4-1BBL在口腔鳞癌中的表达及临床意义

目的:研究4-1BBL在口腔鳞癌组织和炎症组织中的表达特征。方法:PCR、Real-time PCR、免疫组化检测4-1BBL mRNA和蛋白在口腔鳞癌组织、炎症组织和正常黏膜组织中的表达。结果:PCR 结果显示4-1BBL在口腔鳞癌组织、炎症组织和正常黏膜组织中均有表达,并且Real-time PCR结果显示:与正常组织组比较,口腔鳞癌组4-1BBL mRNA表达量为其2.2106倍,(P<0.05);炎症组织为其1.1151倍,也高于正常组织组(P<0.05);在不同分化期的口腔鳞癌中,高分化组是中分化组的1.516倍(P<0.05),同时也显著高于低分化组(P<0.05)。免疫组化结果:与正常组织比较,鳞癌组织4-1BBL表达显著增高;炎症组织4-1BBL表达介于正常组和鳞癌组之间。同时4-1BBL在不同分化程度的鳞癌组织中,其表达随分化程度的增高而增强。结论:口腔鳞癌组织4-1BBL mRNA和蛋白表达显著高于正常组织和炎症组织;且其表达随分化程度的升高而增强。     

4-1BBL在人口腔鳞癌PBL-SCID鼠嵌合模型肿瘤免疫中的作用

目的:探索建立人口腔鳞癌PBL-SCID鼠嵌合模型,评价4-1BBL在人口腔鳞癌PBL-SCID嵌合模型肿瘤免疫中的作用。方法:SCID鼠右背部皮下注射5×106(0.2 mL)Tca8113细胞。成瘤后,尾静脉注射anti-asialo-GML多抗,随机分为4组,第①组为对照组,不给予成瘤小鼠免疫重建,第②组给予成瘤小鼠免疫重建,第③组给予成瘤小鼠免疫重建+含有空载体的腺病毒做肿瘤内注射,第④组给予成瘤小鼠免疫重建+含有4-1BBL基因的腺病毒做肿瘤内注射。第②、③、④组小鼠腹腔注射健康志愿者外周血淋巴细胞3×107(0.5 mL),第①组腹腔注射0.5 mL1640培养基。每周记录各组小鼠的成瘤情况,免疫重建后,第2、7周取鼠血,用ELISA法测定人IgG含量。小鼠处死后,比较各组小鼠体重及肿瘤、脾脏的重量。RT-PCR检测4-1BBL基因在瘤体内的表达,HE染色检测肿瘤及脾脏生长情况。结果:模型成瘤率为100%,成瘤潜伏期12～18 d。免疫重建后第2、7周时人口腔癌PBL-SCID嵌合组小鼠血中人IgG分别达71.8μg/mL、136.9μg/mL。免疫重建及转染4-1BBL基因组小鼠,肿瘤生长受到明显抑制(P<0.01)。RT-PCR证明4-1BBL基因在瘤体内充分表达,冰冻切片HE染色见肿瘤生长、脾脏有大量淋巴细胞浸润。结论 :SCID小鼠皮下注射口腔鳞癌细胞、腹腔注射人淋巴细胞,可建立人口腔鳞癌PBL-SCID嵌合模型,经腺病毒转染4-1BBL基因后,可显著提高宿主对瘤体的抑制作用。     

4-1BB、CD8在口腔扁平苔藓组织中的表达研究

目的 检测共刺激信号4-1BB及CD8在口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)组织中的表达,探讨OLP病损中4-1BB介导CD8⁺ T细胞免疫应答的潜在机制。方法 选取31例OLP患者(糜烂型15例、非糜烂型16例),15例健康成人(对照组)为研究对象,收集其临床及病理资料,采用免疫组织化学法检测局部组织中4-1BB、CD8的表达情况。结果 OLP患者局部组织中4-1BB及CD8的表达高于对照组(P<0.05),且两者表达呈正相关(r=0.389,P<0.05),糜烂型OLP患者中CD8、4-1BB表达高于非糜烂型(P<0.05)。在OLP不同的临床亚组中,VAS评分、REU评分及基底细胞损伤程度均表现出差异(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,CD8与基底细胞损伤程度呈正比(P<0.05),CD8、4-1BB分别与VAS评分、REU评分存在正相关性(P<0.05)。结论 OLP患者局部组织中4-1BB表达升高,其与疾病活动进展程度呈正相关,4-1BB可能通过调控CD8⁺ T细胞参与OLP的发生发展。     

人共刺激分子4—1BBL表达载体的构建及转染Tca8113细胞的研究

目的：克隆人肿瘤坏死因子配体超家族tumor necrosis factor superfamily，TNFSF）成员4—1BBL基因，构建其真核表达载体，并检测4—1BBL基因在Tca8113中的表达。方法：从淋巴细胞中提取RNA，用RT—PCR方法将4—1BBL的编码序列cDNA扩增。然后将该基因的编码序列插入真核荧光蛋白载体pEGFP—C1质粒中，构建成最终的表达载体DEGFP—C1—4—1BBL。运用脂质体方法将pEGFP—C1—4—1BBL转染Tca8113细胞，转染24h后，荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达．RT—PCR和免疫印迹检测4—1BBL在该细胞中的表达。经G418筛选后。用有限稀释法建立稳定高表达的带有4—1BBL基因的Tca8113细胞系。结果：从淋巴细胞中提取的RNA经RT—PCR扩增出目的基因4—1BBL，其全长大小为768bD。测序鉴定该序列与GenBank中的序列相同。转染pEGFP—C1—4—1BBL载体的靶细胞Tca8113中．荧光显微镜下可见其表达绿色荧光蛋白，RT—PCR方法检测到目的基因4—1BBL的768bp大小的cDNA扩增产物。裂解的4—1BBL／rca8113基因转染细胞膜蛋白中相对分子质量约27．5Kd的特异性条带。结论：转染4—1BBL基因细胞株的建立．为该基因功能的后续研究和单克隆抗体的研制奠定了基础。     

维甲酸相关核孤儿受体γt和4-1BB/4-1BBL在口腔扁平苔藓中的表达及意义

目的 研究口腔扁平苔藓（OLP）患者外周血中维甲酸相关核孤儿受体γt（RORγt）和4-1BB/4-1BBL mRNA的表达。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）法检测30例OLP患者和30例健康人外周血中RORγt和4-1BB/4-1BBL的基因表达水平。结果在OLP患者中,RORγt、4-1BB、4-1BBL mRNA的表达水平显著高于对照组（P<0.05）,结果 经2-ΔΔCT转换后,OLP组3种基因mRNA表达水平分别是健康对照组的3.087、3.320和4.005倍。RORγt和4-1BB mRNA的表达水平无明显相关性（P>0.05）,4-1BB和4-1BBL mRNA表达水平呈正相关（r=0.455 0,P<0.05）。结论 RORγt和4-1BB/4-1BBL在OLP的发病中起了一定作用。     

CD8~+CD28~-调节性T细胞在颞下颌关节紊乱病中的作用及其与雌激素的相关性

目的初步探讨CD8+CD28-调节性T细胞在颞下颌关节紊乱病(temporomandibular disorders,TMD)发病机制中的作用、其表达与雌激素的相关性以及临床意义。方法 TMD患者随机分为观察组与对照组各30例,对照组仅给予透明质酸钠关节腔注射治疗,观察组在对照组的基础上给予咬合板治疗;另外收集30例健康志愿者血样。采用流式细胞术检测纳入对象外周血、关节液内CD8+CD28-调节性T细胞以及白介素10与转化生长因子β1的含量;放射免疫法检测雌二醇的含量;评价治疗前后颞下颌开口指数及视觉模拟疼痛评分的变化。结果治疗前两组患者外周血雌二醇、CD8+CD28-T细胞、白介素10及转化生长因子β1的百分比均明显高于志愿者(P<0.05),外周血、关节液中以上4项指标在观察组与对照组之间的差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后两组以上指标均有不同程度下降,但观察组显著低于对照组(P<0.05)。治疗后观察组颞下颌开口指数及视觉模拟疼痛评分均低于对照组(P<0.05)。相关性分析显示CD8+CD28-T细胞及其细胞因子与雌激素及颞下颌开口指数、视觉模拟疼痛评分呈正相关性(P<0.05)。结论 TMD患者外周血及颞下颌关节液中CD8+CD28-T细胞的含量与雌激素水平呈正相关性,与其临床症状密切相关。     

CD4~+CD25~+调节性T细胞在口腔鳞状细胞癌中的变化及临床意义

目的 观察CD4+CD25+调节性T细胞特异性转录因子FOXP3在口腔鳞状细胞癌(鳞癌)中的表达情况,以探讨其在口腔鳞癌发生发展中的临床意义。方法 通过免疫组化SP法检测10例正常口腔黏膜组织和36例口腔鳞状细胞癌中FOXP3的表达。结果 FOXP3阳性的CD4+CD25+调节性T细胞在高分化组中的阳性率为26.4%、中分化组为42.7%、低分化组为63.5%,与正常组2.81%相比,差异有统计学意义(P<0.05),且其阳性率与与肿瘤分化程度密切相关(P<0.05)。结论 FOXP3阳性的CD4+CD25+调节性T细胞的表达水平的增加与机体免疫功能低下密切相关,其在口腔鳞癌的发生发展中可能起着重要的作用。     

T细胞免疫和细胞凋亡在口腔扁平苔藓发病中的作用

目的通过探讨口腔扁平苔藓（OLP）中细胞凋亡情况及CD4＋、CD8＋T细胞和CD4/CD8比例的变化分析细胞免疫与细胞凋亡的关系,进一步了解OLP的发病机制。方法应用免疫组化SP法检测27例OLP组织中CD4＋、CD8＋T细胞的表达水平,并用原位末端转移酶标记法（TUNEL）定位检测17例OLP中细胞凋亡情况。结果OLP组固有层中CD4＋、CD8＋T细胞明显高于对照组（P＜0.05）,CD4/CD8值降低。OLP组中上皮内细胞凋亡指数高于对照组,固有层淋巴细胞凋亡指数明显低于对照组。结论OLP组固有层中CD4＋、CD8＋T细胞浸润的增加、CD4/CD8比值的变化及OLP中上皮细胞和固有层淋巴细胞凋亡异常,说明细胞免疫功能紊乱和细胞凋亡异常在OLP发病中起重要作用。     

4-1BB及其配体在口腔癌免疫治疗中的作用

4-1BB和4-1BB配体(4-1BBL)为肿瘤坏死因子/肿瘤坏死因子受体(TNF/TNFR)超家属的成员.研究发现,4-1BB和4-1BBL相互作用产生的共刺激信号在机体肿瘤免疫中起重要作用.本文通过对4-1BB/4-1BBL在共刺激作用的研究,探讨其在口腔癌免疫治疗中的潜在作用.     

CD4^＋CD25^＋调节性T淋巴细胞及其在口腔中的研究现况

长期以来,由于缺乏确切的细胞表面标志和发挥抑制作用的分子基础,免疫学家对体内是否存在以抑制自身T细胞活化等免疫反应为主要功能的T细胞亚群观点各异;1995年Sakaguchi等人的实验证实了CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞具有免疫抑制作用,并将这类具有免疫抑制（或调节）功能的T细胞群统称为调节性T细胞（regulatory T cells）,     

Tca8113细胞exosomes的制备、鉴定及体外抗瘤作用观察

目的:探讨舌癌Tca8113细胞能否分泌exosomes,为口腔肿瘤的免疫治疗寻找新方法。方法:采用超速离心及差异密度梯度离心等方法,从Tca8113细胞中分离并纯化exosomes,透射电镜观察其超微结构,Westernblot分析其表面蛋白成分,最后通过与树突状细胞(dendritic cells,DC)及细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)等介导的细胞毒性实验来观察exosomes体外抗肿瘤效应。结果:从Tca8113细胞中成功分离并纯化出exosomes,其结构及携带蛋白与其他细胞来源的相似,并发现其分泌的exosomes还携带有肿瘤抗原MAGE蛋白。体外抗瘤实验表明:负载exosomes的DC诱导的CTL对Tca8113细胞的杀伤率明显高于未负载exosomes的DC诱导的CTL及加IL-2培养的T细胞,有显著性差异(P<0.01)。结论:舌癌Tca8113细胞能分泌exosomes,exosomes携带各种与肿瘤免疫相关的蛋白,负载DC后,可以诱导T细胞成为抗原特异性CTL,具有特异杀伤肿瘤细胞的功能,为口腔肿瘤的免疫治疗开拓了新的途径。     

TGF-β1/iNOS在Tca8113细胞系中的表达

目的:探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitricoxide synthase,iNOS)在舌鳞癌细胞株Tca8113中的表达,为进一步研究TGF-β1和iNOS在舌鳞癌浸润转移中的作用提供实验依据。方法:应用SP免疫组化方法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,对舌鳞癌细胞株Tca8113中TGF-β1和iNOS的蛋白、mRNA表达情况进行检测。结果:SP免疫组化检测到TGF-β1/iNOS蛋白在舌鳞癌Tca8113细胞胞浆中呈强阳性表达,RT-PCR检测到舌鳞癌Tca8113细胞株中TGF-β1/iNOS的mRNA条带明显。结论:TGF-β1/iNOS的蛋白和mRNA在舌鳞癌Tca8113细胞株中同时呈高水平表达。     

NKG2D在口腔鳞癌患者CD3(+)CD56(+)NKT细胞中的作用

目的:探讨口腔鳞癌患者CD3(+)CD56(+)NKT细胞NKG2D受体抗肿瘤免疫的调节作用.方法:分别从30例口腔鳞癌患者和30例正常人外周血中提取CD3(+)CD56(+)NKT细胞,实时定量PCR和Western印迹分析NKG2D在分子水平和蛋白水平的表达差异.通过siRNA-NKG2D转染方法,分析NKG2D受体对CD3(+)CD56(+)NKT细胞的细胞毒性,分泌IL-2和IFN-μ的影响.采用SPSS13.0软件包对数据进行t检验和方差分析.结果:口腔鳞癌患者CD3(+)CD56(+)NKT细胞NKG2D的表达显著低于正常人(P＜0.05);转染siRNA-NKG2D的CD3(+)CD56(+)NKT细胞对肿瘤细胞的杀伤作用显著降低.结论:与正常人相比,口腔鳞癌患者中CD3(+)CD56(+)NKT细胞因NKG2D表达下降,其肿瘤免疫调控作用受到影响.这些发现为NKG2D应用于口腔鳞癌的免疫治疗奠定了基础.     

CD4+T细胞糖酵解在舍格伦综合征中的表达及作用

目的:探究糖酵解与舍格伦综合征(Sj?gren's syndrome,SS)疾病发展的关系.方法:利用磁激活细胞分选(magnetic-activated cell sorting,MACS)法提取CD4+T细胞,实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain re...     

PD1免疫治疗前后口腔癌患者T细胞免疫功能的变化

目的 本研究拟通过检测口腔癌患者PD1免疫治疗前后外周血中T淋巴细胞各亚群的表达情况,探讨肿瘤患者机体免疫系统发生的变化。方法 本项目拟采用2019年10月至2020年9月于河北医科大学第四医院60例经手术后病理证实口腔鳞癌的患者为研究对象,并给予PD1免疫治疗。用流式细胞仪检测CD4+T细胞和CD8+T细胞在T淋巴细胞中的百分比,计算CD4+T细胞/CD8+T细胞的比值。ELISA法检测口腔癌患者PD1免疫治疗前后血液中的IFN-γ和IL-2水平。结果 经过PD1治疗后,口腔癌患者血液中IFN-γ、IL-2含量、CD4+T细胞百分比及CD4/CD8+T细胞比值都明显升高(P<0.001);在PD1治疗后,口腔癌患者血液中CD8+T细胞百分比的含量显著降低（P<0.001）,口腔癌患者在接受PD1免疫治疗之后,患者的免疫功能显著增强。结论 运用PD1免疫治疗口腔癌患者,治疗前后患者T细胞免疫功能明显增强,具有一定的临床应用价值与应用前景,为临床上应用针对口腔癌的免疫治疗提供理论依据。     

鞘氨醇-1-磷酸受体4在口腔鳞状细胞癌中的表达及生物学功能

目的 ：探讨鞘氨醇-1-磷酸受体4(sphingosine-1-phosphate receptor 4,S1PR4)在口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma,OSCC）中的表达及生物学功能。方法 ：通过实时荧光定量PCR (RT-qPCR)、免疫印迹实验（Western blot）和免疫组织化学染色,分析OSCC组织样本及细胞系（WSU-HN4、WSU-HN6、CAL27、WSU-HN30）中S1PR4的表达。通过S1PR4拮抗剂（CYM50358）抑制S1PR4活性,利用CCK-8以及克隆形成实验检测CYM50358对OSCC细胞增殖的影响。通过流式细胞术分析CYM500358对OSCC细胞凋亡的影响。采用SPSS 23.0软件包对数据进行统计学分析。结果：OSCC中的S1PR4转录及表达显著上调,CYM50358处理组OSCC细胞增殖活性显著低于空白对照组（P<0.05）,CYM50358处理组OSCC细胞克隆形成能力显著低于空白对照组（P<0.05）,CYM50358处理组OSCC细胞凋亡比例显著高于空白对照组（P<0.05）...     

口腔扁平苔藓患者CD4+T细胞中miR-155功能调控对CD4+T细胞和角质形成细胞的影响

目的 探讨糜烂型口腔扁平苔藓(erosive oral lichen planus,EOLP)患者 CD4+T 细胞中miR-155功能调控对CD4+T 细胞及角质形成细胞的影响.方法 选择EOLP 患者和健康志愿者各6名,用磁珠分离技术从外周血单个核细胞中分离 CD4 + T 细胞.以 Lipofectamin2000为载体,通过人 miR-155 agomir 和人 miR-155 antagomir及其相应阴性对照的修饰作用,实现CD4+T细胞中miR-155的功能性调控,使用ELISA检测上清中IFN-γ水平,同时用CCK8检测CD4+T细胞和角质形成细胞增殖活性.结果 EOLP患者CD4+T细胞中miR-155分别经agomir和antagomir修饰后,上清中IFN-γ含量较其阴性对照组下降(P<0.05);CD4+T细胞中miR-155功能无论上调或下调,均可以提高角质形成细胞的增殖活性,而共培养体系中角质形成细胞的细胞形态和增殖活性都会发生改变.结论 miR-155功能上调会使EOLP CD4+T细胞和角质形成细胞的增殖活性增加,而miR-155功能下调则会使EOLP CD4+T细胞增殖活性下降而角质形成细胞的增殖活性增加.     

DC在口腔鳞癌中的活化率分析

目的:探讨肿瘤浸润树突状细胞(tumor infiltration dendritic cells,TIDC)在口腔鳞癌中的活化率和意义。方法:采用免疫组织化学方法(Envision法)对10例正常口腔黏膜、10例癌前病变及30例不同分化程度口腔鳞癌中CD1a、HLA-DR的表达进行检测,并结合细胞形态特征确定树突状细胞(dendritic cells,DC)在组织中的浸润程度,依据Sprinzl等提出的分级标准分级,对其活化率进行统计分析。结果:①DC活化率:癌前病变组显著高于正常口腔黏膜组和口腔鳞癌组(P<0.01);而口腔鳞癌组略高于正常口腔黏膜组,但差异无显著性(P>0.05)。②CD1a表达阳性的DC活化率均与年龄、性别、发病部位无关(P>0.05)。③CD1a表达阳性的DC浸润程度与活化率间呈正相关(r=0.615,P<0.01)。结论:①口腔鳞癌中TIDC数量减少并存在功能缺陷,且随着恶性程度增加而加重。②TIDC浸润度及活化率反映了组织局部的免疫状况,可作为判断机体抗肿瘤免疫能力的一项指标。③肿瘤组织中TIDC浸润度及活化率降低,可能是肿瘤发生免疫逃逸的原因之一。     

c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸联合转染对人舌鳞癌Tca8113细胞的干预作用

我们采用c-erbB-2与c-raf-1反义寡核苷酸联合转染的方法，通过一系列实验，观察对人舌鳞癌细胞株(Tca8113)增殖的抑制作用。     

骨形成蛋白(BMP)-2/4,IA型BMP受体及Smad1、4、5在Tca8113舌癌细胞中的表达及意义

目的：认识和分析BMPs及其信号传导因子与口腔鳞状细胞癌发生、发展的可能关系。方法：用免疫组织化学方法检测BMP－2／4，IA型BMP受体及Smad1,4,5在Tca8113细胞中表达并分析其意义。结果：BMP－2／4，IA型BMP受体及Smad1,4,5在Tca8113细胞中有表达。其中，在胞浆中发现有BMP－2／4的阳性信号，在胞膜中有IA型BMP受体的阳性信号，在胞质、胞核中有Smad1,4,5的强阳性表达。结论：BMPs及其信号传导因子与口腔鳞状细胞癌发生、发展有密切关系。