球体形成实验联合药物筛选建立耐顺铂胰腺癌干细胞株

目的 探索建立顺铂耐药人胰腺癌干细胞株,并进行初步鉴定.方法 通过球体形成实验联合顺铂药物筛选建立耐顺铂胰腺癌干细胞株;MTT法计算耐药指数;免疫荧光半定量检测OCT-4、SOX-2表达水平,检测干细胞标记物;免疫荧光半定量检测MUC-1表达水平,检测细胞分化能力;通过流式细胞仪测量侧群细胞和表面特异抗原标记（CD44＋/CD24＋）检测肿瘤干细胞含量.结果 耐顺铂干细胞株的耐药指数是亲代株PANC-1的71.5倍;干细胞标记物的免疫荧光检测发现,耐药株中OCT-4、SOX-2、MUC-1均有不同程度的表达;耐药干细胞株及亲代株SP细胞比例分别为（25.1±1.1）％和（7.8士0.9）％,差异有统计学意义（t=6.89,P＜ 0.01）;耐药株及亲代株中CD44＋/CD24＋表型的细胞亚群分别占（20.8±1.3）％和（2.4±0.8）％,差异有统计学意义（t=16.13,P＜ 0.01）.结论 球体形成实验联合顺铂药物筛选能建立耐顺铂胰腺癌细胞株,该细胞株能高效富集胰腺癌肿瘤干细胞.     

免疫磁珠法分离胆囊癌CD133阳性细胞及其生物学特性鉴定

目的 建立胆囊癌CD133+细胞分离纯化的方法,观察胆囊癌CD133+细胞和CD133-细胞生物学特性的差异.方法 流式细胞仪检测胆囊癌GBC-SD、SGC996细胞中CD133所占百分比,免疫磁珠法分选CD133+细胞亚群,免疫荧光法定位检测CD133蛋白表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CD133 mRNA表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测CD133+组和CD133-组细胞增殖能力及对5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药特性的差异,单克隆形成实验观察单个CD133+细胞生长特性.结果 胆囊癌GBC-SD、SGC996细胞中CD133+亚群所占相对百分比为(68.5±2.9)％、(0.3±0.2)％.GBC-SD组CD133 mRNA相对灰度值(0.6466±0.0259)显著高于SGC996组(0.2181±0.0108,P＜0.01).CD133蛋白定位于细胞膜表面,并在GBC-SD细胞中呈强表达.人胆囊癌GBC-SD细胞分选后,CD133+组CD133蛋白表达明显强于CD133-组.CD133+组中CD133+亚群所占比例为(90.4±0.9)％.CD133+组CD133mRNA相对灰度值(0.7734±0.0217)显著高于CD133-组(0.2146 ±0.0174,P＜0.01).CD133+组细胞增殖能力明显强于CD133-组(P＜0.01).经5-Fu(0.1μg/ml)处理后,CD133+组细胞生存率明显高于CD133-组(P＜0.05).单克隆形成实验结果示单个CD133+细胞可形成新的细胞克隆,且CD133+组[(36.25±2.99)％]细胞克隆球形成率高于CD133-组[(4.50±1.29)％,P＜0.01].体内成瘤实验结果示CD133+组与未分选组移植成瘤率分别为100％和60％,而CD133-组不成瘤.结论 免疫磁珠分选系统可成功分离高纯度的胆囊癌CD133+细胞,而且人胆囊癌CD133+细胞具有一定的增殖、耐药、自我更新及致瘤潜能.     

人胆囊癌SP细胞的分离及ABCG2和Oct-4的表达

目的 探索在人胆囊癌细胞系中是否存在具有干细胞特性的SP细胞(side populationcells)以及SP细胞、非SP细胞、GBC-SD细胞系之间在耐药基因ABCG2和胚胎干细胞表面标志Cot-4表达方面的差异性.方法 采用FACS(流式激活细胞分选)技术分选出人胆囊癌SP细胞和非SP细胞.通过RT-PCR、Western blot以及流式技术来检测SP细胞、非SP细胞以及GBC-SD细胞系在ABCG2和Oct-4表达方面的差异情况.结果 人胆囊癌GBC-SD细胞系中存在着具有干细胞潜能的SP细胞.其所占的比例为(0.64±0.08)%,并且ABCG2在胆囊癌SP细胞中呈现出高表达的状态[(89.56±3.86)%],在非SP细胞中几乎不表达[(1.32±0.49)%],两者之间的差异具有统计学意义(P<0.05),在GBC-SD细胞系中呈弱表达[(12.37±1.61)%].Oer-4在三种细胞中的表达分别为:(94.87±1.40)%、(88.16±2.34)%、(90.17±1.61)%,三者之间差异没有统计学意义(P>0.05).结论 人胆囊癌的起源与肿瘤干细胞密切相关并且在胆囊癌细胞系中存在着具有干细胞特性并且高表达耐药基因ABOG2的人胆囊癌SP细胞.     

胆管癌干细胞的分离、培养及鉴定

目的:从人胆管癌细胞系QBC-939中分离具有干细胞特征的肿瘤细胞,为后续胆管癌干细胞的研究提供材料。方法:用无血清培养法及流式细胞分选法从QBC-939细胞中分离得到具有干细胞特征的CD133+Ep CAM~(high)干细胞样细胞,继续在无血清培养基中培养,观察其成球能力,并比较CD133+Ep CAM~(high)干细胞样细胞与QBC-939细胞单克隆形成率、耐药性,增殖能力,干细胞相关核转录因子OCT-4、Bmi-1、E-cadherin蛋白表达情况,以及BALB/c小鼠皮下移植后的成瘤能力。结果:在无血清培养基中,CD133+Ep CAM~(high)干细胞样细胞具有较强的成球能力。与QBC-939细胞比较,CD133+Ep CAM~(high)干细胞样细胞克隆形成率、洛铂耐药性、增殖明显增加;干细胞相关核转录因子OCT-4、Bmi-1表达明显增加,而E-cadherin表达明显降低;皮下移植瘤形成率明显增加。以上差异均有统计学意义(均P0.05)。结论:从人胆管癌QBC-939细胞中分离的干细胞样细胞具有肿瘤干细胞特性,可用于胆管癌干细胞的研究。     

肺腺癌A549细胞CD133~+CD44~+表型在裸鼠体内成瘤能力的研究

目的 探讨肿瘤标志物CD133和CD44的表达与人肺腺癌A549细胞株在裸鼠体内形成肿瘤能力的关系.方法 使用单细胞克隆的方法 ,筛选出能够持续增殖分裂的肿瘤细胞,应用免疫荧光方法 和流式细胞仪检测CD133和CD44在具有增殖分裂能力的A549细胞和普通A549肿瘤细胞的表达情况;按表达结果 对A549细胞进行分组,应用单克隆方法 对各组细胞进行培养,并按不间密度注射于裸鼠皮下,观察各个组别的成瘤能力.结果 (1)在倒置显微镜下观察肿瘤细胞生长情况,发现多数细胞死亡,1周后仅有4.11%的细胞能够增殖分裂形成克隆.(2)具有增殖分裂能力肿瘤细胞的免疫荧光结果 :CD133阳性率为19.0%,CD44阳性率为57.0%;普通A549肿瘤细胞免疫荧光结果 :CD133阳性率为2.5%,CD44阳性率为34.0%;具有分裂增殖能力的肿瘤细胞CD133和CD44阳性表达率显著高于普通A549肿瘤细胞(P<0.01).(3)裸鼠体内成瘤能力实验提示:CD133~+CD44~+(A组)细胞成瘤能力显著高于CD133~-CD44~-(B组)、CD133~-CD44~+(C组)和CD133~+CD44~-(D组)细胞(P<0.05);裸鼠瘤块病理检查证实均为腺癌,各脏器检查未发现转移:在接种CD133~+CD44~+(A组)细胞的瘤块组织中发现除了有CD133~+CD44~+细胞外,还有CD133~-CD44~-细胞.结论 肺腺癌A549细胞株中CD133~+CD44~+细胞在裸鼠体内的成瘤能力显著高于其他细胞.     

人胆囊癌细胞系GBC-SD中侧群细胞的耐药性研究

目的 研究人胆囊细胞系GBC-SD中侧群细胞(side population cells,SP)的耐药特性,并探讨其耐药机制.方法 利用流式细胞术分选SP、非SP细胞,采用MTT检测2种细胞亚群对5种化疗药物吉西他滨、顺铂、5-氟尿嘧啶、表阿霉素、米托蒽醌的药物敏感性;利用流式细胞术检测吉西他滨处理的人胆囊癌细胞系GBC-SD中SP细胞比例的变化,并通过RT-PCR、Western印迹检测SP、非SP细胞亚群中ABCG2 mRNA和蛋白的表达.结果 吉西他滨、顺铂、5-氟尿嘧啶、米托蒽醌以对胆囊癌细胞系GBC-SD的IC50浓度分别作用SP、非SP细胞亚群1 d后,SP细胞的增殖能力高于非SP细胞,两组之间的差异具有统计学意义(P<0.05),而表阿霉素处理水平的两组间差异无统计学意义(P>0.05);人胆囊癌细胞系GBC-SD经过吉西他滨处理3周后,SP细胞的比例显著升高(8.02%±0.13%比0.62%±0.08%,P<0.05),且SP细胞明显高表达ABCG2基因.结论 人胆囊癌细胞系GBC-SD中SP细胞具有类似干细胞的耐药特性,耐药基因ABCG2高表达是其耐药的重要机制.

Abstract：

Objective To investigate the drug resistance of side population cells in human gallbladder cancer cell line GBC-SD and explore its mechanism. Methods Drug sensitivity assays of 5chemotherapeutic agents were performed on side population cells (SP) and non-SP cells of GBC-SD.GBC-SD was cultured and then treated with the chemotherapeutic agent gemcitabine. The frequency of SP by FACS was measured. RT-PCR and Western blotting were used to detect the expression of AB-CG2 in both the SP and the corresponding non-SP subsets. Results After 1 d treatment with 4 chemotherapeutic agents (gemcitabine, cisplatin, 5-fluorouracil and mitoxantrone) in IC50 concentration to GBC-SD cell line, the reproductive ability of SP was higher than that of non-SP (P<0.05). However, statistical significance was not achieved when compared with epirubicin (P>0.05). The percentage of SP in GBC-SD treated with chemotherapeutic agent gemcitabine after 3 weeks was sharply elevated by FACS (8.02% ±0.13% vs 0.62% ±0.08%, P<0.05), and the expression of ABCG2mRNA and protein were increased in SP as compared with non-SP. Conclusion SP from human gallbladder cancer cell line GBC-SD, like stem cell, showed a heighten resistance to drugs. Increased expression of ABCG2 was largely responsible for the multi-drug resistance.     

胆囊癌与肿瘤干细胞关系的研究进展

胆囊癌是胆道系统最常见的恶性肿瘤,其早期诊断率低,患者预后极差.目前关于胆囊癌的发病机制尚未阐明.近年来,关于肿瘤干细胞研究的不断深入,在胆囊癌中,最新的研究证实胆囊癌GBCSD细胞系中分离出了SP细胞.同时,胆囊癌中存在CD133+细胞、CD44+细胞、CD133+ CD44+细胞,并具有克隆形成能力、增生能力、分化能力及成瘤能力.本文就以胆囊癌与肿瘤干细胞关系的研究进展进行综述.     

WNT信号调节前列腺肿瘤中具有干细胞特性细胞的自我更新和分化

在人前列腺肿瘤细胞系中,具有干细胞特性的肿瘤细胞可以在悬浮培养中由单个细胞通过自我更新形成前列腺肿瘤球。肿瘤球表现出不同的增殖、分化能力以及表达于细胞相关标记物cD44、ABCG2和CD133。应用WNT抑制剂可以减小肿瘤球大小以及降低细胞的自我更新能力,相反,添加Wnt3a可以增加肿瘤球的大小以及自我更新能力,     

碱性成纤维细胞生长因子在富集结直肠癌肿瘤干细胞中的作用

目的 研究不同浓度碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）作用于结直肠癌细胞不同时间,富集肿 瘤干细胞的效果。方法? 结直肠癌DLD-1细胞分别在含5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL bFGF的无血清培 养基中悬浮培养,分为G1、G2、G3组,设置培养时间梯度为10 d、20 d、30 d,获得球细胞。采用流式 细胞术（FCM）检测细胞球中的CD44+、CD133+及CD44+CD133+双阳性的细胞表达比例,Real-time PCR 检测球细胞中的干细胞基因（KLF4、Nanog）;上皮间质转化基因（E-cadherin、Snail）;Wnt/β-catenine通路 基因（Wnt-3a）的 mRNA表达情况,成球实验检测细胞球的自我更新能力。结果 FCM检测结果：CD44+ 阳性表达的细胞表达以G2组20 d最高,CD133+及CD44+CD133+双阳性的细胞表达均以G2组20 d及G3 组10 d最高,差异有统计学意义（F=98.895、147.641、13.321,P<0.05）。 Real-time PCR检测结果：各组中 KLF4、Nanog、Snail以及Wnt-3a mRNA的表达均以G2组20 d表达最高（F=2.424、7.694、2.951、3.771, 均P<0.05）, E-cadherin基因G2组20 d mRNA表达最低（G2组30 d、G1组10 d除外）（F=10.620,P<0.05）。 成球实验结果：各组比较G1组20 d和G2组20 d成球数量明显多于其他组,差异具有统计学意义（F=14.279, P<0.01）;但 G1组20 d和G2组20 d比较,无统计学差异（t=0.605,P=0.578）。 结论 碱性成纤维细胞生长 因子无血清悬浮培养能够有效富集肿瘤干细胞,其中G2组培养20 d较其余组能更有效地富集结直肠癌肿 瘤干细胞。     

胃癌CD133阳性细胞的纯化及其生物学特性研究

目的检测人胃癌KATO-Ⅲ、SGC7901、AGS及MKN-45细胞株中CD133基因及蛋白的表达,研究CD133阳性(CD133+)细胞与CD133阴性(CD133-)细胞的生物学特性的差异。方法采用半定量聚合酶链反应及免疫蛋白印迹法分别检测KATO-Ⅲ、SGC7901、AGS及MKN-45细胞株中CD133基因和蛋白的表达;免疫磁珠细胞技术将KATO-Ⅲ细胞株中CD133+和CD133-细胞分离纯化,对比两者生长形态特点、体外增殖能力及分化能力的差异;采用CCK-8法分析CD133+和CD133-细胞对不同浓度(0.05、0.10、0.20、0.50、1.00mg/ml)化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的差别。结果 KATO-Ⅲ细胞中CD133基因及蛋白表达量均明显高于SGC7901、AGS及MKN-45细胞(P<0.05)。CD133+细胞在无血清培养基中呈球形克隆悬浮生长,相比CD133-细胞具有更强的体外增殖能力及潜在分化能力。5-FU耐药性实验中,CD133+细胞在0.50mg/ml浓度下的抑制率较CD133-细胞明显降低(P<0.05),但其他浓度时二者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论人胃癌细胞株KATO-Ⅲ中的CD133+细胞具有一定增殖、分化及耐药潜能,CD133可作为胃肿瘤起始细胞亚群的表面标志之一。     

PIWIL2在人膀胱移行细胞癌肿瘤干细胞样细胞中的表达及意义

目的 研究PIWIL2在人膀胱癌肿瘤干细胞样细胞(CSLC)中的表达和意义,探讨PIWIL2在靶向肿瘤干细胞治疗中的作用.方法 用无血清悬浮培养法从人膀胱移行细胞癌细胞株BIU-87中分离获得悬浮细胞球,流式细胞仪检测细胞表面分子标志CD133和CD44的表达,免疫磁珠分选系统分离CD133+CD44+细胞;分别采用T...     

肝癌SMMC-7721细胞中侧群细胞干细胞标记的表达

目的 分选肝癌细胞株SMMC-7721中的侧群(SP)细胞,并分析其干细胞标记的表达.方法 采用流式细胞荧光激活分选(FACS)技术将SMMC-7721细胞分为SP细胞和非侧群(NSP)细胞两个亚群,以实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)技术和流式细胞术对两个亚群细胞干细胞标记mRNA和蛋白表达进行分析.结果 SMMC-7721细胞株中分选出的SP细胞比例为(9.2±0.2)%.SP细胞ABCG2、CD133、Oct4、Sox2和NANOG等干细胞标记mRNA的表达水平分别是NSP细胞的7.132倍、4.985倍、8.642倍、5.095倍和5.164倍,差异均有统计学意义(P＜0.01);ABCG2、CD133、Oct4、Sox2和NANOG蛋白在肝癌SP细胞中的含量分别为(92.65±3.92)%、(12.75±1.62)%、(17.35±2.31)%、(9.57±1.71)%和(28.39±5.28)%,在NSP细胞中的含量分别为(0.26±0.06)%、(2.51±0.17)%、(1.74±0.38)%、(1.52±0.41)%和(3.37±1.02)%,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 肝癌SMMC-7721细胞中的SP细胞可能富集了肝癌干细胞,联合应用多种干细胞标记筛选肝癌SP细胞可能会获得纯化的肝癌干细胞.

Abstract：

Objective To study the expression of stem cell markers in side population cells sorted from SMMC-7721 cell line. Methods Fluorescence-activated cell sorting (FACS) was used to sort side population (SP) cells and non-SP (NSP) cells from SMMC-7721 cell line. Real-time polymerase chain reaction (PCR) and flow cytometry (FCM) were used to evaluate the expression of several stem cell markers such as ABCG2, CD133, Oct4, Sox2 and NANOG in SP cells and NSP cells. Results FACS analysis indicated that (9.2 ±0. 2)% of the SMMC-7721 cells were SP cells. Real-time PCR analysis suggested that ABCG2, CD133, Oct4, Sox2 and NANOG were expressed in the SP cells at higher levels than the NSP cells by about 7. 132, 4. 985, 8. 642, 5.095 and 5. 164 folds, respectively ( P ＜0. 01 ). FCM analysis revealed that the expression of ABCG2, CD133, Oct4, Sox2 and NANOG proteins in SP cells was (92. 65 ±3.92)%, (12.75 ±1.62)%, (17.35 ±2.31)%, (9.57 ± 1.71)% and (28.39 ±5.28)% respectively,while in NSP cells that was (0. 26 ±0. 06)%, (2. 51 ±0. 17)%, ( 1.74 ±0. 38)%, ( 1.52 ±0. 41 )% and ( 3.37 ± 1.02) % respectively ( P ＜ 0. 01 ). Conclusion The SP cells sorted from SMMC-7721 cell line may enrich tumor stem cells. Purified liver cancer stem cells may be obtained by screening SP cells using a variety of stem cell markers.     

体外稳定表达DMBT1胆囊癌细胞株GBC-SD的建立及其特性

目的 建立稳定表达脑恶性肿瘤缺失基因1(DMBTl)的胆囊癌细胞株GBC-SD,研究其增殖特点.方法 将DMBTl全长表达质粒以脂质体为介导转染胆囊癌细胞株GBC-SD,G418筛选阳性克隆5～6周,免疫组织化学、Western blot及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测DMBT1蛋白及mRNA表达,噻唑蓝(MTT)绘制生存曲线及、血清下测细胞生存抑制率及免疫荧光观察细胞凋亡.结果 稳定转染后,实验组DMBT1蛋白相对表达量为0.82±0.11,对照组为0.24±0.03,实验组mRNA相对表达量为0.87±0.12,对照组为0.29±0.03,差异均有统计学意义(P<0.01);实验组无明显对数生长期且较早进入衰亡期,在无血清培基中增殖抑制率随时间增高,72 h达(43.3±5.0)%;实验组无血清培基中凋亡率达(22.0±2.5)%,对照组(7.0±1.1)%,差异有统计学意义(P<0.01).结论 成功在体外建立稳定表达DMBT1的胆囊癌细胞株,DMBT1在体外抑制胆囊癌细胞增殖,无血清下诱导其凋亡.     

Differentiation of CD133-positive pancreatic cells into insulin-producing islet-like cell clusters

Adult pancreatic stem and progenitor cells could represent an alternative source of insulin-producing tissue for diabetes treatment. In order to identify these cells, we have focused on the human pancreatic cells expressing cell surface molecule CD133, a marker of adult stem cells. We found that population of human CD133-positive pancreatic cells contains endocrine progenitors expressing neurogenin-3 and cells expressing human telomerase, ABCG2, Oct-3/4, Nanog, and Rex-1, markers of pluripotent stem cells. These cells were able to differentiate into insulin-producing cells in vitro and secreted C-peptide in a glucose-dependent manner. Based on our results, we suppose that the CD133 molecule represents another cell surface marker suitable for identification and isolation of pancreatic endocrine progenitors.     

细胞株源人前列腺肿瘤干细胞的分选与鉴定

目的:论证人前列腺癌(prostate cancer,PCa)细胞株中是否存在干细胞亚群。方法:分别用免疫表型法和侧群(side population,SP)细胞法从5种人PCa细胞株(Du145、IA8、LNCaP、TSU-PrL和PC-3)中富集类干细胞,再应用软琼脂克隆形成试验初步验证类干细胞亚群的体外生长方式及成瘤能力。选择LNCaP源SP细胞(LNCaP/SP),依次采用免疫细胞化学技术、Transwell、MTT以及裸鼠致瘤试验,分别检测其干细胞标记物的表达情况、鉴定其体外增殖和侵袭能力以及动物体内的致瘤和转移潜能。结果:5种细胞株中均难以分选出免疫表型为CD133+CD44+的细胞亚群。除PC-3外,其余4株细胞可分选出呈现典型克隆性生长特点的SP细胞。体外克隆形成率在IA8、LNCaP和TSU-PrL源SP细胞与非侧群(non-side population,NSP)细胞间有显著性差异(P<0.05)。与LNCaP/NSP相比,LNCaP/SP的体外增殖和侵袭能力显著增强,同时阳性表达整合素α2、Nanog、CD44、OCT4以及ABCG2等5种干细胞标记物。而且,LNCaP/SP的皮下成瘤率、骨转移率及瘤体体积亦显著高于LNCaP/NSP(P<0.01)。结论:SP分选法更适合富集人PCa细胞株中类干细胞,LNCaP/SP细胞是PCa细胞株LNCaP中的肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)。     

大鼠胚胎肝干细胞的分离、鉴定及转染绿色荧光蛋白基因的研究

目的 分离、培养大鼠胚胎肝干细胞,检测肝干细胞表面标志CD49f,c-Met,建立携带示踪标记的大鼠肝干细胞.方法 Percoll梯度离心法分离孕14 d大鼠胚胎肝细胞,体外培养后采用流式细胞术(FACS)检测CIM9f和c-Met,pAcGFP1-N1质粒提取并经电泳鉴定后用脂质体法转染细胞.结果 成功分离并纯化了孕14 d大鼠胚胎肝细胞;CIM9f和c-Met阳性细胞的比例分别为65.0%和85.9%;电泳鉴定质粒正确,成功转染细胞后荧光显微镜观察到大量表达绿色荧光蛋白(GFP)的肝干细胞.结论 从孕14 d大鼠胎肝中成功分离并鉴定肝干细胞,成功转染pAeGFP1-N1质粒,建立携带稳定表达GFP示踪标记的大鼠肝干细胞.     

人膀胱癌组织中肿瘤干细胞样细胞的分离培养及PIWIL2表达

目的从人膀胱移行细胞癌（BTCC）组织中分离培养肿瘤干细胞样细胞（CSLC）,鉴定其生物学特性,并研究PIWIL2在CSLC中的表达和意义。方法收集12例不同临床分期BTCC患者组织标本,通过酶消化和原代培养相结合等方法处理,采用无血清悬浮培养法分离培养获得含CSLC的悬浮细胞球,流式细胞仪检测细胞表面分子标志CD133和CD44的表达,免疫磁珠分选系统分离CD133＋CD44＋细胞;采用半定量逆转录聚合酶链反应检测PIWIL2mRNA在CSLC中的表达;裸鼠皮下接种CS-LC,观察其成瘤能力。结果成功地从人膀胱癌组织分离培养获得可悬浮生长、稳定传代的CSLC,CSLC高表达CD133和CD44,裸鼠皮下接种1×104、1×105个CSLC均可全部成瘤,PIWIL2mRNA在CSLC的表达显著高于正常膀胱组织细胞。结论采用无血清悬浮培养法成功从人膀胱癌组织中分离获得CSLC,具有肿瘤干细胞特性,能高度表达PIWIL2,为靶向肿瘤干细胞的治疗提供了实验依据。