骨髓基质细胞诱导分化修复髁突软骨面缺失的实验研究

目的:采用骨髓基质细胞(BMSCs)体内修复髁突软骨全层缺失。方法:15只山羊,9只作为实验组,将BMSCs和少量软骨细胞(7:3比例混合)按5×107/mL与生物可降解材料复合后,植入山羊髁突软骨全层缺失处;对照组6只山羊,髁突软骨全层缺失区植入支架材料,分别于术后4、8、12周每个时间段取材3只实验动物,2只对照组动物;2组分别用HE染色、Ⅱ型胶原分泌的免疫组化法进行评价。结果:实验组术后4周,山羊髁突软骨缺失区能形成成熟的软骨组织,12周时软骨未退变。对照组不能形成成熟的软骨组织。结论:骨髓基质细胞在自体软骨细胞基质的诱导下,可以修复山羊颞下颌关节髁突软骨面全层缺失。     

壳聚糖聚电解质复合物再生纤维软骨的实验研究

目的:探讨壳聚糖电介质复合物与髁突软骨细胞体内形成纤维软骨情况,以期为工程化软骨再生修复颞下颌关节软骨缺损奠定基础。方法:合成磷酸化壳聚糖电解质复合物(chitosan-polyelectrolyte complex,CS-PEC)制备三维凝胶支架,并与髁突软骨细胞复合培养后植入裸鼠体内,分别于4、8周取出新生物,通过组织学和免疫组化观察新生物的生物学特性。结果:软骨细胞在CS-PEC支架中形态铺展良好。植入体内4周后,支架保持原有结构,可见肥大样软骨细胞出现,免疫组化染色显示中央新软骨形成区Ⅱ胶原为阳性。8周后,支架降解,见新生软骨形成,阿新兰染色显示软骨基质形成,免疫组化染色显示软骨形成区Ⅱ胶原为阳性,周围纤维样细胞中Ⅰ胶原阳性;对照组无新生软骨形成,软骨特异性标志Ⅱ胶原及软骨基质特染均为阴性。结论:CS-PEC复合材料有望成为软骨再生的支架载体。     

骨髓基质细胞修复山羊髁突软骨缺失的绿色荧光蛋白示踪

目的:采用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)对骨髓基质细胞体内修复髁突软骨全层缺失进行示踪观察。方法:扩增PG13细胞株,获得大量含GFP基因的假病毒液,并直接转染骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)。将含有GFP基因转染标记的BMSCs和少量软骨细胞与生物可降解材料复合后,植入山羊髁突软骨全层缺失处,1个月后应用激光共聚焦显微镜检测修复组织中GFP标记的BMSCs的分布。结果:标记的BMSCs植入关节软骨缺损1个月后,修复组织仍能高效表达GFP。激光共聚焦显微镜下显示:多数新生软骨陷窝内有GFP标记的细胞。结论:标记的BMSCs可在髁突软骨全层缺失区分化为成熟的软骨细胞,并在髁突软骨缺失的修复中发挥重要作用。     

BMSCs／PLGA复合物修复山羊下颌髁突骨软骨缺损的实验研究

目的：观察利用BMSCs／PLGA复合物修复山羊下颌髁突骨软骨缺损的可行性及效果。方法：选取36只成年健康山羊，一侧关节制备3mm直径、5mm深的髁突表面骨软骨缺损，根据植入物不同分为BMSCs／PLGA复合物组、PLGA组及空白组，另一侧关节作为正常对照组。分别在术后6周和24周后处死每组6只动物，标本进行大体及组织学检查比较。结果：术后24周时空白组下颌髁突骨软骨缺损未能自发修复；植入PI。GA组的缺损表面虽有软骨形成，但连续性有中断；植入BMSCs／PLGA组的修复效果最佳，表面软骨接近正常纤维软骨。组织学评分结果也显示BMscs／PLGA组明显优于材料组和空白组。结论：BMSCs／PLGA复合物可以作为一种修复下颌髁突骨软骨缺损的新的有效方法。     

内镜下软骨细胞移植修复颞下颌关节软骨缺的实验研究

探讨经关节镜植入软骨细胞修复颞下颌关节软骨缺损的可行性和修复组织的质量。方法 经关节镜对12只猕猴的髁突和（或）关节结节进行钻孔,造成骨软骨缺损模型;将软骨细胞悬液与人工基质材料PluronicF127混合形成复合物,经关节镜注入颞下颌关节面缺损区;4周、8周、12周和24周后经大体形态观察、组织学观察、免疫组织学染色评价修复情况。结果 软骨细胞移植术后,关节面缺损均得到了修复,修复组织内为分化良好的软骨细胞,并随时间推移排列逐渐有序;免疫组化染色发现修复组织Ⅱ型胶原染色明显。结论 关节镜导向下的细胞移植术是切实可行的。软骨细胞移植能修复关节面骨软骨缺损,修复组织接近正常的关节软骨组织。     

山羊髁突刨削术后髁突软骨面修复的初步观察

目的:观察山羊髁突刨削术后髁突的愈合过程。方法:实验动物7只山羊,将6只山羊两侧髁突软骨面磨除,另1只未做手术为正常对照。分别于术后4、8、12周;每个时间点取材2只实验动物进行HE染色加以评价。结果:术后4周山羊髁突软骨缺失区粗糙,为骨样及一些纤维样组织修复,或可见少许纤维样软骨;术后8周及12周髁突表面较术后4周时光滑,修复组织逐渐变为以骨性组织为主,软骨样成分逐渐消失。结论:经过关节髁突的刨削术,术后3个月时,实验动物髁突软骨缺失区不能形成正常的软骨组织。     

软骨细胞移植修复髁突软骨损伤的实验研究

目的 研究软骨细胞移植修复髁突软骨损伤后的效果及修复组织的性质。方法 选用成年雄性白免５３只,分成５组。第１组：细胞移植组;第２组：单纯胶原膜植入组;第３组：在实验动物有髁突前斜面形成直径２ｍｍ的全层损伤后,未植入任何物品;第４组：空白手术对照组;第５组：正常对照组。结果 细胞移植组动物的髁突软骨损伤区形成软骨组织修复。结论 异体兔髁突软骨细胞移植能够形成类似正常的关节软骨修复髁突软骨缺损。     

牵引成骨结合组织工程化软骨重建山羊髁突缺损的实验研究

目的：利用牵引成骨结合组织工程化软骨重建山羊髁突缺损。方法：12只山羊随机分为两组：实验组在下颌切迹下方作截骨线,切除一侧髁突及其颈部,左右随机。再于下颌支后缘形成转移盘,在转移盘的远中植入软骨细胞支架复合物。对照组在转移盘的远中仅植入支架。分别于牵引结束4、8、12周大体及组织学观察山羊髁突的形成情况。结果：牵引结束后4周,实验组山羊髁突已具备良好的外形,髁突表面覆盖软骨组织：对照组山羊新形成之髁突外形虽与正常髁突相似但表面无软骨层。12周时,实验组山羊髁突外形与正常髁突相似,表面仍有软骨层覆盖：而对照组山羊新形成的髁突外形虽与正常髁突相似,但表面仍无软骨层覆盖。结论：利用牵引成骨结合组织工程化软骨的方法不仅可以从外形上重建山羊髁突,而且在解剖结构上与正常髁突相似,为髁突正常功能的行使提供了良好的解剖学基础。     

雌激素对髁突软骨细胞作用的研究进展

髁突软骨细胞是髁突软骨唯一的细胞成分，其生长、代谢受细胞因子、力学刺激及激素影响，其中，雌激素对其的影响一直受学者们关注，它可能是引起颞下颌关节紊乱病的因素之一。髁突软骨是纤维软骨，不同于四肢关节软骨，雌激素对四肢关节软骨细胞代谢影响的研究已深入，而对髁突软骨细胞影响的研究则相对滞后。本文从雌激素对髁突软骨细胞的作用机制及对髁突软骨代谢、分化的影响两方面进行综述，这将有助于进一步认识机体雌激素水平对颞下颌关节生理与病理变化的影响，以期对颞下颌关节紊乱病的治疗提供理论指导。     

双侧下颌牵张成骨对转化生长因子β1在颞下颌关节髁突表达的影响

目的　研究狗的双侧下颌牵张成骨中颞下颌关节髁突的形态改变及转化生长因子β1(TGF-β1)在髁突的 表达。方法　16只狗随机分为4组,每组4只,分别为牵张6 d组、牵张后固定2周组、牵张后固定8周组及正常对 照组。各实验组的牵张频率均为1 mm/d,1次/天。对每组动物的髁突标本进行苏木精-伊红染色及TGF-β1的免 疫组化染色观察。结果　苏木精-伊红染色可见实验组动物的髁突纤维软骨早期有不同程度的损伤,增殖带、肥 大带细胞增生活跃,软骨钙化层及其深层软骨成骨活跃;TGF-β1阳性染色主要定位在肥大带细胞胞浆、周围基质和 成骨反应活跃处的成软骨细胞、成骨细胞及周围基质。牵张后固定2周时这种改建修复现象最明显,8周时逐渐恢 复至正常对照组的表现。结论　双侧下颌牵张成骨对颞下颌关节髁突影响主要表现为髁突纤维软骨组织形态学 的改变和软骨、骨的改建活动,但随着固定时间的延长这种改变逐渐修复。     

透明质酸钠和泼尼松龙对兔颞下颌关节软骨损伤治疗效果的研究

目的 比较局部应用透明质酸钠和泼尼松龙对兔颞下颌关节软骨损伤的治疗效果。方法 选用成年健康新西兰大白兔27只,随机分成4组。第1组:兔颞下颌关节髁突软骨全层损伤后局部应用泼尼松龙(12.5 mg),10只;第2组:兔颞下颌关节髁突软骨全层损伤后局部应用透明质酸钠(5 mg),10只;第3组:兔颞下颌关节髁突软骨全层损伤手术对照组,5只;第4组:正常对照组,2只。分别于术后1、2、4、8、12周处死,对髁突软骨及其修复组织进行大体形态学及组织学检查。结果 第1、2组实验动物的髁突软骨损伤区为纤维结缔组织增生,术后12周时,损伤区充满致密的纤维结缔组织,胶原纤维排列有序,与关节面平行。修复组织的质量类似,但第2组髁突软骨的退行性改变较第1组明显减轻。结论 泼尼松龙和透明质酸钠都能促进髁突软骨损伤后的修复,在预防颞下颌关节软骨的退行性改变方面,透明质酸钠优于泼尼松龙。     

FAM20C在小鼠下颌髁突发育过程中的时空表达

目的 观察小鼠髁突发育过程的不同阶段,FAM20C在髁突软骨中的时空表达特点,试探究其在小鼠髁突发育过程中的可能作用机制。方法 苏木精-伊红(HE)染色和改良番红O-固绿染色观察胚胎17.5 d和出生后0、7、21 d 4组小鼠髁突软骨及软骨下骨的形态学变化。免疫组化染色观察相应时间点FAM20C在小鼠髁突软骨组织中的定位及表达。测量FAM20C阳性表达的平均光密度值,并进行单因素方差分析。结果 HE染色和改良番红O-固绿染色结果表明：随着软骨内骨化的进展,髁突软骨细胞层长度减少,软骨下骨体积增加,下颌髁突体积增大;免疫组化结果表明：4组小鼠髁突软骨组织中均有FAM20C阳性表达,FAM20C主要表达于髁突软骨增殖软骨细胞层和前肥大软骨细胞层,少量表达于肥大软骨细胞层及软骨下骨层,随着髁突发育,FAM20C表达逐渐减少。统计学结果显示,各时间点FAM20C阳性表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论 FAM20C参与小鼠下颌髁突发育,可能通过调节髁突软骨细胞的增殖和分化在髁突形成中发挥重要作用。     

高脂饮食对小鼠颞下颌关节骨关节炎的影响

目的:通过检测髁突软骨内IL-1β、TNF-α、VEGF的表达,探讨高脂饮食对小鼠颞下颌关节骨关节炎的影响。方法:48只小鼠随机分为正常饮食(ND)组、常规建模(MF+ND)组、高脂建模(MF+HFD)组、混合建模(MF+MD)组。采用前牙单侧反牙合法建立异常咬合模型,建模后的第2、4、6、8周处死小鼠取双侧颞下颌关节。通过HE和番红-O固绿染色进行病理观察及评分。免疫组织化学染色检测髁突软骨内IL-1β、TNF-α、VEGF的表达。结果:HE和番红-O固绿染色结果显示,建模组可见髁突软骨破坏,Mankin评分增高;而MF+HFD组破坏更加严重,Mankin评分更高;免疫组织化学染色结果显示,各建模组IL-1β、TNF-α和VEGF的阳性细胞数明显增加,并且MF+ND、MF+HFD和MF+MD三组IL-1β、TNF-α、VEGF阳性细胞表达比较均具有显著差异(P<0.05)。结论:长期的高脂饮食可以加重咬合异常所诱导的颞下颌关节骨关节炎小鼠的髁突软骨破坏,加重小鼠颞下颌关节骨关节炎的程度。     

山羊颞下颌关节盘细胞体外培养研究

目的:研究山羊颞下颌关节盘纤维软骨细胞体外培养的生物学特性及其损伤修复的细胞学基础.方法:切取1 月龄山羊颞下颌关节盘, II型胶原酶消化获得关节盘纤维软骨细胞.逐日观察细胞的形态变化, 测定其生长曲线,甲苯胺蓝染色、I型胶原免疫组化染色鉴定.透射电镜观察细胞超微结构.结果:原代培养的关节盘纤维软骨细胞以长梭形为主, 部分多角形, 7 d即可传代.甲苯胺蓝染色阳性, I型胶原免疫组化染色胞质内可见棕黄色颗粒.超微结构显示细胞分为2 种,软骨细胞样细胞和成纤维细胞样细胞;线粒体、内质网发达.结论:体外分离培养的山羊颞下颌关节盘纤维软骨细胞具有较强的增殖能力,1～3代细胞可作为颞下颌关节盘组织工程的种子细胞.     

纤维软骨和透明软骨不同染色方法的对比研究

目的 研究不同软骨染色方法在髁突软骨、股骨软骨和生长板软骨中的染色差异。方法 取健康雌性新西兰大白兔颞下颌关节髁突、膝关节股骨,分别进行苏木精-伊红（HE）染色、甲苯胺蓝染色、阿利新蓝染色、番红O 阿利新蓝染色、番红O染色、番红O 快绿染色,光学显微镜下观察分析各软骨组织结构。结果 HE染色髁突纤维软骨各层结构清晰,关节软骨基质呈嗜碱性蓝染,骨组织呈嗜酸性红染;甲苯胺蓝染色关节软骨基质呈蓝紫色,骨组织不着色;阿利新蓝染色软骨基质呈淡蓝色,骨组织不着色;番红O 阿利新蓝染色关节软骨呈浅蓝色,骨组织呈淡红色,但是髁突软骨纤维层和增殖层红染;番红O染色中髁突软骨基质呈红色,股骨软骨和生长板软骨呈橘黄色,骨组织呈淡红色;番红O 快绿染色关节软骨基质呈红色,骨组织呈绿色,在髁突纤维软骨中纤维层呈明显绿染。结论 不同的染色方法可以特异性展现软骨组织结构。在今后透明软骨和纤维软骨的研究中,因根据研究对象、研究目的等选用适合的染色方法,以期最佳的反映研究部位的形态结构。     

全颞下颌关节假体植入山羊后的安全性评价

目的:通过建立山羊全颞下颌关节置换模型,探讨植入后山羊的血液学和组织学变化,评价自行设计的人工全颞下颌关节假体的安全性。方法:取健康6个月龄山羊10只,随机选取6只山羊,根据其颞下颌关节螺旋CT所测参数,采用Surgicase5.0软件重建三维头颅模型,制备人工全颞下颌关节假体,选用超高分子量聚乙烯制备关节窝衬里,钛合金制作下颌固位柄及关节窝上方钛板,钴-铬-钼合金制备髁突。另4只作为正常对照组。手术切除实验组6只山羊右侧髁突及关节盘,进行全关节置换。术前1周及术后1周、1、3、6个月采血,测定肝、肾功指标。术后3、6个月取山羊的肝、肾组织和假体周围及对侧下颌骨组织,通过TUNEL染色检测凋亡细胞并进行组织病理染色。采用SPSS16.0软件包对数据进行成组t检验。结果:所有实验动物均存活至实验完成,能够正常进食。各时间点实验组与对照组肝、肾功指标差异无显著性,肝、肾组织病理染色以及凋亡率与正常对照组一致,实验侧与对照侧骨组织均无明显炎症反应,实验侧组织在术后3个月成骨细胞较对照侧增多,术后6个月与对照侧组织无显著差异。结论:自行研制的全颞下颌关节假体具有较好的生物相容性和生物安全性。     

过度充填对兔下颌髁状突软骨影响的定量组织学研究

目的 探讨过度充填对兔下颌髁突软骨的影响。方法 18只5月龄纯种新西兰兔，等分为空白对照组，实验I组（单次充填组），实验Ⅱ组（多次充填组）。实验组一侧上颌第一前磨牙和对侧下颌第一前磨牙制洞，采用光固化树脂过度充填，造成与对颌牙的急性He干扰，2月后取双侧颞下颌关节，组织切片，HE染色，计量组织学分析。结果 多次充填组髁突软骨出现明显退行性病变，髁突前中部软骨层次紊乱，纤维带，增殖带和肥大带变薄，单次充填组程度相对较轻。结论 过度充填所致的咬合干扰可导致髁突软骨发生退行性病变，病变程度与干扰强度相关。     

经颧弓后上牵引下颌后髁突软骨中PTHrP的表达及意义

目的:观察经颧弓后上牵引下颌后兔颞下颌关节髁突软骨中PTHrP的分布特征,探讨PTHrP在髁突软骨改建过程中的作用。方法:手术在颧弓和下颌角之间放置弹簧持续地将兔右侧下颌骨向后上方牵引,分别于术后2、4、6周处死动物,观察实验组与对照组PTHrP的分布特征。结果:经颧弓后上牵引下颌,髁突受到过度负荷后髁突软骨发生改建。经颧弓后上牵引2周,增殖层和上肥大层软骨细胞PTHrP表达明显增强,而4和6周PTHrP表达强度不均,软骨细胞丛附近软骨细胞前体细胞内PTHrP表达较强。对照组PTHrP在整个实验过程中均处于弱表达。结论:PTHrP可能与髁突软骨的修复性改建密切相关。     

胶原复合梯度磷酸三钙修复髁突软骨缺损

目的 研究胶原复合梯度磷酸三钙(Col/TCP)修复髁突软骨损伤的效果.方法 选用成年雄性新西兰大白兔30只,在实验动物的右侧髁突前斜面形成3 mm × 4 mm的全层缺损后,植入复合材料;左侧仅造成同样的缺损.分别于术后4、6、8、12和24周各处死6只实验动物,对缺损区的新生软骨进行大体标本、组织学、免疫组织化学及透射电镜观察.结果 实验组4周后复合材料即可诱导关节软骨的修复;12周时缺损区与周围正常软骨基本一致,且与关节下骨结合紧密;24周后再生软骨未见明显褪变;对照组缺损区由纤维组织充填,未见软骨形成.实验组Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈阳性,对照组为阴性;透射电镜观察实验组见典型软骨细胞出现,对照组为纤维组织.结论 Col/TCP可以修复髁突软骨缺损,形成类似正常的关节软骨.     

颞下颌关节盘前移位关节区组织病理变化的实验研究

目的通过建立关节盘前移位实验动物模型的方法,来研究人类关节盘前移位病变早期阶段的发展过程和病理学改变。方法１２只新西兰大白兔左颞下颌关节经实验诱导为关节盘前移位模型,右侧为手术对照组。于术后２４ｈ、１周、２周、３周、４周、１０周各处死２只,切取关节组织,ＨＥ染色,光镜观察。结果早期：关节结节、髁突关节软骨增生明显,髁突软骨下出血,骨组织内血管网消失;后期：髁突关节软骨、骨组织及滑膜出现骨关节炎（ＯＡ）样改变。结论实验诱导关节盘前移后关节区的病理学变化与人类相似;关节盘前移位关节区的创伤可引起关节骨关节炎样改变。