缺氧和梭曼单一或复合作用对PC12细胞的细胞毒效应

目的：缺氧与梭曼中毒能引起不可逆性脑损伤认识已久，然而，缺氧与梭曼中毒复合对脑的作用所少甚少，本研究应用ＰＣ１２细胞损伤模型，探讨缺氧和梭曼单一或复合作用对神经瘤细胞的损伤，方法：培养的ＰＣ１２细胞暴露于含不同氧是分比的空气及含不同浓度梭曼的培养液，测定细胞乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）的释放及细胞存活率的变化，用以指标细胞毒效应的量效，时效关系，用ｔ检验及双因素方差分析判别统计差别显著性及缺氧，梭曼双因素     

梭曼中毒复合缺氧损伤对PC12细胞游离钙的影响

目的：探索钙在梭曼中毒神经细胞损伤中的作用及其机理。方法：采用Ｃａ＾２＋指示剂Ｆｕｒａ－２作为细胞内钙离子荧光探针，检测了梭曼中毒复合缺氧损伤时ＰＣ１２细胞内「Ｃａ＾２＋」的变化。结果：单纯梭曼对细胞内「Ｃａ＾２＋」，无明显影响，在乙酰胆碱和／或谷氨酸存在的情况下，梭曼中毒明显升高「Ｃａ＾２＋」，单纯缺氧也可使「Ｃａ＾２＋」升高，梭曼中毒复合缺氧损伤「Ｃａ＾２＋」升高更加明显。尼莫地平可对抗梭中毒     

缺氧复合梭曼中毒对PC12细胞中IL-4、IL-8和TPK活性的影响

目的研究缺氧复合梭曼中毒PC12细胞中白介素-4、白介素-8(IL-4、IL-8)和酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性的变化.方法采用ELISA法和放射免疫技术检测缺氧复合梭曼中毒PC12细胞的IL-4、IL-8和TPK活性.结果单纯梭曼中毒PC12细胞胞浆、胞核的TPK以及IL-4、IL-8活性在中毒2 h升高,12 h活性水平最高,24 h活性降低.缺氧复合梭曼中毒组PC12细胞胞浆、胞核的TPK以及IL-4、IL-8活性在缺氧中毒2 h升高,6 h最高,12 h活性降低,各时相点均明显高于正常对照组.结论提示酪氨酸蛋白激酶、IL-4、IL-8参与缺氧复合梭曼中毒所致脑损伤的发病机制.     

高钾离子引起PC12细胞内游离Ca2+浓度升高的机制

目的：分析高钾离子（Ｋ＾＋）引起ＰＣ１２细胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ＾２＋］ｉ）升高的可能机制。方法：利用ＭｉｒａＣａｌ Ｉｍｉａｇｅ Ｓｙｓｔｅｍ检测［Ｃａ＾２＋］ｉ，Ｃａ＾２＋荧光探针为Ｆｕｒａ－２／ＡＭ。结果：（１）ＫＣ１浓度为３０￣１００ｍｍｏｌ／Ｌ时，可剂量依赖性地诱导ＰＣ１２细胞［Ｃａ＾２＋］ｉ升高；（２）在细胞外无Ｃａ＾２＋时，高Ｋ＾＋对ＰＣ１２细胞［Ｃａ＾２＋］ｉ无影响；（３）Ｌ－     

缺氧PC12细胞中细胞因子和酪氨酸蛋白激酶活性的变化

目的 研究缺氧对PC12细胞中IL-1β、4、8、13(白介素-1β、4、8、13)和酪氨酸蛋白激酶(TPK)活性的影响.方法 采用放射免疫技术和ELISA法检测缺氧后PC12细胞的IL-1β、4、8、13和TPK活性.结果 缺氧后PC12细胞胞浆、胞核的TPK以及IL-1β、4、8、13活性在缺氧中毒2h升高,6h最高,12h活性降低,各时相点均明显高于正常对照组.结论 提示在缺氧所致的脑损伤发病机制中酪氨酸蛋白激酶、细胞因子及其相关的细胞内信号传递方面起了重要的作用.     

基于凝血酶合并缺氧诱导PC12细胞损伤的模型研究

目的：探索凝血酶合并缺氧对PC12细胞损伤的最佳反应时间点,为进一步研究凝血酶在缺血性脑损伤中的意义提供实验方法。方法建立体外缺氧合并凝血酶诱导的PC12细胞损伤模型。按照常规细胞培养方法,采用三气培养箱（1％ O2,5％ CO2,94％ N2）和无糖DM EM培养液造成细胞缺氧模拟缺血,并同时加入不同浓度的凝血酶（0、50、100、150和200 U／mL ）,再将每组都作用于1、6、12、24 h后,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）分析细胞的存活率、TUNEL法检测细胞的凋亡程度。结果随着缺氧时间的延长和凝血酶浓度的增加,细胞存活率逐渐下降,TUNEL细胞阳性率和凋亡率逐渐升高。低浓度凝血酶（50 U／mL）在缺氧1 h后,与对照组（0 U／mL）相比细胞存活率有所升高,提示低凝血酶可能有保护作用。尤以缺氧12 h后开始细胞损伤更为明显,150 U／m L凝血酶组作用12 h后与对照组相比细胞存活率显著下降（ P＜0．01）,凋亡率显著增加（ P＜0．05）;且200 U／mL凝血酶作用12 h和150、200 U／mL 凝血酶组作用24 h后细胞存活率与对照组比较差异均有统计学意义（ P＜0．05）。结论150 U／mL凝血酶在缺氧作用12 h后为研究凝血酶合并缺氧对PC12细胞损伤的最佳模型条件。     

缺氧和血清剥夺诱导的PC12细胞NDA损伤与修复

探讨PC12细胞在缺氧（37℃,5％,O2,95％,N2）,血清剥夺条件下NDA损伤与修复,凋亡,坏死或生存的变化规律,应用单细胞凝胶电泳技术,流式细胞学技术检测在不同时间点,缺氧,无血清培养等诱导下对PC12细胞单链DNA损伤与修复,凋亡的影响,结果发现在PC12细胞DNA同伤值均在0.5h时达第一个峰值,随后下降,3h后DNA损伤数值再次逐渐增加并达到最高值,细胞凋亡峰值略滞后于DNA损伤峰值,并于DNA损伤程度基本相平行。提示PC12细胞在缺缺氧和血清剥夺条件下存在NDA务与修复的动态变化过程,DNA损伤可能直接诱导细胞凋亡,DNA缶伤程度在早期与细胞凋亡程度相一致。     

血管紧张素Ⅱ2型受体活化促进缺氧/复氧损伤PC12细胞的生长

目的 探讨血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)活化对缺氧/复氧(H/R)损伤PC12细胞生长的影响。方法PC12细胞是大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株,具有神经内分泌细胞的一般特征。将PC12细胞用连二亚硫酸钠(Na₂S₂O₄)处理后复制H/R损伤的神经细胞模型;H/R损伤PC12细胞分别予以AT2R拮抗剂(PD123319)、AT2R激动剂(CGP42112)进行处理,采用MTT法观察细胞存活率的变化;以逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)检测Bax、Bcl-2 mRNA表达的变化。结果PC12细胞经40mmol/LNa₂S₂O₄处理1 h后,MTT法检测的细胞存活率约为55~60%,提示复制H/R损伤模型成功;H/R损伤PC12细胞经CGP42112处理后,细胞存活率显著增高,而Bax mRNA 表达下调,Bcl-2 mRNA 表达上调;而PD123319处理后,细胞存活率显著下降, Bax mRNA 表达上调,Bcl-2 mRNA 表达则下调。结论AT2R活化可改善H/R损伤的PC12细胞的生长,其机理可能与其上调Bcl-2/Bax的比值有关。     

硫化氢对化学性缺氧诱导PC12细胞凋亡的影响

【目的】 探讨硫化氢(H2S)对抗二氯化钴(CoCl2)诱导PC12细胞凋亡的作用及其初步机制｡【方法】 应用化学性缺氧模拟剂CoCl2在PC12细胞建立化学性缺氧损伤模型;以硫氢化钠(NaHS)作为H2S的供体;应用CCK-8比色法检测细胞存活率;碘化丙啶(PI)染色流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率; Hoechst33258 染色检测细胞凋亡的形态学变化; 罗丹明123(Rh123) 染色荧光显微镜照相检测细胞线粒体膜电位(MMP); 2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相检测细胞内的活性氧 (ROS)水平｡【结果】 CoCl2引起PC12细胞的存活率显著降低及凋亡率明显增加, 同时引起PC12细胞的MMP 明显降低及ROS 生成显著增加｡在600 μmol/L CoCl2处理PC12细胞前,应用100 ~ 400 μmol/L NaHS 预处理30 min,呈浓度依赖性地阻断CoCl2引起PC12细胞的存活率降低; 200 μmol/L､400 μmol/L NaHS 预处理能显著地降低600 μmol/L CoCl2 引起PC12 细胞的凋亡率增加并阻断CoCl2 引起的MMP降低及ROS升高｡【结论】 H2S 具有神经细胞保护作用, 能明显地对抗CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,此作用可能与其减少ROS生成,提高MMP有关｡     

缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液对PC12细胞的影响

为研究缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液对PC1 2细胞的影响 ,在PC1 2细胞培养液中加入缺氧预适应小鼠脑匀浆提取液及其去蛋白提取液 ,检测缺氧 2 4h和 4 8h后PC1 2细胞LDH和MTT代谢的变化。结果发现 ,未去蛋白的脑匀浆组PC1 2细胞活性显著增加 ,而去蛋白组细胞活性未见显著变化。提示预适应脑组织中有某种或某些蛋白质类神经保护性物质生成     

Effects of hypoxia, soman and their combination on PC12 cells

Nowadayshypoxic/ischemicbraininjuryisahotprobleminneurology['].Manypreviousstudieshaveinvolvedinthebrainfunction,metabolismandmorphologyatdifferentlevelsofintactanimal,organs,cellsandmolecules.Thenervoussystem,especiallythecentralcholinergicsystem,isthetargetofsomantoxicity['].Sincecholinergiccrisisinducedbytheinhibitionofacetylcholinergicester(AchE)aftersomanintoxicationisthemaincauseofdeath,majorinterestoftheresearcherswasconcentratedonsoman'seffectsoncholinergicnervoussystem.Thoughbraininj…     

磷脂酶A2在模拟高原梭曼中毒性脑损伤中的变化

目的 探讨磷脂酶A2（PLA2）在缺氧复合梭曼中毒脑损伤的作用机制。方法 应用微量滴定，放免法从动物整体水平观察了高原缺氧，梭曼中毒单一与复合致伤后12、24、48h大鼠脑组织含水率（WCB）、伊文思蓝（EB）含量，PLA2的活性，环磷酸腺苷（cAMP)含量的变化。结果 高原中毒组脑组织伊文思蓝含量，PLA2的活性，ADP、AMP、cAMP含量在中毒后24、48h明显高于平原中毒组，高原对照组和正常对照组，应用钙通道阻断剂尼莫地平可明显降低PLA2活性，减轻缺氧中毒后脑组织水肿。结论 磷脂酶A2、腺苷酸环化酶的激活可能参与高原缺氧复合梭曼中毒脑损伤。     

钠/钙和钠/氢交换蛋白与心肌缺血再灌注损伤

Ca2+超载与缺血/再灌注损伤有密切关系,钠/钙交换蛋白和钠/氢交换蛋白是缺血/再灌注Ca2+超载过程中两个至关重要的因素。目前已有很多钠/钙交换蛋白(NCX)抑制剂和钠/氢交换蛋白(NHE)抑制剂用来防止Ca2+超载引起的缺血再灌注损伤。     

缺氧条件下梭曼中毒大鼠脑G蛋白及cAMP-PKA信号系统的变化

目的 探索G蛋白及cAMP－PKA信号系统在缺氧条件下梭曼毒性升高机制中的作用。方法 Western blot检测Giα、Gqα含量、cAMP浓度及PKA活性升高，Giα下降，缺氧条件下梭曼中毒与单纯梭曼中毒组有显著差别；阿托品可对抗PKA活性的升高。在所观察的三个脑区中，以纹状体变化最为明显。结论 G蛋白及其介导的cAMP－PKA信号系统参与了缺氧条件下梭曼毒性升高的形成机制。     

镉对人体外周血淋巴细胞内游离Ca~(2+)及钙调素影响的研究

采用体外实验方法，观察CdCl2对培养24h的人外周血淋巴细胞内游离Ga2+浓度及CaM活性的影响。结果表明：细胞内游离Ca2+浓度与镉浓度（≤100μmol／L）及染毒时间（≤60min）存在明显的剂量及时相相关，在≤50μmol／LCdCl2作用下，CaM活性随染毒剂量增加而升高，50μmol／LCdCl2使CaM活性增至0μmol／L组的190．22％（P＜0．05），但100μmol／LCaCl2则对CaM无激活作用。在一定镉浓度（0～50μmol／LCdCl2）及染毒时间（0～40min）内，细胞内游离Ca2+浓度与CaM活性呈*一致性变化，提示镉的免疫毒作用机制与Ca2+、CaM系统有关。     

1,2-二氯乙烷对大鼠肝细胞内游离钙离子浓度的影响

目的了解1，2-二氯乙烷染毒24h对大鼠肝细胞的损伤及其机理。方法运用显微荧光术测定了大鼠肝细胞内游离钙离子浓度，同时，测定了大鼠肝细胞培养上清液乳酸脱氢酶（LDH）活力作为大鼠肝细胞受损的指标。结果所有剂量组的1，2-二氯乙烷的大鼠肝细胞内游离钙离子浓度与对照组比较差异均无显著性（P〉0．05）；LDH活力仅在浓度为5mmol／L的1，2-二氯乙烷染毒组与对照组比较差异也无显著性（P〉0．05）；而1，2-二氯乙烷其他染毒组（即浓度为10mmol／L和20mmol／L）与对照组比较差异均有显著性（P〈0．01）。结论较高浓度（10mmol／L和20mmol／L）的1，2-二氯乙烷能损伤大鼠肝细胞，损伤的途径不是通过破坏肝细胞内钙稳态机制。     

不同Ca2+浓度透析液对维持性血液透析患者血PTH和CRP的影响

目的 探讨3种不同的钙离子浓度的透析液对维持性血液透析患者血钙、钙磷乘积、血PTH及CRP的影响有无不同.方法 选择维持性血液透析的≥18岁患者共45例患者,随机分成3组,分别用3种不同含Ca2 浓度透析液进行血液透析3个月,观察病人透析全程的血压变化、有无低钙抽搐、骨痛,在治疗前及治疗3个月时检测其血清钙、磷、iPTH及CRP变化.结果 透析3个月后用低Ca2 浓度透析液,患者血清iPTH值较前明显增高,血清CRP值较前明显降低,P<0.05;而高Ca2 浓度透析液可使患者血清iPTH值较前降低,但P>0.05,血清CRP值较前明显增高,P<0.05.结论 低钙透析液会降低患者血钙,对血磷无明显影响,可刺激血透患者甲状旁腺激素的分泌,但可减轻尿毒症患者的炎症状态;高钙透析液可加重尿毒症患者的炎症状态.