肉汤稀释法酵母菌药物敏感性试验及质量控制介绍

美国临床实验室标准化委员会(NCCLs)于1997年公布了肉汤稀释法酵母菌抗真菌药物敏感性试验参考方法(M27-A),并于2002年进行了修订(M27-A2)[1].下面简要介绍肉汤稀释法酵母菌药物敏感性试验方法及质量控制.     

肉汤稀释法酵母菌药物敏感性试验及质量控制介绍

美国临床实验室标准化委员会(NCCLs)于1997年公布了肉汤稀释法酵母菌抗真菌药物敏感性试验参考方法(M27-A),并于2002年进行了修订(M27-A2)[1]。下面简要介绍肉汤稀释法酵母菌药物敏感性试验方法及质量控制。     

美国临床实验室标准化委员会2003年版产孢丝状真菌药敏试验方案简介

美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)1997年版推出了关于酵母菌的液体培养基稀释法(全量法与微量法)抗真菌药物敏感性试验方案M27-A。该方案准确性高、重复性好，实验室间结果的一致性可以与抗细菌的药物敏感试验相媲美。之后，NCCLS1998年版又提出了关于产孢丝状真菌的抗真菌药敏试验倡导方案M38-P。该方案包括微量液基稀释法与多量液体培养基稀释法，     

评价3种体外敏感试验方法检测念珠菌对氟康唑和伏立康唑的敏感性

目的 评价3种实验室常用念珠菌体外药敏试验方法在测定氟康唑和伏立康唑对念珠菌的体外活性上的可靠性及实用性.方法 应用美国临床实验室标准化委员会微量肉汤稀释法(NCCLS M27-A2),NCCLS念珠菌纸片扩散法(M44-A),丹麦ROSCO纸片扩散法、法国生物梅里埃公司ATBFUNGUS3药敏试验板条法检测氟康唑和伏立康唑对85株临床分离念珠菌及2株质控菌株的体外抗菌活性.采用SPSS 13.0软件分析结果,比较3种实验室常用药敏试验方法与NCCLS M27-A2微量肉汤稀释法的相关性.结果 3种体外药敏试验方法所得结果分别与M27-A2肉汤微量稀释法进行比较,氟康唑药敏试验结果比对,NCCLS M44-A纸片扩散法一致率为83.5%,ROSCO纸片扩散法一致率为76.4%,ATB FUNGUS 3药敏试验板条法一致率为72.9%;伏立康唑药敏试验结果比对,3种药敏试验方法一致率均为85.9%.结论 在检测氟康唑和伏立康唑对常见念珠菌体外抗菌活性的3种方法所得结果与肉汤稀释法存在一定的差异.对部分菌株(尤其是剂量依赖敏感株)需要进一步应用M27-A2肉汤微量稀释法确定其MIC值.各种体外药敏试验结果与临床体内疗效还需进一步研究.     

氟康唑体外抗菌活性及五种体外敏感试验方法的比较

目的 对比研究五种酵母菌体外药敏试验方法在测定氟康唑对酵母菌的体外活性检测上的可靠性及实用性。方法 分别应用美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）M27-A常量肉汤稀释法、微量肉汤稀释法，NCCLS及ROSCO纸片扩散法、浓度梯度法测定氟康唑对155株临床分离的酵母菌及4株质控菌株的体外活性。采用WHONET-5软件及SPSS软件对结果进行分析，比较各种药敏试验方法与M27-A常量肉汤稀释法的相关性。结果 4种体外药敏试验方法所得结果分别同M27-A常量肉汤稀释法进行比较，浓度梯度法一致率为83．9％，NCCLSM44-P纸片扩散法一致率83．1％，ROSCO纸片扩散法一致率为78．1％，微量肉汤稀释法一致率为93．5％。结论 5种酵母菌体外药敏试验方法在检测氟康唑对临床常见酵母菌的体外活性检测上存在一定的差异，本次试验结果表明，微量肉汤稀释法与NCCLSM27-A常量肉汤稀释法的一致性最佳，其方法结果准确可靠、重复件好．活用于常规下作。     

丝状真菌常规药物敏感试验及其质量控制

美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)于1998年推出了丝状真菌肉汤稀释法抗真菌药物敏感性试验参考方法M38-P。该方法包括常量和微量肉汤稀释法,适用于曲霉菌、镰刀菌、波氏假阿利霉菌、根霉菌及孢子丝菌等丝状真菌。2002年NCCLS对该方法又进行了修订,即M38-A[1]。现对丝状真菌常规药物敏感试验及其质量控制简要介绍如下。1抗真菌药物1.1来源直接购买厂家生产的纯药物粉剂,不能使用药店或其他临床制剂;药物粉剂按厂家说明储存,或存于-20℃甚至更低温度的干燥器(最好是真空干燥器)中。1.2贮存液的配制与贮存抗真菌药物贮存液浓度至少应为…     

三种方法检测酵母菌对氟康唑药敏试验一致性的研究

目的:对比研究3种酵母菌体外药敏试验在测定酵母菌对氟康唑药物敏感的可靠性及实用性。方法:以美国实验室标准协会(CLSI)酵母菌纸片扩散法药敏试验(M44-A)为参照,采用丹麦ROSCO纸片扩散法、法国梅里埃ATB FUNGUS3药敏试验,检测82株临床分离的酵母菌对氟康唑的药物敏感度。采用WHONET-5.4和SPSS13.0软件对结果进行分析,比较ROSCO纸片扩散法、ATB FUNGUS3与M44-A结果间的一致性。结果:ROSCO纸片扩散法检测82株临床分离酵母菌对氟康唑的药敏结果与CLSI M44-A检测结果间差异无统计学意义(P>0.05),一致率为80.5%;ATBFUNGUS3检测的药敏结果与CLSIM44-A检测结果间差异有统计学意义(P<0.01),一致率为74.4%,其中光滑假丝酵母菌和白假丝酵母菌的检测结果与参照差异较大。结论:在检测酵母菌对氟康唑体外药物敏感度方面,ROSCO纸片扩散法与M44-A的一致性较好;对部分菌株,则需进一步应用微量肉汤稀释法M27-A2检测,以确定其最低抑菌浓度(MIC)。     

两种药敏培养基在酵母菌体外药敏试验中的临床应用评价

目的比较两种药敏琼脂在真菌药敏试验中的临床应用效果。方法应用ROSCO抗真菌药纸片分别在RPMI 1640琼脂和葡萄糖美兰M—H（GMBMH）琼脂上的纸片扩散法（K—B法）及美国临床实验室标准化委员会（NCCLs）M27-A宏量肉汤稀释法测定192株临床分离的酵母样真菌对两性霉素、氟康唑、氟胞嘧啶、伊曲康唑、酮康唑的药敏情况。结果RPMI 1640和GMBMH对宏量肉汤稀释法的相关系数分别为0．93、0．82。未出现一种方法测得的敏感或耐药菌株在另一种方法中表现为耐药或敏感的严重错误。结论RPMI1640和GMB-MH对NCCI。SM27-A宏量肉汤稀释法测定结果均表现出较好相关性。但对NCCLs M27-A宏量肉汤稀释法的相关程度,RPMI 1640优于GMB-MH。RPMI 1640纸片扩散法可以替代NCCLs M27-A在临床推广使用。     

真菌药敏纸片扩散法实验与应用研究

目的评价氟康唑、两性霉素B、伊曲康唑、酮康唑4种抗真菌药物在萄萄糖美蓝M-H琼脂培养基上进行K-B纸片扩散法药敏试验的可行性。方法应用NCCLS认可的氟康唑纸片扩散法和NCCLS M27-A肉汤稀释法检测氟康唑(FLC)、两性霉素B(AMB)、伊曲康唑(ITC)、酮康唑(KTC)对131株假丝酵母菌的敏感性;用纸片扩散法同时检测2种氟康唑(FLC1:25μg/片;FLC2:15μg/片)纸片的敏感性,对其结果进行比较。结果纸片扩散法中:FLC1与肉汤稀释法符合率为97.71%(128/131);FLC2与肉汤稀释法符合率为96.95%(127/131);AMB、ITC、KTC分别与肉汤稀释法符合率为98.47%(129/131)、98.47%(129/131)、97.71%(128/131)。经Kappa检验,K值分别为:0.8952、0.8681、0.8118、0.8509、0.7190;FLC1、FLC2、AMB、ITC 2种方法一致性优,KTC 2种方法一致性良好。结论葡萄糖美蓝M-H琼脂可代替Shadomy琼脂,适用于常规纸片扩散法真菌药敏试验。     

Neo-Sensitab纸片法与微量稀释法检测常见酵母菌对酮康唑敏感性的比较

目的　探讨Neo Sensitab纸片法检测酵母菌对酮康唑的敏感性及与美国国家临床实验室标准化委员会 (NCCLS)的微量稀释法的符合率。方法　采用Rosco酵母真菌药敏纸片对 4 2株常见临床分离的酵母菌作了检测 ,同时根据NCCLS的M 2 7A方案采用微量稀释法测定了对酮康唑的最小抑菌浓度 (MIC) ,并对结果作比较分析。结果　Neo Sensitab抗真菌药敏纸片法与微量稀释法检测的 4 2株致病酶母菌对酮康唑的敏感性符合率为 95 .2 4 %。结论　Neo Sensitab抗真菌药敏纸片法具有操作简便、观察时间短、成本低廉等优点 ,在临床具有良好的实用性 ,能及时为临床医生在选择治疗方案时提供参考。     

流式细胞术快速检测念珠菌的药物敏感性

目的建立流式细胞术(FCM)快速检测念珠菌药物敏感性的方法。方法选定了3种代表性染料:碘化丙啶(PI)、FUN-1和DiOC5(3),采用FCM测定60株临床分离的念珠菌对氟康唑(FLC)和两性霉素B(AMB)的敏感性,并与美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的M27-A法的结果进行比较。结果PI、FUN-1和DiOC5(3)3种荧光染料均可用于FCM检测念珠菌的药物敏感性,其中PI、FUN-1均可用于FLC和AMB 2种药物的敏感性试验;与另外2种染料相比,利用PI染料进行检测的结果与M27-A法有更好的一致性,并且价廉易得,但其要求药物与细菌的孵育时间较另外2种染料长;DiOC5(3)仅可用于对AMB的最低抑菌浓度(MIC)测定,但其要求药物与细菌的孵育时间最短,只需0.5 h。结论利用FCM进行抗真菌药物敏感性试验,可大大缩短检测时间,但为获得与M27-A法较为一致的结果,应针对不同的药物选用不同的染料,设定各自的最佳检测条件。     

大量、微量肉汤稀释法和E-test在氟康唑敏感试验中的比较

由于广谱抗生素在免疫力严重低下的AIDS患者中广泛应用,严重的真菌感染不断增加,应用低毒性的azole类制剂要求体外抗菌药物敏感试验。作者应用E-test、微量肉汤稀释法和美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)关于氟康唑(FCZ)药物敏感试验的参考方法大量肉汤稀释法,对238株临床分离的念株菌和近平滑球拟酵母进行了药物敏感试验。80％MIC抑制终点在孵育48小时后用参考方法大量肉汤稀释法测定,分别在孵育24和48小时后判读MIC。结果微量肉汤稀释法和大量肉汤稀释法比较,所有菌株在孵育24小时和48小时判读MIC有极好的一致性,分别为93％和94％。E-test和大量肉汤稀释法比较,24小时判读MIC终点的符合率分     

恶性肿瘤患者念珠菌临床分离株的药物敏感性分析

目的 以美国临床实验室标准化委员会（NCCLS） M27-A方案的微量肉汤稀释法为金标准,评价丹麦ROSCO公司的纸片扩散法在检测念珠菌耐药性方面的应用价值,为临床实验室寻找一种简便的念珠菌药敏试验方法.方法 分别采用丹麦ROSCO公司抗真菌药敏纸片和法国生物梅里埃公司ATBFUNGUR2念珠菌药敏板条来检测78株常见念珠菌对5-氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑等4种抗真菌药物的敏感性,以NCCLS的微量稀释法作为金标准,评价纸片扩散法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值.结果 纸片扩散法检测5-氟胞嘧啶、两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑的药敏结果,其Kappa值达到了0.89,未出现一种方法敏感而另一种方法耐药的严重错误现象;对78株念珠菌的药敏结果进行分析,5-氟胞嘧啶、两性霉素B敏感性高,分别为88.20％和89.17％,氟康唑和伊曲康唑敏感性较低,分别为56.34％和52.12％.白色念珠菌和热带念珠菌对4种抗真菌药物的敏感性较高,分别为90.95％、85.71％,而光滑念珠菌和克柔念珠菌的敏感性低,分别为67.50％、41.67％.结论 纸片扩散法与微量稀释法一致性高,在临床实验室可以替代微量稀释法进行念珠菌的药敏分析.我院念珠菌对两性霉素B的敏感性最高,对伊曲康唑的敏感性最低;抗真菌药物对白色念珠菌的抑菌率最高,对克柔念珠菌的抑菌率最低.     

Neo-Sensitab纸片法与微量稀释法检测常见酵母菌对酮康唑敏感性的比较

目的 探讨Neo-Sensitab纸片法检测酵母菌对酮康唑的敏感性及与美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)的微量稀释法的符合率。方法 采用Rosco酵母真菌药敏纸片对42株常见临床分离的酵母菌作了检测，同时根据NCCLS的M-27A方案采用微量稀释法测定了对酮康唑的最小抑菌浓度(MIC)，并对结果作比较分析。结果 Neo-Sensitab抗真菌药敏纸片法与微量稀释法检测的42株致病酶母菌对酮康唑的敏感性符合率为95．24％。结论 Neo-Sensitab抗真菌药敏纸片法具有操作简便、观察时间短、成本低廉等优点，在临床具有良好的实用性，能及时为临床医生在选择治疗方案时提供参考。     

流式细胞术快速检测念珠菌的药物敏感性

目的建立流式细胞术（FCM）快速检测念珠菌药物敏感性的方法。方法选定了3种代表性染料：碘化丙啶（PI）、FUN-1和DiOC5（3）,采用FCM测定60株临床分离的念珠菌对氟康唑（FLC）和两性霉素B（AMB）的敏感性,并与美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）推荐的M27-A法的结果进行比较。结果PI、FUN—1和DiOC5（3）3种荧光染料均可用于FCM检测念珠菌的药物敏感性,其中PI、FUN-1均可用于FLC和AMB2种药物的敏感性试验;与另外2种染料相比,利用PI染料进行检测的结果与M27-A法有更好的-致性,并且价廉易得,但其要求药物与细菌的孵育时间较另外2种染料长;DiOC5（3）仅可用于对AMB的最低抑菌浓度（MIC）测定,但其要求药物与细菌的孵育时间最短,只需0．5h。结论利用FCM进行抗真菌药物敏感性试验,可大大缩短检测时间,但为获得与M27-A法较为-致的结果,应针对不同的药物选用不同的染料,设定各自的最佳检测条件。     

美国临床实验室标准化研究所2005年版有关药敏试验标准化更新要点

2005年美国临床实验室标准化研究所(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSL／NCCLS)出版的药敏试验手指南M100-S15中的更新要点，涉及2003年版的纸片法M2-A8、2003年版的稀释法M7-A6两个文件。     

结核患者深部真菌的分离鉴定及耐药分析

目的观察和评价结核患者深部真菌的分离培养及耐药情况。方法依据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推出的酵母菌的液体培养基稀释法抗真菌药物敏感试验标准方案(M-27)进行结果判断,采集2100份标本进行分离培养并对268份深部真菌进行鉴定和耐药分析。结果深部真菌的分离率为12.8%(268/2100),其中白念珠菌为70.5%(189/268),热带念珠菌为16.8%(45/268),克柔念珠菌为7.8%(21/268),光滑念珠菌为3.3%(9/268),并对7种抗真菌药物均出现不同程度的耐药,其中发现对7种抗真菌药物全耐药的白念珠菌9株,热带念珠菌2株。结论结核患者的深部真菌感染较严重并存在耐药倾向,应早诊断、早治疗。     

Rosco真菌药敏试验与其他方法的比较研究

目的对3种酵母菌药物敏感试验[E试验法、美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)认可的纸片扩散法、丹麦Rosco纸片扩散法]进行比较,探讨Rosco的纸片扩散法与其他2种方法的一致性.方法对临床分离的52株酵母菌用Rosco纸片扩散法做药敏试验,并与E试验及纸片扩散法(NCCLS认可)进行对照,同时用标准菌株做质控.结果氟康唑Rosco纸片扩散法与E试验法相符率为98.08%(51/52),与NCCLS认可的纸片扩散法相符率为96.15%(50/52).其他抗真菌药Rosco纸片扩散法与E试验法相符率分别为伊曲康唑98.08%(51/52);酮康唑98.08%(51/52);两性霉素B98.08%(51/52);氟胞嘧啶96.15%(50/52).经配对χ2检验,差异无显著性(P>0.05).结论 Rosco纸片扩散法与E试验法、NCCLS认可的纸片扩散法结果基本一致,其方法操作简便、结果直观、价廉、药物选择种类多、准确性好,适用于临床实验室常规抗真菌药敏试验.     

Rosco真菌药敏试验与其他方法的比较研究

目的　对 3种酵母菌药物敏感试验 [E试验法、美国临床实验室标准化委员会 (NCCLS)认可的纸片扩散法、丹麦Rosco纸片扩散法 ]进行比较 ,探讨Rosco的纸片扩散法与其他 2种方法的一致性。方法　对临床分离的 5 2株酵母菌用Rosco纸片扩散法做药敏试验 ,并与E试验及纸片扩散法 (NCCLS认可 )进行对照 ,同时用标准菌株做质控。结果　氟康唑Rosco纸片扩散法与E试验法相符率为 98.0 8% (5 1 / 5 2 ) ,与NCCLS认可的纸片扩散法相符率为 96 .1 5 % (5 0 / 5 2 )。其他抗真菌药Rosco纸片扩散法与E试验法相符率分别为 :伊曲康唑98.0 8% (5 1 / 5 2 ) ;酮康唑 98.0 8% (5 1 / 5 2 ) ;两性霉素B 98.0 8% (5 1 / 5 2 ) ;氟胞嘧啶 96 .1 5 % (5 0 / 5 2 )。经配对 χ2检验 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　Rosco纸片扩散法与E试验法、NCCLS认可的纸片扩散法结果基本一致 ,其方法操作简便、结果直观、价廉、药物选择种类多、准确性好 ,适用于临床实验室常规抗真菌药敏试验     

酵母菌的 NCCLS 药敏试验方法及其应用

应读者要求，特邀王文莉等详细介绍１９９２年美国国家临床试验标准化委员会（ＮＣＣＬＳ）公布的《酵母菌液基稀释法抗真菌药物敏感试验参考方案》的具体内容。包括试验用抗真菌药物的来源、母液的制备及其贮存方法；培养基的配制及其缓冲液的选择；具体的试验操作步骤及其质量控制；入选的试验用参照菌株等。另外，以附录形式简单介绍了作者所在真菌中心采用此方案进行的１３５株酵母菌的氟康唑药敏试验结果以及应用此方案的体会。总之，ＮＣＣＬＳ方案重复性好、准确性强，虽操作步骤比较复杂，但仍不失为一种可行的药敏试验方法，并为尽早与国际接轨，为致病酵母菌耐药性标准的确立，提供参考。