庆大霉素对豚鼠内淋巴囊和血管纹Na~＋－K~＋－ATP酶活性的影响

应用酶细胞化学技术和计算机图像分析，对豚鼠连续肌注庆大霉素（１００ｍｇ·ｋｇ－１／ｄ）２～１５ｄ后内淋巴囊上皮细胞和血管纹边缘细胞的Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性变化进行了定量观察。结果发现，与正常对照组相比，用药２ｄ后两类细胞的Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性反应产物没有明显变化，但连续用药５ｄ后二者的产物均明显减少，１０ｄ和１５ｄ仍呈继续轻微减少趋势。表明庆大霉素既可抑制血管纹边缘细胞Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性，降低其分泌功能；同时也能抑制内淋巴囊上皮细胞的该酶活性，减弱其液体重吸收功能。     

Na^＋—D^＋—ATP酶活性在豚鼠内淋巴囊的细胞化学定位

Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶在Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋离子主动性跨上皮转运过程中起重要作用。应用对硝基苯酚磷酸（ｐ－ＮＰＰ）为底物的柠檬酸铅一步法Ｋ＾＋－ＮＰＰ酶电细胞化学技术，观察了反映Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性的Ｋ＾＋－ＮＰＰ酶在豚鼠内淋巴囊的超微结构定位分布。结果：在透射电镜下观察，内淋巴囊超薄切片上的Ｄ＾＋－ＮＰＰ酶活性反应产物仅分布于上皮细胞底侧面胞膜的胞浆一侧，向上一直延续至上皮细胞间的紧密     

豚鼠内淋巴囊上皮细胞Na^＋,K^＋—ATP酶不同？…

目的 进一步研究同肉淋巴囊上皮细胞Ｎａ＾＋，Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶不同β亚基的表达。方法 采用豚鼠内淋巴囊冰冻切片、原位杂交的方法检测Ｎａ＾＋，Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶不同β亚基ｍＲＮＡ在淋巴囊上皮细胞中的表达。结果 在内淋巴囊上皮细胞胞浆内可见Ｎａ＾＋，Ｋ＾－ＡＴＰ酶不同β亚基的阳性颗粒，β１亚基表达较弱，β２亚基表达较强。结论 结合其他报道，内淋巴囊上皮细胞具有多种亚基异构体组成的Ｎａ＾＋，Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶     

庆大霉素对豚鼠血管纹Na，K-ATP酶α亚单位异构体表达的影响

目的 观察正常豚鼠血管纹Ｎａ,Ｋ－ＡＴＰ酶α亚单位异构体的表达及庆大霉素对其表达的影响。方法 用鼠抗大鼠Ｎａ,Ｋ－ＡＴＰ酶α亚单位异构体特异性单克隆抗体,采用免疫组化ＳＰ法观察正常豚鼠血管纹中Ｎａ,Ｋ－ＡＴＰ酶α１异构体的表达及庆大霉素作用后表达的变化。结果 正常豚鼠血管纹Ｎａ,Ｋ－ＡＴＰ酶α１异构体表达呈阳性,而α２和α３异构体表达呈阴性。庆大霉素作用后α１异构体表达显著减弱。结论 庆大霉素显著     

Na~＋－K~＋－ATP酶活性在豚鼠内淋巴囊的细胞化学定位

Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋－ＡＴＰ酶在Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋离子主动性跨上皮转运过程中起重要作用。应用对硝基苯酚磷酸（ｐ－ＮＰＰ）为底物的柠檬酸铅一步法Ｋ￣＋－ＮＰＰ酶电镜细胞化学技术，观察了反映Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋－ＡＴＰ酶活性的Ｋ￣＋－ＮＰＰ酶在豚鼠内淋巴囊的超微结构定位分布。结果：在透射电镜下观察，内淋巴囊超薄切片上的Ｋ￣＋－ＮＰＰ酶活性反应产物仅分布于上皮细胞底侧面胞膜的胞浆一侧，向上一直延续至上皮细胞间的紧密连接水平，内淋巴腔面胞膜未见反应产物。提示丰富的Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋－ＡＴＰ酶活性特征性地分布在内淋巴囊上皮细胞底侧面胞膜，表明Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋－ＡＴＰ酶在内淋巴囊上皮Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋离子交换过程中的重要地位。     

自身免疫性感音神经性聋的内耳代谢与电生理研究

为探讨自身免疫性感音神经性聋（ＡＳＨＬ）的内耳病理生理学机制，采用听觉电生理技术和酶组织化学方法，观察ＡＳＨＬ模型动物的内耳生理功能与组织内主要酶活性的变化。结果示：听视经复合动作电位和耳蜗微音器电位阈值明显升高，内淋巴电位（包括负相）幅值均有不同程度的降低，并与血管纹和内淋巴囊局部组织内Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶和琥珀酸脱氢酶活性改变之间的相关性。表明自身免疫性内耳损伤，进而造成组织内相关酶代谢     

豚鼠膜迷路积水模型耳蜗Ca^2＋ATP酶的变化

目的 了解Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶在耳蜗活动位点及膜迷路积水后耳蜗Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶的变化。方法 选成年健康、Ｐｒｅｙｅｒ反射正常豚鼠１４只，左耳装圆窗电极一阻塞肉淋巴，经声反应阈（ＣＡＰ阀值）证明膜迷路积水形成；右侧为对照耳。用枸橼酸铅细胞组化法测定Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶，在透射电镜下Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶以磷酸铅黑色颗粒显示。结果 对照耳Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活动部位在蜗管前庭膜内淋巴侧、内外毛细胞皮     

鼓阶电刺激后螺旋神经节神经元Na^＋—K^＋—ATP酶和耳蜗传出神…

用０．１～１．０ｍＡ电流刺激卡那霉素致聋豚鼠耳蜗３小时。三个月后，经组织学处理用积分吸光度定量测定螺旋神经节神经元（ＳＧＮ）Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶和耳蜗传出纤维乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）。实验结果表明０．１ｍＡ级可增强上述酶的活性；０．４ｍＡ级酶活性无改变；１．０ｍＡ级可显著抑制酶的活性。认为０．１～０．４ｍＡ级电流对豚鼠耳蜗是安全临界域，在人工耳蜗植入电路设计时，有参考意义。     

豚鼠膜迷路积水模型耳蜗Ca2+-ATP酶的变化

目的了解Ｃａ２＋ＡＴＰ酶在耳蜗活动位点及膜迷路积水后耳蜗Ｃａ２＋ＡＴＰ酶的变化。方法选成年健康、Ｐｒｅｙｅｒ反射正常豚鼠１４只,左耳装圆窗电极后阻塞内淋巴,经声反应阈（ＣＡＰ阈值）证明膜迷路积水形成;右侧为对照耳。用枸橼酸铅细胞组化法测定Ｃａ２＋ＡＴＰ酶,在透射电镜下Ｃａ２＋ＡＴＰ酶以磷酸铅黑色颗粒显示。结果对照耳Ｃａ２＋ＡＴＰ酶活动部位在蜗管前庭膜内淋巴侧、内外毛细胞皮板及静纤毛、血管纹中间细胞指突膜等处;实验性膜迷路积水后,声反应阈提高,前庭膜、内外毛细胞等处之Ｃａ２＋ＡＴＰ酶颗粒明显减少。结论膜迷路积水后声反应阈提高,前庭膜、内外毛细胞等处Ｃａ２＋ＡＴＰ酶活性明显下降,两者呈负相关。     

肾上腺素α2受体在豚鼠血管纹的定位定量研究

用竞争蛋白结合分析法及放射自显影法对豚鼠血管纹肾上腺素α２受体进行了定性定位定量测定，结果显示：加入去甲肾上腺素组（Ａ组）中ｃＡＭＰ量仅为１．３８９±０．８５２ｐｍｏｌ／４０μｌ，较对照组（Ｃ组）７．７００８±０．８６７ｐｍｏｌ／４０μ显著低（Ｐ＜０．０５）；先加入育亨宾再加去甲肾上腺素组（Ｂ组）中ｃＡＭＰ量又复回升达６．９５４±０．９６２（Ｐ＜０．０５），但仍较对照组低（Ｐ＜０．０５）。在经３Ｈ－育亨宾孵育的切片中，血管纹中下部银粒数为９６±１４个／视野，呈条带状分布，与血管纹走向一致，血管纹之外的组织银粒散在均匀，银粒数为２８±７／视野。经细胞立体计量法计算，血管纹中α２受体的含量大约为１．２５×１０９个／ｍｍ３。作者认为，豚鼠血管纹边缘细胞存在α２受体，并推想该受体是通过膜受体－ｃＡＭＰ途径影响细胞膜上Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶的活性，从而参与内淋巴的平衡。     

川芎嗪对庆大霉素耳中毒耳蜗外毛细胞和血管纹的保护作用

目的：探讨在庆大霉素（gentamycin，GM）耳中毒情况下，川芎嗪（tetramethylpyrazine，TMP）对豚鼠耳蜗外毛细胞和血管纹边缘细胞的保护作用。方法：12只豚鼠随机分为GM组、联合用药组、TMP组及对照组，用药十天后处死，采用透射电镜观察耳蜗外毛细胞及血管纹边缘细胞超微结构，扫描电镜观察血管纹边缘细胞表面形态。结果：透射和扫描电镜显示，联合用药组外毛细胞及血管纹边缘细胞超微及表面结构破坏不均明显轻于庆大霉素组，特别是其中的线粒体结构破坏与数目减少更显著轻于庆大霉素组。结论：川芎嗪具有保护庆大霉素耳中毒耳蜗外毛细胞和血管纹结构的作用，从而拮抗庆大霉素耳毒性。     

豚鼠壶腹嵴毛细胞内钙离子活动及ATP的影响

目的 探讨离体前庭毛细胞（ＶＨＣ）去极化时细胞内钙离子活动特征及内耳活性物质ＡＴＰ对离体ＶＨＣ内钙离子浓度的影响及其机制。方法 采用酶孵育后机械分离法分离豚鼠壶腹嵴ＶＨＣ,６μｍｏｌ／Ｌ钙荧光探针Ｆｌｕｏ－３染色,利用激光扫描共聚焦显微镜（ＬＳＣＭ）记录静息状态下、加入高Ｋ＾＋液及不同浓度ＡＴＰ时代表ＶＨＣ内［Ｃａ＾２＋ｉ的荧光强度相对值的变化。结果 细胞外有Ｃａ＾２＋存在时,７５ｎｍｏｌ／ＬＫ＾     

ATP对离体耳蜗外毛细胞内游离钙浓度的影响

为探讨三磷酸腺苷对耳蜗外毛细胞内游离下浓度的影响，利用荧光染色法５７０型粘附式细胞仪对ＡＴＰ引起的豚鼠耳蜗外毛细胞Ｃａ＾２＋浓度的变化进行动态观察。加入ＡＴＰ使Ｃａ＾２＋浓度明显升高，升高后迅速下降，高峰处无延迟，再次加入ＡＴＰ，出现类似反应。说明ＡＴＰ是以一种神经递质的作用影响外毛细胞的生理活动。     

鼓阶电刺激后螺旋神经节神经元Na~＋－K~＋－ATP酶和耳蜗传出神经AChE实

用０．１～１．０ｍＡ电流刺激卡那霉素致聋豚鼠耳蜗３小时。三个月后，经组织学处理用积分吸光度定量测定螺旋神经节神经元（ＳＧＮ）Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋－ＡＴＰ酶和耳蜗传出纤维乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）。实验结果表明０．１ｍＡ级可增强上述酶的活性；０．４ｍＡ级酶活性无改变；１．０ｍＡ级可显著抑制酶的活性。认为０．１～０．４ｍＡ级电流对豚鼠耳蜗是安全临界域，在人工耳蜗植入电路设计时，有参考意义。     

丹参与甘油合用对正常豚鼠前庭膜及基底膜的效应

目的 试图寻找提高对内耳脱水效应的方法。方法 分别采用丹参与甘油合用和单用甘油作正常豚鼠静脉注射，进行内耳膜迷路形态学观察、耳蜗微循环和外淋巴Ｎａ＾＋、Ｋ＾＋、Ｃａ＾２＋浓度的测定。结果 发现丹参与甘油合用较单用甘油引起的内耳前庭膜及基底膜形态学变化、耳蜗微循环增加及外淋巴Ｎａ＾＋、Ｋ＾＋、Ｃａ＾２＋浓度的变化有明显差异。结论 丹参与甘油合用明显增强了甘油经正常豚鼠前庭膜和基底膜对内淋巴的脱水作用     

L—甲状腺素预防庆大霉素耳毒性的机制探讨

目的：观察Ｌ－甲状腺素对豚鼠庆大霉素耳毒性的预防作用，并对机制进行探讨。方法通过ＡＢＲ测试，耳蜗铺片毛细胞计数，血液和外淋巴庆大霉素药代动力学分析等方法，对肌注庆大霉素（１２０ｍｇ．ｋｇ＾－１／．日＾－１）组、肌注相同剂量庆大霉素并同时口服Ｌ－甲状腺素（５０μｇ．ｋｇ＾－１．日＾－１）的合并用药组，以及相应对照组的豚鼠在用药一周和用药二周时的内耳形态，功能进行观察。结果用药二周后，合并用药组ＡＢＲ     

ATP对离体耳蜗外毛细胞内游离钙浓度的影响

为探讨三磷酸腺苷（ＡＴＰ）对耳蜗外毛细胞内游离钙（Ｃａ２＋）浓度的影响，利用荧光染色法，以５７０型粘附式细胞仪对ＡＴＰ引起的豚鼠耳蜗外毛细胞Ｃａ２＋浓度的变化进行动态观察。加入ＡＴＰ使Ｃａ２＋浓度明显升高，升高后迅速下降，高峰处无延迟，再次加入ＡＴＰ，出现类似反应。说明ＡＴＰ是以一种神经递质的作用影响外毛细胞的生理活动     

豚鼠血管纹心钠素（ANP）免疫组分布及超微定位

采用免疫细胞化学ＡＢＣ法结合免疫电镜技术，研究心钠素（ＡＮＰ）在正常豚鼠血管纹中的分布及超微定位。结果发现在耳蜗外侧壁１～４回的血管纹内均可见ＡＮＰ－ＩＲ阳性产物，以靠近血管纹的游离缘反应颗粒明显，螺旋韧带呈阴性反应。免疫电镜观察，血管纹的边缘细胞及中间细胞的胞浆中，可见大量直径为２５０～３５０ｎｍ的球形颗粒，以核两端相对较多；基底细胞和血管内皮细胞胞浆内含量较少。研究果提示，血管纹可能具有分泌Ａ     

豚鼠耳蜗外毛细胞的共聚焦图像

建立了用激光扫描共聚焦显微镜豚鼠耳蜗外毛细胞生理变化及细胞形态的方法，以荧光染料Ｆｌｕｏ－３作胞内Ｃａ＾２＋指示剂，用共聚焦显微观察乙酰胆碱（Ａｃｈ），ＡＴＰ、高钾引起的外毛细胞（ＯＨＣ）胞内Ｃａ＾２＋浓度的变化，三种物质均引起Ｃａ＾２＋升高，但升高的幅度，进相及所在细胞部位不同，高钾还引起ＯＨＣ短缩，偏折，利用共聚焦显微镜“光学切片”的特性，对Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ荧光素染色的活的ＯＨＣ形态及磺     

GDNF转基因表达对庆大霉素所致的耳蜗和前庭毒性的影响

神经胶质细胞源性神经营养因子（ｇｌｉａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ ＧＤＮＦ）是转化生长因子－β超家族的一个远亲成员,在发育和成熟的耳蜗中均起潜在作用。为了解ＧＤＮＦ转基因表达对庆大霉素所致的耳蜗和前庭毒性的影响,该文作者将３２只豚鼠分为６组：（１）人工外淋巴组（４只）;（２）Ａｄ．ＬａｃＺ组（４只）;（３）庆大霉素组（４只）;（４）Ａｄ．ＬａｃＺ＋庆大霉素组（６只）;（５）Ａｄ．ＧＤＮＦ＋庆大霉素组（救援组,８只）;（６）应用庆大霉素后７天＋Ａｄ．Ｇ…