BMP-2在成年大鼠脑内SVZa-RMS-OB通路中的表达

目的 明确BMP-2在成年大鼠脑内,SVZa、RMS、OB 3个不同区域内的表达模式.方法 用RT-PCR和免疫荧光染色的方法观察成年大鼠SVZa、RMS、OB 3个区域BMP-2的表达情况.结果 RT-PCR检测在成年大鼠脑内SVZa、RMS、OB 3个区域BMP-2的mRNA均有不同程度的表达,其中OB区表达最高;免疫组化显示BMP-2蛋白在OB区表达也最高,但在SVZa区表达次之,RMS区表达最低.结论 确立BMP-2在成年大鼠SVZa、RMS、OB 3个区域的表达模式,提示BMP-2可能对成年SVZa神经干细胞的增殖和定向分化起到一定的调节作用.     

细胞因子信号抑制因子-2在成年大鼠喙侧神经干细胞迁移流通道的表达

目的明确SOCS2在成年大鼠脑内喙侧神经干细胞迁移流内的表达模式1方法用RT-PCR和原位杂交组织化学技术观察SOCS2在成年大鼠喙侧神经干细胞迁移流的SVZa、RMS、OB 3个区域的表达情况.结果成年大鼠脑内SVZa、RMS、OB 3个区域SOCS2均有不同程度的表达,且在这3个部位中SOCS2在OB区表达最强,在SVZa表达次之,RMS表达较弱.结论SOCS2在成年大鼠SVZa、RMS、OB 3个区域均有表达但强度不同,提示SOCS2可能对成年SVZa神经干细胞的发育、迁移和定向分化起到一定的调节作用.     

Nestin、Wnt1和β-catenin在小鼠SVZa-RMS-OB通路的表达

目的:研究Nestin、Wnt1和β-catenin在小鼠SVZa-RMS-OB通路的表达情况. 方法:取P0昆明小鼠全脑组织,冰冻切片,切片厚度为20μm,行免疫荧光双标检测Nestin和Wnt1在小鼠SVZa-RMS-OB通路的表达情况,行免疫荧光单标检测β-catenin小鼠SVZa-RMS-OB通路的表达情况. 结果:Nestin在SVZa表达最高,在OB表达最低,在RMS表达介于SVZa和OB之间;Wnt1在OB表达最高,在RMS表达最低,在SVZa的表达介于OB和RMS之间;β-catenin在SVZa表达最高,在OB表达最低,在RMS表达介于SVZa和OB之间. 结论:随着SVZa神经干细胞从SVZa向OB迁移,Nestin和β-catenin表达逐渐减低;Wnt1在迁移终点OB高表达,在RMS迁移途中表达最低;Nestin、Wnt1和β-catenin在小鼠SVZa-RMS-OB通路的不同表达可能与SVZa神经干细胞增殖、分化有关.     

Id2在三碘甲状腺氨酸调节大鼠室管膜前下区神经干细胞分化中的作用

目的 探讨三碘甲状腺氨酸(triiodothyronine,T3)对大鼠室管膜前下区(anterior subventrieular zone,SVZa)神经下细胞(neural stem cells,NSCs)分化为少突胶质细胞的影响及转录因子Id2的表达变化.方法 离体培养新生大鼠SVZa来源的NSCs,应用免疫细胞化学技术观察加入T3后对NSCs分化细胞种类、比例的影响,以及不同分化时间Id2表达的变化情况.结果 在正常自然培养的未分化NSCs中ld2表达较强,分化2h和12h时表达较弱,随后逐渐增强.加入T3后,细胞分化加速,Id2表达较对照组高(P<0.05),但此时少突胶质细胞数甚增多,而星形胶质细胞数量减少.结论 T3可能通过增加Id2的表达从而促进体外培养的SVZa NSCs向少突胶质细胞分化,而抑制其向星形胶质细胞分化.     

Id2在SVZa神经干细胞向神经元分化中的作用

目的研究DNA结合抑制物2(inhibitor of DNA binding2,Id2)在室管膜前下区(anteriorsubventricularzone,SVZa)神经干细胞向神经元分化中的作用。方法体外分离培养P0昆明小鼠SVZa神经干细胞,正义Id2、反义Id2真核表达质粒转染SVZa神经干细胞,采用流式细胞仪检测在Id2作用下SVZa神经干细胞分化为神经元的比例。采用Western blot检测不同浓度的骨形成蛋白2(bonemorphogenenticprotein2,BMP2)诱导下Id2蛋白的表达变化。结果正义Id2真核表达质粒转染组,SVZa神经干细胞分化为神经元的比例小于空白对照组,反义Id2真核表达质粒转染组,SVZa神经干细胞分化为神经元的比例明显高于空白对照组;随着BMP2浓度的增加,Id2的表达增加。结论Id2抑制体外培养的P0SVZa神经干细胞向神经元方向分化,BMP2可以促进SVZa神经干细胞Id2的表达,它们共同参与调控SVZa神经干细胞向神经元分化的过程。     

高密度Oligo基因芯片筛选小鼠嗅球发育相关基因的研究

目的研究小鼠嗅球发育相关基因表达谱,探讨嗅球(olfactory bulb,OB)在室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞的迁移及分化中的作用.方法采用16 500点的小鼠高密度Oligo基因芯片对胚胎16 d(embryonic day 16,E16)、生后1 d(postnatal day 1,P1)、7 d(P7)、21 d(P21)OB的基因表达情况进行检测,以4个时相点全脑等量混合样品作为对照.结果通过筛选基因表达谱,得到5 277条在E16、P1、P7及P21 OB中均有表达的基因,然后采用两两对比组合,得到6组数据,从中筛选出了581个差异在3倍以上的基因,分层聚类分析将其分为6大类,进一步分析了与SVZa区神经干细胞的迁移相关基因Slit2聚类同组的28个基因及与多巴胺神经元分化相关基因TH聚类同组的17个基因.结论在小鼠嗅球发育中发现了581条表达差异≥3倍的基因,进一步通过对与Slit2相关的28个基因及与TH相关的17个基因的分析有助于揭示SVZa神经干细胞迁移及向多巴胺神经元分化的作用机制.     

DNA结合抑制因子2在成年大鼠脊髓表达的研究

目的 探讨螺旋环螺旋基因家族(helix-loop-helix,HLH)成员DNA结合抑制因子2(inhibitor of DNA binding 2,Id2)在大鼠脊髓中的表达.方法 Zambonis液灌注固定大鼠脊髓组织,切片进行免疫组织化学(ABC法)染色.结果 Id2免疫阳性细胞在脊髓中广泛分布,在Ⅰ～Ⅲ板层及Ⅸ板层Id2主要在细胞核表达,细胞质表达少.Ⅳ～Ⅷ板层细胞质及细胞核均有Id2表达.从Ⅳ到Ⅷ板层,Id2细胞质阳性细胞体积逐渐增大,染色较深.结论 Id2广泛分布在大鼠脊髓灰质各个板层,不同板层中Id2的细胞定位不同,可能分布于不同类型的细胞中.     

胰岛素受体及胰岛素受体底物-1、2在大鼠脑中的分布

目的观察胰岛素受体(insulin receptor,InsR)及胰岛素受体底物-1、2(insulin receptor substrate-1、2,IRS-1、2)在正常成年大鼠大脑中的分布,为脑内胰岛素信号传导途径的研究提供理论依据.方法应用免疫组织化学染色的方法观察正常成年大鼠脑中InsR、IRS-1、IRS-2的分布.结果InsR、IRS-1、IRS-2在正常成年大鼠脑中广泛分布,在与学习记忆和能量代谢相关的脑区如大脑皮质、海马、丘脑和下丘脑的部分核团均有表达.结论InsR及IRS-1、IRS-2在正常成年大鼠脑中广泛表达,但表达部位不完全一致,提示它们在大鼠中枢神经系统的正常功能活动中可能发挥不同的作用.     

在大鼠脑发育过程中Cdk5激活剂(p39)mRNA的表达

【目的】探讨Cdk5的2种激活剂p35和p39在脑发育过程中的不同表达。【方法】用Northern blot法和原位杂交法检测p39在50只大鼠脑发育过程的表达。【结果】Northern blot显示,在15天胚胎和新生大鼠脑中,p39表达较低,出生后1～3周表达最显著,到成年大鼠脑,表达降低到与新生大鼠脑相同的水平。原位杂交法显示,p39的mRNA在新生大鼠脑的所有区域神经元中的表达很弱,而在3周龄大鼠脑的所有区域转录水平最高,到成年大鼠脑,在大多数神经元中表达都降低,除小脑浦肯野细胞和颗粒细胞还保持着高水平的表达。【结论】结果表明,在大鼠脑发育的不同阶段,p39与以往发表的p35表达结果在空间上和时间上有不同的表达,它们可能在不同的脑区域中起着不同的作用。     

NG2胶质细胞在成年大鼠脑内的分布及形态特征

目的 研究NG2胶质细胞在成年大鼠脑内的分布及形态差异.方法 应用免疫组化SABC法,观察成年大鼠大脑皮质、海马、齿状回、丘脑、下丘脑等区域NG2免疫反应阳性细胞.采用Image-Pro Plus 5.0图像分析软件计数单位面积阳性细胞数量,并进行统计学分析.结果 NG2胶质细胞在成年大鼠多个脑区均有表达,其中大脑皮质的灰质、白质,海马、齿状回,丘脑室下区、下丘脑室周区等区域表达比较集中.成年脑内NG2胶质细胞突起丰富、有较多分支,细胞体呈星形但是在各脑区形态不完全一致.结论 NG2细胞是成年脑内另一类特殊胶质细胞,数量较多且一部分脑区集中表达.     

BMP2在SVZa神经干细胞向GABA能神经元分化中的调控作用

目的 研究BMP2在SVZa神经干细胞向γ-氨基丁酸(GABA)能神经元分化中的调控作用.方法 体外分离培养P0昆明小鼠室管膜下区(SVZa)神经干细胞,纯化传代培养3代后,使用不同浓度BMP2诱导SVZa神经干细胞,采用流式细胞仪检测不同浓度BMP2作用下SVZa神经干细胞分化为GABA能神经元的比例;另外利用活体荧光GFP标记GAD67特异性启动子,动态地研究BMP2在SVZa神经干细胞向GABA能神经元分化中的作用.在此基础之上,采用RT-PCR检测不同浓度BMP2作用下Mash1的表达.结果 不同浓度BMP2作用组分化为GABA能神经元的比例均高于空白对照组,10 ng/ml浓度的BMP2组比例最高;10 ng/ml浓度BMP2组,GAD67-GFP标记阳性细胞数目明显高于对照组;10 ng/ml浓度BMP2组Mash1表达高于其他组.结论 BMP2促进SVZa神经干细胞向GABA能神经元的分化;10 ng/ml浓度的BMP2显著促进Mash1的表达.     

大鼠体内有机阴离子转运多肽2表达的年龄特征

目的：研究正常大鼠脑、肝内有机阴离子转运多肽2（Oatp2）表达的年龄特征．方法：选择健康成年、生后20d（P20）和3d（P3）的Wistar大鼠各12只,雌雄各半．取脑、肝组织,免疫组化及RT—PCR分别检测Oatp2蛋白及mRNA表达,比较年龄因素对Oatp2表达的影响．结果：大鼠肝组织内Oatp2蛋白表达以P3组最低（234．596±52．529）,P20组次之（244．256±68．547）,成年组表达最高（257．449±56．323）;脑内Oatp2表达以P3组最高（280．434±52．331）,P20组次之（264．646±59．050）,成年组最低（261．806±57．465）RT-PCR检测发现肝、脑内Oatp2-mRNA表达与蛋白表达变化规律基本相同．结论：正常大鼠脑、肝内Oatp2表达与年龄因素相关,大鼠脑内Oatp2表达呈随年龄增加表达下降趋势,而肝内Oatp2表达则随年龄增加而增加．     

Id2和 MMP9的表达及其与食管鳞癌的临床病理特征关系研究

目的：观察细胞分化/DNA 结合抑制因子2(Id2)和基质金属蛋白酶9(MMP9)在食管鳞癌组织中的表达,探讨 Id2和 MMP9表达的意义及相关性。方法应用免疫组织化学方法检测70例食管鳞癌和30例正常食管上皮中 Id2和 MMP9的表达水平。结果食管鳞癌中 Id2和 MMP9的阳性表达率均显著高于正常食管上皮(P <0.01);Id2和 MMP9的表达水平均随食管鳞癌的浸润加深、临床 TNM 分期级别增高而升高,浸润深度在 T3+T4组的表达水平高于 T1+T2组(P <0.05),临床Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期的表达水平高于Ⅰ期(P <0.05),但 Id2和 MMP9的表达均与食管鳞癌的分化程度无显著相关(P >0.05)。淋巴结转移组中 MMP9的表达水平高于无淋巴结转移组(P <0.05);而 Id2的表达与淋巴结转移无显著相关(P >0.05);食管鳞癌组织中 Id2和 MMP9的表达水平呈正相关关系(P <0.05)。结论Id2和 MMP9在食管鳞癌的发生和浸润进展中存在协同促进作用,同时检测对于评估食管鳞癌的生物学行为和预后有重要意义。     

Survivin和Ki-67在横纹肌肉瘤中的表达及意义

目的 :探讨横纹肌肉瘤 (RMS)中凋亡调控因子Survivin和Ki 6 7的表达及其意义。　方法 :采用免疫组化技术 (S P法 )和图像分析技术检测 4 3例横纹肌肉瘤及 10例正常横纹肌组织中Survivin和Ki 6 7表达水平 ,并结合病理特征进行分析。　结果 :Survivin在 86 % (37/ 4 3)的RMS中表达 ,且表达水平高于正常横纹肌组织 (P <0 .0 5 )。在胚胎性横纹肌肉瘤 (ERMS)和腺泡状横纹肌肉瘤 (ARMS)中Survivin的表达无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,而在不同分化程度的RMS之间差异显著 (P <0 .0 5 )。在复发或转移的RMS中和无复发或转移的RMS中Survivin的表达差异显著 (P <0 .0 5 )。RMS的Ki 6 7指数 (2 1.4 % )显著高于正常横纹肌组织的Ki 6 7指数 (0 .1% ) ,ERMS和ARMS的Ki 6 7指数差异不显著 (P >0 .0 5 ) ,而在不同分化程度的RMS中 ,Ki 6 7指数差异显著 (P <0 .0 5 )。同样 ,Ki 6 7指数在复发或转移的RMS和无复发或转移的RMS之间的差异显著 (P <0 .0 5 )。　结论 :Survivin表达水平和Ki 6 7指数在RMS中增加 ,其与瘤细胞分化有关 ,可作为预后不良的指标     

BMP-2对室管膜前下区神经干细胞向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响

目的 探讨骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对室管膜前下区(anterior subventricular zone,SVZa)神经干细胞(neural stem cells,NSCs)向多巴胺能神经元分化及对DLX5表达的影响.方法 体外培养SVZa NSCs,分为对照组、BMP-2组、BMP-2+Noggin组和Noggin组,通过免疫荧光染色和流式细胞术,观察其分化为酪氨酸羟化酶阳性(TH+)神经元的情况;用RT-PCR检测DIX5 mRNA表达水平.结果 BMP-2组SVZa NSCs向TH+神经元分化的比例和DLX5 mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.05),且这种效应能被其拮抗剂Noggin特异性抑制.结论 BMP-2可能通过上调DLX5表达水平从而促进SVZa NSCs向多巴胺能神经元分化.     

pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒的构建及其在活细胞内的相互作用

目的构建pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒,利用双分子荧光互补(BiFC)技术,在活细胞内直接观察Olig2与Id4的相互作用。方法利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),以新生大鼠脊髓RNA为模板,扩增Olig2和Id4基因,分别定向克隆到pBiFC-VN173和pBiFC-VC155载体中,获得pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒。对此2种质粒进行酶切鉴定、测序;用脂质体方法共转染pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4质粒到人结肠癌细胞系SW-1116细胞中,在荧光显微镜下观察Olig2与Id4之间的相互作用。结果通过酶切鉴定和测序表明成功构建了pBiFC-VN173-Olig2和pBiFC-VC155-Id4真核表达质粒;该质粒能够有效地共同转染到靶细胞,Olig2和Id4在靶细胞中能够高效表达,并可以相互结合出现BiFC荧光信号,且该信号主要分布于胞质中。结论成功构建了用于BiFC技术的真核表达载体,并在活细胞内检测到Olig2和Id4分子的相互结合。     

FHL2调控Id2功能活性的研究

目的：探讨FHL2对Id2蛋白功能的调控效应。方法：将E47、5xE-Box-Luc、pRL-SV40、Id2以及FHL2表达载体分别共转染MCF-7、293T以及SH-SY5Y细胞,双荧光素酶报告基因方法检测不同转染组细胞中的相对荧光素酶活性。结果：三个细胞系中E47均显著上调了报告基因的表达,Id2抑制了E47的转录激活活性,而FHL2通过与Id2相互作用显著消弱了Id2对FA7功能的抑制效应。结论：通过相互作用FHL2抑制了Id2蛋白的功能活性,FHL2是一个新的Id2蛋白功能抑制子;