地塞米松预处理人肺腺癌 A549 细胞对顺铂抗肿瘤活性的影响

目的：探讨地塞米松（dexamethasone,DEX）预处理人肺腺癌A549细胞后,对化疗药物顺铂（cispla—tin,DDP）抗肿瘤活性的影响。方法：以不同浓度（500、1000nmol／L）DEX预先作用于人肺腺癌A549细胞12h后,再用不同浓度（1．25、2．5、5u/ml）DDP处理。流式细胞术测定细胞凋亡,细胞计数观察细胞生长密度、形态。结果：DEX对A549细胞增殖有抑制作用。DDP能够明显抑制A549细胞增殖,促进其凋亡。DEX预处理后DDP干预A549细胞的增殖抑制作用较单一用DDP增强,且随着DEX浓度的增加,其对化疗药物DDP凋亡抑制作用的影响增强。结论：DEX预处理对顺铂诱导的人肺腺癌A549细胞的凋亡具有明显的促进作用,能增强DDP的抗肿瘤活性。     

Wnt／β-catenin信号转导通路与肺腺癌顺铂耐药作用机制研究

目的：探讨Wnt／β-catenin信号转导通路在肺腺癌顺铂耐药中的分子作用机制。方法：体外常规培养人肺腺癌A549细胞和其顺铂耐药A549／DDP细胞,取对数生长期的细胞用于实验。采用MTT法检测A549和A549／DDP细胞对顺铂的IC50;采用AnnexinV／PI法和Hoechst33342染色法检测顺铂处理后2种细胞的凋亡率;采用蛋白质印迹法检测2种细胞中β-catenin和Survivin的表达;采用siRNA干扰沉默pcatenin的表达,检测A549／DDP细胞的Ic5。值、细胞凋亡率及β-catenin和Survivin的表达。结果：顺铂对A549／DDP细胞的IC50值为（28．984±1．404）μmol／L高于A549细胞的（5．888±0．338）umol／L,t=27．696,P〈0．001;20umol／L顺铂诱导A549／DDP细胞凋亡率为（21．75±0．96）％,显著低于A549细胞的（39．38±0．88）％,t=23．474,P〈0．001。A549／DDP细胞中β-catenin蛋白的表达为1．890±0．060,显著高于A549细胞的1．063±0．035,t=20．595,P〈0．001;在A549／DDP细胞中Survivin蛋白表达量为1．107士0．061,明显高于A549细胞的0．503±0．025,t=15．814,P〈0．001。RNAi技术沉默β-catenin蛋白耐药性（14．615±0．939）gmol／L,显著低于未沉默β-cateninA549／DDP细胞的（28．984±1．404）μmol／L,t=14．732,P〈0．001;RNAi技术沉默pcatenin蛋白细胞凋亡率为（37．57±0．64）％,显著高于未沉默β-cateninA549／DDP细胞的（21．75±0．96）％,t=23．699,P〈0．001;RNAi技术沉默伊catenin蛋白下游靶基因Survivin蛋白的表达为0．527±0．065,显著低于A549／DDP组的1．027±0．025和瞬时转染阴性对照siRNA组的1．033±0．040,F=116．944,P〈0．001。结论：抑制Wnt／β-catenin信号转导通路的活性可以降低A549／DDP细胞对顺铂的耐药性。     

miRNA-451逆转非小细胞肺癌A549／DDP细胞对顺铂的耐药性及其机制研究’

目的：探讨microRNA-451（miR-451）逆转非小细胞肺癌A549／DDP细胞对顺铂的耐药性及其可能的作用机制。方法：应用实时荧光定量PCR法（real～timefluorescentquantitativePCR,qRT—PCR）检测耐DDP细胞株A549／DDP及其亲本细胞株A549中miR-451的表达差异,同时检测A549／DDP细胞转染miR-451mimic后miR-451表达的变化;分别应用MTT法、克隆形成实验、流式细胞术检测转染后A549／DDP细胞对DDP药物敏感度,细胞增殖能力,联合DDP处理后细胞凋亡变化;Western印迹法检测转染后A549／DDP细胞Akt、P—Akt（Ser473）、bcl-2和bax的表达变化。结果：miR-451在耐DDP细胞株A549／DDP中的表达量显著低于敏感细胞株A549（P〈0．05）,A549／DDP细胞转染miR-451mimic24h后,细胞中miR-451的表达水平较对照组明显提高（P〈0．05）。在A549／DDP细胞中过表达miR-451可产生以下效应：相较于对照组,DDP对A549／DDP／miR-451细胞的半数抑制浓度（half inhibitioncon centration,IC50）减低（P〈0．05）,A549／DDP／miR-451细胞的增殖能力减弱,A549／DDP／miR-451经过DDP处理后细胞凋亡增多（P〈0．05）。Western印迹法结果显示,与对照组比较,转染miR-451mimic的A549／DDP细胞P—Akt（Ser473）、bcl-2表达水平降低;bax表达水平升高。结论：miR-451可能通过诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,上调bax蛋白及下调P—Akt（Ser473）、bcl-2蛋白表达而逆转A549／DDP细胞对DDP的耐药性。     

透明质酸寡糖调节A549／DDP多药耐药作用的研究

目的：通过研究透明质酸寡糖对人肺腺癌细胞系A549／DDP的P糖蛋白和多药耐药相关蛋白（MRP）、肺耐药蛋白（LRP）表达的影响,探讨透明质酸在引起肿瘤细胞多药耐药中的作用。方法：将CD44单抗或透明质酸寡糖与A549／DDP细胞共培养48小时,放免法检测培养基中细胞所分泌透明质酸的含量,流式细胞仪检测经上述处理的A549／DDP表面MDR1、MRP、LRP的表达率,MTT法检测在不同浓度顺铂作用下,各组细胞的存活率。结果：经透明质酸寡糖处理后A549／DDP,分泌透明质酸较未处理组明显减少（P〈0．05）;且细胞表面与多药耐药相关的MDR1、MRP、LRP的表达率均降低（P〈0．05）。另外,处理后的细胞,在不同浓度顺铂作用时,细胞凋亡率明显增加。结论：体外条件下,透明质酸寡糖能逆转A549／DDP的耐     

环氧化酶-2抑制剂塞来昔布联合顺铂对A549人肺腺癌细胞株增殖影响的体外实验研究

目的观察环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布（Celecoxib）与化疗药物顺铂（DDP）联合应用对A549人肺腙癌细胞增殖的影响。方法应用MTS法检测Celecoxib与DDP联用对人肺腺癌A549细胞增殖的影响。结果在一定浓度范围内，Celecoxib和DDP均可抑制A549人肺腺癌细胞的生长，其抑制作用呈量-效关系。Celecoxib（0．35mg／L）与DDP联用可增强对A549细胞生长的抑制作用，DDP浓度≥1mg／L时两者具有协同或相加作用；且在一定浓度范围内，Celecoxib与DDP联用对细胞的生长抑制作用呈时-效关系。结论Celecoxib与DDP联合可增强对A549人肺腺癌细胞的生长抑制效应。     

TSA增强人卵巢癌顺铂耐药株C13对顺铂敏感性的体外研究

目的：本研究探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂triChoStatin A（TSA）联合化疗药物顺铂（DDP）处理人卵巢癌顺铂耐药株C13＊的协同效应。方法：MTT法观察TSA、DDP、TSA＋DDP对C13＊细胞增殖的影响；克隆形成实验分别检测DDP、TSA＋DDP处理C13＊的克隆形成率；流式细胞仪检测凋亡和分析细胞周期；Hochest33258观察凋亡细胞形态。结果：40nmol／L TSA处理C13＊12h，细胞的凋亡率为2．99％，MTT显示生长未受明显影响；TSA＋DDP组较DDP组C13＊对DDP的作用更为敏感，在DDP为20～30μmol／L时差异显著（P〈0．05）。结论：一定浓度的TSA和DDP联合应用可以增强人卵巢癌顺铂耐药株C13＊对顺铂的敏感性。     

高温联合顺铂及多西他赛对肺腺癌A549细胞体外作用的研究

目的：研究高温联合顺铂（DDP）及多西他赛（TXT）对肺腺癌细胞株A549的体外作用。方法：不同处理因素作用于A549细胞后,应用四氮唑盐比色法（MTT法）测定细胞增殖情况,根据Veleriote法判断高温联合化疗药的作用效果;通过两药相互作用指数判断药物联合作用效果;流式细胞仪检测不同处理后细胞凋亡情况;光学显微镜及荧光显微镜观察细胞形态学变化。结果：高温和化疗药单独作用均对A549有生长抑制作用（P〈0．05）;化疗药有剂量依赖关系;高温有温度依赖关系;高温与药物联合对细胞生长抑制作用强于单独高温组或单独化疗组（P〈0．01）;DDP与高温联合为协同作用;TXT与高温联合为次加作用;DDP和rr）（T联合作用对细胞生长抑制为协同作用;42℃、DDP2μg/ml和TXT1IXg／ml三者联合凋亡率明显高于其他处理组（P〈0．01）;普通光镜和荧光显微镜下42％、DDP2μg/ml和TXT1μg/ml三者联合凋亡细胞数较对照组和42℃组明显增多,细胞形态学变化明显。结论：DDP、TXT、高温三者体外联合作用对A549有明显的生长抑制和诱导凋亡作用。     

COX-2 抑制剂联合顺铂或X射线对A549肺腺癌细胞株的体外实验

 目的 观察环氧化酶-2（C0X-2）抑制剂塞来昔布（Celecoxib）联合化疗药物顺铂（DDP）或联合X射线对A549人肺腺癌细胞增殖的影响及可能机制。方法 应用MTS法分别检测Celecoxib与DDP联用对A549细胞增殖的影响及联合X射线对A549细胞存活分数（SF）的影响，流式细胞术检测细胞凋亡。结果 在一定浓度范围内，Celecoxib和DDP均可抑制A549人肺腺癌细胞的生长，其抑制作用呈量一效关系。两者联用可增强对A549细胞生长的抑制作用，DDP浓度≥1mg／L时两者具有协同或相加作用。Celecoxib与X射线联用可显著降低细胞存活分数（SF），增加细胞凋亡率。结论 Celecoxib与DDP联合可增强对A549人肺腺癌细胞的生长抑制效应；Celecoxib与X射线联合时，可增加AS49人肺腺癌细胞的凋亡率，增强其对放射的敏感性。     

黄芪多糖降低A549/DDP肺腺癌细胞顺铂耐药机制研究

目的:研究黄芪多糖对A549/DDP肺腺癌细胞顺铂耐药的影响及可能机制。方法:将A549/DDP顺铂耐药肺腺癌细胞分为CON组（未行黄芪多糖及顺铂处理）、APS组（仅用黄芪多糖处理）、DDP组（仅用顺铂处理）及A+D组（黄芪多糖联合顺铂处理）,比较四组细胞增殖、细胞周期及凋亡率和耐药基因表达的差异。结果:A+D组细胞d1-d7吸光度、S期、G2/M期和PI均显著低于CON组、APS组和DDP组细胞（均P<0.05）,G0/G1期和凋亡率均显著高于CON组、APS组和DDP组细胞（均P<0.05）;APS组和A+D组细胞MDR1和MRP基因mRNA表达无明显差异（均P>0.05）,且均显著低于CON组和DDP组（均P<0.05）。结论:黄芪多糖可显著改善A549/DDP肺腺癌细胞对顺铂耐药性,可能与黄芪多糖显著降低MDR1和MRP有关。     

Amorphigenin联合顺铂对人肺腺癌A549/DDP细胞的协同抗肿瘤作用

背景与目的 Amorphigenin是从紫穗槐属植物的种子中分离提取的鱼藤酮类化合物,研究发现amorphigenin对多种肿瘤细胞具有增殖抑制作用。本研究拟探讨amorphigenin对人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP的抗肿瘤作用及其可能的分子机制。方法采用CCK-8法测定A549/DDP细胞的增殖;克隆形成实验测定A549/DDP细胞的克隆形成;流式细胞术检测细胞的凋亡率;Western blot技术检测caspase-3、PARP和LRP蛋白的表达。结果Amorphigenin可抑制A549/DDP细胞的增殖48 h[半数抑制浓度（half maximal inhibitory concentra-tion, IC50）]为（2.19±0.92）μmol/L、抑制克隆形成及诱导细胞凋亡。此外,Amorphigenin与顺铂联合可协同地抑制A549/DDP细胞生长和促进凋亡;降低耐药蛋白LRP蛋白的表达。结论 Amorphigenin可抑制A549/DDP细胞增殖和促进细胞凋亡;amorphigenin可能是通过抑制耐药蛋白LRP蛋白表达,进而与顺铂对A549/DDP细胞产生协同抑制作用。     

siRNA沉默K-C1协同转运子1基因的表达对肺腺癌细胞顺铂敏感性的影响

%0 Journal Article %A 徐然;赵俊刚;石文君; 目的：探讨降低K-Cl协同转运子1（KCC1）基因在肺腺癌A549细胞中的表达及对化疗药物顺铂（DDP）敏感性的影响。方法：设计并合成KCC1特异性siRNA,转染A549细胞;RT-PCR检测RNA干扰后KCC1基因的表达改变;应用DDP处理后,MTT法测定细胞毒性指数,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：siRNA-KCC1能够抑制KCC1基因在A549细胞中的表达;而KCC1表达降低后,A549细胞的凋亡明显升高（P〈0.05）,增殖能力明显下降（P〈0.05）。结论：KCC1基因表达降低能够抑制A549细胞的增殖并促进细胞凋亡,并能够在一定程度上增强A549细胞对化疗药物DDP的敏感性。     

miRNA-192对非小细胞肺癌A549／DDP细胞顺铂耐药性的影响

目的 探讨抑制microRNA-192（miR-192）在非小细胞肺癌A549／DDP细胞对顺铂（DDP）耐药性方面的影响及可能机制。方法 通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测人肺腺癌耐DDP细胞株A549／DDP及其亲本细胞株A549细胞中miR-192的表达水平,A549／DDP细胞转染miR-192抑制剂（inhibitor）和miR-阴性对照（NC）48h后采用qRT-PCR检测转染效率,分别采用MTT法、克隆形成实验及流式细胞术检测转染48h后A549／DDP细胞对DDP的药物敏感性、细胞增殖能力及细胞凋亡变化,Western blotting检测转染48h后细胞中Bax和Bcl-2的表达变化。结果 miR-192在A549／DDP细胞中的表达水平高于A549细胞（P＜0.05）;转染miR-192 inhibitor 48h后的A549／DDP细胞miR-192水平低于转染miR-NC者（P＜0.05）;转染miR-192 inhibitor后,A549／DDP细胞的增殖能力减弱、凋亡细胞增多、DDP对其半数抑制浓度降低、Bax蛋白水平升高和Bcl-2蛋白水平下降,与转染miR-NC者比较,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 抑制miR-192能够降低A549／DDP细胞对DDP的耐药性,其作用机制可能是通过增加细胞凋亡以及下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白表达来实现的。     

β-榄香烯联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨β-榄香烯联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞生长的影响。方法：体外培养宫颈癌SiHa细胞,分别将 β-榄香烯（浓度梯度为25、50、100、150、200μg/ml）,顺铂（浓度梯度为1.5、3、6、9、12μg/ml） ,单独作用于宫颈癌SiHa细胞,加药24h、48h后用CCK-8法检测细胞增殖情况。用流式细胞术检测β-榄香烯组细胞24h凋亡率。选取合适的药物浓度（β-榄香烯125μg/ml,顺铂3μg/ml） ,进行联合用药,加药24h、48h用CCK-8法检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测24h细胞凋亡率。结果：CCK-8法检测显示β-榄香烯和顺铂单独用药24h、48h后,除顺铂1.5μg/ml外,其它实验组对宫颈癌SiHa细胞的抑制率均高于对照组（P〈0.05）,在一定程度上呈浓度和时间依赖性。联合用药时,细胞的抑制率和凋亡率要显著高于单独用药（P〈0.01）。结论：β-榄香烯、顺铂单独或联合作用均能抑制SiHa细胞的增殖,促进其凋亡,且β-榄香烯联合顺铂的作用要显著高于单独用药,β-榄香烯和顺铂可协同（CDI〈1）促进SiHa细胞凋亡。     

丙戊酸对耐药细胞株A549／DDP增殖和凋亡作用的实验研究

目的：探讨丙戊酸（valproicacid,VPA）抑制肺癌耐药细胞株A549／DDP增殖和凋亡的作用。方法：0—4mmol／L丙戊酸作用于A549／DDP细胞48h,观察细胞数量和形态的变化,MTT法分析细胞生长抑制,流式细胞仪测定细胞周期动力学变化,细胞免疫组化测定Caspase-3。结果：VPA干预后细胞数量明显减少,形态不规则,细胞核固缩,胞质减少;与对照组比较,VPA可造成A549／DDP细胞生长抑制,且随着VPA浓度的增加,抑制率增加;G1期比例明显升高,S期明显降低;与对照组比较,各实验组细胞胞质中Caspase-3表达明显增加,Caspase-3表达与VPA的浓度成正相关。结论：VPA可明显抑制A549／DDP的生长,诱导凋亡和G1期阻滞作用,在肺癌耐药方面具有重要理论价值和实践意义。     

5-氮杂-2’-脱氧胞苷联合低浓度顺铂对肺癌细胞增殖影响的实验研究

目的 探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-CdR）与低浓度顺铂（DDP）联合用药对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞增殖的影响。方法 选择1μmol／L DDP、10μmol／L 5-Aza-CdR及两者联合分别处理体外培养的A549细胞,MTT法检测处理前后的细胞增殖活性,流式细胞仪、Hoechst 33258染色分别观察处理前后的细胞周期、凋亡率及凋亡形态学变化。结果 MTT法显示,与单独1μmol／L DDP组比较,联合组能够明显抑制A549细胞的增殖,A549细胞的凋亡率亦明显增加;流式细胞仪显示,联合组作用于细胞G0／G1期,使A549细胞生长阻滞在此期,细胞的增殖指数降低;与单独1μmol／L DDP组比较,联合组A549细胞的凋亡形态学改变更明显。结论5-Aza-CdR联合低浓度DDP能够明显抑制NSCLC A549细胞的增殖和诱导A549细胞的凋亡。     

榄香烯乳诱导线粒体凋亡途径逆转肺癌A549/DDP细胞株耐药

目的：探讨榄香烯乳（ elemene,ELE）逆转人肺腺癌耐顺铂（ cisplatin,DDP）细胞A549/DDP的耐药性及作用机制。方法：采用MTT法检测榄香烯乳单用的细胞毒作用及与DDP合用时耐药逆转作用。荧光探针JC-1结合激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位的变化。DCFH-DA荧光探针结合流式细胞仪检测细胞内活性氧（ reactive oxygen species,ROS）水平。用谷胱甘肽试剂盒结合分光光度法检测计算GSH/（ GSSG﹢GSH）比值。蛋白质印迹法检测胞质中Cyto C、Pro-caspase-3、Caspase-3和Bcl-2家族蛋白表达情况。结果：不同浓度榄香烯乳抑制A549/DDP细胞株生长,呈时间-剂量依赖性效应,联合顺铂能提高A549/DDP细胞株对顺铂的敏感性而逆转耐药。不同浓度榄香烯乳联合顺铂使A549/DDP细胞株线粒体膜电位下降,ROS浓度增加,GSH/（ GSSG﹢GSH）比值降低,上调胞质中Cyto C、Caspase-3、Bad蛋白表达,下调Pro-caspase-3、Bcl-2蛋白表达。结论：榄香烯乳逆转A549/DDP细胞株耐药性可能与其损伤线粒体膜,活化胞内氧化还原体系,诱导线粒体凋亡路径有关。     

人参皂甙 Rh2 联合顺铂对食管癌细胞的杀伤作用

目的：体外观察低剂量人参皂甙Rh2（ginsenoside Rh2,GS-Rh2）对抗肿瘤药顺铂（cisplatin,DDP）杀伤人食管癌细胞株Eca109的影响,并探讨其可能的作用机制.方法：人食管癌细胞Eca109经培养符合条件后,分别加用0.3μg/ml DDP（A组）、20μmol/ml GS-Rh2（B组）、0.3μg/ml DDP＋20μmol/ml GS-Rh2（C组）、对照组（D组）处理48小时.流式细胞仪检测各组细胞凋亡率和死亡率.高效液相色谱检测各组细胞内DDP的药物浓度.蛋白质印迹法检测各组细胞中p53表达.结果：细胞凋亡率和死亡率C组显著高于A、B两组（P＜0.05）;C组细胞内DDP的药物浓度显著高于A组细胞（P＜0.05）;C组细胞p53表达水平低于A组（P＜0.05）.结论：体外低剂量GS-Rh2能增强DDP对人食管癌细胞Eca109的杀伤作用,其作用机制可能与降低细胞内p53表达有关.