黄芪多糖对人肺癌A549 细胞增殖的作用及其机制的实验研究

目的探讨黄芪多糖（astragalus polysaccharide,APS）对人肺癌A549细胞增殖的作用及其机制。方法用不同浓度的APS（25μg.mL-1、50μg.mL-1、10μg.mL-1、200μg.mL-1、400μg.mL-1）作用于人肺癌A549细胞,用MTT法检测细胞增殖的抑制率,免疫细胞化学法检测bcl-2和bax的表达。结果 APS的浓度在25μg.mL-1～400μg.mL-1范围内均可抑制人肺癌A549细胞的增殖,100μg.mL-1的APS对A549细胞增殖的抑制率达最高,100μg.mL-1的APS作用于人肺癌A549细胞48和72小时后,均可下调bcl-2和上调bax的表达。结论 APS能够可抑制人肺癌A549细胞的增殖,可能与其下调bcl-2和上调bax的表达有关。     

灵芪胶囊体外对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡相关基因表达的影响

目的:观察灵芪胶囊(LQC)体外对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡相关基因表达的影响。方法:体外人肺腺癌A549细胞经LQC含药血清处理后,采用MTT比色法测定其抑制率;逆转录-聚合酶链反应检测其凋亡相关基因bcl-2、bax的mRNA表达;Wright-Giemsa染色法观察其形态变化。结果:不同浓度LQC含药血清对A549细胞增殖具有抑制作用,且与浓度呈正相关;LQC含药血清能使bcl-2基因的mRNA表达水平显著下降、bax基因的mRNA表达水平显著增强;同时,细胞形态发生改变。结论:LQC含药血清可调控肿瘤细胞凋亡的相关基因,这可能是其产生抗肿瘤生物学效应的基础之一。     

尖吻蝮蛇毒抑瘤组分I对人肺癌 A549细胞增殖抑制作用

目的：研究尖吻蝮蛇毒抑瘤组分I（ AAVC-I） 对人肺癌A549细胞增殖抑制及凋亡的作用。方法： 采用MTT法检测不同浓度的AAVC-I对A549细胞的24 h 与48 h 抑制率;应用HE染色、Hoechst33258荧光染色,从形态学观察细胞凋亡;采用免疫组化的方法,检测bax蛋白表达的变化。结果： MTT显示,AAVC-I能抑制A549细胞增殖,呈时间和剂量依赖性;AAVC-I处理24 h 后,镜下可见细胞核固缩,核深染及凋亡小体;免疫组化显示,随药物浓度增加,平均光密度值呈递增趋势,表明bax蛋白表达相应上调。结论：尖吻蝮蛇毒抑瘤组分I对人肺癌A549细胞具有抑制作用,并诱导其凋亡,可能与bax表达上调有关。     

异鼠李素诱导A549细胞凋亡的研究

目的观察异鼠李素是否能诱导人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡及相关基因的变化。方法20μg/ml异鼠李素处理A549细胞,光镜电镜下观察细胞形态;进行集落形成实验,MTT法测细胞生长抑制率;流式细胞仪检测凋亡峰及bax,bcl-2等凋亡相关基因的表达。结果10～640μg/ml异鼠李素可抑制A549细胞生长,抑制率有剂量依赖性。流式细胞仪检测20μg/ml异鼠李素处理后出现明显凋亡峰;药物可使bax表达上调,bcl-2表达明显下降,表达改变有浓度依赖性。结论异鼠李素可抑制A549细胞生长,诱导其凋亡,其诱导凋亡的作用与凋亡相关基因抗凋亡基因bcl-2表达明显下调,bax表达上调有关。     

西瑞香素对肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的影响

目的探讨西瑞香素对肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的影响。方法通过Transwell小室分析西瑞香素对肺癌A549细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测西瑞香素对肺癌A549细胞迁移能力的影响;Western blotting检测西瑞香素作用于A549细胞后MMP-2、MMP-9侵袭相关蛋白的表达。结果 Transwell小室实验结果提示,西瑞香素对A549细胞侵袭能力有抑制作用;划痕实验结果提示,西瑞香素对A549细胞迁移能力有抑制作用;Western blotting结果提示,西瑞香素抑制MMP-2、MMP-9侵袭相关蛋白的表达。随着药物浓度增加,MMP-2、MMP-9表达减少,具有剂量依赖性。结论西瑞香素对A549细胞体外侵袭及迁移有抑制作用,这种作用与抑制MMP-2、MMP-9表达有关。     

丹参对体外培养大鼠成纤维样滑膜细胞bcl-2和bax表达的影响

目的：探讨丹参对体外培养大鼠成纤维样滑膜细胞增殖及 bax、bcl-2表达的影响。方法取浓度为1.5＆#215;10-5个/ml的 RSC-364成纤维样滑膜细胞悬液100μl加入细胞培养板,培养24 h,加入含不同浓度丹参的培养液,采用 MTT法分析丹参对成纤维样滑膜细胞增殖抑制作用及其时效关系;免疫组化法检测 bcl-2、bax表达情况。结果丹参可明显抑制大鼠成纤维样滑膜细胞增殖,并显示出一定的量效和时效关系。丹参可显著上调大鼠成纤维样滑膜细胞 bax表达,下调 bcl-2表达,与空白对照组比较差异有统计学意义（ P 〈0.05）。结论丹参对体外培养大鼠成纤维样滑膜细胞的增殖具有抑制效应,其作用机制可能与调控 bax、bcl-2表达有关。     

姜黄素对人胚肺成纤维细胞增殖、凋亡及细胞外基质的影响

目的:研究A549与肺泡上皮细胞共培养条件下姜黄素对经转化生长因子β1(TGF-β1)刺激的人胚肺成纤维细胞生长、凋亡及分泌细胞外基质的影响,为姜黄素抗纤维化提供实验依据。方法:将利用与肺泡上皮细胞来源的A549细胞进行transwell跨室共培养的人胚肺成纤维细胞分为5组:对照组、模型组、不同浓度姜黄素(5、10、20μmol·mL-1)进行干预的治疗组。CCK-8法检测吸光值,计算细胞抑制率;流式细胞仪测定细胞凋亡率;Western blot法测定凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达;ELISA法测定细胞外基质Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、层黏蛋白(LN)、透明质酸(HA)的分泌。结果:姜黄素对人胚肺成纤维细胞有抑制作用,呈剂量依赖式。姜黄素处理组细胞凋亡率较对照组、模型组明显增加(P<0.01)。与模型组相比,姜黄素治疗组Bcl-2蛋白的表达明显减弱,而Bax蛋白的表达明显增强,Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)、层黏蛋白(LN)、透明质酸(HA)浓度下降。结论:姜黄素能抑制TGF-β1刺激的与A549细胞共培养的人胚肺成纤维细胞的增殖,降低细胞外基质的形成,促进其凋亡,具有抗肺纤维化作用,可能机制为通过下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达来实现。     

荞麦七提取物对肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

目的研究荞麦七提取物对人肺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。方法应用荞麦七水提物及荞麦七蒽醌处理肺癌A549细胞,锥虫蓝染色法检测细胞存活率,MTT法检测细胞增殖抑制率,免疫细胞化学法检测Caspase 9和P53蛋白表达水平。结果荞麦七水提取物对肺癌A549细胞增殖的抑制作用随浓度而增强,72 h的抑制率明显较24 h及48 h强,荞麦七蒽醌3种浓度的抑制率之间差异不大。2种提取物对Caspase 9的诱导作用均随着浓度的增大而增强,对P53的抑制作用也随着浓度的增大而增强。结论荞麦七水提物及蒽醌能抑制人肺癌A549细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与上调Caspase 9的表达及下调P53的表达有关。     

茶黄素双没食子酸酯对肺癌A549细胞生长及VEGF基因表达的影响

目的观察茶黄素双没食子酸酯(TFDG)对肺癌A549细胞株生长的抑制、促凋亡效应及对血管内皮生长因子(VEGF)基因表达的影响。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测TFDG对肺癌A549细胞生长的抑制作用,通过流式细胞术检测TFDG对肺癌A549细胞凋亡的影响,RT-PCR法检测A549细胞VEGF mRNA的表达。实验数据用x±s表示,采用单样本方差分析进行统计分析。结果 TFDG显著抑制A549肺癌细胞生长,具有时间依赖性和浓度依赖性;同时TFDG使A549细胞出现凋亡,凋亡率17.8%(P<0.05);TFDG可降低A549细胞VEGF mRNA表达,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论 TFDG能抑制A549细胞生长,促进其凋亡,抑制VEGFmRNA的表达。     

CDA-Ⅱ抑制肺腺癌细胞增殖及C-erbB2表达的实验研究

目的:研究细胞分化剂CDA-Ⅱ(cell differentiation agent-Ⅱ)抑制人肺腺癌细胞A549增殖及对癌基因C-erbB2表达的影响。方法:不同浓度的CDA-Ⅱ作用人肺癌细胞A549,用CCK-8法检测细胞增殖抑制率;RT-PCR和Western blot检测经CDA-Ⅱ作用后A549细胞C-erbB2表达的改变。结果:CDA-Ⅱ能明显抑制肺腺癌细胞增殖,且抑制效应呈剂量依赖性。C-erbB2在CDA-Ⅱ抗人肺癌细胞A549增殖中表达下调。结论:CDA-Ⅱ可有效抑制人肺癌细胞A549增殖,该作用可能与抑制C-erbB2的信号传导通路有关。     

地塞米松诱导人肺腺癌A549细胞对紫杉醇耐药性及Bcl-xL基因表达的影响

目的观察紫杉醇（PTX）干预不同浓度地塞米松（DEX）预处理人肺腺癌A549细胞后的耐药情况和Bcl-xL基因及蛋白表达变化,探讨DEX诱导A549细胞对PTX产生耐药的分子机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）测定不同浓度PTX作用于A549细胞后的细胞存活率,筛选出PTX的半数抑制浓度（IC50）;用不同浓度DEX预处理A549细胞后,再给予不同浓度PTX作用于A549细胞,用MTT法测定细胞存活率,逆转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测细胞中Bcl-xL基因和蛋白的表达。结果不同浓度DEX预处理A549细胞后能诱导其对PTX产生耐药,细胞存活率随DEX浓度的增加而增高,Bcl-xL基因和蛋白表达水平随DEX浓度的增加而增高。结论 DEX能诱导A549细胞对PTX产生耐药,其机制可能与DEX诱导A549细胞抗凋亡Bcl-xL基因表达增加有关。     

Ardisiphenol D,a resorcinol derivative identified from Ardisia brevicaulis,exerts antitumor effect through inducing apoptosis in human non-small-cell lung cancer A549 cells

Context: The in vitro and in vivo antitumor activities of ardisiphenol D, a natural product isolated from the roots of Ardisa brevicaulis Diels (Myrsinaceae), have been studied.

Objective: Previously, we have isolated and identified some chemical constituents from this plant. Furthermore, these compounds showed significant inhibition of the proliferation of human pancreatic PANC-1, human lung A549, human gastrointestinal carcinoma SGC 7901, human breast MCF-7, and human prostate PC-3 cancer cells. In the present paper, a major resorcinol derivative called ardisiphenol D was further studied for its antitumor mechanism.

Materials and methods: MTT assay was used to detect the proliferation of A549 cancer cells. Apoptosis induced by ardisiphenol D was observed by Hoechst 33258 fluorescence staining. Caspase-3 enzyme activity was measured by a commercial caspase-3 enzyme activity detection kit. Protein expression of bax, bcl-2, and caspase-3 was tested by Western blots. In vivo antitumor activity of ardisiphenol D was evaluated by determination of A549 tumor growth in nude mice.

Results: Ardisiphenol D significantly inhibited the proliferation of A549 cells with an IC₅₀ of 0.997?μM with a 48?h treatment. Hoechst 33258 fluorescence staining results indicated the apoptosis of A549 cells induced by 3.125?μM of ardisiphenol D. About 0.39 and 0.78?μM of ardisiphenol D also potently increased the caspase-3 enzyme activity in 24?h. Furthermore, 0.39–3.125?μM of ardisiphenol D induced the activation of caspase-3 protein and the up-regulation of the ratio of bax/bcl-2 protein expression in A549 cells. After i.p. injection, ardisiphenol D (5?mg/kg) also strongly suppressed the A549 tumor growth in nude mice.

Discussion and conclusion: Ardisiphenol D induced apoptosis of A549 cells via activation of caspase-3 and up-regulation of the ratio of bax/bcl-2 protein expression. Ardisiphenol D also strongly suppressed the A549 tumor growth in nude mice and exerted antitumor activity in vivo.     

大鼠急性肺损伤过程中STAT3的活化对bcl-2 bax表达及细胞凋亡的影响

目的探讨大鼠急性肺损伤(ALI)过程中,信号转导和转录活化因子-3(STAT3)的活化是否可以起到一定的抗凋亡作用及其可能机制。方法健康雌性大鼠30只分为生理盐水组(NS)组、内毒素(LPS)损伤组、STAT3抑制剂——西罗莫司干预组。采用原位杂交法测定肺组织中STAT3基因的表达,免疫组织化学及细胞凋亡原位末端标记技术(TUNEL)测定肺组织中凋亡相关蛋白bcl-2和bax的表达及肺细胞的凋亡情况。结果以西罗莫司阻断STAT3的基因表达后,肺组织中抗调亡蛋白bcl-2表达下调,凋亡蛋白bax表达则增高,同时肺细胞凋亡数增加。结论急性肺损伤过程中STAT3通路的激活可上调bcl-2且下调bax的表达,从而起到一定的抗凋亡作用。     

ZnO nanorod-induced apoptosis in human alveolar adenocarcinoma cells via p53, survivin and bax/bcl-2 pathways: role of oxidative stress

Zinc oxide (ZnO) nanoparticles (NPs) are increasingly recognized for their utility in biological applications, including biosensor and medicine. However, little is known about the toxicity mechanisms of ZnO nanorods in human cells. This study was designed to investigate the possible mechanisms of apoptosis induced by ZnO nanorods in human alveolar adenocarcinoma (A549) cells. ZnO nanorod was found to induce cytotoxicity, reactive oxygen species (ROS) generation, oxidative stress and activities of caspase-3 & caspase-9 in a dose- and time-dependent manner. Western blot results showed that ZnO nanorods induced the expression of heat shock protein 70, a first-tier marker of cell damage and a cell-cycle checkpoint protein p53. Moreover, pro-apoptotic protein bax was upregulated and the antiapoptotic proteins, survivin and bcl-2, were downregulated in ZnO nanorod exposed cells. In conclusion, our data demonstrates that ZnO nanorod induced apoptosis in A549 cells through ROS and oxidative stress via p53, survivin, bax/bcl-2 and caspase pathways. FROM THE CLINICAL EDITOR: This study describes the mechanisms of apoptosis induced by ZnO nanorods in human alveolar adenocarcinoma cells.     

色胺酮对p53突变型肺癌H322细胞恶性行为的抑制作用

目的:探讨色胺酮对p53突变型肺癌H322细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法:利用不同浓度的色胺酮分别作用于H322细胞,通过CCK-8分析细胞增殖活性变化,Hoechst33258/PI双染法检测细胞凋亡水平,Transwell和划痕实验评价细胞迁移能力变化。应用Western blot检测mut-p53、bcl2、bax、caspase-3、cleaved caspase-3和转移相关标志物蛋白E-cadherin与N-cadherin的表达。结果:不同浓度的色胺酮均可抑制H322细胞的增殖且提升H322细胞的凋亡水平(P<0.05)。色胺酮可降低H322细胞的迁移能力(P<0.05)。此外,色胺酮可提高H322细胞中bax、cleaved caspase-3和E-cadherin蛋白的表达,同时降低H322细胞中mut-p53、bcl-2和N-cadherin蛋白的表达(P<0.05)。结论:色胺酮能够降低肺癌H322细胞的增殖和提升其凋亡能力,其核心机制与mut-p53表达抑制,继而激活bcl-2/bax/caspase-3信号轴相关;色胺酮能够抑制H322细胞...     

姜黄素联合吉非替尼对人肺腺癌细胞A549/H1975增殖影响的研究

目的：考察姜黄素与吉非替尼联用对人肺腺癌细胞A549（EGFR野生型;K-ras突变）和H1975（EGFR突变：T790M＋L858R;K-ras野生型）增殖的影响,及姜黄素对吉非替尼在细胞膜内药物浓度的影响。方法：完全培养基稀释姜黄素与吉非替尼分别至5个不同浓度,交叉组合作用于A549/H1975细胞72 h,MTT法检测A549/H1975细胞的增殖。联合指数法（combination index,CI）评价姜黄素和吉非替尼的联合作用效价,当CI〈1时认为方案具有协同效应。HPLC-MS法检测细胞膜内吉非替尼浓度。结果：与单独用药组相比,姜黄素与吉非替尼联用显著提高了对A549细胞增殖的抑制作用,表现出强相加/协同效应;而对于H1975细胞仅仅表现为相加效应。在吉非替尼浓度为1μmol·L-1时,添加姜黄素后A549细胞膜内吉非替尼浓度上升至吉非替尼单独用药组的（1.25±0.26）倍,差异存在统计学意义（P〈0.05）,吉非替尼浓度为10μmol·L-1时则没有明显变化;而当作用细胞为H1975时,是否添加姜黄素对于吉非替尼在细胞膜内的浓度均未见明显变化。结论：姜黄素与小剂量吉非替尼联用可以显著抑制肺腺癌A549细胞的增殖,但对于H1975细胞效果不佳。姜黄素可以提高吉非替尼在A549细胞膜内的浓度是可能的原因之一。     

Curcumin inhibited the arylamines N-acetyltransferase activity, gene expression and DNA adduct formation in human lung cancer cells (A549).

It is well known that N-acetyltransferase (NAT) plays an important role in the arylamine metabolism. We analysed the response of A549 human lung cancer cells for N-acetylation of 2-aminofluorene (AF) to curcumin. After curcumin treatment, the NAT activity was examined by HPLC, AF-DNA adduct formation was examined by HPLC, and NAT gene expression by polymerase chain reaction were detected. The NAT activity in the human A549 cells and cytosols was suppressed by curcumin in a dose-dependent manner. The results also demonstrated that gene expression (NAT1 mRNA) in human lung A549 tumor cells was inhibited and decreased by curcumin. After the incubation of human lung A549 tumor cells with AF with or without curcumin co-treatment, the cells were recovered and DNA was prepared and hydrolyzed to nucleotides. The adducted nucleotides were extracted into butanol and analyzation of AF-DNA adducts was done by HPLC. The results also demonstrated that curcumin decreases AF-DNA adduct formation in the human lung A549 tumor cells.