袭能力,以及通过流式细胞仪检测细胞周期的变化.结果 A549和H292细胞转染特异dsRNA分子后,与未经转染的细胞相比,PTEN基因mRNA表达量可增至4倍,但细胞的增殖、侵袭能力无显著变化.与对照组比,较多细胞停留于G1期.结论 dsRNA分子激活后可以增加PTEN基因表达,但对于其细胞功能并无显著影响.     

RNA激活研究进展

近年的研究发现非编码RNA(ncRNA)分子能在多个水平参与基因表达的调控机制,其中小分子双链RNA(dsRNA)对相关蛋白表达的特异性抑制作用已经进行了广泛而深入的研究,如小干扰RNA(siRNA)能够诱导与其分子核糖核苷酸排列序列相一致的mRNA降解,或可使相应基因启动子区域DNA的同源序列段CpG岛发生甲基化[1,2],并导致相应的基因失去转录活性,造成特定基因沉默.细胞内源性的microRNA(miRNA)也可在基因转录和翻译水平抑制基因的表达[3-5],体现出ncRNA分子在基因表达调控中的多样性.     

RNA干扰及其在乳腺癌研究中的应用

RNA干扰（RNAi）是由双链RNA（double-stranded RNA,dsRNA）引起的，广泛存在在于动植物中的序列特异性转录后基因沉默，从而抑制其相应基因表达的过程。作为高效、特异的调节基因表达的技术，RNAi已成为基因功能研究的有力工具。     

Effects of p21 gene expression up-regulation by small activating RNA on poliferation, invasion and migration of gallbladder cancer cells

目的 利用RNA激活技术上调人胆囊癌细胞(GBC-SD)中p21基因的表达,观察其对GBS-SD细胞体外增殖、侵袭和迁移能力的影响.方法 将与p21基因启动子DNA序列互补的双链RNA分子(dsRNA)转染人人胆囊癌细胞中,采用RT-PCR法和Western blot分别检测p21基因mRNA及蛋白的表达情况;MTT法检测细胞增殖活性;Transwell小室法检测RNAa后细胞侵袭、迁移能力的变化.结果 dsRNA转染GBC-SD细胞72h后能显著上调p21基因mRNA和蛋白的表达,与空白组和对照组比较,转染dsp21后,GBC-SD细胞的增殖活性明显受到抑制,细胞侵袭及迁移能力明显下降.结论 RNAa技术能有效上调p21基因的表达并抑制细胞的增殖活性,降低其侵袭及迁移能力,为胆囊癌疾病的基因治疗提供依据.     

RNA激活技术上调p21WAF1/CIP1基因表达对胆囊癌细胞增殖、侵袭与迁移能力的影响

目的利用RNA激活技术上调人胆囊癌细胞(GBC-SD)中p21基因的表达,观察其对GBS-SD细胞体外增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法将与p21基因启动子DNA序列互补的双链RNA分子(dsRNA)转染入人胆囊癌细胞中,采用RT-PCR法和Western blot分别检测p21基因mRNA及蛋白的表达情况;MTT法检测细胞增殖活性;Transwell小室法检测RNAa后细胞侵袭、迁移能力的变化。结果 dsRNA转染GBC-SD细胞72h后能显著上调p21基因mRNA和蛋白的表达,与空白组和对照组比较,转染dsp21后,GBC-SD细胞的增殖活性明显受到抑制,细胞侵袭及迁移能力明显下降。结论 RNAa技术能有效上调p21基因的表达并抑制细胞的增殖活性,降低其侵袭及迁移能力,为胆囊癌疾病的基因治疗提供依据。     

RNA干扰技术在肝细胞癌治疗方面的研究现状及进展

RNA干扰(RNAi)是生物进化过程中高度保守且借助双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)诱发,高效特异性降解同源mRNA的现象。近来研究发现RNAi技术可高度特异地剔除或关闭目的靶基因,从而操控其表达。目前该技术广泛应用于研究靶基因功能、治疗部分疾病特别是恶性肿瘤的基因治疗。肝癌在我国高发,严重威胁患者的生命,针对肝癌的早期诊断、治疗和预后评估一直是外科肿瘤学领域的研究重点。近年,将RNAi技术与肝癌分子生物学机制方面的研究相结合,呈现出很多令人期待、值得深入的研究成果。对此领域的近期研究成果做扼要综述。     

RNA干涉基本原理及其应用前景

RNA干涉（RNA interference，RNAi）的发现源于偶然。1995年康耐尔大学的Guo等试图用反义技术特异性阻断秀丽线虫中par—1基因的表达以研究其功能．但实验发现给线虫注射par—1的反义RNA时，如预期那样阻断了该基因的表达．但当在对照组注射正义RNA时以期待观察到该基因表达增强时．却发现该基因同样被抑制．该研究小组一直没能给出合理的解释。直到1998年，华盛顿卡耐基研究院的Fire和马萨诸塞州大学的Mello才解出谜底——他们将体外转录得到的单链RNA（正义RNA或反义RNA）纯化后注射给秀丽线虫．结果基因抑制效应很微弱，而将正义链和反义链混合的双链RNA纯化后给予线虫．却发现这种双链RNA（double stranded RNA，dsRNA）比单独的正义RNA或反义RNA具有更高效的特异性基因沉默效应，且几个dsRNA分子就足以实现整个同源基因的完全沉默。还会在子代中也引起相应的基因沉默．至此他们将这种现象称作RNAi。