3—磷酸甘油脱氢酶偶联法测定血清醛缩酶活性

探讨用３－磷酸甘油脱氢酶偶联法测定血清中醛缩酶（ＡＬＤ）活性的最佳反应条件。反应体系的终末浓度；ＴＥＡ１００ｍｍｏｌ／Ｌ，ＦＤＰ４ｍｍｏｌ／Ｌ，磷惭酸０．２２ｍｍｏｌ／Ｌ，ＮＡＤＨ０．２６ｍｍｏｌ／Ｌ，ＧＤＨ≥１０００Ｕ／Ｌ，ＴＰＩ≥１５００Ｕ／Ｌ，ＬＤ≥１０００Ｕ／《Ｌ。最适ＰＨ在７．８－８．０，Ｋｍ为７．２×１０＾－３ｍｍｏｌ／Ｌ批内ＣＶ；酶活性在７．３４Ｕ／Ｌ和６５．０９６Ｕ／Ｌ时，ＣＶ分别     

3-磷酸甘油醛脱氢酶偶联法测定血清醛缩酶活性

建立血清醛缩酶活性的３－磷酸甘油醛脱氢酶偶联剂测定法。用底物１，６－二磷酸果糖妄动酶促反应，连续监测ＮＡＤＨ生成速率。反应条件：温度３７℃，ｐＨ８．３，各反应物的终末浓度：三乙醇胺５０ｍｍｏｌ／Ｌ，１，６－二磷酸果糖４．５ｍｍｏｌ／Ｌ，砷酸钠１０ｍｍｏｌ／Ｌ，氧化型辅酶１６ｍｍｏｌ／Ｌ，３－磷酸甘油醛脱氢酶２５００Ｕ／Ｌ，磷酸丙糖异构酶５００Ｕ／Ｌ，乳酸脱氢酶１５００Ｕ／Ｌ，血清与试剂容积比０．４     

酶偶联法测定血清血管紧张素转换酶

目的 建立一种测定血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）的酶偶联法，方法 血清与底物马尿酸双甘肽（Ｈｉｐ－Ｇｌｙ－Ｇｌｙ）混合温育３０分钟，生成马尿酸（Ｈｉｐ）与双甘肽（Ｇｌｙ－Ｇｌｙ）再加入Ｌ－γ－谷氨酰－３－羧基－４－硝基苯胺（ＧＧＣＮ）和γ－谷氨酰基转移酶（ＧＧＴ），催化ＧＧＣＮ与Ｇｌｙ－Ｇｌｙ偶联，产生的３－羧基－４－硝基苯胺于４１０ｎｍ波长测定其吸收度，结果 当底物ｐＨ８．０，ＧＧＣＮ１．０ｍｍｏｌ     

生物发光法测定血清烯醇化酶活性

本文介绍一种体液烯醇化酶活性测定的生物发光方法,操作简便,灵敏度高,可检测酶活性低于IU/L 的标本,线性范围达20U/L,OCV 4.3%.RCV 6%.20名健康成人血清烯醇化酶总活性为7.6±3.8U/L,25例“正常”脑脊液标本酶总活性为14±0.77U/L.     

酶偶联法测定腺苷脱氨酶

本文介绍一种测定腺苷脱氨酶的新的动力学方法.酶促反应生成的氨在偶联的谷氨酸脱氢酶作用下,使还原型辅酶Ⅰ氧化,同时用自动生化分析仪动态监测340nm 处吸光度的下降。作者对方法的最适条件进行了讨论,方法特异,简单快速,精密度好,适用于常规分析。与氨试剂Berthelots 法比较,相关系数r=0.96.     

血清谷胱甘肽过氧化物酶偶联连续监测法

应用偶联连续监测法测定血清谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－ＰＸ），特异性强，灵敏度高，快速、准确。本法批内ＣＶ为３．９％，批间ＣＶ４．９％。在最适条件下，反应的吸光度差（ΔＡ）４ｍｉｍ之内呈线性。胆红质高于正常１０倍不影响结果，避免溶血。测定２３９例年龄５８～８２岁健康中老年人，参考值为７．５５±１．４３μｋａｔａｌ／Ｌ。     

用肌酐亚氨水解酶偶联谷氨酸脱氢酶的酐酶法鉴定

目的 建立适合于自动化分析的人血清和尿肌酐亚氨水解酶偶联谷氨酸脱氢酶指示系统的酶促动力学测定方法。方法 在反应体系中加入异柠檬酸脱氢酶及其作用底物异柠檬酸，再生由主反应前氨消耗的NADPH和α－酮戊二酸，其后加入镁离子络合剂CyDTA和肌亚氨水解酶的启动试剂启动反应，在此同时NADPH和α－酮戊二酸的再生反应被终止，测定NADPH于340nm处吸光度的变化，计算样品中肌酐的浓度。结果 本法测定线性范围为40－2000μmol／L，批内和常规条件下的变异系数均小于5％，回收率为98．5％，与高效液相色谱法具有良好的相关性（r=0.9930)。乳糜、黄疸、溶血、酮体、乳酸盐、临床常用的治疗药物和高至2mmol/L的氨对测定没有干扰。结论 本法操作简便、精确，推荐作为常规测定方法。     

脲酶和亮氨酸脱氢酶偶联法动力学测定血清或尿液中尿素

目的　建立适合于自动化分析血清和尿液尿素的脲酶和亮氨酸脱氢酶偶联的连续监测法。方法　对pH、2 酮基异乙烯酸钠、亮氨酸脱氢酶和脲酶浓度等反应条件进行实验研究 ,并对建立的方法进行评价。结果　用双试剂连续监测法 ,试剂Ⅰ :10 0mmol/LN ,N 二乙醇胺基乙酸缓冲液 (pH 8.80 ) ,含 2 酮基异乙烯酸钠 3.0mmol/L、NADH 0 .3mmol/L、亮氨酸脱氢酶 2 .0kU/L。试剂Ⅱ :试剂Ⅰ中加入脲酶 70kU/L。本法线性范围血清 0 .5～ 15 0mmol/L ,尿液 8.0～ 6 5 0mmol/L。血清和尿液的平均回收率分别为 10 2 .1%和 10 1.5 %。血清批内和批间平均CV分别为 1.0 2 %和 1.70 % ;尿液批内平均CV为 1.98%。本法 (Y)和脲酶偶联谷氨酸脱氢酶法 (X)对比相关良好 (血清Y =0 .992X +0 .0 4 0 ,r=0 .993;尿液Y =0 .990X +0 .6 1,r=0 .991)。胆红素 <32 5 μmol/L、血红蛋白 <5g/L、抗坏血酸 <80 0 μmol/L、三酰甘油 (TG) <7.5mmol/L和NH+ 4 <0 .5mmol/L对测定无明显干扰。结论　本法简便、准确、线性范围广 ,可用于常规自动分析。     

酶偶联法测定血清血管紧张素转换酶

目的建立一种测定血管紧张素转换酶（ＡＣＥ）的酶偶联法。方法血清与底物马尿酸双甘肽（ＨｉｐＧｌｙＧｌｙ）混合温育３０分钟，生成马尿酸（Ｈｉｐ）与双甘肽（ＧｌｙＧｌｙ），再加入Ｌγ谷氨酰３羧基４硝基苯胺（ＧＧＣＮ）和γ谷氨酰基转移酶（ＧＧＴ），催化ＧＧＣＮ与ＧｌｙＧｌｙ偶联，产生的３羧基４硝基苯胺于４１０ｎｍ波长测定其吸收度。结果当底物ｐＨ８０，ＧＧＣＮ１０ｍｍｏｌ／Ｌ，ＧＧＴ６７ｋＵ／Ｌ时，ＡＣＥ活性与吸收度值有良好线性。５５份健康人血清ＡＣＥ（ｘ±ｓ）２８９±８３Ｕ／Ｌ，ＣＶ：批内４６％；批间４８％。１０份肉样瘤患者血清ＡＣＥ（ｘ±ｓ）７４８±３４９Ｕ／Ｌ，批内ＣＶ３９％，回收率９６％～１０３％。结论酶偶联法测定ＡＣＥ活性具有操作简便、迅速、重复性好，适用于手工操作或自动化分析，可用于诊断早期肺损伤和人类免疫缺陷病毒感染。     

酶偶联放大法测定血清总胆汁酸

目的建立简便的酶偶联放大法,直接检测血清总胆汁酸(TBA).方法基于脱氢酶-辅酶体系的原理,用丙酮酸钠作乳酸脱氢酶(LDH)的阻止剂,在Tris-HCl缓冲溶液中,由NAD+-NBT-Brij-98组成酶偶联放大系统.用自动生化分析仪测定血清TBA.结果线性范围0～180μmol/L;精密度批内CV＜2.7%,日间CV＜4.3%,总CV＜5.4%.与日本ENZABILE.AUTO(X)比较r=0.990,Y=1.114X-2.137,与朗道BILEACIDS(Z)比较r=0.997,Y=1.032Z+0.906.LDH＜3 kU/L,乳酸＜20 mmol/L,维生素C＜0.5 mmol/L,胆红素＜300μmol/L,血红蛋白＜5 g/L时,对结果无显著干扰.结论该法简便、灵敏,试剂稳定,适用于血清TBA的常规和自动分析.     

酶偶联放大法测定血清总胆汁酸

目的　建立简便的酶偶联放大法 ,直接检测血清总胆汁酸 (TBA)。方法　基于脱氢酶 辅酶体系的原理 ,用丙酮酸钠作乳酸脱氢酶 (LDH)的阻止剂 ,在Tris HCl缓冲溶液中 ,由NAD -NBT -Brij 98组成酶偶联放大系统。用自动生化分析仪测定血清TBA。结果　线性范围 :0～ 180 μmol/L ;精密度 :批内CV <2 .7% ,日间CV <4 .3% ,总CV <5 .4 %。与日本ENZABILE .AUTO(X)比较 :r =0 .990 ,Y =1.114X - 2 .137,与朗道BILEACIDS(Z)比较 :r =0 .997,Y =1.0 32Z 0 .90 6。LDH <3kU/L ,乳酸 <2 0mmol/L ,维生素C <0 .5mmol/L ,胆红素 <30 0 μmol/L ,血红蛋白 <5g/L时 ,对结果无显著干扰。 结论　该法简便、灵敏 ,试剂稳定 ,适用于血清TBA的常规和自动分析     

酶偶联Trinder反应测定血清磷酸肌酸激酶实验探讨

[目的]建立一种新的酶偶联Trinder反应测定血清肌酸激酶。[方法]利用甘油激酶作用ATP和甘油产生甘油-3-磷酸，经甘油磷酸氧化酶氧化生成H2O2，后者与2，4，6-三溴-3-羟基苯甲酸和4-氨基安替比林在过氧化物酶作用下生成红色化合物。[结果]该方法线性范围达到2000U／L，批内批间平均相对标准偏差为1．96％和3．77％，与紫外酶偶联速联率法比较，相关系数r=0．989，y=1．002x 2．41。[结论]该方法具有灵敏、准确、简便、快速等优点。     

酶偶联法测定肌酐与苦味酸法的比较

目的：评价肌酐酶－氧化酶偶联法测定肌酐（以下简称酶法）。方法：同时用ROCHE公司和LABO公司的两种酶法试剂盒测定肌酐并与苦味酸法进行比较。结果：LABO酶法测定肌酐的线性范围为25μmol/L-2210μmol/L，ROCHE为49μmol/L－4420μmol/L，苦味酸法为92μmol/L－520μmol/L。LABO试剂的批内CV＜0．54％，批间CV＜2．06％，回收率为95％；ROCHE试剂的批内CV＜0．88％，批间CV＜2．30％，回收率为99％；苦味酸法批内CV＜1．13％，批间CV＜3．23％，回收率为93％。溶血、黄疸对两种酶法测定肌酐的干扰率＜4％；抗坏血酸对苦味酸法产生正干扰，当其＞0．625g/L时，干扰率≥11．2％，抗坏血酸≥1．25g/L时，对ROCHE试剂测定结果的干扰率≥5．58％；药物头孢曲松钠≥1．00g/L时，对苦味酸法产生正干扰，干扰率≥7．11％，对其它两种试剂无干扰。结论：酶法测定肌酐优于苦味酸法，可作为临床常规测定方法。同时，临床实验室需根据自己的实际情况选择合适的酶法试剂盒。     

速率法测定血清烯醇化酶活性及其初步临床应用

目的 建立血清烯醇化酶(enolase,ENO)活性的全自动速率测定法,进行方法 学评价及初步临床应用.方法 根据烯醇化酶和丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶及还原型辅酶I的偶联反应,在Olymbus Au5400全自动生化分析仪上用双试剂速率法测定EN0活性.结果 本方法 批内CV2.3%～3.7%,批间CV4.2%～5.6%;...     

血清无机磷的酶法测定

建立了一种酶偶联测定血清无机磷的方法，方法线性范围为０～３ｍｍｏｌ／Ｌ，变异系数批内ｘ＝１．０３ｍｍｏｌ／Ｌ，ｎ＝２０，ＣＶ＝１．２１％，批间：ｘ＝１．２８ｍｍｏｌ／Ｌ，ｎ＝２０，ＣＶ＝３．７％，与钼酸铵紫外光度法相关性为ｒ＝０．９９４２，Ｙ＝０．９５０９Ｘ＋０．０５４１，参考值范围为０．９８～１．５５ｍｍｏｌ／Ｌ。     

连续监测法测定血清山梨醇脱氢酶

以ＮＡＤ＋、山梨醇为底物，３７℃ｐＨ１０的甘氨酸／氢氧化钠为缓冲体系，建立血清山梨醇脱氢酶（ＳＤＨ）的连续监测法。ＮＡＤ＋、山梨醇和Ｚｎ２＋的最终浓度分别为０．４７、１９和１．９ｍｍｏｌ／Ｌ，ＫＮＡＤ＋、Ｋ山梨醇分别为０．０９和１．２ｍｍｏｌ／Ｌ。在此条件下，确定ＳＤＨ线性范围为０～１８０Ｕ／Ｌ，批内ＣＶ为３．９％，批间ＣＶ为５．２％，６０例健康成人血清ＳＤＨ正常参考值为０～３．１Ｕ／Ｌ。初步临床观察表明，急性肝损伤时该酶明显升高，肝外梗阻、心肌梗塞等非肝病患者血清ＳＤＨ一般不增高。     

生物发光法测定血清总CK活力

肌酸激酶是一种二聚酶，广泛存在于身体各组织中，是一项诊断心肌梗塞及其它疾病的重要实验室指标．采用灵敏度和特异性均较佳的生物发光法对血清总CK进行检测，其结果:60例健康正常人的总CK活性为15．03±0．77U／L,而20例心肌梗塞患者的检测结果则为76．25±30．55U／L，二者间存在非常显著的差异（P＜0．001）．临床应用研究表明、该法简便易行、灵敏、特异，值得推广．     

速率法测定血清谷氨酸脱氢酶及其实验条件的探讨

本法以α-酮戍二酸、铵离子及还原型辅酶Ⅰ为底物,在谷氯酸脱氢酶催化作用下,转变为谷氯酸和氧化型辅酶Ⅰ,利用还原型辅酶Ⅰ在340nm 处有吸收峰,监测其反应速率(-△A/min),计算谷氨酸脱氢酶的活力单位。本文对实验条件进行了探讨和选择:以三羟甲基氨基甲烷—盐酸作为缓冲液,pH7.8,缓冲液浓度0.08mol/L,其它反应液浓度为α-酮茂二酸7mmol/L、铵离子浓度100mmol/L、还原型辅酶Ⅰ浓度0.25mmol/L、二磷酸腺苷1mmol/L、乙二胺四乙酸二钠1mmol/L、乳酸脱氢酶2000U/L。同时测定了31例健康体检者血清谷氨酸脱氢酶的正常参考值。