人舌癌Tca8113细胞热休克蛋白多肽复合物(HSP70-PC)的提取和鉴定

采用ADP-Agarose亲和层析结合DEAE离子交换对Tca8113细胞的HSP70-PC进行分离纯化.结果显示在NaCl 250～350 mmol/L浓度处出现一洗脱峰,收集此峰各组分,经10% SDS-PAGE、在相对分子质量70 000处可见清晰单一蛋白条带,电泳后于第5峰发现相对分子质量为70 000的蛋白,此蛋白被洗脱的盐浓度为NaCl 250～350 mmol/L,此即为高纯度的HSP70-PC.HSP70获得率为1 g湿重的Tca8113细胞能纯化85 μg的HSP70-PC.采取低渗匀浆、超速离心、ConA-Sepharose亲和层析、ADP-Agarose亲和层析及DEAE离子交换的纯化方案,可获得高纯度的HSP70-PC.     

不同方法制备抗原致敏的树突状细胞介导T淋巴细胞对Tca8113细胞杀伤作用的影响

目的探讨树突状细胞（DCs）疫苗治疗舌癌的可行性,并选择较优的抗原负载方式。方法分别采用弱酸洗脱法、反复冻融法制备Tca8113细胞抗原,并分为3组：弱酸洗脱抗原组、反复冻融抗原组、对照组（不加肿瘤抗原）。从外周血单核细胞中诱导DCs,分离出T淋巴细胞。以不同效靶比将DCs和T淋巴细胞混合培养,MTT法测光密度值,计算刺激指数。DCs抗原负载后,与T淋巴细胞混合,以不同效靶比加入预先接种了Tca8113细胞的培养板。MTT法测光密度值,计算杀伤率。结果2种方法体外成功地构建了DCs疫苗,抗原致敏组与对照组比较差异显著,且弱酸洗脱组优于反复冻融组。DCs疫苗可诱导细胞毒性T淋巴细胞有效的杀伤Tca8113细胞,并表现明显的剂量效应。结论DCs疫苗致敏T淋巴细胞能够有效的杀伤Tca8113细胞,酸洗脱抗原冲击致敏的DCs疫苗在舌癌的免疫治疗中优于冻融抗原。     

热休克蛋白70在3T3细胞创伤愈合中的作用

探讨热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）在细胞创作后增殖中的作用。方法：采用细胞机械创伤模型,检测创伤后４８ｈ时热处理细胞及非热处理细胞的增殖活性,并用免疫细胞化的方法两组细胞生长过程中ＨＳＰ７０的表达。结论ＨＳＰ７０参与细胞增殖过程,热处理引起的细胞增殖活性升高可能与ＨＳＰ７０的功能有关。     

热休克诱导人舌鳞癌Tca8113细胞HSP70表达的研究

目的:研究热休克恢复期人舌癌Tca8113细胞热休克蛋白(HSP70)的表达和热动力学变化,为人舌鳞癌的免疫治疗提供理论基础。方法:通过人舌鳞癌细胞Tca8113在43℃加热30min,运用免疫组化和流式细胞技术检测在各时间点细胞HSP70的表达,各时间点再次以相同条件加热后用MTT法测各组细胞活性,以期了解Tca8113细胞HSP70表达的动态变化。结果:热休克后恢复2h即出现HSP70的表达,8~12h达到高峰,之后逐渐减少,48h后基本恢复至加热2h后的水平,热休克后恢复12h细胞活性最强。结论:HSP70的迅速表达与缓慢降解对维持Tca8113细胞的生理功能有重要作用。为进一步研究HSP70在人舌癌热疗联合免疫治疗初步提供了理论依据。     

细胞表达HSP70的细胞模型研究

目的 :通过热休克预处理提高人牙髓细胞HSP70的表达水平 ,建立供体外实验研究的热休克细胞模型。方法 :将体外培养的人牙髓细胞爬片后进行热处理 ,置 42℃水浴 2 5min ,37℃复温。于复温后 1、2、3、4、6、8、10h、1d固定 ,进行HSP70的免疫组化染色 ;96孔板细胞同样方法热处理 ,连续培养 3d后 ,进行MTT检测。结果 :正常对照牙髓细胞呈阴性表达。热休克处理牙髓细胞 1、2h组中度阳性着色 ,3、4h组强阳性着色 ,6、8、10h组达到高峰 ,1d组恢复到弱阳性水平。MTT检测显示热处理组与对照组无统计学差异。结论 :热预处理方法可成功诱导人牙髓细胞表达HSP70 ;该方法不会导致连续培养 3d后细胞存活数量的明显变化     

TGF-β及HSP70在rhIL-1β介导的TMJ髁状突软骨炎症损伤中的作用

目的 探讨TGF－β及HSP70在人重组白细胞介素－1（rhIL-1β）介导颞颌关节炎症损伤中的作用。方法 SD大鼠颞下颌关节腔内反复多次注射rhIL-1β，建立颞凳关节炎症损伤模型，利用免疫组织化学检测髁状突软骨炎症损伤过程中TGF－β及HSP70的表达变化。结果 注射后1－3d，实验侧髁状突软骨全层均可见TGF－β阳性软骨细胞，以增殖层阳性表达最明显，7d除髁状突软骨增殖层表达仍较强，前肥厚层TGF－β表达开始减弱，30d髁状突软骨全层TGF－β表达与对照侧相近。HSP70的表达与TGF－β具有相似的特点，注射后1－3d，实验侧髁状突软骨浅层HSP70的表达明显增强，7d后表达逐渐减弱，15d后HSP70表达与对照侧相近。结论 在rhIL-1β介导的髁状突软骨关节炎症损伤中，早期TGF－β与HSP70的表达增强，提示TGF－β及HSP70可能参与了软骨炎症损伤的修复过程。     

热休克诱导人牙髓细胞表达HSP70的细胞模型研究

目的：通过热休克预处理提高人牙髓细胞ＨＳＰ７０的表达水平,建立供体外实验研究的热休克细胞模型。方法：将体外培养的人牙髓细胞爬片后进行热处理,置４２℃水浴２５ｍｉｎ,３７℃复温。于复温后１、２、３、４、６、８、１０ｈ、１ｄ固定,进行ＨＳＰ７０的免疫组化染色;９６孔板细胞同样方法热处理,连续培养３ｄ后,进行ＭＴＴ检测。结果：下沉对照牙贿细胞呈阴性表达。热休克处理牙贿细胞１、２ｈ组中度阳性着色,３、４ｈ     

HSP70在大鼠牙移动过程中的表达及其生物学意义

目的:研究大鼠磨牙移动过程中诱导型热休克蛋白70(HSP70)在牙周组织中的动态表达特点,推测其在牙周组织改建中的生物学意义。方法:建立大鼠牙移动的动物模型,采用免疫组织化学方法观察大鼠磨牙移动1、3、5、7、14d内诱导型HSP70在牙周组织中的动态表达及定位情况。结果:HSP70的表达在牙周膜受力早期呈强阳性,随后表达逐渐减弱,至14d为弱阳性;同一时期牙周膜的张力侧和压力侧诱导型HSP70的表达存在差异。结论:HSP70在大鼠磨牙受外力移动过程中呈现由强到弱的动态变化及区域性变化,这可能与牙周组织损伤的应激保护和改建过程中蛋白合成的需要有关。     

盐酸氮芥对Tca8113 细胞即时杀伤效应的观察

肿瘤手术中,用抗癌药物盐酸氮芥冲洗或湿敷创面,洗涤器械,以打击脱落的癌细胞,已被列为无瘤操作常规。但是其不同的浓度及作用时间是否能有效地抑制癌细胞,尚无有关实验根据。本实验目的在于评价盐酸氮芥在不同的作用时间及浓度条件下的抗癌效应。１材料和方法１．１...     

大鼠磨牙钻磨后HSP70在牙髓不同时间表达的免疫组化研究

目的：研究大鼠磨牙受到钻磨刺激后HSP70在牙髓组织中的表达特点,推测其在牙髓损伤修复中的生物学作用。方法：采用免疫组织化学方法观察大鼠磨牙钻磨损伤后4h-14d内诱导型HSP70在牙髓组织中的动态表达及定位情况。结果：HSP70的表达在损伤早期呈强阳性,随后表达逐渐减弱,至修复期为弱阳性表达;同一时期受损牙髓的不同区域存在强弱变化。结论：HSP70大鼠磨牙受到钻磨损伤后呈现由强到弱的动态变化及区域性变化,这可能与牙髓损伤的应激保护和修复过程中蛋白合成的需要有关。     

转染BMPⅡ型突变受体前后Tca8113舌癌细胞中p27和p57表达的定量分析

目的：明确转染BMP—Ⅱ型突变受体对Tca8113舌癌细胞的作用，以进一步探讨、认识BMPs对口腔上皮恶变的作用机理。方法：检测转染BMP—Ⅱ型突变受体的Tca8113舌癌细胞(Tca8113ZR细胞)和Tca8113细胞的细胞周期相关因子p27和p57的表达，以明确突变受体对细胞周期及生长的影响。结果：转染了BMPⅡ型突变受体后，肿瘤细胞的增殖能力显著减弱。结论：BMPs信号在口腔舌癌细胞的恶性变化中起着重要的调控作用，BMPs信号的改变可能导致细胞的恶性程度的改变。     

Naa10p 表达对舌鳞癌 Tca8113细胞平阳霉素敏感性的影响

目的：观察 N-α乙酰基转移酶（Naa10p）表达对舌鳞癌 Tca8113细胞平阳霉素（PYM）敏感性的影响。方法：采用慢病毒体系分别构建干扰及过表达 Naa10p 的 Tca8113细胞株,并设立相应的对照细胞 Tca8113-LV-NC,鉴定干扰和过表达效率,MTS 法检测药物处理后各处理组细胞对 PYM的敏感性。结果：干扰 Naa10p 的 Tca8113-LV-shNaa10p 细胞、过表达Naa10p 的 Tca8113-LV-Naa10p 细胞与对照细胞 Tca8113-LV-NC 对平阳霉素的半数抑制浓度（IC50）分别为（20．772±0．106）μg／ml、（2．157±0．123）μg／ml、（6．301±0．069）μg／ml（组间比较,P ＜0．05）。结论：下调 Naa10p 表达可降低口腔鳞癌细胞 Tca8113对平阳霉素的敏感性,上调 Naa10p 表达可增强口腔鳞癌细胞 Tca8113对平阳霉素的敏感性。     

平阳霉素抑制舌鳞癌细胞系的量效和时效关系及可能的抗癌机制

目的:探讨平阳霉素体外抑制口腔鳞癌细胞系的量效和时效关系及可能的抗癌机制。方法:用不同浓度的平阳霉素培养人舌鳞癌细胞系Tca8113不同时间,以MTT法和荧光显微镜观察细胞增殖抑制情况,流式细胞术分析细胞凋亡率。结果:MTT法和荧光观察显示:不同浓度平阳霉素组间细胞生长抑制率有显著差异(P<0.05),浓度越高,抗增殖效应越明显;随药物作用时间延长,肿瘤细胞生长受抑制递增(P<0.05)。流式细胞术显示:凋亡率随药物浓度增加而增加,但与作用时间长短无关。低浓度药物无法诱导细胞凋亡。结论:平阳霉素在体外能明显抑制人舌鳞癌细胞系Tca8113生长,并具有浓度和时间依赖性。其抗癌机制可能包括细胞毒作用和启动程序化死亡信号等。     

聚乙二醇-聚谷氨酸纳米微球介导双自杀基因对Tca8113细胞的杀伤作用

目的:观察聚乙二醇-聚谷氨酸(PEG-PBLG)纳米微球介导双融合自杀基因CDglyTK对舌鳞癌Tca8113细胞的杀伤作用,为口腔鳞癌的治疗探索新的途径和方法。方法:以PEG-PBLG纳米微球为载体介导携双自杀基因CDglyTK的真核表达质粒pcDNA3.1( )-CDglyTK转染Tca8113细胞,通过RT-PCR检测CDglyTK的mRNA表达,MTT法描绘细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞凋亡并评价其疗效。统计分析采用SPSS10.0统计软件包完成,两样本均数的比较采用t检验。结果:PEG-PBLG纳米微球可介导质粒pcDNA3.1( )-CDglyTK转染Tca8113细胞,RT-PCR可检测到转染细胞中CDglyTK的mRNA表达。转染后,细胞在滴加5-FC和GCV后生长受到明显抑制,5-FC和GCV联合使用对Tca8113细胞的生长抑制作用明显优于单用5-FC或GCV。5-FC和GCV联合使用组,凋亡指数显著高于对照组(P<0.01),同时也高于单独使用5-FC或GCV组(P<0.05)。结论:PEG-PBLG纳米载体介导双自杀基因CDglyTK,可有效杀伤舌鳞癌Tca8113细胞,为舌鳞癌的基因治疗提供了新的途径。     

替尼泊苷诱导Tca8113细胞凋亡及细胞周期阻滞的实验观察

目的：检测替尼泊苷(teniposide,VM-26)的体外抗肿瘤增殖效果并探索其作用机制。方法：以不同浓度的VM-26体外作用Tca8113细胞,应用MTT方法、流式细胞仪、透射电镜和荧光染色等分别检测细胞的生长抑制率、凋亡率及细胞周期分布。使用SAS6．12软件进行单因素方差分析。结果：VM-26和CDDP对Tca8113细胞的半数抑制浓度分别为0．35μg／ml和1．1μg／ml。透射电镜观察细胞形态发生典型的凋亡表现,5.0μg/ml和0．15μg／ml的VM-26作用72h,细胞凋亡率分别为81．01％和17．38％,而细胞周期则分别被阻滞在S期和G2／M期。结论：VM-26可以显著诱导口腔鳞癌细胞凋亡并抑制细胞生长,不同剂量的VM-26对口腔鳞癌细胞周期阻滞的阶段不同。     

VEGF靶向RNA干扰质粒构建及其对人舌鳞癌Tca8113细胞的影响

目的：用RNA干扰技术阻断人舌鳞癌系Tca8113细胞中VEGF基因的表达,观察细胞增殖及凋亡特征。方法：检测人舌鳞癌系Tca8113细胞中血管内皮生长因子VEGF表达水平;采用真核转录质粒pRNA-U6.1/Neo构建针对VEGF基因的重组转染质粒。将4种不同序列的VEGF-shRNAV1、VEGF-shRNAV2、VEGF-shRNAV3、VEGF-shRNAV4质粒以及含与VEGF无关序列的VEGF-shRNAVc和空白质粒VEGF-shRNAU6分别转染Tca8113细胞,48h后检测其VEGF表达水平,筛选稳定转染RNAi-VEGF的细胞;CCK8检测其增殖能力;流式细胞仪检测其细胞周期;Anexin-V-PI检测其凋亡特征。结果：RT-PCR和Western blot检测：Tca8113细胞阳性表达VEGF;用Lipofectamine 2000成功将不同VEGF片段的质粒转染入Tca8113细胞;RT-PCR发现,VEGF-shR-NAV2组细胞VEGF表达被显著抑制,用400ng/mLG418压力筛选获得VEGF稳定被抑制的细胞系;CCK8检测各组Tca8113细胞增殖见VEGF-shRNAV2组增殖能力小于VEGF-shRNAVc组和VEGF-shRNAU6组;转染VEGF-shRNAV2的Tca8113细胞G0-G1期细胞较VEGF-shRNAVc组和VEGF-shRNAU6组高,且细胞凋亡多。结论：用RNA靶向干扰能明显降低人舌鳞癌Tca8113细胞内VEGF的表达并抑制肿瘤细胞增殖及促进凋亡。     

吉西他滨对舌鳞癌细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的:了解吉西他滨对舌鳞癌Tca8113细胞增殖及端粒酶活性的影响。方法:采用噻唑蓝(MTT)和碘化丙锭(PI)染色法,检测细胞增殖抑制率和细胞周期变化;采用TRAPPCRELISA法检测细胞端粒酶活性,PAGE-银染法显示端粒酶电泳图像。数据采用SPSS10.0中独立样本t检验法或单因素方差分析法进行统计学检验。结果:吉西他滨能够显著抑制Tca8113细胞增殖,并具有时间和浓度依赖性,5.0μg/ml组72h增殖抑制率均值为72.2%,高于0μg/ml组(F=161.854,P<0.05)。细胞周期检测显示:吉西他滨作用72h后,S期细胞比例下降,5.0μg/ml组均值为18.1%,低于0μg/ml组38.5%(t=5.801,P<0.05)。TRAPPCRELISA法检测细胞端粒酶活性(A值)随吉西他滨作用浓度增加和时间延长而下降:72h,0和5.0μg/ml组A值分别为1.32±0.12、0.28±0.02(F=811.208,P<0.05)。结论:吉西他滨能够有效抑制Tca8113细胞增殖,可以降低细胞端粒酶活性。     

紫草素对口腔鳞癌Tca8113细胞增殖与凋亡的作用

目的：研究紫草素对体外培养的口腔鳞癌Tca8113细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察紫草素对Tca8113细胞的体外增殖抑制作用;采用光镜、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳技术及流式细胞术观察紫草素对Tca8113细胞凋亡的影响。采用SPSS12．0软件包对数据进行单因素方差分析及t检验。结果：MTr检测显示．紫草素在0-50μmol／L浓度范围内。对Tca8113细胞的增殖抑制作用呈现时间依赖性和浓度依赖性（P〈0．01）．电镜下可见典型的细胞核皱缩及凋亡小体,DNA琼脂糖凝胶电泳观察到典型梯状条带,流式细胞仪结果显示亚G1期细胞明显增加,各组细胞凋亡率均显著高于对照组（P〈0．01）。结论：紫草素对口腔鳞癌Tca8113细胞具有明显的增殖抑制及诱导凋亡作用．可用于口腔鳞癌化学防治的新尝试。     

肝细胞生长因子对人舌鳞癌 Tca8113细胞 VEGF-C 表达的影响及作用机制的初步研究

目的：研究 HGF 对人舌鳞癌 Tca8113细胞中 VEGF-C 表达的影响并探讨其作用机制。方法：体外培养 Tca8113细胞,应用 ELISA 方法测定不同浓度 HGF 作用下以及分别用 LY294002、U0126、SP600125、SB203580信号通路抑制剂阻断PI3K/Akt、P44/P22MAPK、JNK、P38MAPK 信号通路后 VEGF-C 的表达水平。结果：随着培养液中 HGF 浓度的增加,Tca8113细胞中 VEGF-C 的表达水平出现先增高后降低的趋势,当 HGF 浓度为40 ng/ml 时,VEGF-C 表达水平最高。PI3K/Akt 信号通路抑制剂（LY294002）和 P42/44MAPK 信号通路抑制剂（U0126）显著抑制了 HGF 刺激下 Tca8113的 VEGF-C 蛋白的表达（P ＜0．01）;而 JNK 信号通路抑制剂（SP600125）和 P38MAPK 信号通路抑制剂（SB203580）对 HGF 刺激下 Tca8113的 VEGF-C 蛋白的表达影响甚微（P ＞0．05）。结论：在人舌鳞癌 Tca8113细胞中,随着 HGF 浓度的增加,VEGF-C 的表达先增高后降低。PI3K/Akt 和 P44/P22MAPK 信号通路在口腔鳞状细胞癌淋巴转移中可能发挥作用。