模拟IMRT对CNE-2细胞周期及Cyclin D1/Cyclin B1表达的影响

目的 探讨模拟调强放射治疗(IMRT)对人鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE-2)细胞周期及细胞周期素Cyclin D1、Cyclin B1转录水平的影响.方法 CNE-2分为急速照射(ART)组和模拟IMRT组,两组分别给予6MV X线2、4、6和8 Gy 四个剂量点的照射;ART组的照射时间为1～3 min,模拟IMRT组的完成时间为35 min.另设空白对照组,不接受照射,其余条件相同.照射后12 h,流式细胞术分析细胞周期分布,RT-PCR检测细胞周期素Cyclin D1和Cyclin B1的转录水平.结果 在相同剂量点,模拟IMRT组G2期细胞比例均低于ART组,两组G2期细胞比例随照射剂量的增加而逐渐增加.模拟IMRT组与ART组在相同剂量点之间比较,Cyclin D1转录水平的差异均无统计学意义(P均＞0.05);Cyclin B1转录水平的差异均有统计学意义(P均<0.05),且随照射剂量的增加而下降,模拟IMRT组Cyclin B1的表达高于ART组.结论 模拟IMRT照射时间延长对G2期阻滞作用下降,细胞周期素Cyclin B1的表达相对升高.     

模拟IMRT对CNE-2细胞周期及Cyclin D1/Cyclin B1表达的影响

目的 探讨模拟调强放射治疗（IMRT）对人鼻咽低分化鳞癌细胞株(CNE-2)细胞周期及细胞周期素Cyclin D1、Cyclin B1转录水平的影响。 方法 CNE-2分为急速照射（ART）组和模拟IMRT组,两组分别给予6MV X线2、4、6和8 Gy 四个剂量点的照射;ART组的照射时间为1～3 min,模拟IMRT组的完成时间为35 min。另设空白对照组,不接受照射,其余条件相同。照射后12 h,流式细胞术分析细胞周期分布,RT-PCR检测细胞周期素Cyclin D1和Cyclin B1的转录水平。 结果 在相同剂量点,模拟IMRT组G2期细胞比例均低于ART组,两组G2期细胞比例随照射剂量的增加而逐渐增加。模拟IMRT组与ART组在相同剂量点之间比较,Cyclin D1转录水平的差异均无统计学意义（P均＞0.05）;Cyclin B1转录水平的差异均有统计学意义（P均<0.05）,且随照射剂量的增加而下降,模拟IMRT组Cyclin B1的表达高于ART组。 结论 模拟IMRT照射时间延长对G2期阻滞作用下降,细胞周期素Cyclin B1的表达相对升高。     

芹菜素对人前列腺癌裸鼠移植瘤Bax和Bcl-2表达的影响

目的：探讨芹菜素对人前列腺癌PC-3细胞裸鼠移植瘤凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响。方法：通过皮下种植PC-3细胞建立人前列腺癌裸鼠移植瘤模型,成瘤后随机分为4组：对照组（DMSO＋NS,0.2 mL/d）、芹菜素低剂量组（12.5 mg.kg-1.d-1）、芹菜素中剂量组（25 mg.kg-1.d-1）、芹菜素高剂量组（50 mg.kg-1.d-1）,每组6只,每日腹腔注射1次,共28次。应用免疫组织化学法检测裸鼠移植瘤组织凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达变化。结果：免疫组织化学法结果显示,芹菜素中、高剂量组能促进Bax蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达,两组与对照组和低剂量组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。但芹菜素低剂量组Bax和Bcl-2蛋白的表达和对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：中、高剂量组芹菜素能上调前列腺癌裸鼠移植瘤Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达。     

裂果薯皂苷Ⅰ抗人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠移植瘤的作用机制研究

目的：探讨裂果薯皂苷Ⅰ(SSPHI)对胰腺癌裸鼠移植瘤生长的影响及其作用机制。方法：建立人胰腺癌细胞PANC-1裸鼠移植瘤模型,成瘤裸鼠随机分为模型组、吉西他滨（GEM）组、SSPHI低剂量组（SSPHI-L）组、SSPHI中剂量（SSPHI-M）组和SSPHI高剂量（SSPHI-H）组,连续给药15 d后取瘤组织,测量肿瘤体积、瘤重,计算抑瘤率;苏木精-伊红（HE）染色法观察人胰腺癌移植瘤组织病理形态变化,TUNEL染色观察肿瘤组织细胞凋亡,免疫组织化学染色法测定裸鼠移植瘤Bcl-2、Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达。结果：与模型组相比,SSPHI低、中、高剂量组和GEM组移植瘤体积和瘤重均降低,细胞凋亡率升高（P<0.01）,移植瘤组织Caspase-9、Caspase-3和Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平下降（P<0.01）。结论：SSPHI可抑制胰腺癌裸鼠移植瘤生长,其作用机制可能与下调Bcl-2表达,上调Bax、Caspase-9和Caspase-3表达,诱导移植瘤细胞凋亡有关。     

吲哚-3-原醇对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

【目的】探讨吲哚-3-原醇(indol-3-carbinol,I3C)对人低分化鼻咽癌细胞株CNE-2的作用及其机制。【方法】将对数生长期的CNE-2细胞分成空白对照组和I3C组。空白对照组细胞常规培养,I3C组细胞培养体系中加入I3C(50μmol/L)。各组细胞培养48 h后,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖;Annexin V-碘化丙啶/异硫氰酸荧光素(PI/FITC)检测细胞凋亡,Real-time PCR检测细胞中胞外信号调节激酶(ERK)和Bax、Bcl-2基因表达;Western blot法检测细胞中ERK、p-ERK、Bax、Bcl-2蛋白表达,Caspase3活性试剂盒检测Caspase3活性。【结果】I3C组与空白对照组比较,CNE-2细胞增殖率显著下降(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05),Real-time PCR检测显示I3C组与空白对照组比较,ERK m RNA表达无显著性差异,但Bax m RNA表达水平显著增高(P<0.001),Bcl-2 m RNA表达水平显著下降(P<0.05)。Western blot法检测显示,I3C组与空白对照组比较,ERK总蛋白无明显变化(P>0.05),但p-ERK和Bcl-2蛋白表达显著减少(P<0.05),Bax蛋白表达和Caspase3活性显著增加(P<0.05)。【结论】吲哚-3-原醇能通过抑制ERK信号传导通路激活而抑制CNE-2细胞增值和促进CNE-2细胞凋亡。     

健脾解毒方治疗裸鼠胃癌及其诱导胃癌细胞凋亡的研究

目的:研究健脾解毒方诱导胃癌细胞凋亡的作用并探讨其部分机制。方法:建立裸鼠人胃癌MKN-45细胞皮下移植瘤模型,随机分为空白对照组、替加氟组、健脾解毒方组、联合用药组4组,每组12只;给药14 d后观察各组对裸鼠胃癌的治疗作用及其对荷瘤裸鼠生存期的影响;TUNEL法检测各组胃癌细胞凋亡情况;分别采用实时荧光定量PCR方法和免疫组化S-P法检测健脾解毒方干预后Bcl-2、Bax的mRNA和蛋白表达情况。结果:与空白对照组相比,健脾解毒方组凋亡指数显著升高、Bcl-2 mRNA水平及Bcl-2蛋白表达显著降低、Bax的mRNA和蛋白表达明显上调、Bcl-2/Bax显著下降,健脾解毒方组和联合用药组均能明显抑制瘤体生长(P0.01),延长荷瘤鼠的生存期(P0.01)。联合用药组在抑制胃癌细胞生长和诱导胃癌细胞凋亡方面的作用均优于单纯化疗药组和单纯健脾解毒方组(P0.05或P0.01)。结论:健脾解毒方能抑制裸鼠胃癌细胞生长,诱导胃癌细胞凋亡,其机制可能与调控Bcl-2、Bax表达有关。     

精制保和颗粒调控Bcl-2和Bax表达抑制大肠癌细胞移植瘤生长的作用机制研究

目的观察精制保和颗粒（RBF）对人大肠癌细胞移植瘤生长的影响及对Bcl-2和Bax表达的调控作用。方法通过对BALB/c裸鼠皮下种植人结肠癌HCT116细胞建立裸鼠荷瘤模型,根据瘤体的体积将裸鼠随机分为对照组和RBF组各5只,分别给予等体积的生理盐水和RBF溶液150 mg/（kg·d）,连续灌胃12 d。通过游标卡尺和电子天平分别检测瘤体体积和重量,采用HE染色观察组织病理学改变,通过TUNEL染色检测细胞凋亡情况,采用免疫组化法检测移植瘤组织中PCNA、Bax和Bcl-2蛋白的表达水平。结果与对照组比较,RBF组移植瘤瘤体的体积、重量均显著降低（P均<0.05）;HE染色发现RBF组移植瘤组织出现坏死;免疫组化和TUNEL染色检测显示RBF组中PCNA表达明显降低和TUNEL阳性染色细胞数增多（P均<0.05）;免疫组化检测显示RBF组移植瘤组织中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达明显降低,而促凋亡蛋白Bax的表达明显升高（P均<0.05）。结论RBF干预抑制大肠癌移植瘤细胞的生长,通过调控Bcl-2和Bax表达促进细胞凋亡和抑制细胞增殖可能是其重要机制之一。     

蔡氏扶正消癥汤联合奥沙利铂抑制胃癌生长的研究

目的探讨蔡氏扶正消癥汤联合奥沙利铂对体内外胃癌生长的影响及其机制。方法奥沙利铂、蔡氏扶正消癥汤及联合用药作用人胃癌细胞株SGC-7901后,CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting检测胃癌细胞中Bax和Bcl-2的表达;建立裸鼠胃癌皮下移植瘤模型,分别给予奥沙利铂、蔡氏扶正消癥汤及联合治疗,实验结束后分别测量各组裸鼠皮下移植瘤重量后计算抑瘤率;免疫组织化学法检测各组裸鼠肿瘤组织中Bax和Bcl-2的表达。结果蔡氏扶正消癥汤可明显增强奥沙利铂对体外胃癌细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;同时蔡氏扶正消癥汤联合奥沙利铂可显著抑制裸鼠胃癌皮下移植瘤生长,与对照组和奥沙利铂组相比较均有显著性差异(P<0.05);蔡氏扶正消癥汤联合奥沙利铂可分别上调和下调Bax和Bcl-2在体内外胃癌中的表达。结论蔡氏扶正消癥汤可增强奥沙利铂对体内外胃癌生长的抑制作用,该作用可能通过上调Bax表达和下调Bcl-2表达而实现。     

黄芪注射液对人鼻咽癌 CNE2 裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 探讨黄芪注射液对人鼻咽癌 CNE2 荷瘤裸鼠的抑瘤作用及其作用机制。 方法 建立人鼻咽癌 CNE2 裸鼠多植瘤模型,随机分为对照组,顺铂组,黄芪注射液高、中、低剂量组,分别 ip 生理盐水,顺铂,1040、520、260 g/kg 黄芪注射液,4 周后处死 CNE2 荷瘤裸鼠。通过移植瘤生长曲线、终末瘤质量,计算黄芪注射液的抑瘤率;采用 HE 染色,于光镜下观察各组移植瘤组织细胞病理形态学变化;采用免疫组化法检测黄芪注射液对各组裸鼠移植瘤组织中凋亡相关蛋白 p53、Bcl-2 和 Bax 表达的影响。 结果黄芪注射液高、中剂量组移植瘤体积明显低于对照组 (P＜0.05),瘤质量明显低于对照组 (P＜0.01),抑瘤率分别为 39.90%、30。77%;黄芪注射液高、中剂量组移植瘤组织中 p53、Bcl-2 蛋白的表达低于对照组 (P＜0.01);各组移植瘤组织中 Bax 蛋白表达均呈阴性。 结论 黄芪注射液对人鼻咽癌 CNE2 荷瘤裸鼠移植瘤具有抑制作用,其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡,降低肿瘤组织中 p53 和 Bcl-2 蛋白的表达有关。     

EGCG对鼻咽癌细胞株裸鼠移植瘤的放疗增敏作用以及对Survivin表达的影响

目的研究凋亡抑制基因Survivin的表达与EGCG对鼻咽癌CNE-2裸鼠移植瘤放疗增敏作用的关系。方法将低分化鼻咽癌细胞CNE-2接种于4~6周龄的雌性裸鼠皮下,待移植瘤生长至4~6 mm时,随机分为4组,分别采用NS、EGCG[50 mg/(kg.w)]、放疗(15 Gy)、EGCG给药24 h后再行放疗等方法分别处理各组裸鼠,处理前后分别测量裸鼠移植瘤的短径、体积。21 d后处死裸鼠,取出肿瘤并称重,将肿瘤组织分成两份,分别用来进行病理切片TUNEL染色以及RT-PCR检测Survivin mRNR的表达。结果EGCG+放疗对裸鼠移植瘤的生长抑制最为明显,肿瘤生长抑制率为89.3%,消退率为40.0%。与对照组EGCG组、放疗组相比,EGCG+放疗组的凋亡指数均明显增加(P<0.05),同时,伴有Survivin mRNR的表达显著下降(P<0.05)。结论EGCG对鼻咽癌裸鼠移植瘤可能具有放疗增敏作用,这种作用可能与凋亡抑制基因Survivin的表达下调有关。     

雷公藤甲素对裸鼠胰腺癌皮下移植瘤生长的抑制作用及其机制

目的：观察雷公藤甲素对人胰腺癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用,探讨其作用的分子机制。方法：选择健康BALB/c裸鼠于右后肢皮肤移植人胰腺癌SW1990细胞,建立裸鼠荷瘤模型,将建模成功的裸鼠分为模型组、吉西他滨组和雷公藤甲素组,每组10只,另选10只健康裸鼠作为对照组。测量各组SW1990胰腺癌荷瘤裸鼠体质量,取肿瘤组织称质量,计算肿瘤抑制率;采用免疫组织化学法检测各组裸鼠胰腺组织中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况;采用Western blotting法检测各组裸鼠胰腺组织中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-9和Caspase-3表达水平。结果：与吉西他滨组比较,雷公藤甲素组SW1990胰腺癌的肿瘤抑制率明显升高（P<0.05）。HE染色观察,与模型组比较,雷公藤甲素组裸鼠胰腺癌肿瘤细胞增殖受到抑制。免疫组织化学检测,与模型组比较,雷公藤甲素组裸鼠胰腺组织中Bcl-2表达水平和Bcl-2/Bax比值明显降低（P<0.05）。Western blotting法检测,与模型组比较,雷公藤甲素组裸鼠胰腺组织中Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）,而Bcl-2蛋白表达水平明显降低（P<0.05）。结论：雷公藤甲素能抑制裸鼠肿瘤组织的生长,其机制可能与抑制胰腺肿瘤组织中Bcl-2的激活、促进Bax的表达、降低Bcl-2/Bax的比值、促使Caspase-9和Caspase-3激活及诱导胰腺癌移植瘤细胞凋亡有关。     

重组人腺病毒P53和碘125粒子调节Bax和Bcl2对裸鼠胆管癌移植瘤增殖和凋亡的影响

目的 探讨重组人腺病毒P53（rHAd－P53）和碘125 粒子调节Bax 和Bcl2 对胆管癌裸鼠移植瘤增殖和凋亡的影响。方法 选用人胆管癌细胞构建人裸鼠胆管癌移植瘤模型,按随机数字表法将48 只裸鼠分为空白对照组、rHAd-P53 组、碘125 粒子组和rHAd-P53+碘125 粒子组。测量治疗前后移植瘤大小、重量,免疫组织化学法检测增殖相关蛋白（Ki－67）,TUNEL 法检测凋亡指数,Realtime－PCR 法检测Bcl2 和Bax mRNA 表达,Western blot 检测Bcl2 和Bax 蛋白表达。结果 治疗后,与空白对照组比较,rHAd-P53 组、碘125 粒子组、rHAd-P53+碘125 粒子组移植瘤体积差值、瘤重、增殖指数、Bcl2 和Bcl2/Bax mRNA、Bcl2 蛋白均显著性降低,Bax mRNA 和蛋白均显著性升高。与rHAd-P53 组比较,碘125 粒子组或rHAd-P53+碘125 粒子组移植瘤体积差值、瘤重、增殖指数、Bcl2 和Bcl2/Bax mRNA、Bcl2 蛋白均显著性降低,抑瘤率、Bax mRNA 和蛋白均显著性升高。与碘125 粒子组比较,rHAd-P53+碘125 粒子组移植瘤体积差值、瘤重、增殖指数、Bcl2 和Bcl2/Bax mRNA、Bcl2 蛋白均显著性降低,抑瘤率、Bax mRNA 和蛋白均显著性升高。结论 rHAd-P53 和碘125 粒子能通过抑制Bcl2 的表达、促进Bax 的表达而抑制裸鼠胆管癌移植瘤增殖、促进其凋亡,rHAd-P53 能增强碘125 粒子放疗的敏感性,二者联用较单独使用效果增加。     

Effects of Ad-p27mt gene transfer on the expression of Bax,Bcl-2, VEGF and MMP-9 in the transplanted liver tumors in nude mice

In this study, the mechanism by which Ad-p27mt inhibits the growth, invasion and metastasis of transplanted liver tumor was studied by examining the effects of Ad-27mt gene transfer on the expression of Bax, Bcl-2, VEGF and MMP-9 in the transplanted liver tumors in nude mice.The model of transplanted hepatic tumor was established in nude mice.The mice were then divided into three groups, which were injected with PBS, Ad-LacZ and Ad-p27mt and the growth of the transplanted liver tumor was observed.The expressions of P27, Bax and Bcl-2 proteins were detected by Western blotting and the expressions of VEGF and MMP-9 were immunohistochemically determined.Our result showed that the tumor size, expressions of Bax, Bcl-2 proteins, VEGF and MMP-9 were all lower than those in PBS and Ad-LacZ groups and the differences were statistically significant (P<0.05).Our study suggested that Ad-p27mt could inhibit the growth, invasion and metastasis of hepatic cancer by lowering the expressions of VEGF and MMP-9.     

蟾毒灵对裸鼠人肝癌移植瘤的抑制作用及对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的:探讨蟾毒灵对裸鼠人肝癌原位移植模型的抗肿瘤作用及对Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:建立裸鼠人肝癌原位移植模型,随机分为蟾毒灵高(1.5mg/kg)、中(1mg/kg)、低(0.5mg/kg)剂量治疗组,阿霉素8mg/kg治疗组和模型组。裸鼠人肝癌原位移植模型第25天测量肿瘤体积,取瘤组织做HE染色观察肿瘤坏死程度并行电镜观察,DNA原位末端标记法检测凋亡标记指数,免疫组化法检测肝癌组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果:蟾毒灵各剂量组肿瘤体积均较模型组明显缩小(P<0.01),生存期较阿霉素治疗组及模型组延长(P<0.05)。电镜观察到蟾毒灵各组肿瘤出现明显的细胞凋亡征象,低、中、高剂量治疗组的凋亡指数分别为5.87±2.13、8.86±2.96和10.60±3.42,明显高于阿霉素治疗组的3.28±0.98(P<0.05或P<0.01);蟾毒灵各组瘤组织的Bax表达明显增强,而Bcl-2表达无明显改变。结论:蟾毒灵对裸鼠人肝癌原位移植模型有明显的抗肿瘤作用,其作用机制可能与上调Bax表达、诱导细胞凋亡有关。     

EP对HIBD新生大鼠脑组织BCL-2及BAX表达的影响

目的:观察丙酮酸乙酯(EP)对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠脑组织Bcl-2及Bax蛋白表达的影响,探讨EP在新生大鼠缺血缺氧性脑损伤脑组织中保护作用的可能机制。方法:90只Wistar新生大鼠,随机分为3组:A组为对照组,B组为模型组,C组为干预组。给动物吸入含有92%氮气和8%氧气混合气体建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型,免疫组化法观察大鼠海马区Bax、Bcl-2表达变化。结果:A组Bax、Bcl-2表达变化不明显;B组Bcl-2表达明显减少,与A组、C组比较差异有统计学意义(P<0.05);C组Bcl-2表达较B组明显增多(P<0.05)。B组Bax表达明显增多,与A组、C组比较差异有统计学意义(P<0.05),C组Bax表达较B组明显减少(P<0.05)。结论:丙酮酸乙酯对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤脑组织有保护性作用,此作用可能与其调节Bcl-2和Bax表达水平有关。     

重组质粒hTERT-siRNA对胰腺癌细胞移植瘤hTERT相关基因及蛋白表达的影响

目的探讨重组质粒pSilencer4.1CMV neo-hTERT-siRNA对胰腺癌细胞BxPC-3裸鼠皮下移植瘤hTERT相关基因及蛋白表达的影响.方法建立人原发性胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分为4组：（1）肿瘤对照组,未作任何处理;（2）空载组,即pSilencer4.1-CMV neo空质粒组;（3）T1组,即重组质粒pSilencer4.1-CMV neo-hTERT1-siRNA组;（4）T2组,即重组质粒pSilencer4.1-CMV neo-hTERT2-siRNA组）.荷瘤裸鼠分组处理30d后,RT-PCR检测各组瘤体中hTERT、Bcl-2、Bax mRNA的表达,免疫组织化学检测各组瘤体中Bcl-2、Bax、p53、VEGF、端粒酶蛋白表达,Western blot检测各组瘤体中端粒酶蛋白表达情况.结果 T1组和T2组hTERT和Bcl-2 mRNA表达较肿瘤对照组和空载组明显降低,BaxmRNA表达明显升高（P〈0.01）.与肿瘤对照组和空载组比较,T1组和T2组Bcl-2 Telomerase、p53和VEGF蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达明显升高（P〈0.01）.结论 （1）重组质粒T1和T2能够下调裸鼠移植瘤体内抗凋亡基因hTERT mRNA、Bcl-2 mRNA和蛋白、p53和端粒酶蛋白表达水平,上调促凋亡基因Bax mRNA和蛋白表达水平,其抗胰腺癌作用可能与促进胰腺癌细胞凋亡有关.（2）重组质粒T1和T2能够显著下调裸鼠移植瘤体内VEGF蛋白表达水平,可能具有抑制肿瘤血管生成的作用。