CD4+CD25+调节性T细胞在肿瘤免疫领域的研究进展

CD4^ CD25^ 调节性T细胞(Regulatory T cell，Treg)在维持自身免疫耐受中起重要作用。本文就其在肿瘤免疫领域的研究进展进行综述。     

化疗对乳腺癌患者外周血中Treg细胞数目的影响及意义

目的: 研究化疗药物对乳腺癌患者根治术后外周血中Treg(CD₄⁺CD₂₅⁺调节性T细胞)的影响及意义。 方法: 采集52例乳腺癌术后患者化疗前1天及化疗后第10天外周静脉血,应用流式细胞技术检测外周血中Treg细胞以及CD₃⁺、CD₄⁺、CD₈⁺T细胞占T淋巴细胞百分比,采用ELLSA法检测外周血中IL-4、IL-10、TGF-β1和IFN-γ的表达水平。 结果: 化疗后乳腺癌患者外周血中Treg细胞占T淋巴细胞百分比(4.75±1.60)%较化疗前(5.59±1.81)%减少(Plt;0.05),且与淋巴结有无转移、转移数量以及绝经状态无关(P>0.05)。化疗前后CD3⁺细胞占T淋巴细胞比例分别为(64.690±7.469)%,(64.357±9.356)%(<0.05)。化疗前后CD4+T细胞占T淋巴细胞比例分别为(38.048±10.671)%,(36.536±9.664)%(Pgt;0.05)。化疗后CD8⁺T细胞占T淋巴细胞比例(28.129±10.900)%较化疗前(24.876±6.631)%升高(Plt;0.05)。化疗后CD₄⁺/CD₈⁺(1.506±0.691)较化疗前(1.680±0.704)降低(Plt;0.05)。化疗后乳腺癌患者外周血中IL-4、IL-10、TGF-β1浓度较化疗前降低,而IFN-γ浓度增高(P<0.05)。化疗前后Treg细胞比例变化与细胞因子IL-4、IL-10、TGF-β1和IFN-γ浓度变化无关(P>0.05)。 结论: 化疗可使乳腺癌患者外周血中Treg细胞占T淋巴细胞比例降低,从而达到治疗肿瘤的效果。     

肿瘤免疫中Treg细胞与趋化因子及受体的研究进展

近年来的研究发现,趋化因子系统和调节性T细胞在肿瘤发生、发展及转移中发挥重要作用。作为一种免疫抑制性调节细胞,CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,以下简称Treg细胞)在体内通过多种途径发挥抑制效应性T细胞增殖,在诱导机体对肿瘤的免疫耐受和免疫逃逸中发挥关键作用。肿瘤可以通过多种途径来引导调节性T细胞在肿瘤局部的聚集和维持,其中最重要的一种方式为肿瘤细胞表面高表达趋化因子。现将近年来国内外对趋化因子及受体(特别是趋化因子受体5)与Treg细胞关系的研究进行综述。     

乳腺癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的检测及意义

目的探讨乳腺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的变化及意义.方法采用流式细胞技术检测64例乳腺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞,采用ELISA法检测外周血中转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达水平.结果乳腺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞占T淋巴细胞的百分比为(5.1±2.9)%,高于乳腺良性肿物患者和健康志愿者(P均<0.05).乳腺癌患者外周血中CD4+CD25+T细胞水平与肿物大小、TGF-β1呈正相关(r分别为0.511和0.253),与CD8+CD28+T细胞和NK细胞呈负相关(r分别为-0.243和-0.301).结论乳腺癌患者外周血中具有免疫抑制活性的CD4+CD25+调节性T细胞水平较高,对乳腺癌患者具有免疫抑制作用.     

CD4+CD25+调节性T细胞在肿瘤免疫中的作用

CD4 CD25 调节性T(Tr)细胞是CD4 调节性T细胞的一个重要亚群,具有免疫低反应性和免疫抑制性两大功能特征,其作用机制可能是通过细胞间直接接触和/或分泌抑制性细胞因子.在维持机体免疫内环境稳定、防止自身免疫性疾病发生、诱导移植耐受以及调节肿瘤免疫方面都起着重要作用.文章就该类细胞的研究近况及其在调节肿瘤免疫方面的作用作一综述.     

CD4＋CD25＋调节性T细胞在血液病中的研究进展

CD4＋ CD25＋调节性T细胞是一类产生于胸腺,具有免疫无能性及免疫抑制性的细胞.以往的研究在再生障碍性贫血、白血病、特发性血小板减少性紫癜、非霍奇金淋巴瘤、骨髓增生异常综合征中进行了CD4＋ CD25＋T细胞、CD4＋ CD25hiT细胞、CD4＋ CD25＋ Foxp3、CD4＋ CD127等调节性T细胞相关抗体的测定,得出了调节性T细胞在自身免疫性血液病中减少、在肿瘤性疾病中增多的结论 .调节性T细胞在治疗自身免疫性疾病、变态反应性疾病、移植排斥、肿瘤及特异性疫苗接种方面具有巨大前景.     

化疗对肺癌患者外周血中CD4~＋ CD25~＋调节性T细胞数目的影响及意义

目的研究化疗药物对肺癌患者外周血中Treg（CD4＋ CD25＋调节性T细胞）的影响及意义。方法采集60例肺癌术后患者化疗前1天及化疗后第10天外周静脉血,应用流式细胞技术检测外周血中Treg细胞以及CD3＋、CD4＋、CD8＋T、NK细胞占T淋巴细胞百分比,CD4＋T/CD8＋T比值。结果化疗前NSCLC患者外周血CD4＋ CD25＋调节T细胞比率明显高于健康对照组（P〈0.05）;且Ⅳ期患者调节T细胞比率明显高于Ⅲ期患者（P〈0.05）。化疗后NSCLC患者外周血CD4＋ CD25＋调节T细胞较化疗前显著降低（P〈0.05）。化疗前后不同病理分型患者外周血中CD4＋CD25＋细胞变化差异无统计学意义。化疗后CD8＋T细胞占T淋巴细胞比例（28.129±10.900）%较化疗前（24.876±6.631）%升高（P〈0.05）。化疗后CD4＋/CD8＋（1.506±0.691）较化疗前（1.680±0.704）降低（P〈0.05）。结论肿瘤负荷可显著促进肺癌患者外周血Treg细胞分化,化疗后肺癌患者Treg细胞比例下降。     

乳腺癌患者淋巴结CD4＋CD25＋T细胞和相关细胞因子的检测及相关性分析

目的探讨CD4＋CD25＋T细胞在乳腺癌发生、发展中的作用。方法将取自35例乳腺癌患者的105个肿大淋巴结,制备成单细胞悬液,应用流式细胞仪检测CD4＋CD25＋T细胞比例及CD4＋CD25-、CD8＋T细胞、NK细胞的相对水平。采用定量RT-PCR法,检测IL-2、IL-10、TGF-β1和IFN-γ的细胞因子水平。结果乳腺癌患者淋巴结中的CD4＋CD25＋T细胞水平（在CD4＋T细胞中的百分含量）与淋巴结转移相关,转移淋巴结中其水平明显高于未转移淋巴结。乳腺癌患者淋巴结中CD4＋CD25＋T细胞与CD4＋CD25-、CD8＋T细胞和NK细胞的水平呈负相关关系。乳腺癌患者淋巴结中CD4＋CD25＋T细胞水平与TGF-β1呈正相关,与IL-2、IL-10、IFN-γ无相关性。乳腺癌患者淋巴结中TGF-β1、IL-10、IFN-γ水平与淋巴结转移相关,转移淋巴结中TGF-β1、IL-10含量高而IFN-γ含量较低。IL-2与淋巴结转移无相关性。结论乳腺癌患者转移淋巴结中的CD4＋CD25＋T细胞水平高于未转移淋巴结。     

肿瘤患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞流式细胞术分析

目的：分析比较肿瘤患者和健康人外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的特点,为肿瘤免疫学研究及治疗探索新方法。方法：收集并分离30例肿瘤患者和32例健康人的外周血单个核细胞（PBMCs）,用荧光标记的抗人CD4及抗人CD25单抗标记肿瘤患者和健康人PBMCs细胞,FCM检测CD4^＋CD25^＋Treg细胞,分析CD4^＋CD25^＋Treg细胞在肿瘤患者和健康人中的差别。结果：肿瘤患者的CD4^＋CD25^＋Treg细胞百分数明显高于健康人（年龄〈55者62．4vs40．4;年龄≥55者53．1vs31．0,P〈0．05）。结论：肿瘤患者的CD4^＋CD25^＋Treg细胞高于健康对照,为肿瘤免疫治疗提供新策略,通过删除CD4^＋CD25^＋Treg细胞,有可能增强抗瘤免疫反应。     

CD4~+ CD25~+ Treg细胞与肿瘤免疫研究进展

<正>机体免疫系统通过免疫监视功能,识别和清除包括肿瘤、微生物等"非己"成分,维持机体的稳定。恶性肿瘤在机体内往往表现出免疫逃逸的特殊状态,与机体抗肿瘤的免疫效应之间形成一对此消彼长的矛盾关系。近些年研究发现,CD4+ CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)可通过抑制激活的T细胞功能,影响机体抗肿瘤免疫作用,在维持自身免疫耐受性中发挥着重要作用,与肿瘤免疫逃逸关系密切[1]。机体的细胞免疫受     

新辅助化疗对乳腺癌患者调节性T细胞的影响

目的探讨新辅助化疗对乳腺癌患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)的影响。方法采集68例乳腺癌患者新辅助化疗前1d和化疗后第10天的外周静脉血,应用流式细胞仪检测外周血中Treg细胞及CD3+、CD4+及CD8+T细胞占T淋巴细胞的百分比。定量资料分别采用独立样本或配对样本t检验进行统计分析。结果化疗前,乳腺癌患者外周血Treg细胞占T淋巴细胞的百分比较健康对照组明显增高[(4.77±0.76)%比(0.68%±0.36)%,t=21.176,P=0.000]。化疗后CD4+/CD8+较化疗前升高[(1.95±0.72)%比(1.19±0.43)%,t=8.280,P=0.000];化疗后Treg细胞较化疗前明显降低[(1.59±0.58)%比(4.77±0.76)%,t=19.041,P=0.000]。化疗有效组Treg细胞较无效组明显降低,差异有统计学意义(t=8.227,P=0.000)。结论新辅助化疗可调控乳腺癌患者机体的肿瘤免疫耐受,改善其免疫功能,从而达到治疗肿瘤的效果。     

Th/Tr淋巴细胞比值评估乳腺癌患者抗肿瘤免疫状态

目的：探讨用Th/Tr淋巴细胞比值评估乳腺癌患者的抗肿瘤免疫状态。方法：采用流式细胞术检测53例不同分期的乳腺癌患者化疗前外周血中CD4^＋Th细胞、CD4^＋CD25^＋Tr细胞水平,计算Th/Tr比值,并与30例健康志愿者进行比较。结果：有转移与无转移的乳腺癌患者Tr细胞绝对值差异无统计学意义（103±75vs 109±70,P=0.722）。有转移的乳腺癌患者Th/Tr淋巴细胞比值小于无转移者（3.83±1.37 vs 6.11±2.93,P〈0.001）,无转移患者小于健康志愿者（6.11±2.93 vs 11.24±1.84,P〈0.001）。结论：Th/Tr比值对乳腺癌患者抗肿瘤免疫状态的评估优于Tr细胞计数,Th/Tr比值在乳腺癌患者尤其是有转移的乳腺癌患者中显著降低,其水平变化可作为评估乳腺癌患者免疫状态的有效指标。     

非小细胞肺癌患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞检测及临床意义

[目的]探讨非小细胞肺癌患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞（Treg）表达及临床意义。[方法]流式细胞术检测30例非小细胞肺癌组患者及12例健康志愿者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg百分比。[结果]肺癌组外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋细胞百分比（6.24%±2.01%）高于健康对照组（4.83%±0.85%）（P〈0.05）,外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋细胞百分比在肺癌患者不同性别、年龄、病理、KPS及肿瘤标志物正常与否之间比较无差异（P〉0.05）,Ⅳ期患者表达高于Ⅰ～Ⅲ期患者（P〈0.05）,带瘤患者表达高于无瘤患者（P〈0.05）,有气虚证、血瘀证患者高于无气虚证、血瘀证患者（P〈0.05）。[结论]检测肺癌患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg表达在了解患者肿瘤进展情况和机体免疫功能状态方面有一定价值,其表达升高与患者出现气虚证和血瘀证有关。     

荷乳腺癌小鼠髓源抑制性细胞对B细胞功能的影响

目的：探讨荷乳腺癌小鼠髓源抑制性细胞（myeloid-derived suppressor cell,MDSC）对B细胞功能的影响。方法：构建BABL/c 小鼠4T1 乳腺癌模型,磁珠分选出荷瘤小鼠脾脏的MDSC与正常小鼠脾脏的B细胞,将MDSC与B细胞共孵育后流式细胞术检测MDSC对B细胞表面分子PD-1、PD-L1、CTLA-4、CCR6、CD62L 和MHCⅡ表达的影响,ELISA 法检测B细胞分泌的IgA、IgM和IgG的变化;BrdU试剂盒检测B细胞增殖情况;Annexin Ⅴ/PI 凋亡试剂盒检测B细胞凋亡。磁珠分选出共孵育体系中的B细胞,将其与T细胞共孵育,BrdU 试剂盒检测T细胞增殖情况,Annexin Ⅴ/PI 凋亡试剂盒检测T细胞凋亡。结果：与B细胞对照组相比,B+MDSC组中B细胞表面PD-L1 表达升高（P<0.01）,PD-1、CTLA-4、CCR6、CD62L 和MHCⅡ的表达均降低(均P<0.01);B细胞分泌的IgA、IgM 和IgG 明显升高（均P<0.01）,B细胞增殖增高（P<0.01）、凋亡降低（P<0.01）。与T细胞对照组相比,B+MDSC (1∶5）+T组的T细胞增殖明显降低（P<0.01）,T细胞凋亡无明显变化。结论：荷乳腺癌小鼠MDSC促进B细胞增殖和抑制B细胞凋亡,并且MDSC诱导的B细胞可以抑制T细胞的增殖。     

CD4+CD25+调节性T细胞与大肠癌的关系

近来CD4 CD25 调节性T细胞对肿瘤免疫调节的抑制作用正受到越来越多的重视,许多恶性肿瘤患者外周血都存在CD4 CD25 调节性T细胞比例上调,机体抗肿瘤免疫力下降.大肠癌的发病率正逐年上升,其发病分子机制已为熟知,免疫机制研究不多,国内尚未见大肠癌与该类细胞关系的报道,现对CD4 CD25 调节性T细胞在大肠癌的发生、发展、治疗中的研究综述如下.     

原发性肝细胞癌微环境中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞分布与局部免疫的关系

目的通过检测原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）局部肝癌组织和癌旁组织中T细胞亚群的分布情况,探讨在肝癌发生、发展过程中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与局部免疫状态的关系。方法54例肝癌组织和癌旁组织及10例正常肝组织用免疫组织化学S—P法标记CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞及CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Tr细胞）,并对组织中CD4^＋CD25^＋Tr细胞与CD4^＋T、CD8^＋T及CD4^＋T／CD8^＋T值进行相关性分析。结果54例肝癌、癌旁组织中CD4^＋CD25^＋Tr细胞单个高倍视野平均数分别为5．6208±2．7235和3．8554±1．6018（P=0．001）;肝癌中CD4^＋CD25^＋Tr细胞数目与肿瘤大小、有无子灶有关,组间差异有显著性（P〈0．01）;肝癌中CD4^＋CD25^＋Tr数量与CD4^＋T细胞的数量以及CD4^＋T／CD8^＋T值呈显著负相关（r=-0．459,P=0．015;r=-0．563,P=0．011）,而与浸润性CD8^＋T细胞的数量分布无关（r=-0．485,P=0．072）。结论在肝癌微环境中CD4^＋T淋巴细胞表达降低,CD4^＋CD25^＋Tr细胞表达增高,后者可能通过抑制CD4^＋T淋巴细胞的增殖来抑制肝癌局部免疫,从而促进肿瘤的进展以及侵袭或转移。     

STAT3磷酸化调控乳腺癌髓系来源抑制细胞介导T细胞免疫抑制的机制研究

  目的   检测STAT3在乳腺癌MDSCs中的磷酸化状态及其对MDSCs免疫抑制活性的影响。   方法  收集脐血单个核细胞,免疫磁珠的方法分选其中CD33+细胞,体外与乳腺癌细胞系MDA-MB-231共孵育诱导MDSC生成。Western blot方法分别检测IDO和STATs的表达与磷酸化情况。MDSCs与健康供者外周血T淋巴细胞共孵育,分别加入1-MT和JSI-124来抑制IDO功能和STAT3磷酸化,利用MTT实验和ELISA检测各组T细胞的增殖和细胞因子分泌。   结果  Western blot检测发现体外诱导的MDSCs中IDO表达明显增加,同时伴STAT3磷酸化水平升高。加入JSI-124后pSTAT3和IDO表达明显降低。MTT实验中MDSCs明显抑制T细胞增殖,加用IDO特异性抑制剂1-MT或STAT3抑制剂JSI-124后T细胞增殖抑制明显改善（P < 0.05）,且1-MT组和JSI-124组之间差异无统计学意义。ELISA结果显示MDSCs显著抑制T细胞分泌IFN-γ,促进TGF-β、IL-10释放（P < 0.05）。而加用1-MT或JSI-124后,IFN-γ分泌水平升高,而TGF-β、IL-10分泌水平降低（P < 0.05）,而1-MT组和JSI-124组之间差异无统计学意义。   结论   MDSCs中磷酸化STAT3水平升高导致IDO过表达;STAT3的特异性抑制剂JSI-124可以逆转MDSCs对T细胞增殖和Th1类因子分泌的抑制作用。      

胃癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的检测及其临床意义

目的探讨胃癌患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞水平的特点及其临床意义。方法采用流式细胞术检测35例胃癌患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞水平并进行分层分析。结果健康对照组CD4 CD25 调节性T细胞水平为(8.69±2.28)%,35例胃癌患者CD4 CD25 调节性T细胞比例为(17.77±8.45)%,统计学有显著差异(P<0.01);进一步分层分析显示随疾病进展外周血CD4 CD25 调节性T细胞水平升高,在III期、IV期尤为明显,统计学有极显著差异(P<0.01)。结论胃癌患者外周血CD4 CD25 调节性T细胞水平的升高与胃癌免疫功能低下及肿瘤的发生发展密切相关,去除这群细胞可有效诱导肿瘤免疫,为肿瘤治疗提供一种新的方法。     

5-FU对小鼠乳腺癌4T1细胞株中肿瘤干细胞样细胞的富集作用

目的:探讨以氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)处理并通过荷瘤小鼠模型体内传代的方法富集乳腺癌干细胞样细胞的可行性,为靶向肿瘤干细胞治疗奠定基础.方法:以乳腺癌细胞株4T1皮下接种小鼠制备荷瘤模型,以一定剂量5-FU腹腔注射4周;处死小鼠后取肿瘤组织制成细胞悬液,并接种小鼠制备下一代小鼠荷瘤模型,5-FU处理及再次传代方法同上,共传4代.对照组小鼠给予生理盐水注射,其余处理同模型组.流式细胞术检测各代肿瘤组织中CD44+ CD24-/low细胞比例,Hoechast 33342染色法检测侧群(side population,SP)细胞的比例,免疫组化法检测CD55和ALDH1蛋白的表达,倒置显微镜观察乳腺癌细胞微球体的形成,小鼠致瘤实验检测不同肿瘤细胞的致瘤能力.结果:各代对照组小鼠模型肿瘤组织中CD44+CD24-/low细胞比例为(11.5±0.9)％,SP细胞比例为(9.7±1.3)％,ALDH1表达阴性,CD55强阳性表达细胞数为(0.6±0.3)％,乳腺癌细胞微球体比例为(0.5±0.2)％;5-FU处理组4代小鼠模型肿瘤组织中CD44+ CD24-/low细胞比例分别为(49.8±1.2)％、(56.8％±1.7)％、(66.4±1.5)％、(69.0±1.6)％,SP细胞比例分别为(25.0±1.2)％、(42.6±2.8)％、(58.4±2.1)％、(61.3±2.6)％,ALDH1阳性表达细胞比例为(3.8±0.7)％、(14.1±2.4)％、(25.2±3.1)％、(27.5±2.7)％,CD55强阳性细胞比例为(7.8±1.6)％、(10.1±2.0)％、(15.6±1.4)％、(17.3±1.9)％,乳腺癌细胞微球体形成比例为(5.9±0.4)％;两组各相应指标之间差异均具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).5-FU作用后富集了肿瘤干细胞的第3代肿瘤细胞的致瘤作用显著强于对照组细胞(P＜0.05).结论:5-FU作用并通过荷瘤小鼠体内传代能够富集小鼠乳腺癌4T1细胞株中的肿瘤干细胞样细胞.     

Elimination of regulatory T cells is essential for an effective vaccination with tumor lysate-pulsed dendritic cells in a murine glioma model

Both melanoma and glioma cells are of neuroectodermal origin and share common tumor associated antigens. In this article, we report that the melanocyte differentiation antigen TRP2 (tyrosinase-related protein 2) is not predominantly involved in the tumor rejection of a syngeneic murine glioma. Although GL261 glioma cells endogenously expressed TRP2 and were lysed by TRP2 specific cytotoxic T cells (CTLs) in vitro, vaccinations with TRP2 peptide-pulsed dendritic cells (DCs) could only induce minor antiglioma responses in a prophylactic setting and failed to work in a stringent setting where vaccine and tumor were administered on the same day. Further analysis revealed that TRP2 is not recognized by bulk CTLs after depletion of regulatory T cells which results in tumor rejections in vivo. In contrast to TRP2 peptide-pulsed DC, tumor lysate-pulsed DCs were more potent as a vaccine and completely protected mice from tumor outgrowth in a prophylactic setting. However, the vaccine efficacy of tumor lysate-pulsed DC was not sufficient to prevent the tumor outgrowth when tumors were inoculated the same day. In this case, Treg depletion before vaccination was essential to boost antiglioma immune responses leading to the rejection of 80% of the mice and long-term immunity. Therefore, we conclude that counteracting the immunosuppressive glioma tumor environment via depletion of regulatory T cells is a prerequisite for successful eradication of gliomas after targeting multiple tumor antigens by using tumor lysate-pulsed DCs as a vaccine in a more stringent setting.