内标实时荧光定量PCR技术在HCVRNA定量检测中的应用分析

目的比较内标实时荧光定量PCR技术及国产实时荧光定量PCR法检测HCV RNA载量的检测结果,研究两种检测方法的灵敏度。方法采集丙肝患者抗病毒治疗前28例、治疗4周29例及治疗结束时29例患者外周血标本,分别用内标实时荧光定量PCR技术(COMBAS Taqman全自动分析系统)及国产实时荧光定量PCR法检测同一血清其HCVRNA定量值。结果内标实时荧光定量PCR技术最低检出下限是15IU/mL,抗病毒治疗前28例患者两种方法检测结果差异无统计学意义(P>0.05);抗病毒治疗4周时29例患者病毒载量经内标实时荧光定量PCR技术检测产生RVR的百分比是24.14%,而国产实时荧光定量PCR法产生RVR的百分比是检测79.31%,差异有统计学意义(χ2=16.39,P<0.01);抗病毒治疗结束时29例患者HCVRNA载量经内标实时荧光PCR法检测阳性率为20.69%,而国产实时荧光定量PCR法检测阳性率为3.45%。结论内标实时荧光定量PCR技术较国产实时荧光定量PCR法检测HCVRNA载量灵敏,能够提供更精确的数据。     

不同荧光定量PCR技术在HBV检测中的应用评价

【摘要】 目的：评价国产普通荧光定量PCR技术与罗氏内标法荧光定量PCR技术在HBV检测中的意义。 方法：采集安徽医科大学第一附属医院2014年3月-12月HBV患者的血清190份,分别用上述方法进行检测,通过相关性分析和Kappa检验评价两种试剂检测结果之间的差异性及一致性。结果：①190份标本中,罗氏Cobas 试剂与国产试剂检测结果呈线性相关(R2=0.6707,P<0.05）;②分成HBeAg( )与HBeAg(-)两组比较,两组中Cobas 试剂与国产试剂检测均呈线性相关(R2=0.5864,P<0.05;R2 =0.5226,P<0.05）;③根据不同HBeAg状态和抗病毒要求的DNA载量对标本进行一致性分析,HBeAg( )组Kappa值为0.752;HBeAg(-)组Kappa值为0.381。结论：对于HBeAg( )患者,可以应用国产试剂检测患者的HBV-DNA水平,而对于HBeAg(-)患者,建议应用Cobas 试剂检测其患者的HBV-DNA水平。 关键词 肝炎,乙型,慢性;肝炎病毒,乙型; 聚合酶链反应 乙型肝炎病毒标志物     

不同荧光定量PCR技术在乙型肝炎病毒检测中的应用评价

目的 评价普通荧光定量PCR技术与罗氏内标法荧光定量PCR技术在乙型肝炎病毒(HBV)检测中的意义。方法 采集HBV患者的血清190份,分别用两种方法进行检测,通过相关性分析和Kappa检验评价两种试剂检测结果之间的差异性及一致性。结果(1)190份标本中,罗氏Cobas试剂与国产试剂检测结果呈线性相关(R²=0.670 7,P<0.05);(2)分成HBeAg(+)与HBeAg(-)两组比较,两组中Cobas试剂与国产试剂检测均呈线性相关(R²=0.586 4,P<0.05;R² =0.522 6,P<0.05);(3)根据不同HBeAg状态和抗病毒要求的DNA载量对标本进行一致性分析,HBeAg(+)组Kappa值为0.752;HBeAg(-)组Kappa值为0.381。结论 对于HBeAg(+)患者,可以应用国产试剂检测患者的HBV-DNA水平,而对于HBeAg(-)患者,建议应用Cobas试剂检测其患者的HBV-DNA水平。     

实时荧光定量PCR法检测乙型肝炎患者血清HBVDNA含量512例分析

目的探讨实时荧光定量PCR检测不同血清标志物模式的乙型肝炎患者的血清HBVDNA含量的特点。方法应用ELISA对512例病人血清中乙型肝炎血清标志物进行检测,同时用实时荧光定量PCR检测标本中HBVDNA的含量,分别统计每组的HBVDNA阳性例数及其阳性率,用u检验进行统计学处理。结果HBsAg（＋）／HBeAg（＋）／抗HBc㈩组168例,HBVDNA阳性161例,占95．8％;HBsAg（＋）／抗HBe（＋）／抗HBc（＋）组163例,HBVDNA阳性51例,占31．3％;HBsAg（＋）／抗HBc（＋）组181例,HBVDNA阳性94例占51．9％;三组之间互相比较差异均有显著性（P〈0．001）。结论HBsAg（＋）／HBeAg（＋）／抗HBc（＋）组中HBV复制最活跃,实时荧光定量PCR检测HBVDNA比血清标志更能反映乙型肝炎病毒存在与复制情况。     

探讨实时荧光定量PCR在乙型肝炎病毒DNA定量检测中应用价值

目的:探讨实时荧光定量PCR在乙型肝炎病毒DNA定量检测中应用价值。方法:选择2021年4月至2023年4月我院收治的120例疑似慢性乙型病毒性肝炎患者为研究对象，分别采用实时荧光定量PCR与酶联免疫吸附法(ELISA)对所有患者HBV-DNA含量进行检测。以试纸法检测结果为标准，比较实时荧光定量PCR、ELISA检测结果的一致性；比较实时荧光定量PCR、ELISA对慢性乙型肝炎的诊断效能；比较不同HBV感染状态下HBV-DNA含量的差异。结果:120例疑似慢性乙型肝炎患者经试纸法检查确诊为慢性乙型肝炎107例。Kappa检验分析结果显示，实时荧光定量PCR检查结果与试纸法检查结果具有高度的一致性(Kappa值=0.897,P<0.05)。实时荧光定量PCR对慢性乙型肝炎的诊断灵敏度、特异性与准确率均高于ELISA(P<0.05)。大三阳HBV-DNA含量均高于小三阳与急慢性感染期(P<0.05);小三阳HBV-DNA含量与急慢性感染期比较无明显差异(P>0.05)。结论:实时荧光定量PCR在慢性乙型肝炎诊断中的应用价值较高，不但能完成疾病的准确诊断，还能通过对...     

乙型肝炎外膜大蛋白血清学检验及临床意义

目的:探讨乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP)检测的临床意义。方法:收取223例慢性乙型肝炎患者血清,用荧光聚合酶链反应(PCR)定量法检测乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸HBVDNA,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测HBV-LP,前S1抗原(Pre-S1Ag),用时间分辨荧光免疫分析法检测乙型肝炎病毒血清标志物。结果:HBVDNA与HBV-LP阳性率比较差异有显著性(P<0.001)。HBV-LP与Pre-S1Ag阳性率比较差异有显著性(P<0.001)。HBeAg与HBVDNA,HBV-LP及Pre-S1Ag阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:血清HBV-LP检测是对病毒复制检测的补充。     

实时荧光定量聚合酶链反应对结核性胸膜炎的诊断价值

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测胸腔积液结核分枝杆菌DNA对结核性胸膜炎的诊断价值。方法对88例结核性胸膜炎患者和32例恶性胸腔积液标本行实时荧光定量PCR检测结核分枝杆菌DNA。结果88例患者胸腔积液实时荧光定量PCR检测阳性36例(40.91%),32例恶性胸腔积液实时荧光定量PCR检测阳性1例(3.13%)。2组阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论胸腔积液实时荧光PCR检测对结核性胸膜炎早期诊断有重要仍价值。     

献血员感染HBV窗口期的病毒核酸筛查

目的探讨实时荧光定量PCR技术在临床输血安全领域研究的意义以及我国目前输血残留感染HBV风险,进一步提高临床输血安全性。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术定量检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阴性献血员血浆中乙型肝炎病毒(HBV)DNA。结果 11456份HBsAg献血员血浆中有41份(0.358%)HBVDNA阳性;对其中34份HBVDNA例阳性标本于3-6月后进行随访检测,有4例HBsAg呈阳性,4例HBVDNA仍为阳性。结论目前我国存在输血残留感染HBV的风险,ELISA技术和荧光定量PCR检测技术在输血领域对HBV检测存在技术互补性。HBVDNA检测可以缩短献血员感染HBV窗口期,提高临床输血的安全性。     

深圳献血员HBsAg阴性HBVDNA阳性的追踪分析

目的对酶联检测结果阴性NAT筛查为HBVDNA阳性标本8份中的6份进行HBVDNA定量追踪分析，以期发现血清转换期标本。方法采用国产及进口试剂同时检测乙肝表面抗原(HBsAg)，丙型肝炎抗体(抗-HCV)，爱滋病抗体(抗-HIV)，梅毒螺旋体抗体(抗-TP)，丙氨酸氨基转移酶(ALT)，对各项结果均为阴性者进行核酸检测(NAT)筛查，对HBVDNA阳性献血员进行核酸定量追踪。结果从16512人份标本中筛出8份HBVDNA阳性，其中7例HBVDNA定量检测均能检测出HBVDNA的拷贝数，1例因HBVDNA含量过低不能检出拷贝数，随后追踪标本中HBVDNA含量均无显著性变化，未发现血清转换期献血员。结论所用酶联检测试剂及NAT筛查试剂均有较高灵敏度，核酸定量检测试剂定量较准确，HBVDNA定性检测结果为阳性并不一定说明体内有较高含量的HBVDNA拷贝数，应加大核酸筛查力度，才能发现血清转换期标本，从而为卫生部门制定相关政策提供科学依据。     

3种方法从血清标本中提取HBV DNA的比较

目的:比较3种从血清标本中提取HBVDNA方法的效果,选出一种快速、简单、高效提取血清中HBVDNA的方法。方法:收集40例经荧光PCR定量检测HBVDNA含量全部大于1.0×104copies·ml-1的血清标本,用3种方法提取标本中的HBVDNA,然后进行荧光定量PCR检测,对检测结果进行统计学分析。结果:用裂解液煮沸法提取的HBVDNA模板含量最高,与另外2种方法之间的差异有显性(P<0.05)。结论:裂解液煮沸法是一种快速、简单、高效的提取血清中HBVDNA的方法。     

深圳献血员HBsAg阴性HBVDNA阳性的追踪分析

目的对酶联检测结果阴性NAT筛查为HBVDNA阳性标本8份中的6份进行HBVDNA定量追踪分析,以期发现血清转换期标本.方法采用国产及进口试剂同时检测乙肝表面抗原(HBsAg),丙型肝炎抗体(抗-HCV),爱滋病抗体(抗-HIV),梅毒螺旋体抗体(抗-TP),丙氨酸氨基转移酶(ALT),对各项结果均为阴性者进行核酸检测(HAT)筛查,对HBVDNA阳性献血员进行核酸定量追踪.结果从1 651 2人份标本中筛出8份HBVDNA阳性,其中7例HBVDNA定量检测均能检测出HBVDNA的拷贝数,1例因HBVDNA含量过低不能检出拷贝数;随后追踪标本中HBVDNA含量均无显著性变化,未发现血清转换期献血员.结论所用酶联检测试剂及NAT筛查试剂均有较高灵敏度,核酸定量检测试剂定量较准确,HBVDNA定性检测结果为阳性并不一定说明体内有较高含量的HBVDNA拷贝数;应加大核酸筛查力度,才能发现血清转换期标本,从而为卫生部门制定相关政策提供科学依据.     

SYBR Green实时荧光定量PCR技术平台的建立

目的建立SYBRGreen实时荧光定量PCR技术平台。方法通过摸索SYBRGreen工作液的配制方法,经典PCR检测HBVDNA方法转为SYBRGreen实时荧光定量PCR方法及建立大鼠TGF-bate1mRNA表达水平的SYBRGreen实时荧光定量PCR方法。结果SYBRGreenⅠ工作液,40×H2O溶液稳定性好,最佳反应浓度为1∶10000。HBVDNA的SYBRGreen实时荧光定量PCR方法,最佳的MgCl2反应浓度4.0mmol,引物浓度0.5μmol,81℃时收集荧光信号。定量分析用标准曲线斜率为-3.32,相关系数为-0.994,误差为0.016。大鼠TGF-bate1表达水平的SYBRGreen实时荧光定量PCR方法,TGF-bate1和Bate-actin的最佳MgCl2反应浓度均为3.5mmol,引物浓度前者为0.8μmol,后者为0.5μmol,在87℃时收集荧光信号。靶基因TGF-bate1mRNA的相对量用下述公式计算:(1+Etgf)Ct1/(1+Eact)Ct2。结论初步建成了可检测DNA和mRNA的SYBRGreen实时荧光定量PCR技术平台。     

乙型肝炎病毒学和免疫学与临床特征相关性的前瞻性研究

目的研究慢性乙型肝炎(CHB)、肝硬化(HBV-LC)、原发性肝癌患者血清中的乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBs Ag)和乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)定量分布特点,以及二者之间相关性,为乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)在病程不同阶段的诊断和干预治疗提供临床依据。方法采集2014年7月至2015年7月,在丹东市传染病医院住院的慢性乙型肝炎(CHB)150例、肝硬化(LC)100例、肝癌患者50例,采用微粒子化学发光定量动态检测HBs Ag水平,荧光PCR定量动态检测HBVDNA载量,并对HBVDNA水平及HBs Ag进行相关性分析。结果 HBs Ag定量值大小:慢性乙型肝炎>肝硬化>肝癌,CHB中检测值最高,其次为肝硬化,肝癌组检测值最低,且P<0.05,差异有统计学意义;HBVDNA定量和HBs Ag呈现相同的规律,即慢性乙型肝炎>肝硬化>肝癌且P<0.05,差异有统计学意义。结论 1 HBs Ag定量值和HBVDNA定量值一样在慢性乙型肝炎疾病进展中呈逐渐下降渐下降趋势。2 HBs Ag与HBVDNA之间呈一定的正相关,可以使用HBs Ag与HBVDNA互补评估HBV病毒复制情况。     

两种方法检测HBV标志物阳性患者血清HBV DNA载量结果

目的:观察不同方法检测乙型肝炎病毒(HBV)感染者血清中HBVDNA载量的相关性和临床意义。方法:采用实时荧光定量PCR(RQ-PCR)和核酸扩增(PCR)酶联免疫吸附(ELISA)两种方法检测HBV感染者血清HBVDNA载量。结果:HBsAg阳性各种模式两种方法检测结果比较,差异均有显著性(P<0.001)。模式Ⅴ(抗-HBs阳性+抗-HBc阳性+抗-HBe阳性)RQ-PCR检测结果<3.0lg拷贝/ml,PCR-ELISA检测结果为(3.80±1.61)lg拷贝/ml。模式Ⅵ(抗-HBc阳性+抗-HBe阳性)、Ⅶ(抗-HBc阳性)、Ⅷ(抗-HBe阳性)两种方法检测结果均﹤3.0lg拷贝/ml。结论:采用不同的方法检测HBV感染者血清中HBVDNA载量,结果存在不同程度的差异。     

结核PCR定量测定在结核病诊断中的应用

目的:评价荧光定量PCR技术在结核病诊断中的应用价值。方法:采用荧光定量PCR(FQ-PCR)、涂片法和培养法同时检测580例结核患者、疑似结核患者的痰、胸腹水、脑脊液标本,对检测结果进行比较。结果:荧光定量PCR检测阳性率要高于涂片法和培养法的阳性率,统计分析有显著性(P<0.01)。结论:应用荧光定量PCR方法检测结核杆菌,具有特异、灵敏、简便、快速的特点,可作为结核病诊断的常规方法。     

实时荧光定量PCR法在检测3种泌尿生殖道病原微生物中的应用

目的探讨实时荧光定量PCR法在检测3种泌尿生殖道病原微生物（沙眼衣原体（CT）、解脲支原体（UU）、淋病奈瑟菌（NG））中的应用。方法 512例门诊和住院疑似泌尿生殖道感染女性患者阴道宫颈分泌物标本,采用实时荧光定量PCR法检测CT、NG、UU,同时用胶体金法检测CT,用培养法进行NG、UU检测。结果 512例疑似泌尿生殖道感染女性患者中,实时荧光定量PCR法和胶体金法检测CT的阳性率分别为10.1%和7.4%。实时荧光定量PCR法和培养法检测UU的阳性率分别为33.4%和23.9%。实时荧光定量PCR法和培养法检测NG的阳性率分别为8.7%和6.1%。阳性检出率为UU〉CT〉NG,阳性率比较,差异均有统计学意义,实时荧光定量PCR法对CT、NG、UU的检出率高于胶体金法和培养法。结论实时荧光定量PCR法在敏感度、特异度及报告周期上均优于胶体金法和培养法,对STD诊断提供了重要依据,但无法提供药敏报告,可与常规检测方法互相补充。     

进口试剂与国产试剂检测人类免疫缺陷病毒结果比较

目的评价第4代HIV（1＋2）抗原抗体联合检测试剂及第3代HIV抗体检测试剂,为采供血系统选择优质、高效的HIV血液筛选试剂提供依据。方法用进口HIV抗原抗体联合检测试剂A和B、国产HIV抗体检测试剂C和D检测无偿献血人群血液标本,分析其特异性、灵敏度和假阳性率;用国家参考品血清盘对进口试剂A和B、国产试剂C和D进行考核,分析比较4种试剂的符合率、精密度。结果用进口A和B、国产C和D4种试剂对无偿献血者标本进行HIV的初筛和复检,试剂A特异性为99.94%,进口试剂B特异性为99.87%,试剂C特异性为99.88%,试剂D特异性为99.92%;HIV经确证实验室确证阳性样本4种试剂均检测出阳性结果,灵敏度均为100%。国产试剂和进口试剂对HIV抗体检测的特异性和敏感性没有显著性差异。结论用国产4种试剂进行检测HIV,符合率均能达到国家要求。     

乙肝患者DNA含量与免疫学标志物相关性研究

目的研究乙肝病毒DNA含量与乙肝病毒感染免疫学标志物是否具有相关性。方法应用荧光定量PCR法对500例乙型肝炎患者及100例健康对照者的血清进行HBVDNA含量检测,并用ELISA法进行乙型肝炎病毒免疫学标志物检测。结果不同组之间DNA含量有差异(P<0.01)。HBsAg(+),HBeAb(+),HBcAb(+)组患者血清HBVDNA含量阳性检出率明显高于除HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb-IgM(+)组以外的其他各组(P<0.01)。HBeAg阳性和HBVDNA阳性有较高的一致性(P<0.01)。结论 500例乙型肝炎患者中HBsAg(+),HBeAb(+),HBcAb(+)组患者血清HBVDNA含量阳性检出率及HBVDNA的平均含量最高,HBeAg检测和DNA定量检测阳性率具有较高一致性。     

2种试剂检测人类免疫缺陷病毒结果的比较分析

目的 评价国产试剂与进口试剂检测效果.方法 选择了2种试剂(一种国产试剂,一种进口试剂),以2010年1月至2011年12月的样本进行检测,分析了2种试剂检测结果 的特异性、灵敏度和假阳性率;用国家参考品血清盘对2种试剂进行考核,讨论了他们的符合率、精密度.结果 进口试剂和国产试剂的灵敏度均为100%.在特异性和假阳性率方面不存在显著差异.经过国家参考品复核.2种试剂的符合率、精密度达到相关要求.结论 国产试剂的检测效果与进口试剂不存在差异.     

HBsAg阳性产妇母乳喂养与乙肝病毒母婴传播的相关性研究

目的了解HBsAg阳性产妇母乳喂养与母婴传播的关系,以更好地选择喂养方式。方法利用荧光实时定量PCR检测技术定量检测HBsAg阳性产妇乳汁中的HBVDNA,用酶联免疫吸附法检测婴儿血清中的HBsAg。结果 HBsAg阳性产妇乳汁HBVDNA阳性率为36.7%。乳汁HBVDNA阳性产妇母乳喂养组婴儿乙肝病毒感染率为19.4%,明显高于人工喂养组的5.1%（χ2=8.124,P〈0.05）;而母乳HBVDNA阴性产妇两种喂养方式下婴儿乙肝病毒的感染率比较,差异无统计学意义（χ2=0.176,P〉0.05）。结论 HBsAg阳性产妇应检测乳汁HBVDNA的含量,以决定采取母乳喂养或人工喂养。