免疫缺陷小鼠肿瘤模型的建立及其肿瘤相关免疫机制的探讨

目的　观察不同免疫缺陷小鼠中的人肝癌细胞生长情况以及 T,B淋巴细胞的免疫作用 ,探讨免疫缺陷小鼠肿瘤模型制作的意义 .方法　将体外培养的人肝癌细胞接种到四种免疫缺陷小鼠 ,分别为 :B细胞缺陷的 CBA/N,T细胞缺陷的 BAL B/c- nu,T,B细胞缺陷的 SCID及免疫重建的 SCID小鼠 ,观察其生长特点 ;作鼠脾细胞毒试验 ,测定外周血 CD4 + ,CD8+ 数分数和荷瘤鼠血清 Ig含量的变化 ;作肝癌细胞凝集试验 .结果　 CBA/N和用 BAL B/c鼠外周血淋巴细胞重建的 SCID(B- PBL- SCID)鼠不成瘤 ,nude,SCID和用 CBA/N鼠外周血淋巴细胞重建的 SCID (C- PBL - SCID)小鼠全部成瘤 ;SCID鼠的瘤体比裸鼠瘤体长的更快 ,肝内接种转移率更高、转移范围更大 .接种瘤细胞的 BAL B/c和 CBA/N鼠脾细胞对癌细胞杀伤力较强 ,免疫重建的 SCID鼠脾细胞毒杀伤较小 .接种瘤细胞的鼠 CD4 +数分数都下降 ,CD8+变化不大 ,CD4 + /CD8+比值下降 .具有 B细胞的实验鼠均测得 Ig在 mg· L- 1 水平 ,并能使癌细胞产生凝集反应 .结论　 SCID鼠是建立肿瘤模型和免疫重建研究的理想小鼠 ;小鼠成瘤率与 T细胞相关 ,T细胞在异种瘤移植排斥中起主要作用 ;B淋巴细胞及其产生的抗体在抗肿瘤中起着不可忽视的作用     

小鼠免疫力对接种人类肝癌细胞系9724生长的影响

目的 探讨不同免疫力小鼠的免疫细胞对人类肝癌细胞系9724生长的影响及异种特异性细胞毒杀伤能力。方法 将培养后的人类肝癌细胞系接种到不同免疫力小鼠（免疫正常的BALB／c,B缺陷的CBA／N,T缺陷的BALB/c nude及T,B缺陷的C.B－17 SICD小鼠）右后臀皮下,观察其生长;取实验和相应的正常鼠脾细胞进行细胞毒杀伤试验。结果 BALB/c和CAB／N小鼠不成瘤;BALB/c nude和C.B－17 SCID小鼠100％成瘤;SCID免疫重建组用BALB/c外周淋巴细胞重建SCID（BALB/c－PBL－SCID）的不成瘤,用CAB／N外周淋巴细胞重建的SCID（CBA／N－PBL－SCID）成瘤,接种过瘤的BALB/c和CBA／N小鼠脾细胞对癌细胞有较强的细胞毒杀作用,对照组和nude,SCID小鼠无杀伤作用;SCID免疫重建有较小的杀伤作用。结论 T细胞在异种瘤移植排斥中起主要的免疫杀伤作用,这种排斥是异种特异笥的;肿瘤免疫需要综合性免疫作用。     

人肝癌细胞在不同免疫缺陷小鼠中的生长特点

为探讨人类肝癌细胞9724在不同免疫缺陷小鼠的生长特点,将体外培养人类肝癌细胞9724接咱不同免疫力小鼠（B细胞缺陷的CBA/N,T细胞缺陷的BALB/c-nu,T、B细胞缺陷的SICD小鼠及免疫重建的SCID小鼠,免疫正常的BALB/c小鼠作为对照组）皮下、肝内、腹腔,观察其生长特性。结果是BALB/c小鼠和用BALB/c小鼠外周淋巴细胞免疫重建的SCID（B-PBL-SCID)小鼠不成瘤;CBA/N小鼠随种数量和途径不同而有不同的表现;裸小鼠、SCID小鼠和用CBA/N小鼠外周淋巴细胞重建的SCID（C-PBL-SCID）小鼠100%成瘤。提示SCID小鼠是建立肝癌模型的最佳小鼠,也是进行肿瘤免疫研究的最佳模型动物;T细胞在异种瘤移植排斥中起主要作用。     

人肝癌细胞系9724在不同免疫缺陷小鼠中的增殖特点

目的 探讨人类肝癌细胞9724在不同免疫缺陷小鼠的生长及模型特点。方法 体外培养人类肝癌细胞9724；按种到不同免疫力小鼠（B缺陷的CBA／N，T缺陷的BALB／c裸鼠，T，B缺陷的C.B-17 SICD小鼠及免疫重建的SCID小鼠。免疫正常的BALB／c作为对照组）皮下、肝内、腹腔，观察其生长特性。结果 BALB／c小鼠和用BALB／c外周淋巴细胞免疫重建的SCID（BALB／c-PBL-SCID)不成瘤；CBA/N小鼠随接种数量和途径不同而有不同的表现；BALB／c裸鼠，SCID小鼠和CBA／N小鼠外周淋巴细胞重建的SCID（CBA／N－PBL－SCID）100％成瘤。结论 SCID小鼠是建立肝癌模型的最佳小鼠，也是进行肿瘤免疫研究最佳模型动物；T细胞在异种瘤移植排斥中起主要作用。     

人肝癌细胞在免疫重建前后SCID小鼠中的生长特点

目的 探讨SCID小鼠免疫重建及免疫对人肝癌细胞成瘤的影响。方法 体外培养人肝癌细胞系，接种到SCID小鼠和用BALB／c,CBA/N小鼠外周血淋巴细胞重建的SCID（B－PBL－SCID和C－PBL－SCID）小鼠皮下；监测成瘤状态，测定鼠脾细胞毒杀伤力和免疫重建的免疫球蛋白量，作血清与靶细胞凝集实验。结果 免疫重建体现了所用小鼠免疫对肿瘤的排斥特点，免疫重建成功；SCID和C－PBL－SCID小鼠100％成瘤（两瘤体相比P＜0．01），B－PBL－SCID出现瘤体后逐渐消失；B－PBL－SCID和C－PBL－SCID脾细胞对靶细胞有一定的杀伤力，B－PBL－SCID的血清能与靶细胞产生凝集反应。结论 SCID是建立肿瘤模型和肿瘤免疫研究的良好动物；肝癌细胞在小鼠体内的成瘤率与T，B细胞免疫有关。     

hu-PBL-SCID小鼠体内人淋巴细胞状况及其对人肺癌移植瘤转移的影响

将人外周血淋巴细胞经腹腔移植于T、B细胞严重联合免疫缺陷的SCID小鼠后,成功地建立了hu - PBL- SCID小鼠模型。在移植后4 周,其小鼠血清中存在人免疫球蛋白,其脾淋巴细胞中,所检测的8 种免疫表型人淋巴细胞亚群均存在,表明人淋巴细胞在SCID小鼠体内出现了增殖或重建。但hu- PBL- SCID小鼠及未免疫重建的SCID小鼠体内人肺巨细胞癌PLA- 801DL的生长及转移情况未见明显差异,提示hu- PBL- SCID小鼠体内的人淋巴细胞不具有明显的抗肿瘤活性。     

免疫重建荷人卵巢癌-严重联合免疫缺陷小鼠模型的建立

目的:为研究卵巢癌的免疫治疗方法构建合适的动物模型.方法:严重联合免疫缺陷(severe combined immunodeficiency,SCID)小鼠皮下接种人卵巢癌细胞系SKOV3,同时腹腔注射人脾或外周血淋巴细胞进行免疫功能重建.观察成瘤情况;并用ELISA法检测鼠血清中人IgG含量以及流式细胞学和ABC免疫组织化学法测定鼠脾内人T细胞表型鉴定免疫重建.结果:免疫重建的小鼠成瘤率为89.6%,免疫组化证实皮下瘤保持原细胞系特征.3种方法检测发现用人外周血淋巴细胞免疫重建的效果优于用脾淋巴细胞.结论:免疫重建的荷人卵巢癌-SCID小鼠模型已初步建立成功.     

hu-PBL-SCID人鼠嵌合体细胞免疫的建立及其免疫功能检测

目的：探讨腹腔注射人外周血CD4＋T淋巴细胞后,SCID小鼠能否重建人的细胞免疫系统,并观察重建后免疫系统的特点与功能。方法：从人外周血分离得到CD4+T淋巴细胞,腹腔注射至SCID小鼠体内,并予以rIL-2刺激。注射细胞6周后,分批处死动物,用PCR和免疫组织化学法分别观察SCID小鼠是否表达人的淋巴细胞DNA 及其T,B淋巴细胞表型;移植异种移植物后测定血浆中人IL-2,TNF-α,INF-γ含量。结果：腹腔注射人外周血CD4+T淋巴细胞后, SCID小鼠脾脏体积增大;外周血PCR扩增可见人淋巴细胞HLA-II恒定区DNA片段;肝、脾免疫组织化学染色可见到大量的人CD4+T淋巴细胞,而没有CD8＋,CD19＋T淋巴细胞;移植后重建SCID小鼠血清中可检测到人IL-2,INF-γ。结论：腹腔注射人外周血CD4+T淋巴细胞可选择性重建SCID小鼠人细胞免疫系统;方法简单、迅速、供体来源广。     

人免疫重建NOD/SCID小鼠模型的建立

目的探讨NOD/SCID（nonobese diabetic/severe combined immunodeficien）t小鼠人免疫重建模型的建立方法和免疫特性.方法 16只NOD/SCID小鼠随机分成实验组和对照组,每组8只.Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,通过腹腔注射移植给实验组小鼠,空白对照组小鼠每只腹腔注射无菌PBS,第4、8和12周时,流式细胞术检测小鼠外周血中人的CD3＋T、CD19＋B淋巴细胞,ELISA法测定小鼠血清中人IgG含量,免疫组织化学染色检测小鼠脾脏和肝脏中人CD3＋T、CD19＋B淋巴细胞浸润情况.结果移植PBMC 4周后,实验组NOD/SCID小鼠外周血中人CD3＋T、CD19＋B的细胞分别为85.6%、76.7%,并且在小鼠脾脏组织中也可以检测到人CD3 T、CD19 B淋巴细胞.移植4、8及12周后小鼠血清中人IgG含量分别达到（863±12.5）μg/mL、（1217±16.7）μg/mL、（958±13.1）μg/mL.结论用人外周血PBMC经腹腔注射可以成功建立人免疫重建NOD/SCID小鼠模型,方法简便可靠.     

三种酶联免疫吸附法筛选"渗漏"型SCID小鼠的比较

SCID(severe combined immunodeficiency)小鼠是一种严重联合免疫缺陷动物,在繁育过程中可能出现"渗漏"现象,即部分小鼠出现低水平的功能性T和B细胞,血清中Ig含量明显升高.在用SCID小鼠进行肿瘤或免疫学实验时,通常用酶联免疫吸附法(ELISA)测定鼠血清中总Ig含量来判断小鼠是否渗漏.一般要求Ig＜1 mg.L-1用作实验.IgG占总Ig的80%以上,可反映总Ig含量.本文比较了3种ELISA法测定SCID小鼠、BALB/c裸小鼠及BALB/c小鼠血清IgG含量的效果.     

重度联合免疫缺陷小鼠的繁育及其应用初报

应用带过滤罩的透明鼠在层流柜内繁育Ｔ和Ｂ淋巴细胞缺失的重度联合免疫缺陷（ｓｃｉｄ）小鼠获得成功，１９９３年５月至１９９４年４月，共繁育ｓｃｉｄ小鼠２２１只，寿命均超过１２个月。平均每窝产仔数为５．５只，显著低于对照组ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，不育率为１４．９％，离乳率为８８．２％，与ＢＡＬＢ／ｃ小鼠相比均无明显差异。ｓｃｉｄ小鼠４～１０周龄的体重与同龄ＢＡＬＢ／ｃ小鼠相比无明显差异，微生物学检测均符合ＳＰ     

人免疫重建荷人人乳头瘤病毒16阳性宫颈癌-严重联合免疫缺陷鼠模型的建立及其免疫学特性研究

目的　建立人免疫重建荷人人乳头瘤病毒 (HPV) 16阳性宫颈癌 严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠模型并研究其免疫学特性。方法　对SCID鼠腹腔注射人外周血淋巴细胞 (hu PBL)后2 4h ,皮下接种HPV16阳性的人宫颈癌细胞株SiHa细胞建立人免疫重建荷人HPV16阳性宫颈癌SCID鼠模型 ,观察荷瘤鼠的一般生物学特性、异种移植物抗宿主病 (XGVHD)情况 ,检测血清中人IgG含量、外周血和脾中人CD3 、CD4 和CD8 T细胞、脾重、肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)以及脾细胞毒杀伤功能。结果　免疫重建的小鼠成瘤率为 10 0 %。未发现异种移植物抗宿主反应。荷瘤第 5天 ,血浆中人IgG水平人化组 (0 98μg/ml± 0 2 0 μg/ml)、人化荷瘤组 (1 39μg/ml± 0 2 5 μg/ml)均显著高于空白组 (0 2 0 μg/ml± 0 11μg/ml) (t=7 6 5 5、9 937,均P =0 0 0 0 ) ,人化荷瘤组显著高于人化组 (t=3 2 0 0 ,P =0 0 0 6 ) ,荷瘤组与空白组比较差异无显著意义 (t=0 0 90 ,P =0 930 )。 30d内免疫重建组血浆中人IgG水平随重建时间延长而升高 ,与未人化组比显著升高 (P <0 0 5 )。外周血和脾中人CD3 ,CD4 和CD8 T细胞均显著升高 (P <0 0 5 ) ,脾重显著增加 (P <0 0 5 )。组织学观察到移植瘤局部TIL浸润并经免疫组织化学检测到人CD4 T细胞     

重组人血管内皮抑制素注射液联合放射对鼻咽癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用

目的:观察分析重组人血管内皮抑制素注射液(Endostar,恩度)对鼻咽癌裸鼠皮下移植瘤有无放射增敏作用.方法:以CNE1细胞株建立移植瘤裸鼠模型,每4天测量空白对照组(A组)、单纯恩度用药组(B组)、单纯放射组(C组)、恩度+放射联合组(D组)肿瘤的直径,计算肿瘤体积、预期值/观察值(E/O),称取瘤重,计算肿瘤抑瘤...     

裸小鼠淋巴结的解剖和组织学特点

目的 研究裸小鼠淋巴结的解剖学和组织学特点。方法 使用手术显微镜解剖20只BALB/c裸小鼠和20只BALB/c小鼠,通过免疫组织化学方法比较了两者淋巴结中T淋巴细胞和B淋巴细胞表达的不同。结果 平均每只裸小鼠中包含23个淋巴结和一组大型淋巴结群。裸小鼠颈部淋巴结分布密度较高,其中颌下淋巴结及颈浅淋巴结在裸小鼠中大多数为2个(构成比分别为95%和90%),而在小鼠中大多数为4个(构成比分别为95%和90%),两者差异有统计学意义。无论小鼠还是裸小鼠的颈深淋巴结均为2个(构成比分别为100%和95%),两者差异无统计学意义。裸小鼠淋巴结中CD₃阳性的T淋巴细胞减少。细胞膜和细胞质着色的CD₃阳性表达的T细胞在裸小鼠的表达阳性率为15%,在小鼠的表达阳性率为100%,两者表达的差异有统计学意义。细胞膜阳性表达CD₂₀的B细胞在裸小鼠中的阳性率为95%,在小鼠中的阳性率为100%,两者表达的差异无统计学意义。结论 裸小鼠淋巴结分布的解剖图对于初学者有一定的帮助,裸小鼠颈部淋巴结密度较高的解剖学特点和缺乏CD₃阳性的T淋巴细胞将有助于更好地理解裸小鼠的淋巴结转移机制。     

人眼眶横纹肌肉瘤动物模型的建立

目的:探讨建立人眼眶横纹肌肉瘤动物模型的方法. 方法:培养人胚胎型横纹肌肉瘤细胞株RD细胞,取对数生长期细胞分别接种于4周龄SCID鼠和60Co照射 (1 Gy) 后1 d 的BALB/c裸小鼠;选用成瘤BALB/c裸小鼠的瘤块移植入另一批4周龄BALB/c裸小鼠胁部皮下(组织块接种法).观察各组动物肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线;肿瘤组织行常规病理H-E染色并镜检. 结果:60Co照射后1 d裸小鼠成瘤时间约6～8周,SCID鼠组约3～4周,组织块接种法移植2周后裸小鼠瘤体较明显,3组动物的成瘤率均为100%;成功绘制出肿瘤生长曲线,肿瘤均呈进行性生长;病理检查示各组移植性横纹肌肉瘤与人体肿瘤标本所见类似.结论:成功建立了裸小鼠和SCID鼠人眼眶横纹肌肉瘤模型,组织块接种法可以缩短BALB/c裸小鼠成瘤时间,为进一步研究人眼眶横纹肌肉瘤奠定了基础.     

BALB/c荧光裸鼠脾脏组织学的观察

目的 探讨不同日龄阶段BALB/c荧光裸鼠脾脏组织学变化;以及与BALB/c普通裸鼠脾脏组织学的差异。 方法 取不同日龄（14日龄、28日龄、49日龄、70日龄）BALB/c荧光裸鼠及BALB/c普通裸鼠各32只,雌雄各半,处死取脾脏,对脾脏的绝对重量、脾脏指数进行测量分析,对脾脏的组织学改变进行观察,并对脾脏淋巴细胞数进行统计分析。 结果 与14日龄荧光裸鼠相比,28日龄荧光裸鼠脾脏指数明显较高（p<0.05）。与14日龄荧光裸鼠相比,49日龄、70日龄荧光裸鼠淋巴细胞数明显变少（p<0.05）。与普通裸鼠（14日龄、28日龄、49日龄、70日龄）相比较,相同日龄荧光裸鼠（14日龄、28日龄、49日龄、70日龄）淋巴细胞数明显减少（p<0.05）。 结论 GFP基因对不同日龄荧光裸鼠的脾脏发育及其功能有一定影响。     

免疫重建荷人卵巢癌严重联合免疫缺陷鼠腹腔移植模型的建立

目的：建立免疫重建的荷人卵巢小鼠腹腔移植模型。方法：用人外周血淋巴细胞（PBL悬液腹腔注射建立有免疫功能的严重联合免疫缺陷（SCID）鼠模型3只;用人PBL和人卵巢癌细胞株SKOV3细胞腹腔注射建立免疫重建荷人卵巢癌SKOV3 SCID鼠模型3只,观察其生物学、免疫学特性。结果：每组免疫重建小鼠成瘤比例为3／3。免疫重建均检测到人IgG 存在,与未重建组比较差异有显著意义（P＜0．05）;免疫重建荷瘤鼠主要成瘤在腹腔,分布于肝下素、腹膜、横膈、肠系膜等部位,与未重建组比较,成瘤减少;原代移植瘤细胞形态、CA125表达与SKOV3细胞相似,但透射电镜观察到早期细胞凋亡表现;组织学观察到成片淋巴细胞浸润。结论：免疫重建荷人卵巢癌SCID鼠腹腔移植模型已初步建立,本模型较好地模拟了在免疫功能情况下人卵巢癌腹腔播散的生物学行为,为卵巢癌治疗的临床前研究提供了较理想动物模型。