亚低温对大鼠短暂全脑缺血后神经元凋亡的影响

目的 探讨亚低温对大鼠脑缺血后神经元凋亡的影响，揭示亚低温的部分神经保护机制。方法 采用“双侧颈总动脉阻断＋全身低血压”方法来建立大鼠短暂性全脑缺血模型。用神经元尼氏体亚甲兰特殊染色法观察大鼠脑缺血后海马CA1区神经元损害情况；原位细胞凋亡检测法（TUNEL染色）及电镜观察脑缺血后CA1区神经元凋亡情况。结果 与假手术组、低温缺血组相比，常温缺血组海马CA1区神经元缺失明显（P＜0．01）。常温及低温缺血组海马CA1区均存在神经元凋亡，但低温缺血组海马CA1区凋亡神经元数明显少于缺血组（P＜0．01）。结论 经“双侧颈总动脉阻断＋全身低血压”方法建立的大鼠短暂全脑缺血模型证实了亚低温的脑保护作用。全脑缺血后的迟发性神经元死亡很可能经由凋亡途径，而亚低温可通过抑制缺血性神经元凋亡而发挥一定的神经保护作用。     

脑脉泰对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和Akt，bcl-2，Bax和caspase3表达的影响

目的研究脑脉泰对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡和Akt、bcl-2、Bax、caspase3表达的影响。方法采用大鼠大脑中动脉栓塞再灌注动物模型,将雄性SD大鼠随机分为假手术组（sham）、脑缺血再灌注模型组（MCAO）、脑脉泰大剂量组（MCAO＋脑脉泰2．24g／kg）、脑脉泰中剂量组（MCAO＋脑脉泰1．12g／kg）、脑脉泰小剂量组（MCAO＋脑脉泰0．56g／kg）,每组10只大鼠。脑脉泰组在MCAO前5天开始灌胃给药,连续5d。用TUNEL法和免疫组化染色法分别检测缺血半暗带凋亡细胞和Akt、bcl-2、Bax和caspase3表达。结果脑脉泰大剂量组和中剂量组大鼠脑缺血半暗带的凋亡细胞显著减少（P〈0．01）,Akt、bcl-2表达显著增加,caspase3和Bax表达减少,与MCAO模型组比较,有显著性差异（分别为P〈0．05和P〈0．01）。结论脑脉泰对脑缺血／再灌注损伤有保护作用,其保护作用与促进Akt和bcl-2的表达,抑制Bax和caspasse3的表达有关。     

神经生长因子对大鼠脑缺血后海马CA1区神经细胞凋亡的影响

目的　研究神经生长因子（ Ｎ Ｇ Ｆ）在缺血性脑损伤中对神经细胞凋亡的影响。方法　采用大鼠 ４ 血管闭塞脑缺血模型, Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ 方法原位标记 Ｄ Ｎ Ａ 片段,观察脑室内注射 Ｎ Ｇ Ｆ 后海马 Ｃ Ａ１ 区神经细胞凋亡的变化。结果　使用 Ｎ Ｇ Ｆ 后 ３ｄ 海马 Ｃ Ａ１ 区 Ｔ Ｕ Ｎ Ｅ Ｌ 阳性神经细胞数为神经细胞总数的１３．９％ ±１１．６％ ,与缺血对照组（２１．３％ ±１３．７％ ）比较显著减少（ Ｐ＜ ０．０１）。结论　外源性 Ｎ Ｇ Ｆ 对脑缺血所致的神经细胞凋亡可能具有一定的保护作用。     

大鼠全脑缺血再灌注后额叶神经细胞凋亡与P53蛋白表达的实验研究

目的 探讨大鼠全脑缺血再灌注后不同时间对额叶神经细胞凋亡及P~(53)蛋白表达的影响。方法采用改良的Pulsineli 4-血管阻断(4-VO)方法建立SD大鼠急性全脑缺血模型,随机分为3组:正常组(n=7);假手术组(n=49);手术组(n=49)。缺血15min,分别于再灌注1、6、12、24、48、72h和7d断头取脑,采用TUNEL方法检测神经细胞凋亡,SP免疫组化方法观察额叶P~(53)蛋白的表达。结果 全脑缺血再灌注24h,可见少量TUNEL阳性细胞,再灌注48h可见较多TUNEL阳性细胞,72h出现大量TUNEL阳性细胞,7d明显减少。免疫组化染色:缺血组于再灌注24h可见少量P~(53)蛋白表达,48h达高峰,72h有所下降,7d明显下降,这种表达主要在细胞核内。结论 急性全脑缺血再灌注后的迟发性神经元坏死是以凋亡的方式发生的,全脑缺血再灌注后,额叶P~(53)蛋白表达增加,神经细胞凋亡和P~(53)蛋白的表达在一定时间内呈正相关。     

葡萄糖调节蛋白78对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响

目的 通过体内体外实验探讨内质网伴侣蛋白-葡萄糖调节蛋白(GRP)78对缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响.方法 体内实验采用大鼠大脑中动脉线栓模型,应用免疫组织化学、Western blot和RT-PCR方法检测脑缺血再灌注后缺血周围区GRP78表达的动态变化;体外实验通过原代培养的海马神经元建立脑缺血再灌注模型,Western blot方法观察去糖去氧及恢复糖氧后GRP78表达的变化,并运用2脱氧葡萄糖诱导GRP78高表达,观察对神经细胞凋亡的影响.结果 体内实验:与假手术组相比,脑缺血再灌注后GRP78表达明显增强,再灌注12 h达高峰(mRNA:0.7367±0.0651,F-477.160,P<0.01;蛋白:0.8129±0.0748,F=39.857,P<0.01).体外实验:经2脱氧葡萄糖预处理高表达GRP78的神经细胞活力明显增强(与单纯去糖去氧组相比,细胞活力增加了39.22%±0.44%,t=46.374,P<0.01),凋亡细胞减少(与单纯去糖去氧组相比,凋亡细胞数减少16.60±1.02,t=7.530,P<0.01).结论 脑缺血再灌注启动内质网应激反应,与神经细胞凋亡有关;诱导GRP78高表达可以减轻缺血再灌注性神经元的损伤和凋亡.     

神经生长因子对大鼠脑缺血后海马CA1区神经细胞凋亡的影响

Objective　To investigate the protective action of nerve growth factor (NGF) on neuronal apoptosis by ischemic insults.Methods　Global ischemia in Wistar rats was induced using four-vessel occlusion,and NFG group intraventricular adminstration of NGF after ischemia,control group received the same volue of solvent.At the 3 days after ischmia,terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP-biotion nick endlabeling (TUNEL) hippocampal CA₁ sector.Result　The results showed that the number of TUNEL positive cells to the number of whole cells in the CA₁ subified was 21.3±13.7% in NGF group,and 13.9%±11.6% in control group,significant difference between the ratios in two group (P<0.01).Conclusion　It was suggested that intraventricular NGF has a protective effect on neuronal appoptosis by ischemic insults.     

脑脉泰对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和Akt,bcl-243,Bax和caspase3表达的影响

目的研究脑脉泰对大鼠脑缺血再灌注损伤神经细胞凋亡和Akt、bcl-2、Bax、caspase3表达的影响。方法采用大鼠大脑中动脉栓塞再灌注动物模型,将雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham)、脑缺血再灌注模型组(MCAO)、脑脉泰大剂量组(MCAO+脑脉泰2.24g/kg)、脑脉泰中剂量组(MCAO+脑脉泰1.12g/kg)、脑脉泰小剂量组(MCAO+脑脉泰0.56g/kg),每组10只大鼠。脑脉泰组在MCAO前5天开始灌胃给药,连续5d。用TUNEL法和免疫组化染色法分别检测缺血半暗带凋亡细胞和Akt、bcl-2、Bax和caspase3表达。结果脑脉泰大剂量组和中剂量组大鼠脑缺血半暗带的凋亡细胞显著减少(P0.01),Akt、bcl-2表达显著增加,caspase3和Bax表达减少,与MCAO模型组比较,有显著性差异(分别为P0.05和P0.01)。结论脑脉泰对脑缺血/再灌注损伤有保护作用,其保护作用与促进Akt和bcl-2的表达,抑制Bax和caspasse3的表达有关。     

NO对实验性局灶脑缺血再灌流神经细胞凋亡影响的定量研究

目的 研究ＮＯ在局灶性脑缺血再灌流过程中对神经细胞的作用机制,特别是ＮＯ与细胞凋亡的关系。方法 利用流式细胞仪检测法,测定Ｎ－硝基－左旋－精氨酸（ＮＮＬＡ）干预后局灶性脑缺血鼠脑组织中神经细胞的凋情况。结果 在缺血再灌流期间过多或过少的ＮＯ均对缺血区凋亡峰有明显影响,小剂量ＮＮＬＡ减少神经细胞凋亡的发生率,大剂量ＮＮＬＡ增加神经细胞凋亡的发生率。结论 局灶性脑缺血的不同区域,包括正常及病变组织中的     

阿魏酸钠对脑缺血大鼠海马CA1区神经细胞凋亡的影响

为了探讨脑缺血迟发性神经细胞死亡与细胞凋亡的关系以及阿魏酸钠的抗凋亡作用,利用大鼠全脑缺血及再灌流模型,TUNEL法原位标记DNA片段,观察用阿魏酸钠后海马CA_1区神经细胞凋亡改变.结果发现,脑缺血10min再灌流3d后海马CA_1区存在较明显的神经细胞凋亡现象,凋亡细胞分布与光镜下神经细胞迟发性死亡的病理改变相对应,缺血前用药组神经细胞凋亡数目较对照组明显减少,神经细胞迟发性改变减轻.而缺血后用药组未见显效.结果提示,脑缺血海马CA_1区神经细胞迟发性死亡可能是通过细胞凋亡完成,阿魏酸钠对脑缺血再灌流引起的海马CA_1区神经细胞凋亡具有一定的防止作用.     

促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血侧皮层神经元凋亡和Bcl-2表达的影响

目的　探讨促红细胞生成素 (Erythropoietin ,EPO)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的保护作用。方法　采用线栓法阻断大鼠一侧大脑中动脉 (MCA)血流 2h ,再灌注 2 4h制成局灶性脑缺血再灌注损伤模型。将 3 2只雄性SD大鼠随机分成EPO组、缺血再灌注组、假手术组和正常组。于缺血开始时EPO组给EPO 3 0 0 0U/kg腹腔注射 ;缺血再灌注组和假手术组给予等剂量生理盐水。再灌注 2 4h后断头取脑、切片 ,进行HE染色、Bcl -2免疫组化染色和细胞凋亡检测。结果　缺血 2h再灌注 2 4h后 ,EPO组和缺血再灌注组大鼠缺血侧皮层可检测到凋亡细胞 ,且EPO组凋亡细胞数明显少于缺血再灌注组 ,假手术组和正常组未见凋亡细胞 ;EPO组和缺血再灌注组缺血侧皮层Bcl -2阳性细胞数均高于假手术组和正常组 ,与缺血再灌注组相比 ,EPO组Bcl-2蛋白表达显著增高。结论　EPO可抑制缺血再灌注损伤后缺血侧皮层的细胞凋亡 ,其机制可能是通过上调bcl-2基因表达而实现。     

二氮嗪对大鼠脑缺血再灌注细胞凋亡的影响

目的研究二氮嗪开放线粒体ATP敏感性钾通道对大鼠脑缺血再灌注细胞凋亡的影响。方法采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,将20只大鼠随机分成4组,假手术组、缺血组、缺血＋二氮嗪治疗组和缺血＋二氮嚷＋MitoK（ATP）通道特异性抑制剂5-HD组。观察各组凋亡细胞数和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的变化。结果与缺血组比较,二氮嗪使凋亡细胞数明显减少（83．2±9．04 vs 123．96±13．45）,Bcl-2表达增高（0．17±0．01 vs 0．13±0．01）,Bax表达下降（0．15±0．02 vs 0．20±0．03）,差异具有显著性（P＜0．05）。5-HD能取消这些作用（P＜0．05）。结论局灶性脑缺血再灌注损伤时,二氮嗪能通过上调半暗带区Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少神经元凋亡,对脑缺血损伤起保护作用。     

人尿激肽原酶对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响

目的观察人尿激肽原酶(HUK)对大鼠脑缺血再灌注(I/R)后大脑皮质缺血灶周围区Caspase-3、凋亡诱导因子(AIF)的时相表达及对神经细胞凋亡的影响。方法将Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、HUK干预组,应用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)再灌注模型。假手术组于术后,模型组、HUK干预组于缺血2h后再灌注6h、24h、48h、72h,应用免疫组化技术和原位末端标记法(TUNEL)检测不同时相各组缺血灶周围脑区Caspase-3、AIF和TUNEL阳性细胞的表达。结果大鼠I/R后在缺血灶周围区各个时间点均可见到Caspase-3、AIF和TUNEL阳性细胞的表达,HUK组与模型组相比较,两组Caspase-3、AIF和TUNEL阳性细胞的表达趋势基本一致,Caspase-3、AIF和TUNEL的表达高峰均在I/R后24h。HUK组各时间点Caspase-3、AIF和TUNEL阳性细胞的光密度值较模型组明显降低(均为P<0.05)。结论HUK对大鼠脑缺血再灌注损伤有保护作用,其作用机制可能与HUK抑制Caspase-3、AIF的表达,减轻迟发性神经元的凋亡有关。     

丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤后的Fas／FasL蛋白表达的影响

目的研究大鼠脑缺血再灌注损伤后Fas和FasI。蛋白的表达和丁笨酞保护作用的机制。方法线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组和丁苯酞组;应用尼氏染色显示存活神经元,末端转移酶介导的缺口末端标记（TUNEI。）方法检测程序化死亡细胞;免疫组织化学法观察脑缺血再灌注后6h、1d、3d、7d四个时间点脑组织中Fas和FasI．蛋白的表达变化。结果丁苯酞组皮层存活神经元数量多于缺血再灌注组,TUNEI．阳性细胞数减少,丁苯酞组在再灌注后各时间点的Fas和FasL阳性细胞数较缺血再灌注组少,差异均有统计学意义。结论丁苯酞可能通过抑制Fas／FasL蛋白的表达,从而减少神经元凋亡,减轻缺血再灌注后脑组织的损伤。     

胰岛素对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2表达及细胞凋亡的影响

目的 探讨胰岛素对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2表达及细胞凋亡的影响.方法 将动物随机分为假手术组、缺血组及干预组,参照Zea Longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注模型,干预组大鼠在脑缺血即刻给予胰岛素及葡萄糖腹腔注射,分别在左侧MCAO2h再灌注不同时间点断头取脑,脑皮质神经元Bcl-2的表达通过免疫组化法来测定,并采用TUNEL法原住标记DNA片段,检测TUNEL阳性细胞的变化.结果 缺血组大鼠脑皮质Bcl-2的表达较假手术组显著增强(P＜0.01),TUNEL阳性细胞数较假手术组显著增多(P＜0.01);给予胰岛素处理后,Bcl-2的表达较缺血组显著增强(P＜0.01),TUNEL阳性细胞数较缺血组明显减少(P＜0.01),但两者均显著高于假手术组(P＜0.01).结论 短暂的脑缺血再灌注可导致脑皮质神经元中Bcl-2的表达增加,抗细胞凋亡;胰岛素可上调脑皮质神经元中Bcl-2的表达,发挥神经保护作用.     

胰岛素对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

目的探讨胰岛素对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响。方法将动物随机分为假手术组、缺血组及干预组,参照zea longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞（mid-dle cerebral artery occlusion,MCAO）再灌注模型,干预组大鼠在脑缺血即刻给予胰岛素及葡萄糖腹腔注射,分别在左侧MCAO2h再灌注不同时间点断头取脑,脑皮质神经元Caspase-3的表达通过免疫组化法来测定,并采用TUNEL法原位标记DNA片段,检测TUNEL阳性细胞的变化。结果缺血组大鼠脑皮质Caspase-3的表达较假手术组显著增强（P〈0.01）,TUNEL阳性细胞数较假手术组显著增多（P〈0.01）;给予胰岛素处理后,Caspase-3的表达较缺血组明显减弱（P〈0.01）,TUNEL阳性细胞数较缺血组明显减少（P〈0.01）,但两者均显著高于假手术组（P〈0.01）。结论短暂的脑缺血再灌注可导致脑皮质神经元Caspase-3的表达增加,促进细胞凋亡,胰岛素可下调脑皮质神经元Caspase-3的表达,发挥神经保护作用。     

艾芬地尔对脑缺血再灌注大鼠Musashi1表达的影响

目的探讨艾芬地尔对脑缺血再灌注不同时相大鼠脑组织的保护作用及对Musashi1表达的影响。方法将84只Wistar大鼠随机分为3组,假手术组、脑缺血再灌注组（模型组）、艾芬地尔组（干预组）各28只,采用线拴栓塞法建立大脑中动脉闭塞模型,分别于再灌注2、3、7、14d各处死7只大鼠,其中1只用于透射电镜观察神经细胞超微结构变化,6只用于尼氏染色观察神经细胞组织学变化,免疫组化研究Musashi1的表达规律。结果 （1）与假手术组比较,模型组有以下表现,电镜：神经元胞体及细胞器肿胀明显,胞浆密度降低;尼氏染色：神经元数目减少,胞体肿胀,尼氏小体减少或消失;免疫组化：Musashi1阳性细胞在再灌注2d时即出现轻微增多,3d时表达急剧上升,持续至14d仍有较高表达;（2）与模型组比较,干预组表现特点如下,电镜：神经元胞体及细胞器轻度肿胀;尼氏染色：尼氏小体较多;免疫组化：Musashi1阳性细胞较相同时点模型组表达增多,光密度值增高,表达规律同模型组。结论艾芬地尔能够减轻脑缺血再灌注造成的细胞损伤,具有促进神经再生因子Musashi1表达的作用,对于改善脑缺血再灌注损伤具有积极作用。     

三磷酸腺苷敏感性钾通道开放剂对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-8表达的影响

目的 研究三磷酸腺苷敏感性钾通道(KATP)开放剂对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)-8 表达的影响.方法 200只Wistar雄性大鼠随机分为假手术组、对照组、KATP开放剂预处理组(开放剂组)及KATP开放剂 阻断剂预处理组(阻断剂组).应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,应用原位末端标记法(TUNEL)、免疫组化染色、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测脑缺血再灌注后各组脑组织凋亡细胞数和caspase-8 mRNA及蛋白的表达.结果 (1)缺血再灌注12 h、24 h、48 h、72 h各时间点凋亡细胞数,开放剂组较对照组和阻断剂组显著减少(P＜0.05～0.01),阻断剂组与对照组间各时间点差异无统计学意义.(2)缺血再灌注12 h、24 h、48 h、72 h各时间点caspase-8蛋白表达,开放剂组显著低于对照组和阻断剂组(P＜0.05～0.01),阻断剂组与对照组间各时间点差异无统计学意义.(3)缺血再灌注各时间点caspase-8 mRNA表达,开放剂组均显著低于对照组和阻断剂组(均P＜0.01), 阻断剂组与对照组各时间点相比差异无统计学意义.结论 KATP开放剂能显著减少脑缺血再灌注后神经元凋亡和caspase-8 mRNA及蛋白的表达;KATP开放剂可能通过抑制死亡受体通路发挥脑保护作用.