Wortmannin与U73122对缺失磷脂酶C-γ_1细胞迁移的影响

0　引　　言　　磷脂酶 C-γ1 (phospholipase C-γ1 ,PL C-γ1 )与三磷酸肌醇激酶 (phosphatidylinositol- 3kinase,PI- 3K)是生长因子介导的信号传递过程中的两个重要信号分子。尽管敲除 plcgl基因后的小鼠不能正常发育 ,并于胚胎第 9天死亡 [1 ] ;缺失PL C- γ1 小鼠胚胎成纤维细胞 (PL C- γ1 - /- )在体外却能正常生长 ,且在表皮生长因子 (epiderm al growth factor,EGF)刺激下其受体激活与内吞、DNA合成、迁移能力等与正常细胞(PL C-γ1 + /+ )相似 [2 ] 。但 PL C-γ1 - /- 并不出现其近亲 PL C-γ2的代偿表达 ,PL C- …     

PLC-γ1对血小板生长因子介导的细胞增殖的影响

目的 观察磷酸脂酶C-γ1（PLC-γ1）对血小板生长因子(PDGF)介导的细胞增殖的影响。方法 应用无内源性PLC-γ1小鼠成纤维细胞株,观察在PDGF作用下细胞增殖情况（包括细胞内钙离子动员及DNA合成）,并与正常细胞株对照。结果 缺失PLC-γ1的细胞与正常细胞DNA合成显著增强,均出现细胞内钙动员;但PLC-γ1-/-细胞DNA合成时间显著延长,钙流较PLC-γ1+/+值小且峰值出现较晚(P<0.01)。结论 PLC-γ1在PDGF作用下成纤维细胞的增殖过程中有重要作用,当其缺乏时功能可被其他途径代偿。     

磷酸酯酶C—γ1对血小板生长因子介导的细胞迁移的影响

目的 生长因子诱导产生的细胞内信号分子参与调节细胞的增殖分化，磷酸脂酶C－γ1（PLC－γ1）被认为是连接生长因子和其下游信号传递分子之间的主要桥梁，但它在细胞分裂信号传递中是否必需。目前说法不一。本研究旨在阐明PLC－γ1在细胞分裂信号传导中的作用。方法 应用无内源性PLC－γ1小鼠成纤维细胞株，观察在血小板生长因子作用下细胞的迁移情况。结果 缺失PLC－γ1的细胞与正常细胞无显著差异。结论 当PLC－γ1缺乏时，在血小板生长因子作用下，成纤维细胞的迁移过程中其功能可被代偿。     

蛋白激酶C介导磷脂酶C-γ1参与高温诱导热休克蛋白70表达

目的 研究蛋白激酶C(PKC)是否介导磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)参与高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70(HSP70)表达的信号转导通路.方法 以基因敲除方法建立的缺失PLC-γ1基因(plcgl-/-)及野生型PLC-γ1基因(plcgl+/+)小鼠胚胎成纤维细胞为模型,Western免疫印迹-增强化学发光法检测高温诱导时PLC-γ1的磷酸化激活,PKC激酶检测试剂盒测定PKC激活程度,并以酶联免疫吸附(ELISA)法及MTT法测定PKC抑制剂白屈莱红碱(chelerthrine chloride,CH)和激活剂佛波醇-12-豆蔻酰-13乙酸(phorbol12-myristate 13-acetate,PMA)对HSPT0表达及细胞热耐力的影响.结果 plcgl+/+细胞经高温处理,PIE-γ1出现磷酸化激活、PKC活性显著增强(P<0.01);plcgl-/-细胞PKC活性也有所增强,但明显低于plcgl+/+细胞(P<0.01).PKC抑制剂或激活剂能增强或降低两种细胞热耐力,对高温引起的两种细胞HSP70合成都有明显抑制或促进作用.结论 蛋白激酶C可介导磷脂酶C-γ1参与高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70表达的信号传递.     

表皮生长因子通过PI-3K信号通路诱导非小细胞肺癌细胞表达CXCR4

目的:研究非小细胞肺癌细胞株A549中表皮生长因子受体(EGFR)和CXCR4之间的关系.方法:用不同浓度(20,40,60 μg/L)的表皮生长因子(EGF)处理血清饥饿的A549细胞24 h,RT-PCR检测CXCR4 mR-NA;血清饥饿的A549细胞用AG1478(EGFR磷酸化特异性抑制剂,10 μmol/L)处理24 h,分别用RT-PCR和Western blot检测CXCR4 mRNA和蛋白表达水平;分别在有/无LY294002(PI-3K通路抑制剂)情况下,用EGF处理血清饥饿的A549细胞,检测CXCR4 mRNA水平.结果:EGF使非小细胞肺癌细胞CXCR4表达上调约3-4倍,EGFR磷酸化抑制剂AG1478能降低CXCR4表达,EGF通过PI-3K信号通路上调CXCR4表达且CXCR4 mR-NA含量以浓度依赖的方式增加.结论:EGF通过EGFR和PI-3K信号通路上调CXCR4表达,CXCR4和EGFR胞内信号通路之间的交互作用可能促进肿瘤进展,对于协同表达CXCR4和EGFR的非小细胞肺癌患者,同时抑制EGFR和CXCR4可能是潜在的治疗靶点.     

阻断磷脂酶C—γ1信号通路对大肠癌细胞凋亡的影响

目的 探讨磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)信号通路被阻断对大肠癌细胞凋亡状态的影响。方法 利用U73122(1、5、10μmol／L)处理细胞以阻断PLC-γ1信号通路，光镜、电镜观察细胞形态改变，MTT法评估细胞杀伤效应，流式细胞仪分析凋亡细胞比例。结果 PLC-γ1信号通路阻断后，大肠癌细胞出现了典型的凋亡形态学改变，存活细胞明显减少，流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰，凋亡细胞所占比例达到半数以上。结论 阻断PLC-γ1信号通路能够启动大肠癌细胞凋亡。     

PLC-gamma与肿瘤发生相关机制研究进展

磷脂酶C(PLC)是肌醇1，4，5-三(IP3)和二酰甘油(DAG)信号转导通路中的关键酶，参与细胞生长、增殖、分化、细胞骨架改变、细胞运动、细胞凋亡、肿瘤生成及发展等过程。PLC-γ是PLC同工酶中非常重要的一种。PLC-γ与多种肿瘤的发生发展有着极为密切的关系。本综述了PLC-γ信号通路的组成及其与肿瘤发生发展的关系及相关机制。     

阻断磷脂酶C-γ1信号通路对大肠癌细胞凋亡的影响

目的探讨磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)信号通路被阻断对大肠癌细胞凋亡状态的影响。方法利用U73122(1、5、10μmol/L)处理细胞以阻断PLC-γ1信号通路,光镜、电镜观察细胞形态改变,MTT法评估细胞杀伤效应,流式细胞仪分析凋亡细胞比例。结果PLC-γ1信号通路阻断后,大肠癌细胞出现了典型的凋亡形态学改变,存活细胞明显减少,流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰,凋亡细胞所占比例达到半数以上。结论阻断PLC-γ1信号通路能够启动大肠癌细胞凋亡。     

磷脂酶C-γ1在人胚组织中的表达

目的研究磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)在人胚组织中的表达情况。方法收集人胚组织(包括软骨、软骨膜、骨骼肌)并行石蜡包埋及切片,采用免疫细胞化学ABC染色法观察人胚组织细胞中PLC-γ1的表达情况。结果PLC-γ1在这几种细胞中均有较强的表达,主要位于胞质中。结论PLC-γ1相关的细胞内信号传递途径对于人早期胚胎细胞的发育、增殖具有重要的生物学意义。     

磷脂酶C-γ1对乳腺癌细胞运动作用的影响

目的研究磷脂酶C-γ1(phospholipase C-γ1,PLC-γ1)对乳腺癌细胞生长、黏附和迁移等生物学行为的影响,揭示乳腺癌发生的新分子机制。方法在乳腺癌MDA-MB-231细胞中加入PLC-γ1抑制剂,观察细胞划痕、趋化和黏附运动能力变化,应用Western blot技术检测相应的乳腺癌信号转导通路中整合素β1分子磷酸化的表达。结果 PLC-γ1被抑制后乳腺癌细胞的迁移和黏附运动能力下降,差异有统计学意义(P<0.05);整合素β1的磷酸化表达水平降低。结论 PLC-γ1参与了乳腺癌细胞迁移和黏附运动,可作为乳腺癌分子诊断和靶向治疗的靶点。     

PLC-γ1信号通路在H2O2诱导的PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨磷酸脂酶C-γ1(PLC-γ1)信号通路对H2O2诱导的PC12细胞凋亡作用的影响.方法 利用PLC-γ1特异性抑制剂U73122(10 pμmol/L)预处理PC12细胞,阻断50 μmol/LH2O2诱导的PLC-γ1信号通路,Hoechst/P1双染观察细胞形态改变,MTT评估细胞活力,流式细胞仪分析凋亡和坏死细胞比例,DNA电泳验证细胞凋亡状态的改变.结果 H2O2对PC12细胞活力的影响呈时效和量效关系.PLC-γ1信号通路阻断后,PC12细胞出现了凋亡形态学改变,细胞活力明显降低.流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰,凋亡细胞所占比例达35.7%,DNA电泳呈现明显的梯形条带.结论 PLC-γ1信号通路在50 μmol/L H2O2诱导的PC12细胞凋亡中发挥重要的保护作用.     

Wortmannin对表皮生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖及迁移的影响

目的:研究PI3K抑制剂Wortmannin对表皮生长因子(EGF)诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、迁移及磷酸化Akt蛋白表达的影响,旨在探讨EGF诱导的VSMCs增殖和迁移的信号通路。方法:以低血清培养的VSMCs作为对照,采用细胞计数、划痕损伤实验和WesternBlotting技术,观察Wortmannin对EGF诱导的VSMCs增殖、迁移及磷酸化Akt蛋白表达的影响。结果:干预后24h,EGF组VSMCs增殖、迁移较对照组明显增强,同时磷酸化Akt蛋白的表达平行增高。而Wortmannin则明显抑制了VSMCs的增殖、迁移和磷酸化Akt蛋白的表达。结论:PI3K/Akt信号通路参与了EGF诱导的VSMCs增殖和迁移。     

磷脂酰肌醇3激酶p55γ调节亚单位对胃癌细胞系MGC803细胞迁移的影响

磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）是生长因子信号通路的重要组成成分，调节细胞的增殖、分化、存活和迁移等。PI3K信号通路的组成性活化不仅能导致细胞的恶性转化，而且还与肿瘤细胞的迁移、黏附以及肿瘤血管生成相关。p55γ是PI3K的调节亚单位之一，能与催化亚单位p110结合，在受胰岛素刺激时能结合胰岛素受体底物1（IRS-1）而表现PI3K的活性，但对其在生长因子信号转导和PI3K功能上的作用却不清楚。本实验研究p55γ的过表达对低分化胃黏液腺癌细胞系MGC803细胞运动、迁移等侵袭行为的影响，从而为阐明p55γ在细胞中的功能奠定基础。     

PLC—γ1对血小板生长因子介导的细胞增殖的影响

目的观察磷酸脂酶C－γ1（PLC－γ1）对血小板生长因子（PDGF）介导的细胞增殖的影响。方法 应用无内源性PLC－γ1小鼠成纤维细胞株,观察在PDGF作用下细胞增殖情况（包括细胞内钙离子动员及DNA合成）,并与正常细胞株对照。结果 缺失PLC－γ1的细胞与正常细胞DNA合成显著增强,均出现细胞内钙动员;但PLC－γ1^-/-细胞DNA合成时间显著延长,钙流较PLC－γ1 / 值小且峰值出现较晚（P＜0．01）。结论 PLC－γ1在PDGF作用下成纤维细胞的增殖过程中有重要作用,当其缺乏时功能可被其他途径代偿。     

自然杀伤细胞活化信号的转导和效应

新近研究发现,NK细胞活化受体与靶细胞表面相应配体交联结合后,可通过以SLP-76和WASP为核心的信号传递复合体及PI3K途径发挥作用。SLP-76活化后,通过募集结合PLC-γ、Itk和Vav,形成SLP-76信号转导复合体;WASP活化后,通过募集结合Grb2、Vav、WIP、Arp2/3和Cdc42-GTP等,形成WASP信号转导复合体。上述2种信号转导复合体经Nck相连后,与浆膜上的LAT作用,进而活化其中的PLC-γ和Arp2/3复合体,最终导致转录因子NFAT活化、细胞因子(GM-CSF、IFN-γ等)分泌和肌动蛋白聚合。PI3K介导Rac/PAK/MEK/ERK途径,导致NK细胞脱颗粒,释放穿孔素和颗粒酶,诱导靶细胞凋亡。     

阻断PLC-γ1通路对TNF-α抑制胶质瘤细胞增殖并诱导其凋亡的影响

目的 探讨磷脂酶C-γ1（PLC-γ1）在肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导胶质瘤细胞凋亡中的作用。方法 应用PLC-γ1的特异性抑制剂U73122抑制SW0胶质瘤细胞PLC-γ1活性,用MTT法观察在阻断PLC-γ1通路前后,TNF-α对SWO胶质瘤细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测TNF-α诱导SWO胶质瘤细胞凋亡的情况;Western免疫印记法检测TNF-α是否激活caspase-3以及抑凋亡蛋白bcl-2表达的情况。结果 抑制PLC-γ1活性后,SWO胶质瘤细胞对低浓度TNF-α的敏感性显著增加。结论 阻断PLC-γ1通路本身虽不能直接启动凋亡,但却能增加SW0胶质瘤细胞对某些调亡因素（如TNF-α）的敏感性,其分子机制之一可能是下调抑凋亡基因bcl-2的表达。     

整合素信号通路与后发性白内障的研究现状

后发性白内障（ after cataract ）又称后囊膜混浊（ posterior capsule opacification ， PCO）是白内障超声乳化或囊外摘除联合人工晶状体植入术后最常见的并发症，也是导致术后视力再次下降的主要原因。据统计，PCO在成年人白内障手术后2～5年的发生率为20％～50％，而儿童由于晶状体上皮细胞（lens epithelial cells， LECs）的增殖能力较强，PCO发生率可达100％［1］。研究表明，当晶状体受到创伤刺激时，导致血－房水屏障破坏，引起大量生长因子分泌，刺激术后残留晶状体上皮细胞并与细胞表面生长因子受体结合，诱导受体酪氨酸磷酸化，激活下游的级联信号通路，进而引起细胞的增殖、移行并发生上皮－间质转分化（ epithelial mesenchymal transdifferent， EMT），从而促进后囊膜混浊的形成［2－3］。整合素（ integrin ）作为一类细胞表面黏附分子，不仅具有介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质（ cell extracellular matrix ， ECM）黏附的作用，而且具有跨膜连接作用，能够把细胞外基质与细胞骨架相互连接起来，介导细胞内外双向的信号传递，通过调节下游信号转导蛋白的磷酸化水平及活性，从而参与细胞增殖、迁移、黏附、分化和凋亡等活动［4－5］。整合素信号通路在后发性白内障的发生发展中起重要作用。     

基质细胞衍生因子-1α对间充质干细胞迁移的影响

［摘要］目的: 研究基质细胞衍生因子-1α（stromal cell-derived factor-1α,SDF-1α）对间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）迁移的影响及可能的机制。方法: 采用全骨髓法体外分离培养并扩增大鼠骨髓来源的MSCs,应用Boyden 趋化小室实验观察不同质量浓度（0,5,25,50和100 ng/mL）的SDF 1α对MSCs定向迁移的影响,通过蛋白质印迹法和Boyden趋化小室实验观察细胞内PI3K/Akt和MAPKs信号通路在MSCs向SDF-1α迁移过程中的变化。结果： 不同质量浓度的SDF-1α通过调节PI3K/Akt和MAPKs信号通路,不同程度上影响MSCs的趋化性迁移,低质量浓度的SDF-1α促进细胞迁移,而高质量浓度对细胞迁移起到抑制作用;阻断MSCs中基底水平PI3K/Akt和MAPKs信号通路在不同程度上抑制了MSCs趋向SDF-1α迁移作用。结论：MSCs向SDF 1α迁移能力随着PI3K/Akt信号的强弱而增减;JNK/SAPK信号的减弱显著抑制了SDF-1α诱导的MSCs定向迁移;SDF-1α可以促进细胞内ERK1/2和p38MAPK两条信号通路,而ERK1/2和p38MAPK信号对SDF-1α促进的细胞迁移影响并不显著。     

磷酸脂酶C-γ1对血小板生长因子介导的细胞迁移的影响

目的生长因子诱导产生的细胞内信号分子参与调节细胞的增殖分化,磷酸脂酶Ｃ－γ１（ＰＬＣ－γ１）被认为是连接生 长因子和其下游信号传递分子之间的主要桥梁,但它在细胞分裂信号传递中是否必需,目前说法不一。本研究旨在阐明 ＰＬＣ－γ１在细胞分裂信号传导中的作用。方法应用无内源性ＰＬＣ－γ１小鼠成纤维细胞株,观察在血小板生长因子作用 下细胞的迁移情况。结果缺失ＰＬＣ－γ１的细胞与正常细胞无显著差异。结论　当ＰＬＣ－γ１缺乏时,在血小板生长因子作 用下,成纤维细胞的迁移过程中其功能可被代偿。     

PI3K/mTOR双靶点抑制剂PI-103在体外对喉鳞癌细胞的作用

 目的    探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)双靶点抑制剂 PI-103 在体外对喉鳞癌细胞的作用。 方法    采用喉鳞癌细胞株 Hep-2 及AMC-HN-8,分别加入LY294002、Rapamycin或PI-103处理培养细胞,DMSO处理作为对照,应用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡;Transwell 小室观察肿瘤细胞迁移及侵袭能力;Western blot测定相关细胞周期、细胞凋亡及 PI3K/Akt/mTOR 信号通路相关蛋白质水平。结果    LY294002、Rapamycin 、PI-103能将喉鳞癌细胞周期阻滞于S期,G2期百分含量较空白对照组显著下降,细胞周期相关蛋白Cyclin E1和 Cyclin D1水平降低。流式细胞术筛选细胞死亡率升高,凋亡相关蛋白Caspase9,Caspase3,Caspase8的表达量升高(P<0.05),然而活性凋亡蛋白active Caspase3并没有显著升高,但PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白质p-AKT和p-4EBP1表达量降低。药物组肿瘤迁移和侵袭细胞数均低于对照组。PI-103在以上事件中作用效率均显著高于LY294002和Rapamycin (P<0.05)。结论    PI-103 能够调节细胞周期蛋白阻滞喉鳞癌细胞周期,促进细胞死亡,抑制细胞迁移及侵袭,且效果优于单靶点抑制剂LY294002和Rapamycin,对头颈部鳞癌的临床治疗有潜在的研究价值。