低分子量半乳糖化脂肪酰壳聚糖的制备及其形成胶束的性质研究

目的制备具有主动肝靶向作用的低分子量半乳糖化脂肪酰壳聚糖聚合物胶束材料并进行结构表征,对其形成的胶束特性进行研究。方法以甲磺酸为溶剂及反应介质,利用脂肪酰氯(棕榈酰氯及月桂酰氯)与壳聚糖的OH进行酰化反应制备具有不同碳链长度及取代度的脂肪酰壳聚糖,再利用EDC.HCl活化乳糖酸,与所得的脂肪酰壳聚糖的2位氨基反应制备半乳糖化脂肪酰壳聚糖。用红外光谱、1H核磁共振谱对其结构进行表征及取代度的计算,并考察其溶解性能;制备其聚合物胶束,测定临界胶束浓度(CMC)和粒径。结果壳聚糖脂肪酰化的反应条件为20℃、1 h,半乳糖化反应的条件为30℃、24 h;壳聚糖棕榈酰化及月桂酰化反应中酰氯/壳聚糖的合适摩尔比分别为2∶1～8∶1、2∶1～10∶1。此条件下制得的脂肪酰壳聚糖及半乳糖化脂肪酰壳聚糖在二甲基亚砜(DMSO)中有较好的溶解性能;红外光谱、1H核磁共振光谱结果表明,成功合成了半乳糖化脂肪酰壳聚糖;脂肪酰基的取代度范围为0.28～1.13 mol,胶束的CMC约为0.39×10 2～2.82×10 2mg·mL-1,粒径大小119.8～546.0 nm。结论成功制备低分子量半乳糖化脂肪酰壳聚糖聚合物胶束材料。相同碳链长度条件下,脂肪酰氯与壳聚糖摩尔比越大,脂肪酰基的取代度越大,所得胶束的CMC及粒径越小;相同脂肪酰氯与壳聚糖摩尔比时,制得的半乳糖化脂肪酰壳聚糖的粒径小于脂肪酰壳聚糖的粒径。     

羟基喜树碱脂质体的制备及其包封率测定

目的:制备符合肺靶向要求的羟基喜树碱脂质体并测定其包封率。方法:采用薄膜分散-冻融法制备羟基喜树碱脂质体;用凝胶柱色谱法分离游离药物;高效液相色谱法测定包封率。采用ZORBAX SB-C18柱(4.6mm×250mm,5μm),以75mmol.L-1醋酸铵-5mmol.L-1三乙胺(冰醋酸调pH至5.6)缓冲液/乙腈(75∶25)为流动相,流速1mL.min-1,检测波长383nm,柱温30℃。结果:制得的脂质体平均粒径大于2μm,包封率大于70%。在选定的色谱条件下,羟基喜树碱与辅料能完全分离,在0.2~20mg.L-1范围内,药物浓度与峰面积呈良好的线形关系(r=0.9998)。结论:薄膜分散-冻融法适用于制备肺靶向羟基喜树碱脂质体;凝胶柱-高效液相色谱法操作简单,准确,重复性好,可用于测定羟基喜树碱脂质体的含量和包封率。     

7-乙基-10-羟基喜树碱聚合物胶束的肿瘤靶向性研究

目的研究7-乙基-10-羟基喜树碱/聚乙二醇-聚天冬氨酸聚合物胶束(7-ethyl-10-hydroxycamptothecin/polyethylene glycol-polyaspartic acid polymer micelles,SN-38/PEG-pasp)在荷瘤小鼠体内的组织分布特点。方法采用LC-MS法测定荷瘤小鼠血浆和组织中7-乙基-10-羟基喜树碱(7-ethyl-10-hydroxycamptothecin,SN-38)的质量浓度,并用SPSS13.0统计学软件对测定的数据进行分析。结果药物在肿瘤组织中相对摄取率(r_e)达到10,远远高于其他组织,除去肝其余组织作为非靶向组织时,肿瘤的靶向效率(t_e)均大于1,呈现出明显的肿瘤靶向特征,胶束组药物在体内质量浓度排布顺序:肿瘤>肝>肺>脾>肾>心>血。结论 SN-38/PEG-pasp在肿瘤组织中药物浓度明显高于除肝脏外的其他各组织,具有明确的肿瘤靶向性。     

10-羟基喜树碱的合成

喜树碱经H2O2氧化所制得的喜树碱N-氧化物,于酸性条件下经紫外线照射在10-位引入羟基,最后经柱色谱分离纯化得到纯度98%以上的目标化合物,收率33%.     

β-环糊精-聚乙二醇-7-乙基-10-羟基喜树碱胶束在大鼠体内的药动学研究

目的 考察β-环糊精-聚乙二醇-7-乙基-10-羟基喜树碱（β-CD-PEG-SN38）胶束在大鼠体内的药动学。方法 采用HPLC-MS/MS法测定血浆中SN38的质量浓度,利用三隔室模型进行β-CD-PEG-SN38药动学数据拟合。结果 大鼠ivβ-CD-PEG-SN38胶束溶液后,游离型SN38和键合型SN38的AUC分别是1490.7、5060.3ng/(mL·h),在大鼠血浆中占主导的是键合型的SN38。结论 方法 操作简单、实用,可为SN38的靶向给药研究提供参考。     

β-环糊精-聚乙二醇-7-乙基-10-羟基喜树碱纳米胶束的制备及其质量评价

目的制备两亲性聚合物β-环糊精-聚乙二醇-7-乙基-10-羟基喜树碱(β-CD-PEG-SN38)纳米胶束并进行质量评价。方法采用自组装法制备β-CD-PEG-SN38纳米胶束,采用单因素变量法对影响纳米胶束粒径的因素进行了考察,并对β-CD-PEG-SN38纳米胶束的粒径、Zeta电位、形态和稳定性进行评价。结果胶束制备的最佳条件为丙酮作有机溶剂,β-CD-PEG-SN38在丙酮中的质量浓度为1 mg/mL,有机相和水相的体积比为1∶8。该纳米胶束大小适中、粒径分布均匀,为均匀的球形结构。β-CD-PEG-SN38纳米胶束的临界胶束质量浓度为7μg/mL,在模拟的生理条件下具有良好的胶体稳定性,在4℃条件下储存6个月的粒径未发生明显变化。结论β-CD-PEG-SN38在水中能自发形成纳米胶束,粒径均匀、稳定性好,具有良好的胶体稳定性和长期储存稳定性。     

7-乙基-10-羟基喜树碱的合成

用喜树碱乙基化制得的7-乙基喜树碱在冰乙酸中用双氧水氧化成N-氧化物,再经光照重排制得7-乙基-10-羟基喜树碱,并优化了反应条件,总收率49%.     

羟基喜树碱脂质体的制备及质量评价研究

目的:制备羟基喜树碱(HCPT)脂质体,并对其质量进行评价.方法:采用薄膜分散-高压乳匀法制备羟基喜树碱脂质体;用激光粒度分析仪测定其Zeta电位、粒径大小;考察其在0.9%NaCl溶液、水、5%葡萄糖溶液中8 h的稳定性;用凝胶柱层析法考察包封率;采用薄膜透析法考察体外释药性质.结果:羟基喜树碱脂质体Zeta电位为(-33.1±1.3) mV,平均粒径(182.5±5.6) nm,8 h内在水、5%葡萄糖溶液中稳定性良好;包封率(91.2±1.2)%;体外释药曲线符合Higuchi方程Q=1.291 6t1/2 0.309 8,r=0.980 3.结论:本试验制备的羟基喜树碱脂质体稳定性好,大小均匀, 包封率高,并具有延缓药物释放的性质.     

10-羟基喜树碱衍生物的合成及体外抑制肿瘤活性

目的寻找高效低毒的喜树碱类抗肿瘤新药。方法合成7个喜树碱衍生物（3~9），经¹HNMR，IR，MS分析确证了所合成化合物的结构，经MTT法筛选了对宫颈癌Hela、肝癌BEL-7402、胃癌7901和大肠癌CCL-187瘤株的体外抑制肿瘤活性。结果7个化合物分别对前三种瘤株有效，其中化合物4对前三种瘤株均有较好的体外抑制肿瘤细胞活性，尤其对宫颈癌Hela细胞的抑制活性大于10-羟基喜树碱。结论该类化合物的抗癌活性值得进一步研究。     

脂质体对7-乙基-10-羟基喜树碱稳定性影响

目的考察脂质体对7-乙基-10-羟基喜树碱(7-ethyl-10-hydroxycamptothecin,SN-38)活性形式的保护作用。方法建立测定SN-38活性形式的HPLC法,考察不同pH条件对SN-38活性与SN-38非活性形式相互转变动力学和平衡比例的影响;并研究了37℃的pH 7.4、8.0、9.0、10.0条件下脂质体对SN-38活性形式的保护作用。结果在pH<4.3的条件下,SN-38以其活性形式存在;在pH>9的条件下,SN-38主要以其非活性形式存在;在pH 6.5的条件下,SN-38活性和非活性形式之间相互转换最慢。包裹在脂质体内的SN-38在模拟生理条件下8 h活性形式质量分数仍大于98%。结论脂质体能够有效地保护SN-38α-羟基内酯环。     

巯基壳聚糖载胰岛素亚微球的制备及影响包封率的因素

目的制备巯基壳聚糖载胰岛素亚微球,并对影响包封率的因素进行考察。方法以三聚磷酸钠(TPP)为离子交联剂制备巯基壳聚糖载胰岛素亚微球。结果所制得的亚微球平均粒径为473.5nm,包封率为51.8%。结论亚微球的制备条件温和,快速简便。     

7-乙基-10-羟基喜树碱脂质体在大鼠体内的代谢和排泄

目的考察7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)脂质体经静脉注射后,在大鼠尿液、粪便中的代谢产物以及以SN-38原形药物排泄的量。方法大鼠尾静脉单次给予2.77 mg/kg SN-38脂质体,分别于0～6、6～12、12～24、24～48 h分段收集尿液、粪便,采用UPLC/Q-TOFMS法对SN-38脂质体在大鼠尿液、粪便中的代谢产物进行鉴定,并且建立HPLC法,用于大鼠尿液及粪便样品中SN-38原形药物的排泄量的测定。结果 SN-38脂质体的在大鼠体内的代谢产物经鉴定为SN-38G。48 h内脂质体组共有1.57%的原形药物经过尿液排出,共有12.94%的SN-38原形药物经过粪便排出。结论 SN-38脂质体只有少部分以原形药物经尿液和粪便排出体外。     

高喜树碱衍生物10-羟基-7-甲基-高喜树碱的电喷雾离子阱质谱分析

目的 应用电喷雾离子阱质谱对高喜树碱类衍生物10-羟基-7-甲基-高喜树碱(TOP-01)进行质谱裂解分析,通过主要特征碎片离子研究其裂解规律。方法 样品溶液通过仪器自带的蠕动泵进样系统直接进样分析,采用离子阱质谱的多级离子碰撞裂解方式,寻找TOP-01的特征碎片离子。结果 TOP-01在软电离模式下,主要产生的正离子碎片分别为m/z 333、305、277、290等,负离子碎片分别为m/z 347、319、317、289、301等。结论 TOP-01在软电离模式下、正负离子模式下质谱裂解方式存在差异,其中主要产生的正负离子碎片分别为333和347,本研究为高喜树碱及其衍生物的结构修饰及代谢研究等提供了参考依据。     

聚乙二醇-7-乙基-10-羟基喜树碱共聚物的合成及体外表征

首先将聚乙二醇(PEG)琥珀酰化,在二氯磷酸苯酯作用下用PEG选择性与7-乙基-10-羟基喜树碱(1)的10-位羟基成酯,得到PEG-1共聚物,经FT-IR、1H NMR和MALDI-TOF-MS确证结构,并考察了共聚物载药量、溶解度和在不同pH缓冲液中的水解情况.结果显示,共聚物可明显提高溶解度,延长体外半衰期.     

RP-HPLC法测定小鼠血浆中10-羟基喜树碱的浓度

目的:建立测定小鼠血浆中10-羟基喜树碱浓度的方法。方法:33只小鼠灌胃给予10-羟基喜树碱80mg·kg-1,于给药前及给药后0.17、0.33、0.67、1、1.5、2、4、8、12、24h时心脏取血,采用高效液相色谱法,测定其中血药浓度。色谱柱为Luna C18,流动相为水-甲醇,梯度洗脱,流速为1.2mL·min-1,内标为喜树碱,荧光检测器检测,激发波长为383nm,发射波长为553nm。结果:内源性杂质不干扰测定,10-羟基喜树碱检测浓度线性范围为1.25～80ng·mL-1(r=0.9997),平均方法回收率为96.46%～101.87%,平均萃取回收率为82.4%～109.6%,日内、日间RSD均≤5.00%。结论:该方法简便可靠、专属性好、精密度高,可用于10-羟基喜树碱的血药浓度检测。     

RP-HPLC法测定壳聚糖微球中5-氟尿嘧啶的包封率

目的建立壳聚糖微球中5氟尿嘧啶包封率的测定方法。方法采用C18色谱柱,甲醇水(体积比为10∶90)为流动相,检测波长266 nm。用超声浸泡研磨法测定了药物的包封率,并与国内外常用的2种测定方法进行对比。结果平均回收率为103.64%,RSD为1.60%(n=5),质量浓度在2.0~20.0 mg.L-1内线性关系良好。测得壳聚糖微球的包封率为42.21%。而其他2种方法测定同一批微球的包封率值比实际偏高或偏低,即测定方法存在问题。结论该法简便灵敏,测得值真实、可靠,适用于交联法制备的壳聚糖微球中药物包封率的测定。     

7-乙基-10-羟基喜树碱脂质体的抗肿瘤作用

目的探索7-乙基-10-羟基喜树碱(7-ethyl-10-hydroxy camptothecin,SN-38)脂质体的体内外抗肿瘤作用。方法体外实验采用噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,M TT]法检测SN-38脂质体对9种人源肿瘤细胞的抑制作用;体内实验利用A549非小细胞肺癌和SKOV-3卵巢癌荷瘤裸鼠模型,以伊立替康为阳性对照药,统计裸鼠体质量、瘤体积、抑瘤率、相对肿瘤增殖率等指标,考察不同剂量的SN-38脂质体对肿瘤的生长抑制作用。结果体外实验表明SN-38脂质体能抑制多种肿瘤细胞增殖;体内实验表明SN-38脂质体高、中、低剂量(4、2、1 mg·kg-1)对A549荷瘤裸鼠的抑瘤率分别为69.75%、52.08%和29.78%,SN-38脂质体高、中、低剂量(8、4、2 mg·kg-1)对SKOV-3荷瘤裸鼠的抑瘤率分别为54.19%、38.91%、23.71%。结论 SN-38脂质体体外对多种肿瘤细胞有较好的抗增殖作用,体内对A549非小细胞肺癌及SKOV-3卵巢癌荷瘤裸鼠有较好的治疗作用。     

HPLC法测定氧化石墨纳米粒中10-羟基喜树碱的含量

目的:建立氧化石墨（GO）纳米粒中10-羟基喜树碱（HCPT）含量测定的高效液相色谱方法。方法:色谱柱:Diamonsil^TMODS-C₁₈（200 mm×4.6 mm,5μm）,流动相:乙腈-水（25:75）,流速:1.0 ml·min^-1,检测波长:266 nm。结果:在本试验条件下制剂中辅料对HCPT含量的测定无干扰,HCPT的质量浓度在1～100μg·ml^-1内线性关系良好（r=0.999 9）,平均回收率为99.54%。GO纳米粒中HCPT含量可达到（0.157±0.009）mg·mg^-1。结论:含量测定方法准确可靠、简单易行,可用于GO纳米粒中HCPT的含量测定。     

壳聚糖分子参数对羟基喜树碱包衣脂质体体外性质的影响研究

目的研究不同脱乙酰度(DD)及不同相对分子质量(Mr)的壳聚糖(CS)对CS包衣羟基喜树碱(HCPT)脂质体的体外性质的影响,为选择具有合适分子参数的壳聚糖作为该制剂的包衣材料提供实验基础.方法采用过氧化氢氧化降解的方法制备不同Mr的CS;利用N-乙酰基取代法制备不同DD的CS.采用薄膜分散法制备HCPT脂质体,并用不同分子参数的CS包衣.对其形态、zeta电位、平均粒径、包封率及体外释药特性做了考察.结果CS包衣HCPT脂质体外观均呈球形,粒径均匀.未包衣脂质体zeta电位为(-46.8±1.0)mV(n=10),经CS包衣后,zeta电位均变为正值,且随着DD的降低而变小,而Mr对zeta电位无显著影响.DD对脂质体的平均粒径无显著性影响,而随着Mr的降低而减小.CS包衣脂质体的包封率随着CS的Mr和DD的降低而减小,体外释药速度随着DD及Mr的降低而加快.结论CS的分子参数对CS包衣HCPT脂质体的体外性质有较大的影响,且成一定规律性,可通过调整CS分子参数得到不同体外性质的CS包衣HCPT脂质体.