miR-221增强乳腺癌细胞对多西他赛的耐药性

目的:探究miR-221在人乳腺癌细胞T47D和MCF-7多西他赛(docetaxel)耐药性中的作用及机制。方法:qPCR检测多西他赛处理乳腺癌细胞T47D和MCF-7不同时间点,细胞中miR-221含量的变化;qPCR和Western blot检测miR-221 mimics的转染效率。用阴性对照（NC）或miR-221 mimics转染细胞,不同浓度的多西他赛刺激细胞72小时后,MTT法检测细胞对多西他赛的耐药性;PI和Annexin V双染法检测miR-221 过表达对T47D和MCF-7细胞凋亡的影响;qPCR和Western blot检测靶蛋白p27的表达。结果:在T47D和MCD-7中多西他赛刺激明显促进miR-221的表达量升高;miR-221在细胞内可以发挥生物学效应,降低靶蛋白p27的表达;且过表达miR-221明显增强T47D和MCF-7对多西他赛的耐药性,降低其凋亡率。结论:miR-221过表达可明显增强T47D和MCF-7细胞对多西他赛的耐药性。     

miR-125a增强多西他赛对乳腺癌生长的抑制作用

背景与目的:研究表明miR-125a通过下调Her-2或者Her-3的表达抑制乳腺癌细胞生长,可能是指导乳腺癌治疗的靶点.本研究旨在观察miR-125a是否具有增强多西他赛对乳腺癌细胞株和裸鼠荷瘤模型的生长抑制作用.方法:转染miR-125a联合不同浓度多西他赛处理MCF-7和MDA-MB-231乳腺癌细胞株和MDA-MB-231乳腺癌裸鼠模型,观察细胞株和裸鼠接种肿瘤的生长情况.结果:miR-125a与多西他赛可协同抑制MDA-MB-231及MCF-7乳腺癌细胞株、MDA-MB-231乳腺癌裸鼠模型肿瘤的增殖,单纯转染miR-125a也可抑制MDA-MB-231及MCF-7乳腺癌细胞株的增殖.结论:miR-125a与多西他赛有协同抗乳腺癌作用,可成为乳腺癌靶向治疗的潜在靶点.     

miR-520a-3p靶向ABCG2增强乳腺癌细胞对多西他赛敏感性的机制研究

目的:研究miR-520a-3p对乳腺癌细胞多西他赛敏感性的影响,并探索潜在的分子机制。方法:收集2015年4月至2017年10月在我院乳腺外科确诊的45例乳腺癌标本,实时荧光定量PCR法检测乳腺癌组织中miR-520a-3p的表达水平。分析miR-520a-3p与乳腺癌化疗耐受和肿瘤生物学特征的相关性。采用实时荧光定量PCR检测乳腺癌细胞MCF-7、MCF-7/Doc和MDA-MB-231中miR-520a-3p和三磷酸腺苷结合盒转运蛋白（ABCG2）mRNA的表达,采用蛋白质免疫印迹实验检测ABCG2的表达。转染miR-520a-3p mimic后,采用细胞毒性实验观察乳腺癌细胞对多西他赛敏感性的变化。采用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹实验观察miR-520a-3p升高后,ABCG2 mRNA和蛋白的表达变化。进一步采用双荧光素酶活性实验验证miR-520a-3p对ABCG2的靶向作用。结果:化疗耐药组新辅助化疗后肿瘤原发部位的miR-520a-3p表达水平明显降低（P＜0.05）,同时相关性分析发现,miR-520a-3p低表达与高TNM分期（III期）和淋巴结转移相关（P＜0.05）。miR-520a-3p在MCF-7/Doc和MDA-MB-231细胞中表达较在MCF-7细胞中下降（P＜0.05）,而ABCG2的表达水平则明显升高（P均<0.05）。上调miR-520a-3p后,MCF-7和MCF-7/Doc细胞对多西他赛的敏感性增强（P＜0.05）,而ABCG2在mRNA和蛋白水平的表达均下降（P＜0.05）。双荧光素酶报告基因结果则证实ABCG2是miR-520a-3p的靶基因。结论:miR-520a-3p可逆转MCF-7/Doc对多西他赛的耐药性,这一作用可能与负调控肿瘤耐药相关蛋白ABCG2的表达从而抑制药物外排有关。     

多西他赛治疗晚期乳腺癌的临床研究

目的 观察国产多西他赛注射液对一线治疗后失败的晚期乳腺癌患者的临床疗效及毒副反应,并对安全性进行评估。方法 以国产多西他赛对44例既往治疗后进展的乳腺癌患者进行70mg／m^2静脉滴注,每3周1次,单药治疗。试验中不预防使用粒细胞集落刺激因子。用世界卫生组织（WHO）的疗效及抗肿瘤药急性及亚急性毒性反应分度标准评价疗效及毒性,用卡式评分评价身体状况变化。结果 在41例可评价疗效的患者中,4例达到完全缓解,14例部分缓解,有效率达43．9％,临床获益率85．4％。不良反应主要表现为Ⅲ、Ⅳ度白细胞下降（42．9％）、脱发（7．1％）和消化道反应（4．8％）。未出现水钠潴留。结论 使用多西他赛注射液治疗化疗后进展的晚期乳腺癌患者,疗效显著,耐受性良好,可作为该类患者的治疗选择。     

二甲双胍联合多西他赛对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的影响

目的:通过二甲双胍联合多西他赛观察对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖和凋亡的抑制作用。方法:实验分为4组:多西他赛联合二甲双胍组、单用多西他赛组、单用二甲双胍组以及空白对照组。平板克隆实验检测多西他赛联合二甲双胍对MDA-MB-231细胞克隆形成能力的影响,MTT实验检测多西他赛联合二甲双胍对MDA-MB-231细胞克增殖能力的影响,流式细胞仪检测多西他赛联合二甲双胍对MDA-MB-231细胞凋亡能力的影响。结果:平板克隆实验、MTT实验和流式细胞仪凋亡检测实验结果分别显示:多西他赛联合二甲双胍中细胞的克隆率、增殖能力下降高于单用多西他赛组、单用二甲双胍组以及空白对照组（P<0.05）,而凋亡率多西他赛联合二甲双胍组亦高于其它各对照组（P<0.05）。结论:二甲双胍联合多西他赛能够显著降低乳腺癌细胞MDA-MB-231的克隆和增殖能力,同时增加MDA-MB-231的凋亡能力,两者的联合具有协同杀伤肿瘤细胞的作用。     

国产多西他赛联合卡培他滨治疗耐药性晚期乳腺癌临床观察

目的:观察国产多西他赛(TXT)联合小剂量卡培他滨(CAP)治疗蒽环类或紫杉醇化疗失败的转移性乳腺癌疗效和不良反应.方法:TXT 35ms/m2,静脉滴注,第1、8天;CAP 2000mg/天,分2次口服,第1-14天.21天为1个周期,治疗2个周期评价疗效.结果:31例患者中,完全缓解2例、部分缓解14例、稳定11例、进展4例,总有效率51.6%,疾病控制率87.1%,中位肿瘤进展时间6.4个月,1年生存率65.2%.不良反应主要为骨髓抑制、胃肠道反应、手足综合征、脱发和乏力等.结论:国产TXT联合小剂量CAP治疗蒽环类或紫杉醇化疗失败的转移性乳腺癌疗效满意,不良反应可以防治,病人耐受良好,值得临床推广使用.     

国产多西他赛联合卡培他滨治疗耐药性晚期乳腺癌临床观察

目的：观察国产多西他赛（TXT）联合小剂量卡培他滨（CAP）治疗蒽环类或紫杉醇化疗失败的转移性乳腺癌疗效和不良反应.方法：TXT 35ms/m2,静脉滴注,第1、8天;CAP 2000mg/天,分2次口服,第1-14天.21天为1个周期,治疗2个周期评价疗效.结果：31例患者中,完全缓解2例、部分缓解14例、稳定11例、进展4例,总有效率51.6%,疾病控制率87.1%,中位肿瘤进展时间6.4个月,1年生存率65.2%.不良反应主要为骨髓抑制、胃肠道反应、手足综合征、脱发和乏力等.结论：国产TXT联合小剂量CAP治疗蒽环类或紫杉醇化疗失败的转移性乳腺癌疗效满意,不良反应可以防治,病人耐受良好,值得临床推广使用.     

国产多西他赛为主的联合化疗治疗转移性乳腺癌

 目的 观察国产多西他赛为主的联合化疗治疗转移性乳腺癌的疗效、毒副反应和临床受益反应（Clinical　benefit　response，CBR），并以进口多西他赛作对照。方法 A组30例转移性乳腺癌患者，既往未采用蒽环类药物治疗的14例采用国产多西他赛联合阿霉素治疗（A1组），既往蒽环类药物治疗失败的16例采用国产多西他赛联合卡培他滨治疗（A2组）；B组25例转移性乳腺癌患者作对照，其中未采用蒽环类药物治疗的11例采用进口多西他赛联合阿霉素治疗（BI组），既往蒽环类药物治疗失败的14例采用进口多西他赛联合卡培他滨治疗（B2组）；3周为1个周期，2周期评价疗效，记录毒副反应。结果 A组有效率（CR＋PR）66．7％，肿瘤控制率（CR＋PR＋SD）93．3％。毒副反应主要为骨髓抑制和脱发，可耐受，无治疗相关性死亡。CBR评价有效者73．3％；B组有效率68％，肿瘤控制率92％。毒副反应与A组相似。CBR评价有效者72％。结论 国产多西他赛为主的联合化疗治疗转移性乳腺癌有较好的疗效，毒副反应可耐受，临床受益反应良好，与进口多西他赛的疗效和不良反应相似。     

乳腺癌多西他赛耐药的分子机制

多西他赛（DTX）已广泛应用于乳腺癌的辅助化疗、新辅助化疗和转移性乳腺癌的治疗。然而, 由于天然耐药的存在和获得性耐药的产生,严重制约了DTX的临床应用。已知的乳腺癌多西他赛的耐药机制主要包括：药物作用靶点的改变、解毒酶的激活、细胞凋亡相关基因的异常表达、DNA甲基化状态、ATP结合盒（ABC）转运蛋白的过表达、微小RNA的表达异常等。     

多西他赛联合表阿霉素治疗乳腺癌的疗效观察

目的 探讨多西他赛联合表阿霉素治疗乳腺癌的临床疗效和毒副反应.方法 将60例乳腺癌患者随机分为观察组和对照组,每组30例.观察组给予多西他赛联合表阿霉素治疗,对照组给予表阿霉素治疗,比较观察2组患者的临床疗效和毒副反应.结果 观察组和对照组的总有效率分别为96.67％和76.67％,观察组疗效明显优于对照组(P＜0.05);主要毒副反应为骨髓抑制、消化道反应,观察组发生率明显低于对照组(P＜0.05).结论 多西他赛联合表阿霉素治疗乳腺癌疗效显著,毒副反应可耐受.     

靶向人Pokemon基因的shRNA重组质粒的构建

目的构建靶向Pokemon基因的短发夹RNA（shRNA）真核表达载体,为研究Pokemon基因在肿瘤发生发展中的作用奠定基础。方法利用基因重组技术,依据siRNA的设计原则,针对目的基因的mRNA序列筛选了3对siRNA序列以及一对阴性对照序列,将其分别插入真核表达载体psiRNA-hHlneo H1启动子下游,经α互补筛选、酶切和DNA测序鉴定,构建靶向Pokemon基因的RNAi真核表达载体。结果酶切鉴定及DNA测序结果显示siRNA片断正确,与设计序列一致,且成功插入预定位点。结论靶向Pokemon基因的shRNA重组质粒成功构建,为进一步研究Pokemon基因在多种疾病中的作用以及探索肿瘤的基因治疗奠定基础。     

靶向人Pokemon基因的shRNA重组质粒的构建(英文)

Objective:The aim of this study was to establish the foundation for studying the role of pokemon gene in tumorigenesis and development by constructing recombinant plasmids that can express small interfering RNA(siRNA)targeting human Pokemon gene.Methods:Hairpin siRNA templates targeting Pokemon gene were synthesized and cloned into plasmid vector psiRNA-H1neo.Three vectors derived siRNAs(psiRNA1,2,3)and one mocking psiRNAc(as control)were con- structed.The recombinant Pokemon siRNA plasmids were constructed...     

Construction the hairpin RNA recombinant plasmids targeting human Pokemon gene

Objective  

The aim of this study was to establish the foundation for studying the role of pokemon gene in tumorigenesis and development by constructing recombinant plasmids that can express small interfering RNA (siRNA) targeting human Pokemon gene.     

CIK、DC-CIK细胞抗鼻咽癌CNE2细胞的作用比较

目的:研究细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与树突状细胞(DC)共培养后DC-CIK细胞抗鼻咽癌CNE2细胞的作用.方法:正常人外周血单个核细胞诱导DC和CIK细胞,加入CNE2细胞冻融液,将DC与CIK共培养,以CIK细胞单独培养为对照.用MTT法测定杀伤活性.结果:DC-CIK细胞杀伤鼻咽癌细胞活性高于CIK细胞(P<0.05).结论:DC-CIK细胞抗鼻咽癌CNE2细胞的作用显著,为DC-CIK细胞免疫治疗提供了实验和理论依据.     

Short hairpin RNA targeting c-FLIP sensitizes human cervical adenocarcinoma Hela cells to chemotherapy and radiotherapy

c-FLIP inhibits caspase-8 activation and cell apoptosis mediated by death receptors. The present study aims at determining the effects of c-FLIP targeted vector-based short hairpin RNA (shRNA) on cell growth and evaluating its modulation of responsiveness to drugs and radiotherapy in cervical adenocarcinoma Hela cells. cFLIP expression of the cells transfected with shRNA against c-FLIP was significantly down-regulated after 72 h. c-FLIP silencing markedly suppressed cell proliferation and increased cell apoptosis. The activation of caspase-8 and caspase-3 was induced with shRNA targeting cFLIP with the passage of time after transfection. Furthermore, Vector-based shRNA against c-FLIP subsequently increased the sensitivity to cisplatin, iritican and Co60 radiotherapy by about 4- to 6-folds in Hela cells. Our data suggest that vector-based shRNA effectively inhibited c-FLIP expression, enhanced the expression level of caspase-8 and caspase-3 to induce cell apoptosis, probably with the higher efficacy in combination therapies with conventional chemotherapy and radiotherapy in cervical adenocarcinoma.     

shRNA对肺癌相关基因抑制作用的实验研究

目的:利用RNA干扰(RNAi)技术,研究突变型蛋白磷酸酶2A(PP2A)α催化亚基编码基因的小发夹RNA(shRNA)对人肺癌GLC-82细胞的影响。方法:根据靶基因的不同区域设计4组shRNA,采用体外转录法合成,利用阳离子脂质体转染入GLC-82细胞,孵育48小时后,观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞的存活率,免疫印迹法检测蛋白质的表达。结果:与空白对照相比,4组shRNA作用不尽相同,其中一组shR-NA可以明显抑制细胞的增殖,出现部分细胞脱落死亡,并且抑制GLC-82细胞目的蛋白的表达。结论:成功筛选出一段能特异而高效地抑制突变型PP2Aα催化亚基基因表达的shRNA,为进一步研究该基因的功能和作用机制提供了新的手段。另外,应用RNA干扰技术可抑制突变型PP2Aα催化亚基编码基因在人肺癌GLC-82细胞中的表达,有望成为肺癌基因治疗新的研究线索。     

Caspase-3在苦参碱诱导鼻咽癌CNE2细胞凋亡中的作用

目的：探讨苦参碱对鼻咽癌CNE2细胞生长和凋亡的影响以及Caspase-3在其中的作用。方法：将不同浓度（0、0.25、1.00、4.00g/L）的苦参碱分别作用于体外培养的CNE2细胞48h;采用MTT法检测细胞的存活与增殖,采用Annexin-Ⅴ和PI双染法测定细胞凋亡,采用Westernblot法检测细胞中Caspase-3蛋白的含量。结果：在苦参碱1.00和4.00g/L浓度作用下,CNE2细胞存活和增殖受到影响,其存活率分别为对照组的65.1%和50%,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P均〈0.05）;且CNE2细胞的凋亡频率明显增加,分别达到15.78%和28.44%,与对照组相比,差异均具有统计学意义（P均〈0.05）。苦参碱1.00和4.00g/L浓度组细胞的Caspase-3蛋白水平分别为1.22±0.34和1.69±0.46,均比对照组0.87±0.26明显增高（P均〈0.05）。结论：苦参碱能够引起鼻咽癌CNE2细胞的增殖抑制和凋亡增加,并对Caspase途径有激活作用。     

靶向Bcl-2的shRNA增强甲氨喋呤诱导Raji细胞凋亡的研究

Objective  

The aim of this study was to study the effect of Bcl-2 small hairpin RNA (shRNA) enhancing methotrexate (MTX)-induced apoptosis of Raji cells.     

鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2Z中EBV-LMP 1的表达

目的：探讨人高分化鼻咽癌细胞系CNE1和人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z中EB病毒编码的LMP 1基因表达情况。方法：用免疫组化法及Western bolt法分别检测鼻咽癌细胞系CNE1和CNE2Z中LMP 1基因的表达情况。结果：免疫组化及Western bolt法均显示,CNE2Z细胞中LMP 1呈强阳性表达,而CNE1细胞中LMP 1呈阴性表达。结论：人高分化鼻咽癌细胞系CNE1中没有LMP 1的表达而人低分化鼻咽癌细胞系CNE2Z中LMP 1呈阳性表达,鼻咽癌的恶性程度可能与LMP 1的表达有关。