半定量PCR检测子宫颈组织中人乳头瘤病毒16型DNA的研究

目的：探讨子宫颈组织中人乳头瘤病毒16型（HPV16）E6基因的含量与疾病严重程度的关系。方法：用半定量PCR检测20例慢性宫颈炎，6例宫颈非典型增生，18例宫颈癌组织中HPV16E6基因的含量。结果：宫颈非典型增生及宫颈癌组织中E6基因的含量显著高于慢性宫颈炎（P＜0．01）；宫颈癌及宫颈非典型增生的差异无显著性（P＞0．05）。结论：HPV16E6基因的含量随着宫颈疾病严重程度增加而增加，定量检测HPV16 DNA的含量可能作为监测宫颈癌高危人群的一种方法。     

人类乳头瘤病毒与宫颈糜烂癌变的相关性研究

目的：探讨人类乳头瘤病毒与宫颈糜烂癌变的相互关系。方法：阴道镜下对116例宫颈糜烂,12例宫颈癌及36例正常宫颈分别钳取活组织,用聚合酶链反应对活组织进行HPV公共引物及HPV16、HPV18型特异引物检测。结果：29．31％的宫颈糜烂患者HPV阳性,正常宫颈阳性率仅11．11％（P＜0．05）,宫颈糜烂Ⅰ度、Ⅱ度、Ⅲ度及宫颈癌中HPV16是最常见亚型,其阳性率分别为9．38％、18．90％、25．53％、75．0％,宫颈颗粒型或乳突型糜烂与宫颈癌强相关（OR＝5．56,95％CI＝1．21－25．49）。“高危”HPV－DNA检出率随宫颈鳞柱上皮异位程度增加而升高。结论：宫颈糜烂的病因可能与持续感染“高危”HPVs有关。     

人类乳头瘤病毒及其亚型在新疆南部地区维族妇女宫颈癌组织中的分布

目的：研究我国宫颈癌高发区新疆维吾尔自治区维族妇女宫颈癌发病与人类乳头状瘤病毒（HPV）的关系。方法：采用聚合酶链反应（PCR）技术对南疆维族宫颈癌新鲜组织及正常宫颈组织（各40例）进行HPV－C、HPV16、HPV18及HPV6／11的检测。结果：HPV－C、HPV16、HPV18及HPV6／11在宫颈癌组织中的阳性率分别为87．5％、72．5％、10．0％及0％，在维族对照组中的阳性率分别为20．0％、5．0％、0及7．5％，在HPV－C阳性的宫颈癌中HPV16阳性占82．8％。宫颈癌组织中HPV－C及HPV16的阳性率明显高于正常对照组，差异有显著性（P＜0．001）。HPV16在宫颈鳞癌组织中的阳性率明显高于腺癌，而HPV18在宫颈腺癌中的阳性率明显高于鳞癌，HPV总感染率及HPV16阳性率在宫颈癌的各临床分期及病理组织分级之间无显著性的差异。结论：HPV感染与我国癌颈癌高发区新疆南部地区维族宫颈癌发病有密切相关，其中HPV16感染在南疆维族妇女宫颈癌发病中起主要的作用，HPV16主要与鳞癌有关，而HPV18与宫颈腺癌有关。HPV－C及HPV16感染与宫颈癌临床分期及病理分级无关。     

喉癌和食道癌组织中人乳头瘤病毒核酸和抗原的检测

本文采用 Southern 印迹杂交和免疫组化 PAP 法,对喉癌和食道癌组织中 HPV DNA 序列和抗原进行了检测。结果表明,1例喉癌含有 HPV16DNA 序列,另一例含有 HPV35 DNA 序列。7例食道癌杂交全部阴性。此外,全部喉癌和食道癌标本 PAP 检测也均为阴性。结果提示,喉癌的发生可能与 HPV 感染有关。     

多重实时PCR对宫颈癌组织及SiHa细胞株HPV-16病毒存在状态的检测

背景与目的:人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)感染与宫颈癌发生发展密切相关,高危型HPV病毒整合入宿主细胞是细胞转化及癌变的关键。病毒整合状态的检测对深入探讨宫颈癌发生发展机制及预测宫颈病变的转归有一定的临床意义。然而目前尚没有一种理想的能够用于各种临床标本的HPV存在状态的检测方法。本研究旨在探讨HPV-16存在状态的理想检测方法。方法:以HPV-16质粒为标准品,利用两种不同的荧光报告基团,采用多重实时PCR同管定量检测HPV-16E2和E6基因,根据E2和E6基因拷贝数的比值(E2/E6)来判定HPV-16的存在状态;对HPV-16阳性的宫颈癌SiHa细胞和27例宫颈鳞癌新鲜标本进行多重实时PCR与Southern杂交检测,将两种检测方法的结果进行比较。结果:(1)多重实时PCR所得到的HPV-16E2、E6标准曲线相关性好,相关系数均为1.00,扩增效率均在95%以上。(2)对系列稀释的HPV-16质粒进行重复检测,确定了E2/E6比值为1时该多重实时PCR检测系统的95%参考值范围为0.81～1.29,以0.81作为区分游离型和混合型HPV-16的界值。(3)多重实时PCR与Southern杂交检测均发现SiHa细胞中HPV-16呈整合型,27例鳞癌中22例获得了一致的检测结果,符合率为81.5%,Kappa值为0.844,P<0.001。结论:多重实时定量PCR是一种可靠的、便于临床应用的检测HPV-16病毒存在状态的方法,具有省时、简便快速、高通量的优点,并且能用于石蜡切片以及病灶较小、DNA含量少的宫颈癌前病变组织或宫颈细胞学标本。     

人类乳头瘤病毒与宫颈糜烂癌变的相关性研究

目的 :探讨人类乳头瘤病毒与宫颈糜烂癌变的相互关系。方法 :阴道镜下对 116例宫颈糜烂 ,12例宫颈癌及 36例正常宫颈分别钳取活组织 ,用聚合酶链反应对活组织进行HPV公共引物及HPV16、HPV18型特异引物检测。结果 :2 9.31%的宫颈糜烂患者HPV阳性 ,正常宫颈阳性率仅 11.11% (P <0 .0 5) ,宫颈糜烂Ⅰ度、Ⅱ度、Ⅲ度及宫颈癌中HPV16是最常见亚型 ,其阳性率分别为 9 38%、18 90 %、2 5 53%、75 0 % ,宫颈颗粒型或乳突型糜烂与宫颈癌强相关 (OR =5 56,95%CI =1 2 1～ 2 5 4 9)。“高危”HPV DNA检出率随宫颈鳞柱上皮异位程度增加而升高。结论 :宫颈糜烂的病因可能与持续感染“高危”HPVs有关。     

子宫颈癌患者人乳头瘤病毒16、18检测

 目的　探讨人乳头瘤病毒（HPV）16、18型在子宫颈癌的发生、发展中的意义。方法　应用实时荧光定量聚合酶链反应技术对子宫颈原位癌13例，子宫颈癌Ⅰ期32例，子宫颈上皮内瘤样病变（CIN）Ⅰ~Ⅱ级12例，对照组54例（慢性子宫颈炎组37例、非研究疾病组17例）进行HPV16、HPV18型荧光基因定量检测，计算出HPV DNA的拷贝数。结果　研究组、对照组HPV16、HPV18的感染率差异有统计学意义（P＜0.05），在子宫颈癌发生的不同阶段，HPV16、HPV18的感染定量差异亦有统计学意义。子宫颈癌HPV含量与肿瘤直径大小、浸润间质深度、淋巴结阳性个数无相关性（r = 0.168， r = 0.280， r = 0.333，P＞0.05）；局部肿瘤的直径大小与浸润间质深度呈正相关（r = 0.473，P＜0.05）。结论　致癌性HPV的持续、高浓度存在是子宫颈癌发生、发展的主要因素之一。     

PCR和原位杂交检测食管癌组织中人乳头状瘤病毒

探索汕头高发区食管癌的发病是否与ＨＰＶ感染有关。方法用Ｌ１区共用引物ＰＣＲ和ＨＰＶ１８ＤＮＡ探针原位杂交技术对５５例新鲜食管癌标本进行检测。结论ＨＰＶ感染可能是食管癌的病因之一。     

人乳头瘤病毒16型E7C/CD80嵌合DNA疫苗质粒的构建

制备人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)与免疫辅助因子融合的嵌合基因疫苗,以增强基因免疫的效应,是HPV疫苗研制的基本方向之一[1].由于HPVE7在大多数宫颈癌及其前体病变中持续表达而不在正常组织中表达,因而被首先选用作制备宫颈癌治疗性疫苗[2].但E7蛋白也是高危型HPV的主要转化蛋白.本实验将去除E7的转化活性而保留其免疫原性的E7C亚基因插入真核表达质粒pcDNA3.1( )中,并将其和共刺激分子CD80(B7-1)进行连接重组,构建HPV16 E7C/CD80嵌合DNA疫苗,使抗原蛋白和共刺激分子共同在一质粒表达,增强其作为宫颈癌治疗性疫苗的免疫效果.     

宫颈肿瘤组织高危型HPV新分型检测方法的建立及应用

摘 要：［目的］ 建立一种新型宫颈肿瘤组织高危型人乳头瘤病毒（HPV）检测及分型方法,并评价其临床应用。［方法］ 基于我国人群流行的5种高危型HPV（HPV 16、18、31、33、51）的 E6/E7早期基因序列,设计特异性引物,以明确HPV型别的宫颈癌细胞株及宫颈肿瘤组织为模板,进行PCR检测,结合基因测序验证引物的特异性。进一步优化条件,建立高危型HPV多重PCR检测方法,检测65例宫颈肿瘤组织标本,与临床上使用的流式荧光杂交HPV检测法比较,评价其敏感性和特异性。［结果］ 成功建立可同时检测5种高危型HPV的多重PCR检测方法,对65例宫颈肿瘤组织进行高危型HPV检测,检出率为72.3%,明显高于临床流式荧光杂交检测法的检出率（32.31%）（χ2=3.86,P<0.05）。［结论］ 基于HPV E6/E7早期基因的高危型HPV多重PCR检测方法是特异、灵敏的高危型HPV检测方法。     

荧光定量PCR检测宫颈癌旁盆腔组织中HPV-DNA的临床意义

目的探讨FQ-PCR检测宫颈癌旁盆腔组织中HPV-DNA对预测早期宫颈癌微小转移的意义。方法采用FQ-PCR方法,检测31例Ia-IIb期宫颈癌患者的原发灶及其癌旁组织(阴道切缘、宫旁切缘、盆腔淋巴结)中的HPV亚型和DNA拷贝数,并与患者术后组织病理学结果比较。结果31例癌旁组织HPV-DNA总检出率为58.1%,其中病理检测发生癌旁转移的7例患者均检测到HPV-DNA。宫颈原发灶、组织病理学阳性和阴性的癌旁组织HPV-DNA拷贝数分别为106.75±0.72,105.70±0.87和103.70±1.22,且它们之间有非常显著性差异(P<0.01)。结论癌旁组织检出HPV早于组织病理学发现转移,检测癌旁组织中HPV对早期微小转移具有提示意义,有助于发现组织病理学不易发现的早期隐匿性转移。     

青岛地区不同宫颈疾患组织中 HPV16.18DNA 的检测

本研究应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测正常宫颈，慢性宫颈炎，宫颈非典型增生及宫颈癌组织中ＨＰＶ１６、１８ＤＮＡ，检出率分别为０（０／４３），７．０％（３／４３）；１６．０％（２０／１２５），８．０％（１０／１２５）；４２．９％（６／１４），７．１％（１／１４）及５８．１％（１８／３１），６．５％（２／３１）。统计学处理表明：ＨＰＶ１６的检出率除宫颈非典型增生与宫颈癌组织间无差别外，其余每两种组织间的检出率差异均有统计学意义；而四种不同宫颈疾患组织中ＨＰＶ１８ＤＮＡ的检出率无显著意义的差别。结果提示：子宫颈癌的发生与ＨＰＶ感染密切相关，以ＨＰＶ１６尤为明显，用ＰＣＲ技术检测ＨＰＶＤＮＡ不仅敏感，特异，而且操作简便快速。     

人乳头状瘤病毒16 型DNA 在乳腺癌组织中表达的研究

 目的　探讨人乳头状瘤病毒 (HPV) 1 6型感染与人乳腺癌病因学的关系。方法　采用原位分子杂交技术检测本地区人口女性乳腺癌和正常乳腺组织中的 HPV1 6型 DNA。结果　乳腺癌和正常乳腺组织中 HPV1 6型 DNA的阳性率分别为 52 .0 %和 2 0 .0 % ,多种组织学类型的乳腺癌组织中有 HPV1 6型 DNA的存在且以整合型感染为主。结论　本地区女性乳腺组织中有HPV1 6型 DNA感染的存在 ,HPV1 6型感染与本地区乳腺癌的发生、发展密切相关。     

Detection of Human Papillomavirus Type 16 in Sexual Partners of Patients Having Cervical Cancer by Polymerase Chain Reaction

The polymerase chain reaction (PCR) was employed to detect human papillomavirus (HPV) 16 and 18 in cytological samples from the uterine cervix and in urine samples from the male consorts. HPV 16 was detected in 2 (25%)of 8 males whose wives were positive for HPV 16, while it was detected in only one (7%) of 14 consorts whose wives were negative for HPV 16 and 18. This is the first report of the detection of HPV 16 in urine. Viral detection in urine samples by the PCR method is a non-invasive, convenient and useful tool for large-scale epidemiologic studies and investigations of the mechanism of virus transmission.     

人乳头瘤病毒DNA在人喉癌细胞中表达的研究

为研究喉癌与人乳头状瘤病毒(HPV)感染的关系,本研究探讨了HPV在喉癌中的致病作用和基因组型的分布与表达。应用共有引物和多重引物PCR的方法,对160例喉不同病变的新鲜组织标本,进行HPV6、11、16、18、31、33、35、42、58共9型HPVsDNAs感染的检测。结果在喉癌组HPV感染的阳性率为49.3％(35/71),喉癌颈转移淋巴结组为22.7％(5/22),喉癌前病变组为11.8％(2/17),声带息肉组为6.7％(2/30),癌周正常喉组织为0％(0/20)。HPV DNA型别分布在喉癌中以HPV16、18型为主,喉良性病变中以HPV6、11型为主。表明喉癌发生发展与HPV感染相关。     

宫颈癌细胞DNA含量和HPV16的对比研究

作者对３３例宫颈癌患者的活检组织进行了ＤＮＡ含量和ＨＰＶ１６检测。结果显示：宫颈癌细胞ＤＮＡ异倍体率为６６．７％，ＨＰＶ１６阳性率３３．３％。异倍体患者ＨＰＶ１６阳性率显著高于二倍体患者（Ｐ＜０．０５）；在异倍体病例中，不同倍体类型者ＨＰＶ１６阳性率明显不同，其顺序为多异倍体＞非整倍体＞四倍体＞近二倍体。ＨＰＶ１６阳性者的ＤＩ、ＳＰＦ、＞２Ｃ％均显著高于ＨＰＶ１６阴性者（Ｐ＜０．０１）。该结果提示，ＨＰＶ１６不仅与宫颈癌的发生关系密切，而且和癌细胞ＤＮＡ含量、增植特性、肿瘤恶性度也有一定关系。     

c-myc蛋白在宫颈鳞癌中的表达及其与HPV16/18 E6 蛋白表达的关系

目的检测 c-myc 蛋白在宫颈鳞癌中的表达,并探讨 c-myc 蛋白表达与 HPV16/18 E6 蛋白表达之间的关系.方法采用免疫组化 SP 法对 21 例慢性宫颈炎、40 例宫颈上皮内瘤(CIN)和 71 例浸润性宫颈鳞癌进行 c-myc 蛋白和 HPV16/18 E6 蛋白检测.结果慢性宫颈炎、CINⅠ级、Ⅱ级、Ⅲ级 c-myc 蛋白阳性率均很高,而浸润性宫颈鳞癌 c-myc 蛋白阳性率下降(P＜0.05);HPV16/18 E6 阳性组和 HPV16/18 E6 阴性组之间 c-myc 蛋白阳性率差异无显著性.结论浸润性宫颈鳞癌 c-myc 蛋白表达明显下降,c-myc 蛋白表达与 HPV16/18 E6 蛋白表达之间无相关性.     

Relatively Low Prevalence of Human Papillomavirus 16, 18 and 33 DNA in the Normal Cervices of Japanese Women Shown by Polymerase Chain Reaction

Ninety-two cervical scrapes and tissues, obtained from cytologically or histologically normal cervices of Japanese women, were examined for the presence of human papillomavirus (HPV) 16, 18 and 33 DNA by the polymerase chain reaction (PCR) method. Five out of 92 cases were HPV 16 DNA-positive, but neither HPV 18 nor 33 DNA was detected. The HPV (type 16, 18 and 33) prevalence rate in pregnant women, including postpartum, was 10% (3/31), which was higher than that in non-pregnant women. In two HPV 16-positive cases, we detected HPV 16 DNA again 2 months later. HPV (type 16, 18 and 33) prevalence in normal cervices was shown to be relatively low. However, it is very important to follow up the HPV-positive cases in cytologically normal cervices in order to elucidate the relation between HPV infection and the progression of cervical cancer.     

应用 PCR 方法检测大肠癌组织中的 HPV DNA

本文采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）的方法，对２０例大肠癌患者的手术切除标本进行了人体乳头瘤病毒（ＨＰＶ）ＤＮＡ的检测。结果发现４例（２０％）ＨＰＶ１６型扩增阳性，其中１例显示ＨＰＶ１６．１８型双重阳性。初步表明大肠癌组织中存在ＨＰＶ的感染。