ROR1对人肺癌A549细胞上皮-间质转化的影响

目的 探讨受体酪氨酸激酶样孤儿受体-1（receptor tyrosine kinase-like orphan receptor,ROR1）诱导人肺癌A549细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）的作用及可能机制。方法 构建ROR1慢病毒表达载体,感染A549细胞筛选稳定过表达ROR1的A549细胞,采用划痕实验、Transwell实验检测A549细胞的侵袭和迁移能力; real-time PCR、Western blot分别检测ROR1、EMT相关标志物的表达。结果 过表达ROR1能够促进A549细胞向间质样细胞表型转化,Western blot结果显示Vimentin、N-cadherin表达上调, E-cadherin表达下调;划痕实验、Transwell结果显示细胞侵袭迁移能力显著增强（P=0.0023）;Western blot结果显示过表达ROR1能够上调EMT转录因子Snail的表达,干扰Snail能够逆转ROR1诱导的EMT,即下调Vimentin、N-cadherin表达,上调E-cadherin表达;划痕实验、Transwell结果显示干扰Snail显著降低细胞侵袭迁移能力（P=0.013）;进一步研究发现ROR1通过激活AKT信号而促进Snail的表达。结论 ROR1能够促进人肺癌A549细胞EMT转化,其机制可能与ROR1调控AKT/Snail信号有关。     

LINC01060对人胃癌BGC-823细胞系生物学行为的作用研究

目的:探索LINC01060对人胃癌BGC-823细胞系生物学行为的作用。方法:生信数据分析LINC01060在胃癌中的表达情况,建立LINC01060过表达和沉默的稳转BGC-823细胞株,Real time PCR验证LINC01060的表达,CCK-8检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,Western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、N-cadherin和Snail蛋白的表达。结果:GEO数据库发现,LINC01060在胃癌中低表达（P＜0.05）;Real time PCR结果显示,沉默组LINC01060的表达显著下调（P＜0.05）,过表达组LINC01060的表达显著上调（P＜0.05）;CCK-8显示,过表达组细胞增殖能力显著下降（P＜0.05）;流式细胞术显示,过表达组细胞凋亡比例显著上升（P＜0.05）;Transwell结果显示,过表达组细胞侵袭能力显著下降（P＜0.05）;细胞划痕显示,过表达组细胞迁移能力显著下降（P＜0.05）;Western blot显示,过表达组E-cadherin蛋白表达水平显著上调（P＜0.05）,Vimentin、N-cadherin、Snail蛋白表达水平显著下调（P＜0.05）;以上实验沉默组均相反。结论:LINC01060在人胃癌BGC-823细胞中发挥促进凋亡,抑制增殖、侵袭、迁移和EMT的作用。     

光甘草定对肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制

目的：探讨光甘草定对肺腺癌细胞A549 恶性生物学行的影响及其分子机制。方法：常规方法培养A549 细胞和人正常肺上皮细胞BEAS-2B,用不同浓度的光甘草定和或顺铂对其进行处理,通过结晶紫染色、CCK-8 法检测光甘草定、顺铂对A549、BEAS-2B细胞增殖活力的影响,Transwell 小室实验、细胞划痕实验检测光甘草定对A549 细胞侵袭、迁移能力的影响,流式细胞术检测光甘草定对A549 细胞凋亡的影响,3D超低黏附板培养法培养A549 细胞后采用CCK-8法检测光甘草定对A549 细胞增殖的影响,WB法检测光甘草定对A549 细胞中上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达的影响;构建A549 细胞移植瘤模型后检测光甘草定、顺铂对移植瘤的生长以及移植瘤组织中EMT相关蛋白表达的影响。结果：光甘草定、顺铂呈剂量依赖性地显著抑制A549 细胞的增殖（P<0.05 或P<0.01）、细胞迁移（P<0.05 或P<0.01）和侵袭能力（P<0.05 或P<0.01）,光甘草定能诱导A549 细胞凋亡（P<0.01）,抑制A549 细胞中N-cadherin、snail 和vimentin 蛋白的表达,促进E-cadherin 蛋白表达;光甘草定、顺铂均能抑制A549移植瘤的生长,抑制移植瘤组织中Ki67、N-cadherin、snail 和vimentin 蛋白的表达、促进E-cadherin 蛋白的表达。结论：光甘草定可通过抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导A549细胞凋亡,其机制可能与其抑制细胞的EMT进程而产生抑癌作用有关。     

沉默泛素结合酶E2O对人非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响

  目的  研究泛素结合酶E2O（ubiquitin-conjugating enzyme E2O,UBE2O）蛋白在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）细胞增殖、细胞周期、迁移、侵袭中的作用。  方法  通过慢病毒介导的shRNA靶向抑制人NSCLC细胞株A549中UBE2O基因的表达,应用CCK-8法、流式细胞术分别检测UBE2O对A549细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响,应用Transwell实验检测下调UBE2O表达后对A549细胞迁移、侵袭能力的影响,应用Western blot检测细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）两种标志分子E-cadherin蛋白、N-cadherin蛋白和PI3K-Akt信号通路相关蛋白表达量的变化。  结果  下调UBE2O表达后,A549细胞UBE2O mRNA和蛋白表达均下调（均P < 0.01）,CCK-8实验结果显示沉默UBE2O可以抑制A549的增殖（P < 0.001）,Transwell实验显示下调UBE2O的表达能够抑制A549细胞的迁移、侵袭（均P < 0.001）。Western blot结果表明下调UBE2O的表达可使A549细胞中的E-cadherin蛋白表达水平升高、p-Akt蛋白表达水平下降。  结论  UBE2O蛋白能够促进NSCLC细胞侵袭和迁移,作用机制可能是通过诱导肺癌细胞发生EMT和促进pI3K-Akt信号通路的激活。      

IL-17A通过PI3K/Akt通路促进肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:研究IL-17A对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法:使用不同浓度的IL-17A（0、1、10、100 ng/mL）分别作用于A549细胞。CCK-8检测IL-17A对A549细胞增殖的影响;划痕修复实验和Transwell细胞侵袭实验检测IL-17A对A549细胞迁移和侵袭的影响;Western blot检测IL-17A对PI3K/Akt信号通路和凋亡通路蛋白表达的影响;流式细胞术检测IL-17A对A549细胞凋亡的影响;IL-17A和PI3K抑制剂LY294002共同作用于A549细胞,划痕修复实验观察对A549细胞迁移的影响。结果:IL-17A可以促进A549细胞的增殖,其对A549细胞增殖的促进作用随着IL-17A浓度的增加而增加。IL-17A能够促进PI3K和Akt磷酸化蛋白表达、抑制凋亡蛋白caspase3的表达,并抑制A549细胞的凋亡。LY294002可以明显减弱IL-17A对A549细胞迁移的促进作用。结论:IL-17A通过PI3K/Akt通路抑制A549细胞的凋亡,从而促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

熊果酸联合顺铂对卵巢癌干细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:观察熊果酸（ursolic acid,UA）联合顺铂(DDP)对卵巢癌干细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移能力的影响及其作用机制。方法:通过体外无血清悬浮培养人卵巢癌SKOV3干细胞并进行细胞鉴定。实验分为SKOV3干细胞组、熊果酸组、熊果酸联合顺铂组。MTT法检测干细胞的增殖,Transwell实验检测干细胞侵袭与迁移能力,采用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测干细胞凋亡。Real-time PCR检测上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关标记分子Vimentin、N-cadherin、E-cadherin、Fibronectin、Twist的mRNA表达情况,Western-blot检测E-cadherin、Vimentin、Twist蛋白表达情况。结果:熊果酸对SKOV3干细胞增殖有显著抑制作用,呈剂量依赖性（P＜0.05）;流式细胞术显示熊果酸组、熊果酸联合顺铂组均可提高SKOV3干细胞的凋亡率,与SKOV3干细胞组相比有统计学差异（P＜0.05）;熊果酸组、熊果酸联合顺铂组可有效抑制SKOV3干细胞的侵袭和迁移能力（P＜0.05）;Real-time PCR测定熊果酸组、熊果酸联合顺铂组作用SKOV3干细胞后EMT基因表达水平,结果显示Fibronectin、Twist、Vimentin、N-cadherin表达降低,E-cadherin表达升高（P＜0.05）;Western-blot结果显示熊果酸组、熊果酸联合顺铂组可上调E-cadherin蛋白的表达,下调Vimentin、Twist蛋白的表达;与熊果酸组相比,熊果酸联合顺铂组对干细胞凋亡率更高,迁移和侵袭能力更低,E-cadherin表达更高,Vimentin和Twist表达更低,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论:熊果酸对卵巢癌干细胞有抑制增殖、侵袭和迁移,诱导凋亡的作用,联合顺铂作用效果更优,其机制可能与逆转EMT有关。     

柠檬酸合成酶对卵巢癌SKOV3细胞上皮间质转化的影响

目的:探讨柠檬酸合成酶（citrate synthase,CS）对上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）细胞SKOV3上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT）及生物学行为的影响。方法:利用Lipofectamine 2000体外瞬时转染化学法合成的CS siRNA,通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和Western blot检测转染效率;Transwell实验检测转染前后SKOV3细胞侵袭和迁移能力的变化;Western blot检测转染前后上皮标记分子E-cadherin、间质标记分子Vimentin蛋白水平和Wnt通路关键分子β-catenin蛋白水平,实时荧光定量PCR检测转染前后EMT相关转录因子Slug、Snail和Twist的mRNA水平。结果:siRNA干扰序列显著降低SKOV3细胞中CS表达;CS低表达显著抑制SKOV3细胞的侵袭和迁移能力,促进上皮标记分子E-cadherin表达,抑制间质标记分子Vimentin表达,降低Wnt通路关键分子β-catenin表达;EMT相关转录因子Snail和Twist表达显著降低(P＜0.001,P＜0.01),Slug表达下降不显著(P＞0.05)。结论:CS低表达显著抑制卵巢癌SKOV3细胞EMT,其机制可能是通过降低Snail和Twist转录因子实现的,为卵巢癌的转移治疗提供初步的实验及理论基础。     

RBM8A基因对子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、迁移和凋亡的作用及其机制

目的探讨沉默RBM8A基因表达对子宫内膜癌HEC-1A细胞生物学行为的影响及其可能机制。方法设计RBM8A基因靶向的发夹状shRNA,筛选出最佳shRNA沉默片段,构建携带有目的基因的重组慢病毒干扰载体并感染HEC-1A细胞,通过嘌呤霉素筛选出稳定敲低RBM8A基因的细胞作为实验组(shRBM8A),同时设计无意义序列的shRNA作为对照组(shControl)。CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞计数法检测细胞凋亡,Western blot法分析凋亡相关蛋白、上皮间质转化(EMT)信号转导通路相关蛋白的表达。结果与shControl组比较,敲低RBM8A后HEC-1A细胞增殖减慢,凋亡率增加,且迁移与侵袭能力受到明显抑制(P<0.05),凋亡相关蛋白cleaved-caspase 9和cleaved-caspase 3表达增加,EMT相关蛋白E-cadherin表达升高,Vimentin表达降低。结论沉默RBM8A基因可抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡,抑制EMT信号转导通路可能是其作用机制。     

华蟾素注射液对 人食管癌细胞增殖、侵袭和化疗敏感性 的影响及其机制

目的：研究华蟾素注射液对食管癌细胞增殖、侵袭及化疗敏感性的调控作用,并初步探讨其作用机制。方法：应用四甲基噻唑蓝（MTT）法检测华蟾素注射液对人食管癌ECA109细胞增殖及化疗敏感性的影响;流式细胞术检测华蟾素注射液联合化疗药物（顺铂或表柔比星）对ECA109细胞凋亡水平的影响;Transwell小室实验检测华蟾素注射液对ECA109细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blot技术检测华蟾素注射液对ECA109细胞中与侵袭、上皮-间质转化（EMT）及细胞耐药相关蛋白（Snail、Twist、MMP2、Vimentin、P-gp及E-cadherin）表达水平的影响。结果：与空白对照组比较,华蟾素注射液可显著抑制食管癌ECA109细胞的增殖能力,且呈时间和剂量效应关系（时间效应,r=0.985,P=0.000;剂量效应,r=0.988,P=0.000）,并可明显促进该细胞的化疗敏感性（P=0.000）;华蟾素注射液可明显抑制ECA109细胞侵袭和迁移能力（P均=0.000）;华蟾素注射液可明显抑制Snail、Twist、MMP2、Vimentin及P-gp蛋白的表达水平,同时促进细胞表达E-cadherin蛋白。结论：华蟾素注射液能有效抑制人食管癌ECA109细胞的增殖及侵袭活性,并可有效增强该细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能与该药抑制肿瘤细胞EMT过程有关。     

miR-194-5p调控LMNB1抑制肺腺癌细胞的生长转移

目的:探究miR-194-5p调控LMNB1对肺腺癌细胞生长转移的作用。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）实验检测肺腺癌组织和癌旁组织中miR-194-5p、LMNB1表达水平。体外培养肺腺癌细胞A549,分为对照组、miR-194-5p mimics阴性对照组、miR-194-5p mimics组。转染处理后,CCK-8实验检测各组A549细胞增殖情况,比较各组细胞活力;流式细胞实验检测各组A549细胞凋亡率;细胞划痕及Transwell小室侵袭实验分别检测各组A549细胞迁移、侵袭力,比较各组细胞迁移、侵袭数;免疫印迹实验检测各组A549细胞凋亡蛋白caspase-3、Bax和上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白E-cadherin、Vimentin表达;qRT-PCR实验及免疫印迹实验分别检测各组A549细胞miR-194-5p、LMNB1 mRNA表达及LMNB1蛋白表达。结果:相比癌旁组织,肺腺癌组织中miR-194-5p表达水平明显降低（P＜0.05）,LMNB1表达水平明显升高（P＜0.05）。相比对照组,miR-194-5p mimics组A549细胞活力、细胞迁移数、细胞侵袭数、LMNB1 mRNA表达水平、Vimentin和LMNB1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率、miR-194-5p表达、caspase-3、Bax和E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。miR-194-5p mimics阴性对照组A549细胞上述各指标与对照组相比差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:miR-194-5p可下调LMNB1表达,抑制肺腺癌细胞增殖,促进其凋亡,并降低其迁移及侵袭能力。     

整合素连接激酶在非小细胞肺癌中过度表达及促进肺癌细胞的侵袭和迁移

目的:探讨整合素连接激酶（ILK）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及在侵袭和迁移中的作用和相关分子机制。方法:免疫组化法检测ILK蛋白在NSCLC患者中的表达,细胞转染、siRNA干扰、细胞划痕试验、实时定量PCR、Western blot方法探讨ILK在肺癌A549细胞中的表达及分子机制。结果:ILK蛋白在原发性NSCLC组织中过度表达30.6％（33/108）并且和TNM分期（P=0.001）、淋巴结转移（P=0.033）相关。ILK在A549细胞中过度表达并且通过下调E-cadherin,上调波形蛋白、纤维连接蛋白、Snail、Slug导致上皮-间质转化（EMT）。此外,NF-κB抑制剂BAY 11-7028和小干扰靶RNA（siRNA）NF-p65可诱导E-cadherin的表达下调。结论:ILK在原发性NSCLC组织中高表达并与TNM分期和淋巴结转移相关,其促进肺癌细胞的侵袭和迁徙机制可能是经NF-κB信号通路诱导EMT所致。     

T-cadherin在胃癌中的表达及其与VEGF、MVD之间的关系

目的:探讨T-cadherin在胃癌组织中表达及其与VEGF、MVD之间的关系。方法:采用免疫组化SP法对80例胃癌组织及癌旁正常胃组织的T-cadherin、血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和CD34的表达情况进行检测。结果:T-cadherin主要在胃癌细胞膜上表达,阳性率为45.0%(36/80),而癌旁正常胃组织中T-cadherin阳性率为62.5%(50/80),两者比较差异有统计学意义(P=0.026)。VEGF在癌旁正常细胞阳性率为28.75%,在胃癌中表达阳性率为71.25%,差异有统计学意义(P=0.000)。CD34阳性细胞着色部位主要是血管内皮细胞的胞膜和胞浆,胃癌中标记的微血管明显多于正常组织(54.96±7.28/HPFvs27.50±6.10/HPF,P<0.001)。T-cadherin和VEGF蛋白表达呈负相关(P=0.001);T-cadherin阳性组的MVD值明显低于阴性低表达组(P<0.001).T-cadherin、VEGF、CD343种蛋白在胃癌中的阳性表达与患者性别和年龄、肿瘤大小均无关(P>0.05),但与组织分化程度、淋巴结转移及pTNM分期显著相关(P<0.05)。结论:T-cadherin的异常表达可以作为临床评价胃癌诊断、指导治疗及判断预后的辅助指标之一。     

缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7生物学行为的影响

目的:研究缺氧对人乳腺癌细胞系MCF-7的生物学行为,增殖、侵袭能力的影响。通过影响缺氧诱导因子1α(hypoxic-induciblefactor1α,HIF-1α)的表达,检验其在这一过程中的作用,并进一步探讨作用机制。方法:慢病毒感染细胞,干扰乳腺癌细胞系MCF-7中HIF-1α的表达,得到HIF-1α表达正常的乳腺癌细胞系MCF-7-NC和HIF-1α表达受干扰的细胞系MCF-7-HIF△。分别低氧培养及化学药物诱导缺氧,用MTT法检测2组细胞系在缺氧和正常培养条件下的增殖能力,ANOVA检验检测其增殖能力的区别。Transwell实验检验缺氧和正常培养条件下人乳腺癌细胞的侵袭能力,计数通过Transwell小室的细胞,ANOVA检验检测细胞侵袭能力的区别。共聚焦免疫荧光法检测缺氧后2组乳腺癌细胞的上皮和间质标记物的表达,检验细胞系是否发生了上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。结果:MTT实验结果:正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的增殖能力在缺氧后与正常培养条件下相比明显减弱,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△的增殖能力在缺氧和正常培养条件下相比无显著区别。Transwell实验检测细胞的侵袭能力,缺氧后正常表达HIF-1α的MCF-7-NC的侵袭能力较正常培养的细胞明显增强,其差别具有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△侵袭能力在缺氧和正常培养下无显著区别。缺氧后,正常表达HIF-1α的细胞系MCF-7-NC发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)。共聚焦荧光染色显示:在诱导缺氧后,正常表达HIF-1α的MCF-7-NC细胞极性发生变化,呈长梭形改变,上皮标志物人广谱角蛋白(pan-cytokeratin,P-CK)表达下调,间质标志物人α平滑肌动蛋白(α-SMA)表达上调;而HIF-1α表达受干扰的MCF-7-HIF△无明显EMT变化。结论:在体外条件下,缺氧可以引起乳腺癌细胞系MCF-7增殖能力减弱、侵袭能力增强,可以诱导乳腺癌细胞MCF-7发生EMT,干扰缺氧诱导因子亚基HIF-1α的表达,则缺氧对乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响消失。     

微小RNA-148a抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移的作用机制

目的:研究微小RNA-148a(miR-148a)在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达,探讨上调miR-148a的表达对其迁移的影响及机制.方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞株MDA-MB-231中miR-148a的表达水平.应用脂质体法将miR-148a mimic及阴性对照分别转染MDA-MB-231细胞,qRT-PCR检测转染效率;细胞划痕实验检测转染前后MDA-MB-231细胞迁移能力的变化;Western blot方法检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白Slug、Snail和E-cadher-in表达水平的变化.结果:与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-231细胞中miR-148a的表达水平明显降低(P<0.05);与阴性对照组相比,miR-148a转染组中miR-148a的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-148a后,MDA-MB-231细胞迁移能力明显下降,Slug和Snail蛋白表达明显降低,E-cadherin蛋白表达明显增加.结论:miR-148a可通过调控Slug、Snail及E-cadherin蛋白的表达抑制EMT,进而抑制乳腺癌细胞的迁移能力.     

骨肉瘤组织HIF-1α和CXCR4表达及其临床意义的研究

目的:研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和趋化因子受体4(CXCR4)蛋白在骨肉瘤组织中的表达情况,探讨它们与骨肉瘤临床病理因素的关系。方法:采用免疫组化SP法检测52例骨肉瘤及18例骨软骨瘤标本中HIF-1α和CXCR4的表达情况,对骨肉瘤组织中HIF-1α和CXCR4蛋白表达之间及其与临床病理参数的关系进行统计学分析。结果:HIF-1α和CXCR4在骨肉瘤中的阳性表达率分别为88.46%和82.69%,与骨软骨瘤组织中两者阳性表达率相比(11.11%和16.67%),差异有统计学意义(P<0.05)。HIF-1α和CXCR4表达水平与骨肉瘤的转移和临床分期密切相关(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤体积及肿瘤分化程度无明显关系(P>0.05)。HIF-1α阳性表达组的CXCR4表达率(86.96%)显著高于阴性表达组(50%,P<0.05),且HIF-1α表达水平和CXCR4呈正相关(r=0.468,P<0.05);同时转移组病例的HIF-1α和CXCR4表达水平均高于无转移组病例(P<0.05)。结论:HIF-1α、CXCR4高表达可能在骨肉瘤的恶性进展中发挥重要作用,并与骨肉瘤肺转移密切相关。联合检测HIF-1α和CXCR4蛋白的表达对于评估骨肉瘤的生物学行为,提高预后判断的准确性以及临床靶向性治疗有重要的指导意义。     

Lrig1蛋白在人结肠癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(Lrig1)在人结肠癌组织中的表达情况及临床意义。方法:收集陕西省肿瘤医院2009年1月到2012年12月手术外科常规切除的结肠癌标本64例,正常结肠组织36例。采用免疫组织化学方法检测结肠癌组织和正常结肠组织中Lrig1蛋白的表达情况,并分析其临床意义。结果:Lrig1在结肠癌组织中的阳性表达率及表达强度均低于正常结肠组织(34.38%vs94.44%),差异具有统计学意义(P<0.05)。Lrig1在中、低分化的结肠腺癌组织中的表达显著低于高分化组织中的表达(P<0.05),TMN分期I+II期和III+IV期中,Lrig1表达的阳性率分别为68.18%和16.67%,差异具有统计学意义(P<0.05)。在有、无淋巴结转移的结肠癌组织中,Lrig1表达的阳性率分别为13.04%和46.34%(P<0.05)。Lrig1在肿瘤浸润全层及浆膜层中的表达明显低于浸润黏膜及肌层(P<0.05)。Lrig1的表达与患者年龄、性别及肿瘤大小无关。结论:Lrig1在结肠癌组织中的表达下调,与肿瘤的分化程度、TNM分期、淋巴结转移及浸润程度相关,可能作为抑癌基因参与结肠癌的发生发展。     

FHIT对急性髓系白血病细胞HL60影响的研究

目的:进行外源FHIT基因转染人白血病细胞缺乏FHIT表达的HL60,研究FHIT基因对转染细胞生长的生物学影响。方法:构建pEGFP-FHIT真核表达质粒（实验组）与质粒pEGFP-N1（对照组）。分别电穿孔法转染HL60细胞。应用荧光显微镜、RT-PCR、Western blot检测转染基因的转录和表达情况。四甲基偶氮唑盐（MTT）法、流式细胞术研究转染基因对HL60细胞体外增殖、凋亡情况的影响,并与转染对照质粒的细胞株进行比较。结果:经PCR、酶切和DNA测序证实pEGFP-FHIT真核载体构建成功。荧光显微镜下实验组HL60细胞可见绿色荧光,转染率为40%。RT-PCR和Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测到FHIT的表达。MTT检测结果显示:转染后实验组抑制率明显升高,细胞增殖受到抑制（P＜0.05）。流式细胞术结果显示:实验组细胞凋亡率明显增加（P＜0.05)。结论:转染FHIT基因对白血病细胞HL60的生长有抑制作用,并能诱导其凋亡。     

Snail在TGF-β1诱导胃癌细胞MGC-803上皮间质转化中的作用

目的 探讨Snail在TGF-β1诱导人胃癌细胞MGC-803上皮细胞向间质细胞转化过程中的表达及其作用。方法 TGF-β1处理人胃癌细胞MGC-803不同时间(0 h,3 h,6 h,24 h,48 h,72 h),倒置显微镜观察细胞形态的变化,Western blot方法检测Snail蛋白及E-cadherin,Vimentin蛋白的表达情况,Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化。结果 (1)随着TGF-β1作用时间的延长,MGC-803细胞形态发生变化,伪足不同程度的增多;(2)在外源性TGF-β1作用下,胃癌细胞MGC-803均不同程度地表达Snail和E-cadherin,Snail从0 h到6 h表达量增强,到6 h时达到最高。E-cadherin蛋白从0 h到6 h表达逐渐增高,6 h时最高,后续变化不明显。Vimentin蛋白6 h表达量最低,此后逐渐升高,72 h时表达量最高;(3)Transwell小室实验显示6 h时,细胞开始穿过ECM膜,随着时间的延长,穿过的细胞逐渐增多,72 h最多。结论 在TGF-β1诱导人胃癌细胞MGC-803细胞EMT的过程中,Snail蛋白起到重要作用,启动Vimentin转录表达。     

胰岛素样生长因子Ⅱ mRNA结合蛋白3在肺腺癌中的表达及临床意义

目的:研究胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3(IMP3)在肺腺癌患者中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学方法检测92例肺腺癌患者的标本及30例癌旁正常标本中IMP3的表达,并分析与患者的年龄、性别、病理分级、TNM分期、远处转移、肿瘤的大小及与预后的关系。结果:IMP3在肺腺癌组中的阳性表达率为56.5%,明显高于对照组(均为阴性),差异具有统计学意义(P<0.001);IMP3在肺腺癌中的表达与患者的年龄、性别以及肿瘤的大小无关(P>0.05);与病理分级(P<0.001)、临床分期(P<0.05)及是否有远处转移有关(P<0.05);IMP3表达与肺腺癌患者术后3年生存率呈负相关(P<0.001)。结论:IMP3在肺腺癌组织中表达,且与肺腺癌的病理分级、临床分期及远处转移有关。     

RGC32与转化生长因子β1在肺腺癌细胞增殖过程中调控关系的研究

目的:探讨RGC32与转化生长因子β1(TGF-β1)在肺腺癌中表达的相关性,明确二者之间调控关系及其对肺腺癌细胞增殖的影响。方法:Real-time PCR检测52例肺腺癌及相应癌旁组织中RGC32与TGF-β1 的表达;应用TGF-β1 受体特异性抑制剂SB-431542处理A549细胞,检测处理后细胞中RGC32基因的表达,并用MTT法测定细胞增殖活力,双标流式细胞术检测细胞凋亡。结果:RGC32和TGF-β1 在肺腺癌组织中表达均呈现显著增加,且二者呈正相关;SB-431542处理后,RGC32蛋白表达显著下调,A549细胞的凋亡增加,增殖活力降低。结论:RGC32和TGF-β1 在肺腺癌中均呈现表达上调,二者呈正相关。RGC32是TGF-β1 信号通路下游重要的调控基因,能够参与肺腺癌细胞增殖能力的调节。