PD98059对离体四氯化碳刺激肝星状细胞周期和细胞内Ca2+浓度影响

目的 探讨特异性有丝分裂原活化蛋白激酶抑制剂PD98059对离体四氯化碳(CCl4)刺激的肝星状细胞(HSC)周期和细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响.方法 HSC常规复苏传代培养,同步化后分为空白对照组、CCl4组和CCl4+PD98059(100 μmol/L)组.检测细胞周期以反映细胞增殖情况,用钙离子荧光探针进行荧光染料负载,用激光扫描共聚焦显微镜测定[Ca2+]i.结果 流式细胞结果可见CCl4刺激HSC后,S/G2期细胞增多,G1期细胞减少(P＜0.05),PD98059对这一过程有抑制作用(P＜0.05);激光扫描共聚焦显微镜检测可见CCl4组的[Ca2+]i较空白对照组增强(P＜0.05),CCl4+PD98059组细胞内[Ca2+]i降低(P＜0.05).结论 PD98059可以降低CCl4刺激的HSC中[Ca2+]i,对细胞从静止期进入活动期有抑制作用.     

菹草类胡萝卜素对Hela细胞增殖与凋亡的影响

目的研究菹草类胡萝卜素提取物(carotenoids extracts from Potamogeton crispus L.,CEPC)对人宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法、流式细胞术(FCM)、荧光倒置显微镜和激光共聚焦显微镜(LSCM)观察等手段,研究不同浓度受试物对Hela细胞增殖抑制、细胞周期阻滞、细胞形态学变化及胞内Ca2+浓度变化的影响。结果CEPC对Hela细胞增殖有明显的抑制作用;呈现G2/M期阻滞。荧光显微镜和LSCM观察到细胞核浓缩等典型的细胞凋亡形态特征。处理组细胞内Ca2+浓度显著升高。结论CEPC对Hela细胞有生长抑制作用,诱导细胞凋亡是这种作用的主要形式,胞内Ca2+浓度升高可能是细胞凋亡的作用机制之一。     

PI3K抑制剂PI103对四氯化碳刺激的肝星状细胞凋亡和细胞内钙离子浓度的影响

目的探讨PI3K抑制剂PI103对四氯化碳(CCl4)刺激的肝星状细胞(HSC)凋亡率和细胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度的影响,为肝纤维化的治疗提供理论基础。方法将HSC株于37℃、5%CO2孵育箱中复苏传代培养,同步化后将细胞分为3组:空白对照组、CCl4组、CCl4+PI3K抑制剂组。用锚定蛋白V异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V FITC/PI)双标记染色,通过流式细胞仪观察各组细胞凋亡情况;以钙离子荧光探针(Fluo-3AM)为[Ca2+]i荧光指示剂负载细胞,用激光扫描共聚焦显微镜观察[Ca2+]i变化情况。结果 CCl4作用后,HSC凋亡率的变化不明显(P>0.05),但[Ca2+]i荧光强度明显增强(P<0.05)。PI3K抑制剂作用于经CCl4刺激的HSC后,细胞凋亡率增加(P<0.05),[Ca2+]i荧光强度减弱(P<0.05)。结论 PI3K抑制剂PI103可增加HSC的凋亡率,降低[Ca2+]i浓度。     

大蒜素影响子宫颈癌Hela细胞增殖的实验研究

目的探讨大蒜素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法不同浓度的大蒜素作用于体外培养的Hela细胞,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态学变化,采用MTT法检测大蒜素对Hela细胞增殖抑制能力,流式细胞术分析大蒜素对Hela细胞凋亡的影响。结果 MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示50μg/ml浓度大蒜素可明显诱导Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论大蒜素对人宫颈癌Hela细胞增殖有抑制作用,其抑制作用与诱导Hela细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的 观察三羟异黄酮对体外培养的人乳腺癌细胞MDA—MB—435S细胞存活率、细胞周期和凋亡的影响。方法 用噻唑蓝(MTT)法观察三羟异黄酮对MDA—MB—435S细胞生长的影响；流式细胞仪观察三羟异黄酮处理人乳腺癌细胞后细胞周期改变的剂量效应和时间效应；吖啶橙／溴乙锭染色法在荧光显微镜下观察三羟异黄酮对MDA—MB—435S细胞的凋亡作用。结果 随剂量增大和作用时间延长，三羟异黄酮对细胞增殖的抑制作用逐渐增强。同时可以阻滞细胞周期于G2—M期，而且随剂量的增大，作用时间的延长，阻滞作用也增强。经吖啶橙染色法于荧光显微镜下可见，随三羟异黄酮剂量增大，细胞凋亡也逐渐明显。结论 三羟异黄酮可抑制人乳腺癌细胞的增殖，其作用机制可能包括诱导细胞凋亡和G2—M期阻滞。     

大蒜素对子宫颈癌Hela细胞增殖的影响

目的:探讨大蒜素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法:不同浓度的大蒜素作用于体外培养的Hela细胞,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态学变化;采用MTT法检测大蒜素对Hela细胞增殖抑制能力,采用流式细胞术分析大蒜素对Hela细胞凋亡的影响。结果:MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示50μg/ml浓度的大蒜素可明显诱导Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论:大蒜素对人宫颈癌Hela细胞的生长有抑制作用,其抑制作用与诱导Hela细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

天然红心蛋中类胡萝卜素提纯物对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨天然红心蛋中类胡萝卜素提纯物(carotenoidsextractsfromnaturalredyolk,CENRY)对人肝癌细胞QGY-7703细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用体外培养,细胞增殖实验,激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察细胞形态及钙离子浓度变化,采用流式细胞术检测细胞周期等。结果:CENRY1.0、0.5、0.25μmol/L三个剂量能显著抑制人肝癌QGY-7703细胞增殖,细胞凋亡指数随剂量增加及时间延长而上升;CENRY对QGY-7703细胞存在G2/M期阻滞作用;处理组细胞内Ca2+浓度极显著地升高。结论:CENRY能抑制QGY-7703增殖、诱导凋亡。     

香加皮水提取物诱导人食管癌细胞TE-13凋亡的实验研究

[目的]运用多种技术手段研究香加皮水提取物诱导人食管癌细胞TE-13凋亡.[方法]利用MTT染色在普通光镜下观察细胞凋亡形态学变化并观测药物对肿瘤细胞的抑制率;通过流式细胞仪分析人食管癌TE-13细胞凋亡率、细胞周期变化;DNA琼脂糖凝胶电泳方法检测肿瘤细胞凋亡的DNA水平变化;激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)检测细胞内钙离子浓度变化.[结果]经香加皮水提取物处理的人食管癌细胞TE-13出现核固缩、凋亡小体、新月状浓染区等细胞凋亡形态学改变,各剂量药物处理组的肿瘤细胞均表现生长抑制,且具有剂量依赖性,250μg/ml香加皮水提取物处理组的抑制率达91.02%.DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的梯形电泳条带.药物处理组的肿瘤细胞更多地被阻止于G2/M期,各剂量组均出现明显的凋亡变化,最大凋亡率可达20.3%.各剂量药物处理组的肿瘤细胞内的Ca2 浓度明显高于对照组(P<0.01).[结论]香加皮水提取物可明显抑制人食管癌细胞TE-13的生长增殖,诱导细胞凋亡,并能改变该肿瘤细胞周期分布,阻止细胞周期于G2/M期.     

紫杉醇诱导卵巢癌细胞凋亡及细胞周期改变的研究

目的研究紫杉醇能否诱导卵巢癌HO-8910细胞凋亡,以及凋亡诱导与细胞周期改变的关系。方法紫杉醇不同浓度、不同作用时间分别处理HO-8910细胞,在光镜和电镜下观察紫杉醇作用后细胞形态变化,流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期的改变。结果荧光染色及电镜观察到典型的凋亡细胞形态,流式细胞仪DNA含量分析,癌细胞在紫杉醇作用下,首先表现为G2/M期阻滞。但只有出现G2/M期明显阻滞后,经过一定时间才出现凋亡。结论紫杉醇能够诱导HO-8910细胞凋亡,紫杉醇诱导HO-8910细胞凋亡与细胞分裂期阻滞密切相关,这一作用机制将为临床治疗提供理论依据。     

大豆皂甙对人肝癌细胞QGY-7703的生长抑制作用研究

目的:观察大豆皂甙对人肝癌QGY-7703细胞的生长抑制作用。方法:大豆皂甙作用于肝癌QGY-7703细胞,用MTT法、荧光倒置显微镜观察等研究细胞生长与细胞凋亡,激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察细胞凋亡及细胞内Ca2+浓度变化。结果:MTT实验表明0.1～0.8mg/ml大豆皂甙对QGY-7703细胞增殖有明显抑制作用。荧光显微镜和CLSM观察到细胞核浓缩等典型的细胞凋亡形态特征。CLSM检测还表明大豆皂甙使肝癌细胞胞内Ca2+浓度显著增大。结论:大豆皂甙对人肝癌QGY-7703细胞有生长抑制作用,诱导细胞凋亡是这种作用的主要形式,胞内Ca2+浓度升高可能是细胞凋亡的作用机制之一。     

松口蘑菌丝体蛋白对HeLa细胞凋亡的影响

目的 :　研究松口蘑发酵菌丝体水提液中菌丝体蛋白质 (TMP- B)的体外抗癌作用。方法 :　体外培养 He La细胞 ,培养时添加不同浓度的 TMP- B,绘制细胞生长曲线。利用扫描电镜、流式细胞术及 DNA凝胶电泳等进行体外抗人子宫颈癌 He La细胞增殖和诱导细胞凋亡机制的研究。结果 :　 TMP- B在体外具有抑制肿瘤细胞增殖的作用。扫描电镜观察到 TMP- B处理细胞产生明显的凋亡小体 ;TMP- B对细胞周期的影响是通过抑制细胞从 S到 G2 /M期的转化来抑制He La细胞增殖 ,诱导细胞发生凋亡的 ;流式细胞仪分析图上出现凋亡峰 ;DNA电泳出现以 2 0 0 bp左右为单位的 DNA碎片。结论 :　采用液体培养方法生产的松口蘑菌丝体蛋白质 ,具有显著的抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡作用。     

舒林酸抑制结肠癌细胞株增殖及其转移机制的研究

目的 研究非选择性COX抑制荆舒林酸对结肠癌细胞株HT-29生长的影响及其参与引起细胞死亡的可能机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测舒林酸对结肠癌细胞增殖的抑制,激光共聚焦显微镜(LSM)及荧光显微镜观察细胞凋亡,流式细胞仪(FCM)分析其对细胞凋亡及细胞周期的影响.结果 MTT显示舒林酸能呈剂量和浓度依赖性抑制HT-29的增殖.TUNEL染色荧光显微镜下观察凋亡细胞呈棕褐色,AnnexinV/PI染色后LSM观察凋亡细胞胞膜绿染,胞核红染或呈桔黄色,FCM显示此药促进细胞的凋亡,使处于G0/G1期的细胞比例显著降低.结论 舒林酸可抑制结肠癌细胞株HT-29生长,促进其凋亡,其机制可能与其阻止细胞周期的进展有关.     

HIV感染人CD4+T细胞生物学特性的实验研究

目的观察人免疫缺陷病毒（HIV）-1SF33感染后MT4细胞超微结构、细胞周期、细胞内钙离子浓度改变，为寻找艾滋病发病机制提供研究基础。方法以HIV-1SF33实验株感染MT4细胞，72h后用P24试剂盒双抗体夹心法检测HIV抗原表达情况以验证感染是否成功。设正常MT4细胞组与HIV感染MT4细胞组，用倒置显微镜观察细胞形态，透射电镜观察细胞超微结构，激光共聚焦显微镜检测细胞内钙离子浓度，流式细胞仪检测细胞周期。结果染毒成功。染毒组细胞多散在排列，可见多核巨细胞和空泡状细胞形成；胞浆内可见大量大小均一的HIV颗粒堆积，细胞器肿胀，内质网、线粒体扩张，溶酶体体积增大，数量增多，部分细胞融合，胞浆内形成多个空泡；细胞内钙离子含量增高；HIV感染与未感染MT4细胞相比，G2-M-S期细胞比例减少，G0-G1期细胞比例增多。结论HIV感染CD4^＋T细胞后，可直接导致CD4^＋T细胞病变，如细胞肿胀，细胞内钙离子含量增高，细胞增殖减慢。     

Morphological changes of ricin toxin-induced apoptosis in human cervical cancer cells

The morphological changes of ricin-induced apoptosis in a human cervical cancer cell line were studied. To shed light on the mechanism of action of ricin toxin (RT) at the cellular level, we examined cell growth, apoptosis, changes of mitochondrial membrane potential (MMP) and cytochrome C translocation in HeLa cells by exposing these cells to RT for indicated times. The effect of RT on cell proliferation was measured by 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS), inner salt; MTS assay and apoptosis were measured using flow cytometry, fluorescence microscopy and electron microscopy. Changes in MMP were monitored using flow cytometry. Western blot analysis was used to evaluate the release of mitochondrial cytochrome C. RT noticeably inhibited the proliferation of HeLa cells, and the half maximal inhibitory concentration dose was about 100 ng/ml. HeLa cells treated with RT showed typical characteristics of apoptosis rather than necrosis, including phosphatidylserine exposed from the inner to the outer leaflet of the plasma membrane, abnormal cell morphology, chromatin condensation and nuclear fragmentation. In contrast, during the process of cellular apoptosis, the messenger RNA (mRNA) and protein expression of cytochrome C in treated and untreated Hela cells were not significantly changed (data not shown). However, when cells were treated with RT, the massive translocation of cytochrome C to the nucleus was evident. Our results indicate that RT-induced HeLa cell apoptosis, especially for cytochrome C translocation, may play an important role in apoptosis induced by RT.     

Caveolin-1过表达抑制宫颈鳞癌Hela细胞的体外生长研究

目的 探讨转染caveolin-1基因对宫颈鳞状细胞癌Hela细胞株体外生长的影响.方法 用脂质体法把caveolin-1真核表达质粒导入Hela细胞内,筛选出稳定高表达caveolin-1的细胞克隆,并用RT-PCR、细胞免疫荧光和免疫印迹法鉴定.MMT法检测细胞的生长能力,流式细胞仪检测细胞周期分布和凋亡情况,免疫印迹法检测细胞外信号调节激酶（extracellular regulated protein kinases,Erk）1/2的磷酸化水平.结果 转染caveolin-1基因后,成功筛选得到稳定高表达caveolin-1的Hela细胞克隆,与未转染对照组相比,转染后的Hela细胞生长速度明显减慢（P〈0.05）,更多的细胞阻滞在G0/G1期[（68.04±2.57）%vs（53.41±1.01）%],凋亡细胞比例增高[（19.18±2.20）%vs（5.63±0.55）%,P〈0.05],Erk1/2相对磷酸化水平明显下降（0.28±0.05 vs 0.81±0.07,P〈0.05）.结论 caveolin-1基因能够抑制宫颈鳞癌Hela细胞株的生长、促进细胞凋亡;Erk1/2磷酸化水平下降可能在其抑癌机制中发挥重要作用.     

小蘗碱诱导人宫颈癌Hela细胞株凋亡的作用

目的:探讨中药黄连素对子宫颈癌Hela细胞株的增殖抑制和诱导凋亡的作用。方法:以不同浓度的黄连素(10、20、40、80μmol/L),分12、24、48、72h四个时间点处理Hela细胞,光镜观察细胞形态变化;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率;用透射电子显微镜及琼脂糖凝胶电泳检测凋亡发生情况。结果:黄连素可抑制Hela细胞增殖,作用呈明显的时效和量效关系,差异有统计学意义(P<0.01);黄连素可诱导Hela细胞凋亡,透射电子显微镜下可见凋亡细胞;琼脂糖凝胶电泳出现细胞凋亡典型的DNA"梯状"条带。结论:黄连素体外对Hela细胞具有增殖抑制作用和促进凋亡作用。     

IL-12联合DDP对人卵巢癌HO-8910细胞周期及增殖的影响

目的:探讨IL-12联合化疗药物顺铂(DDP)对人卵巢癌HO-8910细胞周期及增殖的影响,并阐明其抑制肿瘤细胞增殖的机理。方法:取对数生长期的人卵巢癌HO-8910细胞株分为对照组、单独使用DDP组、单独使用IL-12组及IL-12联合DDP组。按作用时间(0、24、48、72、96、120 h)和DDP浓度(0、2、4、8、16、32μmol/L)不同,采用MTT比色法分别测定IL-12单独或联合应用DDP对人卵巢癌HO-8910细胞的影响,绘制细胞生长曲线和计算细胞增殖抑制率。根据细胞生长曲线评价肿瘤细胞的增殖速度,流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡的变化,倒置显微镜和电镜观察细胞形态学改变。结果:单独应用DDP或IL-12时,其抑制率在96 h分别为28.93%和29.12%,而IL-12联合DDP在48 h抑制率为27.45%。HO-8910、HO-8910+DDP和HO-8910+IL-12细胞生长抑制曲线随时间延长而升高,在第96 h开始升高(P<0.01),而加入IL-12+DDP细胞的生长抑制曲线则从第48 h就开始升高,72 h达高峰(P<0.05);流式细胞仪检测显示,处于G1/G2期的HO-8910+IL-12+DDP细胞明显减少,而G2/M、S期细胞明显增多;电镜结果显示,HO-8910+IL-12+DDP细胞存在内质网扩张,线粒体空泡化,溶酶体增生,部分细胞可见染色质边集等凋亡前期改变。结论:IL-12联合DDP能抑制人卵巢癌HO-8910细胞增殖,有效地诱导细胞凋亡,增强DDP对肿瘤的治疗作用,为临床卵巢癌患者的治疗提供理论依据。