NO-Aspirin抑制MCF-7乳腺癌细胞的生长以及对Wnt/β-catenin/TCF-4信号通路的影响

目的：探讨NO-ASA（一氧化氮阿斯匹林）对MCF-7人乳腺癌细胞生长的影响及其机制。方法：建立稳定传代的MCF-7细胞系。MTT法测定NO-ASA对MCF-7人乳腺癌细胞的增殖抑制作用。应用Westernblot法检测对Wnt/β-catenin/TCF-4信号通路的影响。结果：NO-ASA能强烈抑制细胞生长和β-catenin/TCF转录活性;NO-ASA降低了Wnt/β-catenin下游区靶基因细胞周期蛋白D1（cyclinD1）和细胞总β-catenin的表达水平。结论：NO-ASA通过减少β-catenin表达及抑制β-catenin/TCF依赖转录活性,强烈抑制MCF-7人乳腺癌细胞增殖,导致其靶基因—细胞周期蛋白D1表达降低。这为乳腺癌的预防和治疗提供了针对性的合理的方法。     

NO-Aspirin抑制MCF-7乳腺癌细胞的生长以及对Wnt/β-catenin/TCF-4信号通路的影响

目的:探讨NO-ASA(一氧化氮阿斯匹林)对MCF-7人乳腺癌细胞生长的影响及其机制.方法:建立稳定传代的MCF-7细胞系.MT法测定NO-ASA对MCF-7人乳腺癌细胞的增殖抑制作用.应用Western blot法检测对Wnt/β-catenin/TCF-4信号通路的影响.结果:NO-ASA能强烈抑制细胞生长和β-catenin/TCF转录活性;NO-ASA降低了Wnt/β-catenin下游区靶基因细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和细胞总β-catenin的表达水平.结论:NO-ASA通过减少β-catenin表达及抑制β-catenin/TCF依赖转录活性,强烈抑制MCF-7人乳腺癌细胞增殖,导致其靶基因一细胞周期蛋白D1表达降低.这为乳腺癌的预防和治疗提供了针对性的合理的方法.     

Wnt信号通路在姜黄素诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡中作用机制

目的 探讨Wnt通路在姜黄素诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡中的作用机制.方法 将MCF-7细胞培养液随机分为5组,分别加入15、30、60、120μmol/L的姜黄素,对照组不加,培养12,24,48 h后采用CCK-8法检测细胞增殖能力.分A、B两组(剂量组、时间组)采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术(FCM)观测细胞凋亡及细胞周期分布;Western Blotting法检测A、B两组的Wnt通路相关蛋白,并进行相应的相关性分析探讨Wnt通路与乳腺癌MCF-7细胞凋亡的关系.结果 CCK-8结果显示,随培养时间延长,姜黄素各浓度组MCF-7细胞增殖抑制率逐渐增高(均P<0.05);在同一时间点,随着姜黄素浓度升高,细胞增殖抑制率逐渐增高(均P<0.05).FCM染色结果显示,随着姜黄素浓度增加、作用时间延长MCF-7细胞凋亡指数逐渐上升(均P<0.05),且G1/S期细胞增加越多(P<0.05).Western Blotting实验结果显示MCF-7细胞中Wnt1、β-catenin的表达下调程度呈现剂量时间依赖性(P<0.05).相关性分析显示细胞抑制率、G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率均与Wnt通路相关蛋白Wnt1、β-catenin的表达呈现较明显的相关性(P<0.05).结论 姜黄素的抗癌活性与抗增殖能力具有明显的剂量时间依赖性,且Wnt通路在姜黄素诱导乳腺癌MCF-7细胞抑制、凋亡过程中发挥了重要作用.     

AQP1通过Wnt通路促进乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移与侵袭

目的:探讨过表达水通道蛋白1（aquaporin 1,AQP1）基因对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移、侵袭能力的影响,分析其对Wnt通路的调控作用。方法:构建和包装pBabe-puro-AQP1逆转录病毒载体,建立稳定过表达AQP1基因的MCF-7细胞。细胞免疫荧光染色法检测外源性AQP1在MCF-7细胞内的定位,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blot检测AQP1 mRNA及蛋白表达变化;采用CCK-8法检测细胞的增殖活性;流式细胞法检测细胞周期;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell法检测细胞的侵袭能力;基因表达谱芯片、Western blot检测转染后Wnt细胞通路相关基因表达改变。结果:稳定过表达AQP1后MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加,差异有统计学意义（P＜0.001）。基因表达谱芯片结果显示,过表达AQP1后22个差异表达基因富集于Wnt细胞信号通路,mRNAs表达明显增强（P＜0.000 1）,Wnt细胞通路关键基因β-catenin及下游靶基因细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、C-Myc蛋白表达也显著增加。结论:AQP1可能通过激活Wnt信号通路促进MCF-7细胞增殖、迁移与侵袭。     

HK2通过Wnt/β-catenin信号通路上调Cyclin D1、MMP7和Slug表达促进宫颈癌细胞增殖和迁移CSCD

目的研究己糖激酶2(HK2)对宫颈癌细胞HeLa增殖和迁移的影响及其作用机制。方法G418压力筛选获取HK2稳定表达的HeLa细胞系;细胞计数法、MTT法、流式细胞仪检测HK2对HeLa细胞增殖、细胞活力及细胞周期的影响;细胞划痕和Transwell小室检测HK2对HeLa细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blot和免疫细胞化学检测β-catenin、Cyclin D1、MMP7和Slug蛋白的表达;TOP/FOP实验检测HK2对Wnt/β-catenin信号转导通路活性的影响;Wnt/β-catenin信号通路抑制剂XAV-939观察在HK2过表达HeLa细胞中抑制Wnt/β-catenin信号通路活性后细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。结果成功构建HK2稳定表达的HeLa细胞系;过表达HK2可以促进HeLa细胞的增殖和细胞活力、促进细胞周期从G_0/G_1期向S期转换、增强细胞迁移和侵袭能力、增强Wnt/β-catenin信号转导通路活性,上调Cyclin D1、MMP7和Slug的表达;XAV-939抑制Wnt/β-catenin信号通路在HK2过表达HeLa细胞中的活性后,可以抑制HK2对细胞增殖、迁移和侵袭的促进作用。结论HK2通过Wnt/β-catenin信号转导通路上调Cyclin D1、MMP7和Slug蛋白表达促进HeLa细胞增殖、迁移和侵袭。     

大黄素对人乳腺癌细胞MCF-7的促凋亡作用及其与JNK信号通路关系

目的探讨大黄素对人乳腺癌细胞MCF-7的促凋亡作用及其与JNK信号通路的关系。方法应用倒置显微镜观察人乳腺癌细胞MCF-7的生长情况,MTT法检测大黄素对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响,用流式细胞仪检测细胞凋亡,应用Western blot和免疫组织化学法检测JNK信号蛋白及其下游促凋亡蛋白AP-1的表达。结果大黄素可降低人乳腺癌细胞MCF-7增殖能力,具有时间依赖性和浓度依赖性。大黄素作用于人乳腺癌细胞MCF-7后,出现明显的早期凋亡现象(P0.05)。不同浓度大黄素处理人乳腺癌细胞MCF-7后,均可引起JNK和JNK下游信号分子AP-1表达增强(P0.05)。结论大黄素可降低人乳腺癌细胞MCF-7增殖能力,促进早期凋亡,可使人乳腺癌细胞MCF-7表达JNK和AP-1增强,促进人乳腺癌细胞MCF-7的凋亡。大黄素通过活化JNK信号转导途径抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖、促进凋亡。     

塔斯品碱衍生物TPD7对乳腺癌细胞迁移和侵袭的抑制作用

目的:探讨塔斯品碱衍生物TPD7对乳腺癌细胞MCF-7和ZR-75-30细胞迁移和侵袭的影响,阐明TPD7抑制细胞迁移和侵袭可能的作用机制。方法:采用细胞划痕法、Transwell小室侵袭法检测MCF-7和ZR-75-30细胞的迁移和侵袭。采用Western blot法检测MMP9、β-catenin及c-Myc的蛋白表达。RT-PCR法检测β-catenin及c-Myc的mRNA表达。结果:TPD7对MCF-7细胞和ZR-75-30细胞迁移和侵袭均有显著抑制作用,且下调MMP9、β-catenin、c-Myc的蛋白表达和mRNA表达,呈剂量依赖性。结论:TPD7抑制乳腺癌MCF-7和ZR-75-30细胞迁移和侵袭,可能是通过Wnt信号通路抑制上皮-间质转化。     

Trim37过表达通过激活Wnt/β-catenin通路促进乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及EMT

目的:探讨Trim37通过Wnt/β-catenin通路对乳腺癌发展的影响及其作用机制。方法:实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)和Western blot检测Trim37在乳腺癌组织、癌旁正常组织、人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)和人正常乳腺上皮细胞(MCF-10A细胞)中的表达。pcDNA-Trim37或Trim37 siRNA转染MCF-7细胞后,CCK-8法检测过表达及下调Trim37对细胞增殖的影响,Transwell实验检测过表达及下调Trim37对细胞侵袭的影响,细胞划痕愈合实验检测过表达及下调Trim37对细胞迁移的影响,Western blot检测过表达及下调Trim37对细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和Snail)及β-catenin、CyclinD1、p-ERK、p-AKT和p-FAK蛋白表达的影响。Wnt/β-catenin通路抑制剂(XAV939)作用MCF-7细胞后,检测MCF-7细胞增殖、...     

槲皮素抗肿瘤作用与Wnt/β-catenin信号转导关系的研究

目的:探讨槲皮素对人结肠癌细胞SW480增殖的影响及对细胞Wnt/β-catenin信号转导的调控作用。方法:以不同浓度的槲皮素处理SW480细胞,采用MTT比色法分析槲皮素对细胞增殖的抑制作用,利用报告基因方法研究槲皮素对Wnt/β-catenin信号转导的影响,用RT-PCR及蛋白质印迹法观察槲皮素对Wnt/β-catenin信号转导通路的下游关键因子Cyclin D1和Survivin转录水平和蛋白表达水平的影响。结果:(40～160)×10-6mol/L的槲皮素可明显抑制SW480细胞的增殖,P<0.01,抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性;(10～160)×10-6mol/L的槲皮素可明显抑制SW480细胞TCF-4报告基因TOPflash活性,P<0.05,抑制作用呈剂量依赖性。槲皮素可显著下调β-catenin/TCF下游靶基因CyclinD1和Survivin的mRNA表达和蛋白表达水平,呈剂量依赖性。结论:槲皮素可抑制人结肠癌细胞SW480的增殖,其抗肿瘤机制可能与其抑制Wnt/β-catenin信号转导通路有关。     

上调SCD1对乳腺癌细胞增殖凋亡的影响及与其相关通路的调控机制

目的:探究上调硬脂酰辅酶A去饱和酶1（SCD1）对乳腺癌细胞增殖凋亡的影响及与其相关通路的调控机制。方法:将细胞分为三组,即对照组、阴性对照组和SCD1组。检测和比较每组的转染效率、细胞活力、增殖情况以及凋亡率。qPCR检测mRNA水平,Western blot检测蛋白表达水平。结果:SCD1组细胞的SCD1 mRNA和蛋白的表达水平显著高于对照组和阴性对照组。SCD1组的细胞活力和克隆形成数目显著高于对照组和阴性对照组。SCD1组的细胞凋亡率显著低于对照组和阴性对照组。转染SCD1后,细胞表达的Cyclin D1、PCNA和Bcl-2 mRNA水平显著升高,Caspase3、Bax mRNA水平显著降低。乳腺癌MCF-7细胞SCD1过表达后,Wnt、β-catenin mRNA和蛋白的表达水平均显著升高。结论:上调SCD1的水平可通过促进Wnt/β-catenin通路促进乳腺癌细胞的增殖并抑制其凋亡。     

过表达Axin对胶质瘤细胞U87的生物学行为的影响及其作用机制

目的：观察Axin对胶质瘤U87细胞生物学行为的影响,并探讨其机制。方法：pCMV5-HA—Axin瞬时转染胶质瘤U87细胞,TUNEL法检测细胞的凋亡,流式细胞仪检测瘤细胞周期变化,Westernblot检测Axin及β—catenin蛋白质的表达。结果：Axin显著促进胶质瘤U87细胞的凋亡、抑制细胞的增殖;促进β-catenin蛋白在胞浆内的蓄积。结论：过表达Axin的胶质瘤U87细胞可能通过降低细胞核内β—catenin的蛋白表达量抑制Wnt信号通路,从而抑制细胞增殖并促使细胞凋亡。     

14-3-3β通过β- catenin 调控胶质瘤细胞的生长和增殖

目的：研究14-3-3β基因在胶质瘤细胞生长和增殖中的调控作用。方法：构建14-3-3β基因过表达质粒并设计14-3-3β基因和β- catenin 基因 siRNAs,分组转染人体正常神经星形胶质细胞系 SVGp12和胶质瘤细胞系 U87,噻唑蓝（MTT）法观察14-3-3β基因过表达/沉默和β- catenin 基因沉默对细胞生长和增殖的影响,并利用 qRT - PCR 定量分析受调控原癌基因的表达变化。结果：14-3-3β基因过表达的星形胶质细胞生长能力显著高于对照组（P ﹤0.05）,而β- catenin 基因沉默的星形胶质细胞生长受到明显抑制（P ﹤0.05）。观察到14-3-3β基因或β- catenin 基因沉默的胶质瘤细胞生长能力也显著低于对照组细胞（P ﹤0.05）。结论：胶质瘤细胞的生长和增殖受到14-3-3β基因的调控并且其调控是通过β- catenin 基因来进行的,但其具体的信号调控机制需要进一步探讨。     

ING4诱导甲状腺癌SW579细胞S早期阻滞的机制研究

目的:检测ING4对甲状腺癌SW579细胞周期的影响及其机制。方法:利用软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖,并利用PI染色和Cldu/Idu双染检测细胞周期变化。Westernblot技术检测周期相关蛋白的变化。结果:ING4可以明显抑制SW579细胞增殖,并且导致其S早期阻滞。ING4处理后细胞p53表达明显升高,同时phospho-S345-Chk1和phospho-T68-Chk2等细胞周期相关蛋白表达水平升高。结论:ING4可导致SW579细胞出现S早期阻滞,p53表达明显升高,细胞周期相关蛋白表达水平升高,但是三者关系有待进一步研究。     

Piceatannol exhibits selective toxicity to multiple myeloma cells and influences the Wnt/ beta‐catenin pathway

Aberrant activation of Wnt/β‐catenin signaling promotes development and progression of various malignant neoplasms. Recent studies observed that the Wnt pathway is constitutively active in myeloma cells and promotes an exaggerated proliferation. Thus, the Wnt signaling pathway might be an attractive therapeutic target for multiple myeloma. In this study, we identified piceatannol as an inhibitor of the Wnt/β‐catenin pathway and as a potent inducer of apoptosis in myeloma cells. Interestingly, healthy cells remained mainly unaffected. These results reveal a significant selective induction of apoptosis by piceatannol and suggest a significant in vivo effect against multiple myeloma. Copyright © 2014 John Wiley & Sons, Ltd.     

腺苷抑制乳腺癌细胞增殖和迁移的机制

目的:检测腺苷对乳腺肿瘤细胞增殖及迁移能力的影响,并探究其潜在的分子机制。方法:以MCF-7细胞为模型,采用梯度浓度的腺苷处理细胞,MTT及细胞计数法检测腺苷对细胞增殖的影响,流式细胞术检测腺苷对细胞凋亡及周期的影响,划痕修复实验检测腺苷对细胞迁移能力的影响。结果:腺苷可显著抑制MCF-7细胞增殖,且抑制效果与腺苷浓度及作用时间呈相关性。流式细胞术检测结果表明腺苷可诱导MCF-7细胞凋亡,并引起细胞的 G2/M期阻滞。划痕实验结果表明腺苷抑制MCF-7细胞的迁移能力。实时定量PCR检测结果发现,促细胞凋亡分子Bax及Bak表达量显著升高,而凋亡抑制分子Bcl-2表达量显著下降,同时Caspase-3的表达量也显著升高。结论:腺苷可诱导MCF-7细胞凋亡,抑制细胞的增殖,同时腺苷可以抑制MCF-7细胞的迁移能力。腺苷诱导MCF-7细胞凋亡与其激活线粒体凋亡通路密切相关。     

CisoDGR 多肽对乳腺癌 MCF －7细胞增殖、凋亡的影响及其机制探讨

目的：探讨 CisoDGR 多肽对乳腺癌 MFC －7细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法：采用 MTT 法检测 CisoDGR 多肽对乳腺癌 MCF －7细胞的抑制率;流式细胞术检测 CisoDGR 多肽对 MCF －7细胞凋亡的影响;Western blot 法检测 Caspase －3、Bcl －2蛋白的表达。结果：CisoDGR 多肽能明显抑制乳腺癌 MCF －7细胞的增殖,诱导细胞凋亡,并存在一定的时－效及量－效关系。其对凋亡的诱导作用可能与 Caspase －3蛋白表达增加及 Bcl －2蛋白表达下降有关。结论：CisoDGR 多肽具有抑制 MCF －7细胞增殖,诱导 MCF －7细胞凋亡的作用,其作用机制可能与 Caspase －3、Bcl －2蛋白的表达变化有关。     

非小细胞肺癌中过表达 RNF146 对 Axin 和 β - catenin 表达和定位的影响

目的：观察E3泛素连接酶RNFl46表达对Axin和B—catenin蛋A表达的影响,探讨RNFl46与Wnt／B-atenin信号通路在非小细胞肺癌（NSCLC）发生发展中的作用。方法：应用免疫组织化学EnVision法检测133例NSCLC患者肺癌中RNFl46、Axin和B-catenin的表达。构建RNFl46过表达质粒,应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）、Westernblot和细胞免疫荧光方法研究RNFl46在肺癌细胞株A549和LTE中过表达对Axin和B—catenin表达及定位的影响。结果：NSCLC患者肺癌组织中RNFl46高表达72例（54．1％）中49例（68．1％）显示Axin表达减弱或缺失,19例（26．4％）出现B-catenin细胞核阳性表达;RNF146低表达61例（45．9％）中只有26例（42．6％）显示Axin表达减弱或缺失,7（11．5％）例出现B—eatenin细胞核阳性。RNFl46与Axin的表达呈明显的负相关（P=0．003）,与B—catenin的细胞核表达呈正相关（P=0．047）。肺癌细胞系中过表达RNFl46能够下调Axin蛋白的表达,诱导B—catenin蛋白表达和核内分布,但对Axin和B—cateninmRNA水平没有影响。结论：RNFl46可能通过Wnt／B-catenin通路参与肺癌的发生发展。     

环氧化酶-2抑制剂nimesulide对乳腺癌细胞株增生、凋亡的影响

目的 探讨环氧化酶-2抑制剂nimesulide(NIM)对雌激素受体(ER)阴性(MDA-MB．231)和阳性(MCF-7)人乳腺癌细胞株增生、凋亡的影响。方法 应用MTT比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞技术测定细胞周期分布和凋亡率，透射电镜观察细胞形态与超微结构，AnnexinV法检测细胞的凋亡。结果 NIM以时间、剂量依赖性方式抑制MDA-MB-231(COX-2阳性)、MCF-7(COX-2阴性)细胞生长，阻滞细胞周期于G0／G1期，诱导细胞的凋亡，MDA—MB-231细胞对NIM的作用更为敏感。NIM对COX-2表达阴性的MCF-7细胞同样具有抑制增生、诱导凋亡的作用。结论 NIM对ER阳性和ER阴性乳腺癌细胞均有抑制增生、诱导凋亡的作用。NIM的抗肿瘤作用存在环氧化酶．2依赖性与非依赖性两种途径。     

P7TP3 inhibits tumor development,migration, invasion and adhesion of liver cancer through the Wnt/β‐catenin signaling pathway

The effect of hepatitis C virus p7 trans‐regulated protein 3 (P7TP3) in the development of hepatocellular carcinoma (HCC) is still unknown. The present study aimed to investigate the role and mechanism of P7TP3 in HCC. P7TP3 was significantly decreased in HCC tissues when compared with corresponding liver tissues immediately around the tumor (LAT) from seven HCC patients. Fewer and smaller colonies originated from HepG2‐P7TP3 cells when compared to HepG2‐NC cells. Overexpression of P7TP3 in HepG2 cells significantly repressed the growth of HCC xenografts in nude mice. Furthermore, wound‐healing tests, Transwell assays, Matrigel Transwell assays, adhesion assays, CCK‐8 assays, flow cytometry and western blotting analysis showed that P7TP3 protein expression inhibited migration, invasion, adhesion, proliferation and cell cycle progression in HCC cell lines. Moreover, P7TP3 suppressed the activity of the Wnt/β‐catenin signaling pathway, and was restored by Wnt3a, which is an activator of the Wnt/β‐catenin signaling pathway. Consistently, β‐catenin was highly expressed by P7TP3 silencing, and restored by XAV939, an inhibitor of the Wnt/β‐catenin signaling pathway. Finally, microRNA (miR)‐182‐5p suppressed the expression of target gene P7TP3 by directly interacting with the 3′‐UTR region. Taken together, P7TP3, the direct target gene of miR‐182‐5p, inhibited HCC by regulating migration, invasion, adhesion, proliferation and cell cycle progression of liver cancer cell through the Wnt/β‐catenin signaling pathway. These findings provide strong evidence that P7TP3 functions as a new promising tumor suppressor in HCC.