HCV非结构蛋白5B复合酶切分型方法的建立及应用

目的建立灵敏有效的HCV6a型非结构蛋白(non-structural protein,NS)5B复合酶切分型方法,探讨NS5B区与5’-端非编码区(5’-noncoding region,5’-NCR)的分型是否一致。方法应用5’-NCR复合酶切分型方法对1093份HCVRNA阳性血清样本进行分型,并筛选基因6a型样本进行NS5B区的扩增,对第2轮PCR产物进行复合酶切分型和测序,并经NCBI Genoty ping证实基因分型。结果 5’-NCR分型法检出10份HCV6a型样品,序列分析显示均存在第145位CA碱基插入和第139位C碱基插入特征。用NS5B分型法检测此10例,均为6a型,序列分析证实存在EaeⅠ酶切位点。结论 NS5B区与5’-NCR区复合酶切分型方法对HCV6a分型具有良好的一致性,以EaeⅠ切点为主的NS5B区复合酶切分型方法可供临床应用。     

庚型肝炎病毒多聚蛋白的翻译及基因变异研究进展

庚型肝炎病毒(HGV)是单股正链RNA病毒,其基因结构及保守序列类似于黄病毒科的成员。HGV基因组全长约9400个核苷酸(nt),与HCV相似,在5’端和3’端各有一段非翻译区(UTR),一个大开放读码框架(ORF)编码约2900个氨基酸的多聚蛋白前体,其氨基端(N端)和羧基端(C端)分别为结构蛋白(C、E1、E2)和非结构蛋白(NS2、NS3、NS4a/b、NS5a/b)。NS3区编码丝蛋白酶、解旋酶,NS5区编码RNA聚合酶。HGV与HCV全序列氨     

丙型肝炎基因治疗的现状与前景

背景　丙型肝炎病毒(HCV)是导致慢性肝炎、肝硬化和肝细胞肝癌的主要原因之一。近年来对HCV分子生物学属性的研究集中在对病毒复制、HCV基因及病毒蛋白结构和功能方面。HCV基因治疗的发展是基于HCV功能基因组学的发展,HCV为单链RNA病毒,包括5′非编码区(NCR)、核心区(C)及非结构区(NS) ,其中5′NCR中内核糖体进入基序(IRES)启动病毒基因翻译,NS3具有丝氨酸蛋白酶和解旋酶的功能,NS5B具有聚合酶的功能,在HCV复制中起重要作用,也是HCV基因治疗的重要靶位点。所谓基因治疗是指将一种新的遗传物质导入患者细胞内并能给患者带…     

丙型肝炎免疫学研究新进展

1HCV新抗原丙型肝炎病毒(HCV)RNA表达结构蛋白,包括核心蛋白(C蛋白)、包膜蛋白1(E1)和2(E2)、p7和非结构蛋白(NS2、3、4A、4B、5A、5B)等。最近Bain等[1]认为HCVRNAC区除编码C蛋白外,还可通过核糖体移码机制编码另一种蛋白,称为F蛋白或选择性读码框蛋白(alternative reading fr     

法国丙型肝炎病毒第三种最常见的基因型的特点

作者曾经鉴定出法国流行的两种主要丙型肝为病毒(HCV)的基因型(1型和2型)。本文又报告一种新 HCV 基因型的鉴定过程及其特点。该基因型具有高分散性5′非编码区和结构蛋白区。这一基因型与 HCV1型和2型在5′非编码蛋白方面只有93～94%的序列一致性。该病毒结构蛋白区的序列分析显示与所有4种主要的 HCV 基因型有极低的序列同源性;核心蛋白为86～89%,包膜蛋白为56～89%。但是,进一步分析表明,这新的基因型与最近描述的基因型3a 非常相似。用基因型特异的寡探针筛选150个临床标本     

丙型肝炎病毒核心区基因在大肠杆菌中的高效表达

丙型肝炎病毒(HCV)是输血后及散发性非甲非乙型肝炎的主要病原,丙型肝炎易转为慢性肝炎,与肝癌及肝硬变关系密切。HCV核心区编码蛋白是研究重点之一。在研究过程中,首先应获得大量高效表达的HCV核心蛋白抗原。HCV基因组结构与黄病毒或瘟病毒相似,为长约9.4kb的单股正链RNA,含一个开放读码框架(open reading frame,OFR),编码含3010～3011个氨基酸残基的多蛋白前体,经宿主和病毒蛋白酶作用加工成结构蛋白(C,E1和E2/NS1)和非结构蛋白(NS2,NS3,NS4和NS5)。核心蛋白约含191个氨基酸,大小约19000～22000,其氨基酸序列十分保守,比较已有的HCV各分离株氨基酸序列,同源性超过95％。其N端三个亲水区的优势抗原表位主要是线性抗原决定簇,在此免疫优势区内出现的变异对免疫识别并没有很大影响。由于人感染HCV后,血清中     

丙型肝炎病毒转基因小鼠模型的研究

0引言丙型肝炎病毒(HCV)是1989年美国Chooetal[1]利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分离鉴定的一种新型肝炎病毒,属黄病毒科丙型肝炎病毒属.其基因组为单股正链RNA,长9.4kb左右,两侧分别为5’和3’非编码区(NCR),中间为单一的开放读码框(ORF),可分为核壳蛋白区(C区)、包膜蛋白区(E区)和非结构蛋白区(NS区).其中,5’NCR区变异较小,内含内部核糖体进入位点(IRES),在病毒蛋白的翻译中有重要的调控功能.C区与E1/E2区构成结构基因,分别编码衣壳蛋白和包膜糖蛋白,内含重要的中和抗原表位与细胞免疫抗原表位,与HCV的免疫致病及防…     

丙型肝炎病毒NS5A蛋白的反式激活作用研究

0引言 丙型肝炎病毒(HCV)是一种单股正链RNA病毒,编码一种多蛋白分子,在病毒和宿主细胞蛋白酶的共同裂解作用下,至少裂解为3种结构蛋白(C、E1和E2)和6种非结构蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)[1,2].NS5 A是非结构蛋白的一种,哺乳动物细胞表达的NS5A蛋白以两种形式存在,分子量分别为56 kD和58 kD.HCV NS5A是HCV基因组编码的一种最为重要的具有多种生物学活性的非结构蛋白质[3-5],是HCV基因组编码的一种具有反式激活作用等多种生物学活性的非结构蛋白质.其基因序列的变异,决定部分HCV病毒株对于IFN-α治疗的疗效应答.HCV NS5A蛋白还具有结合双链RNA激酶(PKR)的生物学活性,对于HCV感染的靶细胞的细胞周期与细胞凋亡的分子生物学调节机制密切相关[6].     

基因重组表达戊型肝炎病毒的研究进展

戊型肝炎是一种经粪 口途径传播的急性传染病 ,主要流行于亚洲、非洲和拉丁美洲等发展中国家和地区。其病毒成球形 ,直径 2 7～ 34ｎｍ ,基因组是单股正链ＲＮＡ ,长约 7.5ｋｂ ,由 5′非编码区、编码区和 3′非编码区组成 ,编码区包括 3个开放读码框架 (ＯＲＦ)。ＯＲＦ1位于基因组的 5′端 ,长 5 0 79ｂｐ ,为非结构区基因 ,编码病毒复制所需要的ＲＮＡ聚合酶、蛋白酶和解旋酶等 ;ＯＲＦ2及ＯＲＦ3位于基因组的 3′端 ,ＯＲＦ2长 1980ｂｐ ,编码病毒的结构蛋白 ;ＯＲＦ3长 36 9ｂｐ ,含有可被中和抗体所识别的抗原表位[1] 。随着戊型肝炎…     

丙型肝炎病毒F蛋白研究新进展

丙型肝炎病毒(HCV)基因组长度约9.6kb,仅含有单个开放阅读框架(ORF),编码一个由约3010个氨基酸残基(aa)组成的多蛋白.在宿主细胞和病毒蛋白酶的作用下,多蛋白被加工成至少10个成熟的HCV蛋白质:C,E1,E2,p7,NS2,NS3,NS4A,NS4B,NS5A和NS5B.HCV C蛋白由191个aa组成,相对分子质量为23000,称为p23蛋白.p23羧基端aa被蛋白酶降解,就得到相对分子质量为21000的成熟C蛋白,称为p21蛋白.p21是HCV的重要结构蛋白,它与HCV RNA结合后形成病毒核心.Xu等[1]证实HCV C基因还可以编码产生一个新的蛋白--F蛋白.近年来F蛋白成为HCV研究的热点之一.