黄芪对晚期糖基化终末产物作用下肾小球系膜细胞的影响

目的：研究黄芪对晚期糖基化终末产物（AGEs）作用下牛肾小球系膜细胞（GMC）增殖和损伤的影响。方法：采用MTT比色法,观察黄芪对体外AGEs培养的GMC增殖的影响。以GMC细胞膜与阿利新蓝（AB）结合量为指标,观察黄芪对AGEs导致的系膜细胞膜损伤的影响。利用AO/EB染料观察AGEs作用下GMC的凋亡,并用荧光显微镜观察黄芪对凋亡的抑制作用。结果：黄芪对GMC增殖有抑制作用,可对抗AGEs导致的细胞膜负电荷减少,并且对抗AGEs诱导凋亡的作用,对系膜细胞有保护作用。结论：黄芪可有效抑制AGEs作用下GMC增殖并有细胞保护作用,是治疗糖尿病肾病的有效药物。     

绞股蓝皂苷对晚期糖基化终末产物诱导人肾小球系膜细胞晚期糖基化终末产物受体表达及氧化应激水平的影响

目的观察绞股蓝皂苷(GP)对晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导下人肾小球系膜细胞(HMCs)中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)表达及氧化应激水平的影响。方法用含13%FBS的DMEM低糖培养液体外培养HMCs细胞,将细胞分为6组:对照组(DMEM培养液),AGEs组(200 mg/L),GP低、中、高剂量(25、75、150 mg/L)组和阳性对照组(氨基胍0.1 mmol/L)。培养72 h后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中RAGE m RNA的表达水平,Western blotting法检测RAGE蛋白表达水平。应用试剂盒检测各组细胞上清液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及细胞内微量还原型谷胱甘肽(GSH)活性。结果 AGEs显著促进HMCs中RAGE m RNA及蛋白表达(P0.01),增强细胞氧化应激水平。GP能有效抑制RAGE m RNA及蛋白表达,增加上清液中SOD和细胞内GSH水平,降低细胞上清液中MDA水平,且呈浓度依赖效应,与AGEs组比较差异显著(P0.01)。结论 GP下调AGEs刺激后HMCs细胞RAGE的异常高表达,同时改善细胞内氧化应激水平,其可能的机制是GP阻断了RAGE介导的AGEs-RAGE-氧化应激信号通路,表现为细胞上清液中MDA水平降低和SOD水平增加及细胞内GSH水平增加。     

中药降糖复方水提取物对KK-Ay糖尿病小鼠糖基化终末端产物及氧化应激的影响

研究中药降糖复方水提取物对KK-Ay小鼠AGEs和RAGE的影响。将自发性2型糖尿病模型KK-Ay小鼠随机分成5组:模型组、二甲双胍组、中药降糖复方低、中、高剂量组。另外,C57BL/6J小鼠作为正常对照组。其中二甲双胍组灌胃盐酸二甲双胍250 mg·kg~(-1);中药降糖复方低、中、高剂量组分别灌胃水提取物2,4,8 g·kg~(-1);正常对照组和模型组灌胃等体积蒸馏水,每日1次,共12周。实验过程中分别对小鼠血清中及(或)尿液中的谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、肌酐(creatinine,Cr)、血清尿素氮(urea nitrogen,BUN)、糖基化终末端产物(advanced glycation end products,AGEs)及糖基化终末端产物受体(receptor of glycation end products,RAGE)等进行检测。于灌胃12周后处死小鼠,取小鼠肾脏做病理切片及免疫组化,同时取肾组织做蛋白印记法Western blot、荧光实时定量PCR、酶联免疫吸附测定法ELISA检测AGEs,RAGE,过氧化氢酶(Cata-lase,CAT)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)等氧化应激指标。该研究证实中药降糖复方水提取物能在一定程度上改善KK-Ay小鼠肾功能(P0.05),缓解糖尿病肾病,猜测其机制可能与降低体内AGEs和RAGE,抑制氧化应激有关。     

非酶糖基化终末产物所致疾病的中药干预

非酶糖基化终末产物(AGEs)是蛋白质、脂质和核酸等大分子的游离氨基与还原性单糖的醛基反应所生成的稳定的共价化合物,在体内的积累是导致糖尿病等多种疾病及其并发症的关键因素。AGEs可直接或间接地对机体产生致病作用。目前AGEs抑制剂特别是某些中药在治疗AGEs引起的疾病方面研究进展迅速,主要通过降低体内AGEs水平、减少AGEs交联、抗氧化、阻断与相关受体的结合等途径来干预AGEs的合成、代谢和受体后效应。简述AGEs的致病机制,并探讨中药对AGEs所致疾病的干预及其可能机制。     

黄芪对初诊2型糖尿病患者血清晚期糖基化终末产物、可溶性糖基化终末产物受体水平的影响

目的 观察黄芪对初诊2型糖尿病患者血清晚期糖基化终末产物(AGEs)、可溶性糖基化终末产物受体(sRAGE)水平的影响.方法 选择2010年9月至2011年12月江苏省常熟市中医院(新区医院)内分泌科初诊2型糖尿病患者56例,按随机数字表法分为两组各28例,对照组给予控制血糖、血压、血脂等治疗,治疗组在对照组基础上加用黄芪颗粒剂冲服,两组均治疗12周为1个疗程,治疗前后均检测生化指标,采用酶联免疫吸附法检测血清AGEs、sRAGE水平.结果 ①对照组糖化血红蛋白(HbA1c)、甘油三脂(TG)治疗后[(7.28±0.83)％、(1.45±0.39) mmol/L]较同组治疗前[(9.57±1.14)％、(1.92±1.01) mmol/L]明显下降(t值分别为5.75、2.79,P＜0.05);②治疗组HbA1c、TG治疗后[(7.16±0.88)％、(1.53±0.41) mmol/L]较同组治疗前[(9.29±1.62)％、(2.11±0.79) mmol/L]下降(t值分别为6.08、2.40,P＜0.05);③治疗组治疗后血清sRAGE水平(20.38±8.01) ng/ml较同组治疗前(15.10±9.22) ng/ml升高(t＝-2.29,P＜0.05),与对照组治疗后(15.13±9.27) ng/ml比较,差异有统计学意义(t＝-1.17,P＜0.05).结论 黄芪可上调初诊2型糖尿病患者血清sRAGE表达.     

清热中药对高糖培养下肾小球系膜细胞增殖的影响

为研究清热中药治疗糖尿病肾病的作用机理,验证中医理论对糖尿病发病机制的认识,并为临床用药提供依据。采用MTF比色法,观察具有清热作用的中药知母、生地、胡黄连和地骨皮水提物对体外高糖条件下培养的牛肾小球系膜细胞增殖的影响。结果显示,知母、生地和胡黄连对系膜细胞增殖有抑制作用,而地骨皮无明显作用。提示清热中药可能通过抑制系膜细胞的增殖从而对糖尿病肾病的发生产生一定的影响。     

中药对高糖作用下牛肾小球系膜细胞增殖的影响

目的研究分别具有益气、养阴、清热、活血功效的中药对高糖作用下牛肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响.方法采用 MTT 比色法,观察黄芪、白芍、山楂、知母、当归对体外高糖培养的牛肾小球系膜细胞增殖的影响.结果黄芪、白芍、山楂、知母对系膜细胞增殖有抑制作用,而当归无抑制作用.结论养阴益气、清热活血中药是治疗糖尿病肾病的有效药物.     

中药复方对大鼠肾小球系膜细胞增殖影响的实验研究

1实验材料中药材:中药人参(Radix Ginseng)、黄芪(Radix Astra-gali)、大黄(Radixet Rhizoma Rhei)、水蛭(Hirudo)均购自大连市医药采购供应站,由辽宁省药品检验所鉴定。细胞:大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)由武汉大学中国典型培养物保藏中心提供。试剂:MEM细胞干粉培养基Gibco;新生牛血清(FCS),鼎国生物;胰蛋白酶(1∶250);乙二胺四乙酸二钠(EDTA);二甲基亚砜(DMSO);L-谷氨酰胺西宝生物;噻唑蓝(MTT)Amresco;其余试剂均为分析纯或生化纯试剂。主要仪器:HEAL FORCE HF-1200超净工作台,上海力申科学仪器有限公司;CK30-12PHP倒…     

周络通胶囊对糖尿病周围神经病变小鼠坐骨神经糖基化终末产物及受体的影响

目的:观察周络通胶囊对糖尿病周围神经病变(DPN)小鼠的作用及对晚期糖基化终末产物(AGEs)及其受体的影响。方法:40只KK/Upj-Ay小鼠随机分为模型组、周络通胶囊高、中、低剂量组(6.85,3.43,1.71 g生药.kg-1),另设10只C57BL/6小鼠对照组。灌胃给药12周,观察一般情况,测定空腹血糖(FBG)及糖化血红蛋白(HbA1c);测定运动神经传导速度(MNCV);光镜及电镜观察坐骨神经形态学变化;荧光分光光度法测定坐骨神经中AGEs含量;荧光定量PCR和Western blot法测定坐骨神经AGEs受体(RAGE)表达。结果:周络通胶囊能不同程度改善模型小鼠症状,高剂量组能降低FBG和HbA1c(P<0.05,P<0.01);3组均能提高MNCV(P<0.05,P<0.01);减轻坐骨神经病理损伤;降低AGEs含量及RAGE mRNA和蛋白的表达(P<0.05,P<0.01)。结论:周络通胶囊对DPN有明显的改善作用,其机制可能与降低周围神经AGEs形成、抑制RAGE表达有关。     

莫诺苷对晚期糖基化终末产物加重链脲佐菌素诱导糖尿病肾病保护作用及其机制

目的探讨山茱萸Cornus officinalis中效应成分莫诺苷对晚期糖基化终末产物(AGEs)加重链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病(DN)小鼠的保护机制。方法将STZ诱导成功的DN小鼠饲喂高AGEs饲料,并分别ig给予氨基胍(0.1 g/kg)、二甲双胍(0.2 g/kg)、卡托普利(0.02 g/kg)、莫诺苷低剂量(0.02 g/kg)和莫诺苷高剂量(0.10 g/kg)12周。检测空腹血糖、胰岛素、血清肌酐和尿素氮、血清和肾脏AGEs、24 h尿蛋白等指标,RT-PCR法检测肾组织中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)m RNA表达,Westorn blotting法检测肾组织中RAGE蛋白表达,观察各组小鼠胰腺和肾脏的病理改变。结果莫诺苷可显著降低DN小鼠血糖,改善"三多一少"症状,增加胰岛素分泌,降低24 h尿蛋白、血清尿素氮和肌酐、血清和肾脏AGEs水平,缓解胰腺及肾脏病变,下调肾皮质RAGE m RNA和蛋白的表达。结论莫诺苷具有保护DN小鼠的作用,且高剂量作用较优,其相关机制可能与降低血清、肾脏AGEs水平,下调肾皮质RAGE m RNA和蛋白的表达有关。     

护肾固精方对大鼠肾小球系膜细胞增殖及白细胞介素-8的影响

目的探讨护肾固精方对肾小球系膜细胞增殖的影响及其作用机理.方法采用细胞培养与细胞分子学技术相结合方法,在大鼠肾小球系膜细胞培养体系中加入护肾固精方,分别以噻唑蓝法(MTT)和酶联免疫吸附法(ELISA),研究其对系膜细胞(Mesangial cell,MC)增殖和白细胞介素-8(IL-8)的影响.结果护肾固精方加入MC培养体系6d后,MC数(活细胞个数)为56835±6638,明显低于对照组138653±14388(P＜0.01).该方有抑制MC增殖的作用,而且这种抑制作用呈现一定量效关系,即药物浓度越高,抑制作用越明显.MC上清中IL-8含量对照组为0.168mg/L±0.113mg/L,治疗组为0.062mg/L±0.015mg/L,两组比较,有非常显著性差异(P＜0.01).结论护肾固精方有明显抑制肾小球MC增殖的作用.这种作用可能与其拮抗MC分泌IL-8等其它炎症介质有关.     

川芎嗪对人胎肾小球系膜细胞增殖的影响及其机理探讨

在人胎肾小球系膜细胞培养体系中加入川芎嗪后能抑制ＭＣ生长数量。川芎嗪０．６ｍｍｏｌ，１．２ｍｍｏｌ加入ＭＣ培养系６天后，ＭＣ数量分别为：３７５８０±３４７５，２７３５０±３４１８，明显低于对照组７１８５０±５１０８（Ｐ＜０．０５）；ＭＣ＾３Ｈ－ＴｄＲ摄取量对照组为３５７５±３０６，加入川芎嗪０．６ｍｍｏｌ，１．２ｍｍｏｌ后分别为１０１７±２０，５８３±２７１（Ｐ＜０．０１）；加入川芎嗪１ｍｍｏｌ于     

柴胡皂苷-d对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的探讨柴胡皂苷-d（saikosaponin—d,SSd）对脂多糖（1ipopolysaccharides,LPS）作用后肾小球系膜细胞（mesangialcell,MC）增殖及细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的异常增生的影响,为肾小球硬化的防治提供实验依据。方法体外培养、鉴定大鼠肾小球MC。利用MTT、LDH释放实验、流式细胞技术观察SSd对LPS刺激后MC增殖的作用,ELISA法检测细胞外基质Ⅳ型胶原（type1Vcollagen,ColⅣ）、纤维连接蛋白（fibronectin,FN）及转化生长因子（transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1）。细胞免疫化学法检测细胞素依赖性蛋白激酶4（cyclin—dependentkinase4,CDK4）、c—Jun、c—Fos。结果SSd对MC增殖有抑制作用,可使Go／G1期细胞增多,并诱导细胞凋亡;SSd可抑制MC分泌ColⅣ、FN、TGF-β1,并抑制了CDK4、c-Jun、C—Fos的表达。结论SSd对肾小球硬化（glomerulosclerosis,GS）的抑制作用是通过抑制CDK4、c—Jun、c-Fos的表达实现的。     

黄芪对高糖高脂环境下内皮细胞与系膜细胞相互作用的影响

目的探讨黄芪对高糖高脂环境下内皮细胞与系膜细胞间相互作用的影响。方法内皮细胞与系膜细胞共培养和系膜细胞单独培养,分为对照组、甘露醇组、高糖高脂组、黄芪组,培养24h后,ELISA法检测各组细胞上清液IV型胶原（colIV）、纤维连接蛋白（Fn）的含量。结果在高糖高脂环境下,共培养和单培养细胞上清液ColIV、Fn含量升高（均P〈0．05）,共培养上清液C01IV、Fn较单培养升高（均P〈0．05）;黄芪组colIV、Fn含量较高糖高脂组下降（均P〈0．05）。结论高糖高脂环境下,系膜细胞和内皮细胞存在异常的相互作用,这种作用能促进ColIV、Fn产生。黄芪通过抑制高糖高脂条件下内皮细胞与系膜细胞间的相互作用,减少ColIV、Fn的含量,发挥肾脏保护作用。     

三七总皂苷对大鼠肾小球系膜细胞增殖及细胞周期的影响

目的:观察三七总皂苷(total Panax Notoginseng Saponins,tPNS)对体外培养的SD大鼠肾小球系膜细胞(Mesangial cells,MCs)增殖以及细胞周期的影响,以探讨tPNS在防治肾小球炎症和硬化中的作用及可能机理。方法:分离培养SD大鼠MCs,分为5组(n=8):空白对照组、血清刺激组、3个不同浓度(100,200,400μg/mL)的tPNS干预组。分别采用MTT法、细胞毒检测及流式细胞术观察大鼠MCs增殖及细胞周期的变化。结果:tPNS呈量效依赖抑制MCs增殖;降低S G2/M期细胞比例,且对MCs均无明显细胞毒性。结果:三七总皂苷通过减少DNA合成期(S期)细胞数量,抑制大鼠MCs增殖,而非依赖于诱导细胞凋亡和细胞毒性。     

糖尿病大鼠肾小球系膜细胞表型转化及菟箭合剂的作用

目的：研究糖尿病大鼠是否存在肾小球系膜细胞表型转化及中药菟箭合剂的作用。方法：SD大鼠分为正常对照组(NC组,n=8)、单肾切除对照组(QC组,n=8)、单肾切除链脲佐菌素(STZ)糖尿病组(DM组,n=8)、缬沙坦治疗组(VT组,n=8)和中药菟箭合剂治疗组(ZY组,n=9),缬沙坦治疗组和菟箭合剂治疗组分别在单肾切除STZ糖尿病模型成模后灌喂缬沙坦[20mg／(kg·d)]和菟箭合剂[20g／(kg·d)]12周,用免疫组化的方法观察大鼠肾小球内α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)和转移生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况,用计算机病理图像分析软件检测肾小球α-SMA和TGF-β染色阳性面积／肾小球毛细血管袢面积比。结果：NC组和QC组大鼠仅个别肾小球内有少量α-SMA阳性显色,DM组大鼠肾小球内可见显著的α-SMA阳性显色,肾小球内α-SMA阳性面积／肾小球毛细血管袢面积比和TGF-β1阳性面积／肾小球毛细血管袢面积比显著增加(P<0．01),24h尿蛋白排泄量较NC组和QC组大鼠显著增多(P<0．01);VT组和ZY组大鼠24h尿蛋白排泄量较DM组显著减少,肾小球内α-SMA阳性面积／肾小球毛细血管袢面积比和TGF-β阳性面积／肾小球毛细血管袢面积比较DM组显著降低(P<0．01);ZY组24h尿蛋白排泄量较VT组低(P<0．01)。结论：单肾切除STZ糖尿病大鼠肾小球内可见大量的α-SMA的表达,提示糖尿病肾病时存在肾小球系膜细胞表型转化,中药菟箭合剂和缬沙坦治疗后可显著减少糖尿病大鼠24h尿蛋白排泄量,抑制肾小球系膜细胞表型转化和肾小球内TGF-β的表达,菟箭合剂较缬沙坦降低糖尿病大鼠24h尿蛋白排泄量的作用更为显著。     

益肾降脂方对慢性肾功能衰竭大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的观察益肾降脂方对大鼠肾小球系膜细胞(Glomerularmesanialcell,GMC)增殖的影响。方法采用灌胃法给予实验性慢性肾功能衰竭(Chronicrenalfailure,CRF)大鼠益肾降脂方汤剂,观察其对大鼠血清GMC增殖的影响。结果与灌服生理盐水的对照组大鼠相比,益肾降脂方治疗组能明显抑制系膜细胞增殖(P<0.01),且优于至灵胶囊治疗组(P<0.01)。结论该方可能是通过抑制GMC的增殖起到治疗慢性肾功能衰竭的作用。     

肾康注射液与苯那普利对肾小球系膜基质作用的对比研究

目的 探讨肾康注射液与苯为利对人肾小球系膜细胞外基质（ＥＣＭ）不同成分的抑制作用强度。方法 采用体外培养的人肾小球系膜细胞技术，观察具有降逆泄浊、益气活血功效的中药肾康注射液及苯那普利时ＥＣＭ不同成分的影响。结果 肾康注射液具有抑制ＥＣＭ成分中纤维连接蛋白（ＦＮ）、层粘连蛋白（ＬＮ）和Ⅳ型胶原（ＣｏｌⅣ）的作用，该抑制作用具有一定的量效关系。苯那普利对ＥＣＭ中ＦＮ、ＣｏｌⅣ也有一定的抑制作用，但不