整合素连接激酶在非小细胞肺癌中过度表达及促进肺癌细胞的侵袭和迁移

目的:探讨整合素连接激酶(ILK)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及在侵袭和迁移中的作用和相关分子机制。方法:免疫组化法检测ILK蛋白在NSCLC患者中的表达,细胞转染、siRNA干扰、细胞划痕试验、实时定量PCR、Westernblot方法探讨ILK在肺癌A549细胞中的表达及分子机制。结果:ILK蛋白在原发性NSCLC组织中过度表达30.6%(33/108)并且和TNM分期(P=0.001)、淋巴结转移(P=0.033)相关。ILK在A549细胞中过度表达并且通过下调E-cadherin,上调波形蛋白、纤维连接蛋白、Snail、Slug导致上皮-间质转化(EMT)。此外,NF-κB抑制剂BAY11-7028和小干扰靶RNA(siRNA)NF-p65可诱导E-cadher in的表达下调。结论:ILK在原发性NSCLC组织中高表达并与TNM分期和淋巴结转移相关,其促进肺癌细胞的侵袭和迁徙机制可能是经NF-κB信号通路诱导EMT所致。     

hsa-miR-125a-5p促进非小细胞肺癌细胞侵袭

背景与目的 microRNAs(miRNAs)是小的非编码RNA,它们通过与靶mRNA不完全互补连接的方式转录后调控靶基因的表达.尽管一些失常的miRNA调节机制在人许多恶性肿瘤中被发现,但是,has-miR-125a-5p在肺癌细胞中的表达及功能还尚不清楚.本研究探讨了has-miR-125a-5p在非小细胞肺癌细胞中的表达及其与肺癌细胞侵袭的关系.方法 应用real-time PCR的方法检测了has-miR-125a-5p在6种肺癌细胞系中的表达情况,并在EAS49细胞中分别转染正义的has-miR-125a-5p 2'-O-甲基寡核苷酸24 h、36 h、48 h、60 h和72 h后检测has-miR-125a-5p的表达情况.同时应用transwell小室观察上调has-miR-125a-5p后,A549细胞侵袭能力的变化.结果 has-miR-125a-5p在6种肺癌细胞系中低表达,以LH7、NCI-H460、SPC-A-1和A549细胞最为明显.在A549细胞中,转染正义的has-miR-125a-5p 2'O-甲基寡核苷酸36h后,has-miR-125a-5p表达最高,并进一步发现.上调has-miR-125a-5p后A549和NCI,H460细胞侵袭能力增强.结论 has-miR-125a-5p在肺癌细胞中低表达,但上调has-mig-125a-5p能够促进A549和NCI-H460细胞侵袭.     

MTA2在非小细胞肺癌中的表达及意义

背景与目的 已有研究发现转移相关蛋白2(metastasis-associated protein 2, MTA2)在多种肿瘤细胞系中 表达且与肿瘤侵袭转移密切相关.本研究旨在研究MTA2在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)中的表 达,并探讨MTA2表达与临床病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学(SP)方法检测110例非小细胞肺癌标本及 34例癌旁肺组织中MTA2蛋白表达,并统计分析其表达与NSCLC临床病理特征关系.结果 MTA2在癌旁肺支气管上 皮和肺泡上皮中无表达,在部分NSCLC中呈阳性表达.110例NSCLC标本中MTA2阳性表达率为58.18%(64/110), MTA2阳性表达与NSCLC的分化程度呈负相关,与临床分期、淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与年龄、性别、 NSCLC的病理分型无明显相关性(P>0.05).结论 MTA2蛋白在部分NSCLC中呈阳性表达且与其分化程度、临床分 期、淋巴结转移密切相关,提示肺癌的发生发展可能与MTA2有关,MTA2可能是肺癌新的标志物及治疗靶点.     

hsa-miR-125a-5p通过上调Rock-1表达促进肺癌细胞侵袭

背景与目的 MicroRNAs(miRNAs)是广泛存在于真核生物体中的内源性非编码的小分子RNA,通过与靶mRNA不完全互补连接的方式转录后调控靶基因的表达,影响了生物的许多复杂的生命过程.本研究探讨了hsa-miR-125a-5p促进肺癌细胞侵袭的作用机制.方法 应用microRNA.org靶基因预测资源预测hsa-miR-125a-5p的靶基因及其结合位点,并进一步根据预测结果用RT-PCR和Western blot的方法榆测了Rock-1的mRNA及蛋白的表达情况.用Rock-1抗体阻断的方法,检测转染正义的hsa-miR-125a-5p 2'-O-甲基寡核苷酸后A549细胞侵袭能力的变化.结果 转染正义的hsa-miR-125a-5p 2'-O-甲基寡核苷酸36h后,A549细胞中Rocb-1 mRNA和蛋白表达均增加,在转染反义的hsa-miR-125a-5p 2'-O-甲基寡核苷酸的A549细胞中则减少.Transwell小室的结果显示,与未阻断组相比较,阻断Rock-1后,转染正义的hsa-miR-125a-5p 2'-O-甲基寡核廿酸的A549细胞侵袭能力减弱.结论 hsa-miR-125a-5p能够上调Rock-1的表达,并促进肺癌细胞侵袭.     

Claudin-1蛋白在胃癌组织和细胞中的表达及促进其表达后对癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:研究紧密连接跨膜蛋白(Claudin-1)在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞生物学行为及裸鼠皮下成瘤能力的影响.方法:收集50例胃癌患者的癌组织及其癌旁组织,采用RT-qPCR和免疫组化检测Claudin-1的表达;RT-qPCR和Western Blot检测Claudin-1在人胃癌细胞株MKN45、SGC790...     

整合素连接激酶mRNA在非小细胞肺癌组织中的表达和意义

目的:比较整合素连接激酶(ILK)mRNA在非小细胞肺癌(NSCLC)组织及正常肺组织的表达差异,分析ILKmRNA的表达与NSCLC的恶性表型、侵袭程度、淋巴转移、远处转移、临床分期之间的关系。方法:取NSCLC患者及肺部良性病变手术切除标本,液氮及超低温冰箱保存,TRIzol法提取总RNA,RTPCR扩增ILKmRNA后对扩增产物进行电泳及图像分析。结果:35例肺癌、30例癌旁组织、29例正常肺及10例肺部良性病变组织ILKmRNA定性表达阳性率分别为82.9%(29/35)、76.7%(23/30)、55.2%(16/29)和60%(6/10),癌组织与正常肺组织之间ILKmRNA阳性率比较有显著性差异(P=0.027)。ILKmRNA定量表达为肺癌组1.67±0.349,癌旁组0.86±0.185,正常组0.43±0.102,肺部良性病变组0.78±0.201,除癌旁组织和肺部良性病变组织差别无统计学意义外,其余差异均有显著性(P<0.01)。NSCLC组织ILKmRNA定量表达的均值随细胞恶性程度、淋巴转移和远处转移及临床分期递增而随之递增(P<0.05)。结论:ILKmRNA在NSCLC组织中表达量高于癌旁组织、正常肺及肺部良性病变组织。高表达的ILKmRNA预示着NSCLC的高度恶性、高侵袭性、高转移性和预后不良,ILKmRNA可作为反映NSCLC恶性表型、转移和侵袭特性的分子标记物。     

LRRC3B在非小细胞肺癌中下调并与肺癌细胞增殖和侵袭能力相关

背景与目的已有的研究表明：在许多恶性肿瘤细胞中,LRRC3B表达显著下调,被视为肿瘤抑制蛋白。然而,在非小细胞肺癌中它的表达模式和生物学作用缺乏研究。人类癌症微阵列的研究显示LR-RC3B在乳腺癌和结肠直肠癌表达下调,提示LRRC3B参与致癌作用。本研究的目的是研究LRRC3B在非小细胞肺癌中的必到状态及其与肺癌增殖、侵袭和细胞周期间的相关性,探讨LRRC3B在调控肺癌细胞增殖、侵袭及细胞周期中的作用。方法应用Western blot和Realtime RT-PCR检测LRRC3B在几株肺癌细胞系中的mRNA和蛋白表达水平。应用MTT法检测对转染LRRC3B的A549和H460细胞系细胞增殖能力变化,应用集落形成实验以及细胞侵袭实验研究LRRC3B对细胞增殖和侵袭以及细胞周期进程的作用。肺癌细胞系H3255中转染LR-RC3B siRAN验证LRRC3B对细胞的增殖以及侵袭能力和对细胞周期进程的影响。结果与正常NHBE细胞系相比,NSCLC细胞系中LRRC3B蛋白表达量显著下调,特别是H460、H358、HCC827以及A549。A549和H460细胞系转染LRRC3B后,细胞增殖和侵袭能力受到抑制。LRRC3B抑制细胞周期进程,并下调cyclin D1和MMP9的表达。H3255细胞中敲除LRRC3B,细胞增殖和侵袭能力显著增强,同时与细胞周期及侵袭能力相关的蛋白cyclin D1和MMP9表达略微上调。结论 LRRC3B在肺癌细胞系中表达下调,而上调LRRC3B则能够抑制肺癌细胞增殖和侵袭能力,并抑制细胞周期进程,可能是未来肺癌治疗的一个新靶点。     

miR-424对非小细胞肺癌A549细胞生长和侵袭的影响及分子机制

背景与目的已有的研究表明miR-424可抑制肾癌细胞增殖,抑制宫颈鳞癌细胞的迁移和侵袭能力,而其对非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）细胞的影响目前尚无系统研究。本研究探讨miR-424对NSCLC A549细胞生长和侵袭迁移能力的影响并进一步研讨其分子机制。方法应用CCK8检测过表达及抑制miR-424的表达对A549细胞增殖的影响。应用Transwell检测过表达及抑制miR-424的表达对A549细胞侵袭能力的影响。应用Western blot检测过表达及抑制miR-424的表达对A549细胞中MMP9和MMP2蛋白水平的影响。构建E2F63’UTR区的荧光素酶报告载体,验证miR-424对E2F6的靶向作用。采用Western blot检测过表达及抑制miR-424的表达后,A549细胞中E2F6的表达。结果过表达miR-424后,A549的生长和侵袭能力显著降低。过表达miR-424后,A549细胞的MMP-2和MMP-9表达下降。荧光素酶活性检测表明miR-424能够抑制E2F6的荧光素酶活性。过表达miR-424后,细胞内E2F6的表达降低。结论 miR-424能够通过调控E2F6而抑制A549的生长和侵袭能力。     

整合素连接激酶在肿瘤发生及进展中的作用

整合素和生长因子受体参与介导细胞与细胞外基质(extracellular matri,ECM)之间的相互作用以及细胞内外的信号传递从而与细胞的分化、增殖、凋亡、迁移以及肿瘤的发生、侵袭和转移等过程有着密切的联系。整合素连接激酶(integron-linked kinase,ILK)作为一种重要的接头蛋白和信     

Nectin 4在肺癌组织中的表达及干扰nectin 4 对肺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响

摘 要：［目的］ 研究nectin 4在肺癌组织中的表达及其在肺癌细胞增殖、迁移侵袭过程中的作用。［方法］ 免疫组化法检测20例肺癌组织及其对应癌旁组织中nectin 4的表达情况;QPCR及Western Blot分别检测不同肺癌细胞株及正常肺上皮细胞中nectin 4 mRNA和蛋白的表达情况;设计nectin 4干扰 RNA序列,转染肺癌细胞后,MTT法检测细胞的增殖能力。划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测细胞的迁移能力和侵袭能力。［结果］ 免疫组化结果显示nectin 4在癌旁组织中不表达,而40%的肺癌组织中表达阳性（8/20）,且nectin 4 的表达与肺癌患者淋巴结转移明显相关（r=0.612,P=0.004）。QPCR及Western Blot结果显示,正常肺上皮细胞BEAS-2B中nectin 4表达较低,而在A549和PC-9肺癌细胞株中nectin 4表达明显较高。 设计的其中一条nectin 4 siRNA可以降低肺癌A549和PC-9细胞nectin 4蛋白表达70%以上,且nectin 4基因干扰后,肺癌细胞的增殖能力减弱,迁移和侵袭能力也受到明显抑制。［结论］ Nectin 4表达水平与肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭密切相关,可以作为肺癌转移治疗的重要靶点。     

下调RAB3C减低上皮间质转化抑制非小细胞肺癌细胞的侵袭和转移

目的:探讨RAB3C表达对非小细胞肺癌细胞A549及NCI-H1299细胞侵袭转移的影响及其机制。方法:构建siR-RAB3C慢病毒载体转染A549及NCI-H1299细胞,使用qRT-PCR及Western blotting法验证每种细胞中RAB3C的mRNA及蛋白表达情况。应用Transwell实验及细胞划痕试验检测下调RAB3C后细胞侵袭情况的变化。Western blotting法比较对照组及siR-RAB3C组细胞中E-cadherin、N-cadherin及Vimentin的表达水平。结果:siR-RAB3C转染组细胞RAB3C的mRNA及蛋白表达量均下调。划痕试验结果显示,与对照组细胞相比,siR-RAB3C组细胞迁移率显著减少。Western blotting实验结果显示,下调RAB3C表达促进E-cadherin,抑制N-cadherin及Vimentin蛋白的表达。结论:调控RAB3C表达通过抑制上皮间质转化抑制非小细胞肺癌A549及H1299细胞侵袭转移。     

DDX17基因表达下调对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的：探讨 DDX17基因在非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的中的作用。方法：采用慢病毒介导的 shRNA,下调非小细胞肺癌 A549细胞中 DDX17的表达,实时荧光定量 PCR 和 Western blot 验证下调效果。CCK －8和平板克隆实验检测细胞增殖能力;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell 实验检测细胞侵袭能力变化。结果：DDX17－shRNA 可有效下调非小细胞肺癌 A549细胞中 DDX17蛋白和 mRNA 的表达。DDX17表达下调后,A549细胞的增殖受到抑制,24、48、72小时细胞增殖能力较对照组分别降低23％、42％和59％。细胞克隆形成数目较对照组明显减少,两组细胞克隆数目分别为75±9和30±6。细胞迁移速率较对照组降低,两组迁移率分别为（49．4±7．4）％和（17．8±3．7）％。细胞侵袭数目较对照组明显减少,两组细胞24小时侵袭数目分别为89．7±13．2和30．0±5．7。结论：DDX17表达下调可显著抑制非小细胞肺癌 A549的增殖、迁移和侵袭。     

非小细胞肺癌中上皮钙粘附素的表达及其意义

目的研究上皮钙粘附素(epithelialcadherin,E-cad)在非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)中的表达,探讨E-cad与NSCLC的组织类型、病理分级、TNM分期及淋巴结转移的关系。方法应用免疫组织化学SABC法检测65例原发性NSCLC,20例癌旁组织中E-cad蛋白的表达水平。结果20例正常肺组织均阳性表达,且均匀分布于膜表面。NSCLC中E-cad表达不均匀,阳性率为32.3%,与正常组比较差异有显著性(P<0.05)。但与组织类型无关(P>0.05),与病理分级、TNM分期及淋巴结转移显著相关(P<0.05)。结论E-cad与NSCLC的发生发展呈显著负相关,低表达者预示预后不良。     

EMT参与人非小细胞肺癌A549细胞多西紫杉醇耐药性的发生

目的:建立耐多西紫杉醇的人非小细胞肺癌细胞株A549/Docetaxel,并初步探索其与上皮间质转化（EMT）的关系。方法:用抗肿瘤药物多西紫杉醇体外以浓度递增和短时反复作用的方法诱导和筛选人非小细胞肺癌A549细胞耐多西紫杉醇的细胞株;用MTT的方法检测细胞耐药指数及生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR和Western blot 检测EMT相关蛋白fibronectin、vimentin和E-cadherin的表达。结果:A549/Docetaxel对多西紫杉醇和紫杉醇的耐药指数分别为8.91和2.82;耐药细胞生长缓慢,倍增时间延长,S期细胞增多,G2期减少。549/Docetaxel与亲本A549细胞相比,上皮细胞标志分子E-cadherin的表达减少,而间质细胞标志分子fibronectin和vimentin的表达增加。结论:成功建立了一株耐多西紫杉醇的细胞株A549/Docetaxel,耐药的发生可能与EMT相关。     

miR-218-1-3p对非小细胞肺癌细胞侵袭和迁移影响

目的 非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)因其侵袭性而导致预后不良,miR-218可对多种肿瘤的进展起到抑制作用.本研究探讨miR-218-1-3p对NSCLC A549细胞侵袭和迁移影响.方法 使用LipofectamineTM 2000 Reagent将miR-218-1-3p mimic转染入NSCLC A549细胞中,实时定量聚合酶链反应(real-time PCR,RT-qPCR)检测各组细胞中miR-218-1-3p的表达,Transwell小室法测定其侵袭及迁移能力,荧光定量PCR检测细胞迁移侵袭相关指标基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)、MMP-7、MMP-9、Rho A、Rho B和Rho C的变化.结果 同对照组相比,上调mir-218-1-3p明显抑制了A549细胞的侵袭(t=4.028,P=0.016)和迁移(t=8.911,P=0.001),其侵袭和迁移的抑制率分别为37.8%和53.6%.MMP-7降低至对照组的(0.68±0.19)倍,t=2.931,P=0.043;MMP-9降低至对照组的(0.58±0.15)倍,t=4.875,P=0.080.结论 miR-218-1-3p能够抑制NSCLC A549细胞的侵袭和迁移.     

linc00675在肺癌组织和细胞中的表达及其抑制肺癌细胞迁移和侵袭的机制

目的:探讨linc00675在肺癌组织和细胞中的表达以及其对肺癌细胞迁移、侵袭的影响。方法:采用qRT-PCR检测linc00675在35例肺癌组织和癌旁组织及肺癌细胞株SPCA1、A549、NCI-H446和人肺正常上皮细胞BEAS-2B中的表达。利用细胞转染实验对肺癌细胞SPCA1进行LV-linc00675和siRNA-linc00675及相关阴性对照的转染,采用qRT-PCR检测linc00675的表达水平。采用Transwell实验检测过表达及干扰linc00675表达对SPCA1细胞迁移和侵袭能力的影响。通过Western blot实验检测细胞上皮标志蛋白 E-钙黏蛋白（E-cadherin）、间质标志蛋白 N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）的表达水平。结果:linc00675在肺癌组织中的表达显著低于癌旁组织,在肺癌细胞株中的表达显著低于人肺正常上皮细胞。转染LV-linc00675可显著增加linc00675在肺癌细胞中的表达,转染siRNA-linc00675可显著降低linc00675在肺癌细胞中的表达。Transwell实验结果显示,过表达linc00675可显著抑制肺癌细胞的迁移和侵袭能力,干扰linc00675表达可显著增强肺癌细胞的迁移和侵袭能力。Western blot实验结果显示,过表达linc00675可显著抑制SPCA1细胞上皮间质转化（EMT）的发生,干扰linc00675表达后SPCA1细胞发生了明显的EMT。结论:linc00675在肺癌细胞中发挥抑癌作用,linc00675可能通过抑制肺癌细胞EMT的发生从而减弱其迁移和侵袭能力,提示linc00675可能成为肺癌治疗的新靶点。     

骨桥蛋白不同剪接变体对肺癌细胞生长、侵袭及转移的影响

目的：研究骨桥蛋白（OPN）不同剪接变体在三株人肺癌细胞系A549、NCI-H209和95-D中的表达情况及其对肺癌细胞增殖、侵袭转移的影响.方法：RT-PCR和Western blot方法检测OPN不同剪接变体在三株肺癌细胞系中的mRNA和蛋白水平.构建不同OPN剪接变体的瞬时转染细胞.软琼脂克隆形成实验、细胞侵袭及划痕实验观察不同OPN剪接变体转染的A549细胞体外增殖、侵袭以及转移能力.结果：在三株肺癌细胞系中,OPN有3种剪接变体形式表达,A549和NCI-H209细胞中OPN-a和OPN-b的mRNA水平高于OPN-c,OPN-c的mRNA水平在95-D细胞中最高.Western blot也进一步发现三种剪接变体在三株肺癌细胞系中表达,三种剪接变体的蛋白表达水平与mRNA水平不一致,主要以OPN-a形式高表达.瞬转三种剪接变体至A549细胞,发现瞬转OPN-a和OPN-b可以更有效的促进A549细胞的增殖,而OPN-b和OPN-c对侵袭能力促进更明显,但是OPN-c更有效促进细胞迁移.结论：不同OPN剪接变体形式在肺癌细胞中的表达水平不同,其对肿瘤的生物学行为影响也不同.鉴定特异的OPN剪接变体可更有效的为评价肿瘤生长及转移提供参考指标.     

吉西他滨与放疗联合治疗非小细胞肺癌

吉西他滨是一种嘧啶核苷类似物,具有抗瘤谱广、毒副反应轻等特点,被广泛地应用于非小细胞肺癌、乳腺癌、膀胱癌、胰腺癌等各种实体瘤治疗领域中。本文综述吉西他滨联合放疗治疗局部晚期非小细胞肺癌的研究进展。     

新型雌激素受体 GPR30在非小细胞肺癌中的表达

目的：研究 GPR30与 ERα、ERβ、HER2、HER3在非小细胞肺癌中的表达及相关性,并分析 GPR30和ERβ与临床病理特征之间的关系。方法：采用免疫组织化学方法检测60例术后非小细胞肺癌组织样本中GPR30、ERα、ERβ、HER2、HER3的表达。结果：GPR30表达在有淋巴结转移、腺癌、低分化、III 期肿瘤中明显高于无淋巴结转移、鳞癌、中高分化、I - II 期肿瘤,差异有统计学意义（P <0.05）。ERβ表达在腺癌中显著高于鳞癌（P <0.05）。GPR30表达与 ERβ和 HER3呈中度正相关（r =0.607,P =0.000;r =0.510,P =0.000）。结论：GPR30与 ERβ或 HER2- HER3的信号途径可能存在相关性,共同参与非小细胞肺癌的发生发展。