养血清脑颗粒对血管性痴呆大鼠海马CA1区超微结构及p38丝裂原活化蛋白激酶蛋白表达的影响

目的观察养血清脑颗粒对血管性痴呆大鼠海马CA1区超微结构及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)蛋白表达的影响。方法 180只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、血管性痴呆模型组(模型组)和养血清脑颗粒治疗组(治疗组),采用改良的Pulsinelli四血管阻断法制作血管性痴呆模型,分别在术后1、2、4、8周采用透射电镜观察大鼠海马CA1区超微结构变化,免疫组化法和Western blotting法检测海马CA1区p38MAPK水平。结果模型组海马CA1区神经元大量固缩,细胞核溶解,异染色质边集,线粒体肿胀。治疗组海马CA1区神经元核膜较完整,核染色质分布较均匀,胞质内线粒体及其他细胞器基本正常。与假手术组相比,模型组各时间点p38MAPK蛋白表达明显增多(P0.01),4周时达高峰;与模型组比较,治疗组各时间点p38MAPK蛋白表达明显减少(P0.01)。结论养血清脑颗粒可改善血管性痴呆模型大鼠海马CA1区损伤的神经元超微结构,可能与抑制p38MAPK蛋白的表达有关。     

养血清脑颗粒对血管性痴呆大鼠海马CA1区胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察养血清脑颗粒对血管性痴呆大鼠海马CA1区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法 144只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(n=48)、血管性痴呆模型组(模型组,n=48)和养血清脑颗粒治疗组(治疗组,n=48)。采用改良Pulsinelli四血管阻断法制作血管性痴呆大鼠模型。假手术组和模型组灌胃生理盐水10 ml/(kg?d);治疗组灌胃养血清脑颗粒3.2g/(kg?d)。分别在术后1周、2周、4周和8周采用免疫组化法和Western blotting法检测海马CA1区GFAP表达水平。结果与对照组比较,模型组各时间点大鼠海马CA1区GFAP表达明显增高(P0.01);与模型组比较,治疗组各时间点GFAP表达明显下降(P0.01)。结论养血清脑颗粒可抑制血管性痴呆大鼠海马CA1区星形胶质细胞的增生和活化。     

粒细胞集落刺激因子对血管性痴呆大鼠海马神经细胞凋亡的影响

背景：研究发现,粒细胞集落刺激因子可激活脑内成体神经干细胞,刺激其增殖和分化,还能促进脑内各种神经营养因子分泌,减小脑缺血动物模型的缺血灶,促进慢性脑卒中模型缺失神经功能的长期恢复。目的：观察粒细胞集落刺激因子对血管性痴呆大鼠海马神经细胞凋亡的作用。方法：采用永久性双侧颈总动脉结扎法建立大鼠血管性痴呆模型,抽签法随机分为4组：实验组（皮下注射粒细胞集落刺激因子干预治疗）、对照组（注射生理盐水）、假手术组（仅行颈前正中切开,不结扎颈总动脉）。采用Morris水迷宫进行定向航行观察大鼠逃避潜伏期,评价大鼠空间学习记忆能力,TUNEL染色和图像分析大鼠海马神经细胞的凋亡。结果与结论：对照组和实验组大鼠脑缺血后7d,大鼠平均逃避潜伏期较假手术组明显延长（P〈0.01）,海马组织TUNEL阳性凋亡细胞较假手术组显著增高（P〈0.01）,随着时间的延长,14,28d时大鼠学习记忆功能障碍逐渐加重,相应海马组织TUNEL阳性凋亡细胞逐渐增加。14,28d时实验组大鼠平均逃避潜伏期比对照组明显缩短,海马组织TUNEL阳性凋亡细胞也较对照组显著减少。说明脑缺血后早期给予外源性粒细胞集落刺激因子有助于减少海马组织神经细胞的凋亡,改善大鼠学习记忆能力。     

粒细胞集落刺激因子对血管性痴呆大鼠海马神经细胞凋亡的影响

背景:研究发现,粒细胞集落刺激因子可激活脑内成体神经干细胞,刺激其增殖和分化,还能促进脑内各种神经营养因子分泌,减小脑缺血动物模型的缺血灶,促进慢性脑卒中模型缺失神经功能的长期恢复。目的:观察粒细胞集落刺激因子对血管性痴呆大鼠海马神经细胞凋亡的作用。方法:采用永久性双侧颈总动脉结扎法建立大鼠血管性痴呆模型,抽签法随机分为4组:实验组(皮下注射粒细胞集落刺激因子干预治疗)、对照组(注射生理盐水)、假手术组(仅行颈前正中切开,不结扎颈总动脉)。采用Morris水迷宫进行定向航行观察大鼠逃避潜伏期,评价大鼠空间学习记忆能力,TUNEL染色和图像分析大鼠海马神经细胞的凋亡。结果与结论:对照组和实验组大鼠脑缺血后7d,大鼠平均逃避潜伏期较假手术组明显延长(P<0.01),海马组织TUNEL阳性凋亡细胞较假手术组显著增高(P<0.01),随着时间的延长,14,28d时大鼠学习记忆功能障碍逐渐加重,相应海马组织TUNEL阳性凋亡细胞逐渐增加。14,28d时实验组大鼠平均逃避潜伏期比对照组明显缩短,海马组织TUNEL阳性凋亡细胞也较对照组显著减少。说明脑缺血后早期给予外源性粒细胞集落刺激因子有助于减少海马组织神经细胞的凋亡,改善大鼠学习记忆能力。     

粒细胞集落刺激因子与血管性痴呆大鼠海马凋亡相关蛋白

背景:研究表明粒细胞集落刺激因子在保护神经元免受各种因素所致的神经元变性和死亡中发挥重要作用。目的:观察粒细胞集落刺激因子对血管性痴呆大鼠海马组织神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法:采用永久性双侧颈总动脉结扎法建立SD大鼠血管性痴呆模型,以未进行血管结扎的大鼠作为假手术组。造模成功后,治疗组大鼠每日皮下注射粒细胞集落刺激因子50μg/kg,假手术组和模型组注射等量的生理盐水。分别于造模后7,14,28d取大鼠海马组织用于检测。结果与结论:Morris水迷宫结果显示,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.01),而治疗组各时间点大鼠逃避潜伏期较模型组缩短(P<0.01);TUNEL及免疫组织化学结果显示,与模型组比较,治疗组各时间点大鼠海马TUNEL及Bax阳性细胞吸光度值明显减小(P<0.01),Bcl-2阳性细胞吸光度值明显增加(P<0.01)。说明粒细胞集落刺激因子可提高血管性痴呆大鼠海马Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达,减少神经细胞凋亡,改善大鼠的学习记忆功能。     

电针长强穴对血管性痴呆大鼠学习记忆能力及海马CA1区细胞凋亡的影响

目的:观察电针长强穴对血管性痴呆(VD)大鼠学习记忆能力及海马CA1区细胞凋亡的影响。方法:将水迷宫筛得的60只雄性大鼠按照随机数字表分为空白组9只、假手术组9只和手术组42只。手术组采用双侧颈总动脉永久性结扎法制备模型,术后1周筛得27只,随机分为模型组9只、电针长强穴组9只、电针非穴组9只,干预后行水迷宫测试及原位末端转移酶标记技术检测。结果:空白组和电针长强穴组的逃避潜伏期、CA1区细胞凋亡数低于模型组(P0.05),穿越平台次数多于模型组(P0.05);电针长强穴组CA1区细胞凋亡数与逃避潜伏期正相关,与穿越平台次数负相关(P0.05)。结论:电针长强穴能够提高VD大鼠学习记忆能力及抑制海马CA1区细胞凋亡,且两者相关。     

艾地苯醌改善血管性痴呆大鼠认知功能及其对海马区生长相关蛋白-43和突触素P38表达的影响

目的:探讨艾地苯醌对血管性痴呆(VD)大鼠认知功能的作用,并初步探讨其机制。方法:SD大鼠60只随机均分为3组:假手术组、模型组和艾地苯醌组,各20只。采用改良双血管阻断(2-VO)法建立大鼠VD模型,艾地苯醌组大鼠腹腔注射艾地苯醌,10 mg/kg,1次/d,连续给药30 d;模型组及假手术组腹腔注射等量生理盐水。采用水迷宫评价各组大鼠学习、记忆能力;免疫组化测定海马生长相关蛋白-43(GAP-43)、突触素P38表达;透射电镜观察突触超微结构的改变。结果:模型组逃避潜伏期长于假手术组和艾地苯醌组(P<0.05),穿越原平台次数少于假手术组和艾地苯醌组(P<0.05);艾地苯醌组逃避潜伏期和穿越原平台次数与假手术组差异无统计学意义(P>0.05)。模型组GAP-43和触素P38蛋白的表达水平均低于其他2组(P<0.05);艾地苯醌组GAP-43和触素P38蛋白的表达水平均高于其他2组(P<0.05)。电镜下可见模型组大鼠海马区突触结构受损,艾地苯醌组大鼠海马组织区突触数量丰富,结构基本完整。结论:艾地苯醌可改善VD大鼠的学习和记忆功能,其机制可能与增强突触相关蛋白GAP-43和突触素P38的表达有关。     

静脉注射同种异体骨髓间充质干细胞对血管性痴呆大鼠海马区脑组织形态及微管相关蛋白2表达的影响

目的:骨髓间充质干细胞移植进入脑组织后,能否影响脑组织的形态及微管相关蛋白2的表达从而改善痴呆状态下的认知功能?观察静脉注射同种异体骨髓间充质干细胞后,血管性痴呆模型大鼠脑海马CA1区脑组织形态及微管相关蛋白2的变化。方法:实验于2004-08/2005-05在解放军第二军医大学完成。①实验动物:健康雄性SD大鼠60只,随机数字表法分为细胞移植组、模型对照组、假手术组,20只/组。②实验方法:另取20只大鼠用于体外分离、培养扩增骨髓间充质干细胞,传至第2代时加入BrdU进行标记,制备单细胞悬液,调整细胞浓度为3×109L-1。细胞移植组、模型对照组采用双侧颈总动脉结扎法建立血管性痴呆动物模型,假手术组仅暴露双侧颈总动脉但不结扎。造模后4周,细胞移植组尾静脉注射骨髓间充质干细胞悬液1mL,模型对照组注射等量磷酸盐缓冲液,假手术组不进行尾静脉注射。③实验评估:细胞移植后4周,苏木精-伊红染色检测各组大鼠脑海马CA1区脑组织形态变化,免疫荧光染色观察经BrdU标记的骨髓间充质干细胞示踪情况,免疫组织化学染色检测脑海马CA1区微管相关蛋白2的表达。结果:细胞移植组5只大鼠死亡,模型对照组3只大鼠死亡,假手术组均进入结果分析。①脑海马CA1区锥体细胞形态变化:细胞移植组和模型对照组CA1区锥体细胞较假手术组排列稀疏、紊乱,细胞肿胀、脱失,核固缩,但细胞移植组细胞排列较模型对照组规则,且细胞肿胀、脱失及核固缩较模型对照组减轻。②脑海马内骨髓间充质干细胞的示踪:细胞移植后4周,大鼠脑海马内可见被绿色荧光标记的骨髓间充质干细胞。③脑海马CA1区微管相关蛋白2的表达:与假手术组比较,细胞移植组及模型对照组脑海马CA1区锥体细胞层微管相关蛋白2阳性产物的吸光度值均明显降低(P<0.05);细胞移植组明显高于模型对照组(P<0.05)。结论:静脉注射骨髓间充质干细胞能够使血管性痴呆大鼠脑海马CA1区神经元损伤及脱失减轻,并使微管相关蛋白2表达增加。     

p38MAPK和JNK在大鼠肾缺血-再灌注损伤模型中的表达及意义

目的 观察p38MAPK、JNK在肾缺血-再灌注损伤大鼠肾组织中的表达和活化,从而探讨p38MAPK、JNK信号转导通路与肾缺血-再灌注损伤的关系.方法 用缺血1 h再灌注1 h 制备缺血-再灌注模型,20只健康雄性SD大鼠[体质量(200±20)g]随机分为假手术组(n=10)、缺血-再灌注损伤组(n=10).检测肾组织丙二醛(MDA)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)活性及血尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)浓度.观察肾组织光镜、电镜下的形态学变化,用RT-PCR技术检测两组肾组织p38MAPK、JNK mRNA的表达情况,Western印迹法观察p38MAPK、JNK的活化情况.结果 缺血-再灌注损伤后,大鼠肾功能和肾小管上皮细胞明显受损,BUN、Cr、MDA浓度均高于假手术组(P<0.01),SOD活性低于假手术组(P<0.01),p38MAPK、JNK磷酸化蛋白在假手术组呈少量散在表达或不表达,缺血-再灌注损伤后磷酸化p38MAPK、JNK呈阳性表达(P<0.01).p38MAPK、JNK mRNA在缺血-再灌注损伤组的表达较假手术组显著增高(P<0.01).结论 肾缺血-再灌注可增加p38MAPK、JNK的磷酸化水平及p38MAPK、JNK mRNA的转录水平,p38MAPK、JNK可能在肾缺血-再灌注损伤中起到至关重要的作用.     

植物雌激素对血管性痴呆大鼠学习记忆及海马神经肽Y的干预效应

目的:观察植物雌激素对血管性痴呆鼠学习记忆能力和海马神经肽Y的影响,探讨植物雌激素对中枢神经系统的保护作用及可能的机制。方法:实验于2005-04开始,在兰州大学基础医学院解剖实验室环境喂养雌性Wistar大鼠80只1周后,随机分为4组,假手术组、血管性痴呆模型组、苯甲酸雌二醇组、大豆异黄酮组,每组20只。采用无创动脉夹夹闭双侧颈总动脉制备血管性痴呆大鼠模型,假手术组大鼠除不阻断双侧颈总动脉,其余与血管性痴呆组均相同。假手术组及血管性痴呆模型组普通喂养,苯甲酸雌二醇组在血管性痴呆术后第2天开始注射苯甲酸雌二醇(45μg/kg),隔日一次。大豆异黄酮组在血管性痴呆术后第1天给大豆异黄酮(120mg/kg)喂养,1次/d。血管性痴呆术后5周采用Morris水迷宫检测血管性痴呆大鼠空间学习记忆能力的变化,观察各组大鼠在迷宫各入水点搜索水下平台的游泳距离及潜伏期;并应用免疫组化方法检测大鼠海马神经肽Y的表达。结果:在实验过程每组有5只大鼠陆续死亡,60只大鼠完成实验并进入结果分析。①血管性痴呆模型组与假手术组、苯甲酸雌二醇组、大豆异黄酮组相比,游泳距离及潜伏期明显延长(P<0.05),假手术组、苯甲酸雌二醇组、大豆异黄酮组差异不明显。②血管性痴呆模型组大鼠海马各亚区及齿状回神经肽Y阳性细胞分布稀疏,数目较假手术组、苯甲酸雌二醇组、大豆异黄酮组明显减少(P<0.05)。而假手术组与苯甲酸雌二醇组、大豆异黄酮组相比较无明显变化(P>0.05)。结论:植物雌激素可取代雌激素,增加血管性痴呆大鼠海马神经肽Y的表达,提高大鼠空间学习记忆能力,对中枢神经系统缺血性病变起保护作用。     

Tau蛋白在血管性痴呆发病机制中的作用

目的观察血管性痴呆中Tau蛋白表达和磷酸化程度，研究其在发病机制中的可能作用。采用持久性双侧颈总动脉结扎方法制备血管性痴呆模型，Morns水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力的差异，HE染色和免疫组化染色检测海马CA1区Tau蛋白、蛋白磷酸酯酶2A的表达情况。结果发现手术组与对照组大鼠相比，Morris水迷宫隐藏平台逃避潜伏期延长，空间摸索试验时间减少；海马CA1区细胞排列疏松，数目减少，细胞形态异常；手术组大鼠神经元中Tau蛋白含量增多，蛋白磷酸酯酶2A减少，以一个月时最明显。以上结果表明Tau蛋白表达增多及过度磷酸化在血管性痴呆发病机制中可能起到作用。     

海马干细胞来源的外泌体对血管性痴呆大鼠学习记忆能力改善作用及其机制探究

目的 分析海马干细胞来源的外泌体对血管性痴呆大鼠学习记忆能力改善作用及其机制。方法 取新生SD大鼠海马组织,提取海马干细胞外泌体。成年特殊清洁级(SPF)健康雄性SD大鼠90只,随机分为假手术组、模型组及外泌体组,每组30只,检测各组大鼠学习记忆能力、氧化应激因子水平、海马组织病理学变化、海马组织因子、脑微血管密度以及凋亡相关因子变化。结果 透射显微镜观察到海马干细胞来源外泌体结构呈圆形或椭圆形杯状结构的小囊泡,其结构完整,直径50～100 nm之间;特异性标记蛋白CD9、CD63表达阳性。与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期及错误次数明显延长,平台区域探索时间及有效区停留时间明显缩短,MDA、AchE、ET-1、VEGF、Bax水平均明显升高,SOD、5-HT、Bcl-2水平均明显降低,脑微血管内皮细胞明显减少(P<0.05);与模型组对比,外泌体组大鼠逃避潜伏期明显缩短,平台区域探索时间及有效区停留时间明显延长,MDA、AchE、ET-1、VEGF、Bax水平均明显降低,SOD、5-HT、Bcl-2水平均明显升高,脑微血管内皮细胞明显增多(P<0.05)。假手术组大鼠海...     

电针对实验性血管性痴呆大鼠学习记忆能力和脑组织细胞凋亡的影响

目的：观察电针对实验性血管性痴呆（VD）大鼠学习记忆能力和脑组织细胞凋亡的影响。方法：实验中用4－血管阻断模型，用Morris水迷宫测定大鼠学习记忆能力，并用Tunel法检测鼠脑皮质和海马细胞凋亡情况。结果：模型大鼠表现明显的学习记忆障碍，在定位航行实验中，与假手术组相比，潜伏期显著延长；在空间探索试验中，在原平台象限跨越平台次数与其余三个象限无显著差异，其顶叶皮层及海马有大量的凋亡细胞出现。而电针能显著缩短定位航行试验的潜伏期，在空间探索试验中，在原平台象限跨越平台次数显著多于其余三个象限，与假手术组无显著差异；其顶叶皮层及海马CA1区的凋亡细胞数显著减少，受损程度明显轻于模型组。结论：电针能改善VD大鼠学习记忆能力，有拮抗脑组织细胞凋亡的作用。     

移植神经干细胞对血管性痴呆大鼠的行为学效应

目的:移植神经干细胞于血管性痴呆(vasculardementia,VD)大鼠海马,研究移植后大鼠的行为学疗效。方法:实验于2002-09/2003-12在解放军南京军区福州总医院实验动物中心进行。①利用无血清培养和单细胞克隆技术从新生大鼠脊髓分离具有单细胞克隆能力的细胞群并连续传代培养,获得大量克隆细胞。②永久性结扎大鼠双侧颈总动脉法建立VD模型,结扎后饲养30d,以Morris水迷宫定位航行试验和空间探索试验来检测大鼠的空间记忆能力。③利用脑立体定位技术将5-溴-2'-脱氧尿苷(BrdU)标记后的神经干细胞移植入VD大鼠海马内,饲养8周后以Morris水迷宫来检测大鼠的空间记忆能力。结果:神经干细胞移植后8周,假手术组平均逃避潜伏期为(25.61±3.21)s,痴呆组的平均逃避潜伏期为(53.42±8.26)s,两组比较差异有显著性意义(F=7.82,P<0.01),移植组平均逃避潜伏期(36.93±6.24)s,两组比较差异有显著性意义(F=8.23,P<0.01),移植组平均逃避潜伏期与假手术组相比差异无显著性意义(F=5.77,P>0.05)。痴呆组、移植组及假手术组大鼠在平台象限的平均滞留时间分别为(8.21±2.90),(11.82±3.08),(13.48±3.35)s,痴呆组、移植组比较差异有显著性意义(F=9.76,P<0.01),痴呆组、假手术组比较差异有显著性意义(F=10.21,P<0.01),假手术组、移植组     

脑缺血预适应大鼠脑内p38丝裂原激活蛋白激酶磷酸化水平和蛋白表达量的测定

目的初步探讨p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)在大鼠脑缺血预适应(IPC)形成中的作用。方法选用成年雄性Sprague-Dawley大鼠复制整体脑缺血预适应模型。将大鼠随机分为空白对照(control)、假手术(SI)、缺血预适应或缺血耐受(IT)、外周伤害对照(PNC)、外周伤害耐受(PNT)5组。应用SDS-PAGE、Western blot等实验方法,借助Gel Doc和Versa Doc凝胶成像系统,半定量检测脑躯体感觉皮层、海马组织内p38 MAPK的磷酸化水平和蛋白表达量。结果经脑IPC后,大鼠躯体感觉皮层和海马组织内p38 MAPK磷酸化水平和蛋白表达量与各自对照组相比均未见显著性差异(P>0.05,n=6)。结论大鼠大脑躯体感觉皮层和海马组织内p38 MAPK可能未以磷酸化水平和蛋白表达量改变的形式参与脑缺血预适应的形成。     

静脉注射同种异体骨髓间充质干细胞对血管性痴呆大鼠海马区脑组织形态及微管相关蛋A2表达的影响

目的：骨髓间充质干细胞移植进入脑组织后，能否影响脑组织的形态及微管相关蛋白2的表达从而改善痴呆状态下的认知功能？观察静脉注射同种异体骨髓间充质干细胞后，血管性痴呆模型大鼠脑海马CAl区脑组织形态及微管相关蛋白2的变化。方法：实验于2004-08／2005-05在解放军第二军医大学完成。①实验动物：健康雄性SD大鼠60只，随机数字表法分为细胞移植组、模型对照组、假手术组，20只，组。②实验方法：另取20只大鼠用于体外分离、培养扩增骨髓间充质干细胞，传至第2代时加入BrdU进行标记，制备单细胞悬液，调整细胞浓度为3x109L～。细胞移植组、模型对照组采用双侧颈总动脉结扎法建立血管性痴呆动物模型，假手术组仅暴露双侧颈总动脉但不结扎。造模后4周，细胞移植组尾静脉注射骨髓间充质干细胞悬液1mL，模型对照组注射等量磷酸盐缓冲液，假手术组不进行尾静脉注射。③实验评估：细胞移植后4周，苏木精一伊红染色检测各组大鼠脑海马CAl区脑组织形态变化，免疫荧光染色观察经BrdU标记的骨髓间充质干细胞示踪情况，免疫组织化学染色检测脑海马CAl区微管相关蛋白2的表达。结果：细胞移植组5只大鼠死亡，模型对照组3只大鼠死亡，假手术组均进入结果分析。①脑海马CAl区锥体细胞形态变化：细胞移植组和模型对照组CAl区锥体细胞较假手术组排列稀疏、紊乱，细胞肿胀、脱失，核固缩，但细胞移植组细胞排列较模型对照组规则，且细胞肿胀、脱失及核固缩较模型对照组减轻。②脑海马内骨髓间充质干细胞的示踪：细胞移植后4周，大鼠脑海马内可见被绿色荧光标记的骨髓间充质干细胞。③脑海马CAl区微管相关蛋白2的表达：与假手术组比较，细胞移植组及模型对照组脑海马CAl区锥体细胞层微管相关蛋白2阳性产物的吸光度值均明显降低（P〈0．05）；细胞移植组明显高于模型对照组（P〈0．05）。结论：静脉注射骨髓间充质干细胞能够使血管性痴呆大鼠脑海马CAl区神经元损伤及脱失减轻，并使微管相关蛋白2表达增加。     

痴呆康复冲剂对血管性痴呆大鼠脑细胞损伤的保护机制

目的:观察痴呆康复冲剂对血管性痴呆大鼠脑细胞损伤后的学习记忆能力、大鼠海马锥体细胞形态改变及对海马CA1区细胞数和生长抑素阳性神经元数的影响。方法:实验于2005-06/10在华中科技大学同济医学院生理教研室完成。①选用Wistar大鼠108只,雄性。按随机数字表法分为3组:假手术组、模型组和痴呆康复冲剂组,每组36只。②采用4血管阻断法制作痴呆大鼠动物模型。假手术组:开颅但不阻断颈总动脉,正常饲养。痴呆康复冲剂组:按1.08g/(kg·d)的剂量连续灌胃痴呆康复冲剂(由黄芪、丹参、制首乌、枸杞子、熟地黄、赤芍药、郁金、远志和紫车河等组成,按药典标准配制成煎膏剂,使用时配成混悬液,由本院自制),共14d,然后造模,术后5d,连续灌服痴呆康复冲剂。模型组:造模后每天灌胃等量生理盐水。各组均于造模后干预120d。③采用水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力:用一约1m3有机玻璃槽,槽内为迷宫状,有多处盲端。实验时,槽内充水,水深20cm,水温(25±2)℃。造模后第7天,训练4次,第5次记录其游完全程的时间和5min内进入盲端的次数作为学习成绩。24h后再测一次上述指标作为记忆成绩。上述实验于造模后30,60,120d进行。④造模后120d,取脑,制成切片,内氏体染色,光镜(×50,×400)观察海马细胞形态变化。计数1mm2海马CA1区中段正常细胞数,取双侧海马细胞数的均值为CA1区细胞计数。免疫组化反应法检测海马生长抑素阳性神经元数目。⑤组间计量资料差异比较采用t检验。结果:大鼠108只均进入结果分析。①造模后30d,模型组大鼠水迷宫实验游完全程时间明显长于假手术组(P<0.05),与痴呆康复冲剂组相近(P>0.05)。造模后60,120d,模型组大鼠水迷宫实验游完全程时间明显长于其他2组(P<0.05)。②造模后30,120d,模型组大鼠水迷宫实验5min内进入盲端次数明显多于假手术组(P<0.05),与痴呆康复冲剂组相近(P>0.05)。造模后60d,模型组大鼠水迷宫实验5min内进入盲端次数明显多于其他2组(P<0.01,0.05)。③痴呆康复冲剂组大鼠CA1区细胞线清晰,锥体细胞形态大多数正常,无明显细胞变性、坏死,明显优于模型组,CA1区细胞计数接近正常,细胞排列紧密,数量明显增多,尼氏体丰富,见仅见少数细胞变性、坏死。④造模后120d,模型组大鼠海马CA1区单位面积细胞计数和海马生长抑素阳性神经元数目明显少于其他2组(P<0.01)。结论:痴呆康复冲剂能改善血管性痴呆大鼠海马CA1区的细胞形态,增加海马生长抑素阳性神经元数目,增强学习记忆功能,有明显神经保护作用。     

纳洛酮对血管性痴呆大鼠学习记忆能力和海马神经细胞内钙离子浓度的影响

背景:脑缺血时阿片受体发生变化并可导致痴呆,阿片受体拮抗剂纳洛酮对脑缺血时阿片受体变化起调控作用,故纳洛酮对血管性痴呆可能起预防作用。目的:研究阿片受体拮抗剂纳洛酮对血管性痴呆大鼠空间学习记忆减退的防治作用,探讨防治作用的神经机制。主要涉及海马神经细胞内钙离子浓度。设计:随机对照的实验研究。地点和对象:在汕头大学医学院清洁级实验动物饲养中心,30只雄性SpragueDawley大鼠。采用持久性结扎双侧颈总动脉方法制备血管性痴呆模型,随机分为假手术对照组、模型组和防治组。干预:防治组于术后即连续7d腹腔注射纳洛酮,其他两组腹腔注射等体积生理盐水。8周后用Morris水迷宫训练方法。主要观察指标:假手术对照组、模型组与防治组大鼠的隐匿平台逃避潜伏期,空间探索实验穿越平台次数,可见平台实验逃避潜伏期。三组钙离子荧光像素值。结果:假手术组和防治组与模型组的实验大鼠相比,其Morris水迷宫隐匿平台逃避潜伏期明显缩短犤假手术组为(7.80±4.70)s,防治组为(8.10±2.93)s,模型组为(21.26±17.41)s,F=15.028,P<0.01犦,前两者差异无显著性意义(P>0.05);空间探索实验穿越平台次数明显增加犤假手术组为(8.45±1.19)次/min,防治组为(8.00±1.17)次/min,模型组为(4.44±1.74)次/min,F=23.257,P<0.     

植物雌激素对血管性痴呆大鼠学习记忆及海马神经肽Y的干预效应

目的：观察植物雌激素对血管性痴呆鼠学习记忆能力和海马神经肽Y的影响。探讨植物雌激素对中枢神经系统的保护作用及可能的机制。方法：实验于2005-04开始，在兰州大学基础医学院解剖实验室环境喂养雌性Wistar大鼠80只1周后，随机分为4组，假手术组、血管性痴呆模型组、苯甲酸雌二醇组、大豆异黄酮组，每组20只。采用无创动脉夹夹闭双侧颈总动脉制备血管性痴呆大鼠模型，假手术组大鼠除不阻断双侧颈总动脉，其余与血管性痴呆组均相同。假手术组及血管性痴呆模型组普通喂养，苯甲酸雌二醇组在血管性痴呆术后第2天开始注射苯甲酸雌二醇（45μg／kg），隔日一次。大豆异黄酮组在血管性痴呆术后第1天给大豆异黄酮（120mg／kg）喂养，1次／d。血管性痴呆术后5周采用Morris水迷宫检测血管性痴呆大鼠空间学习记忆能力的变化，观察各组大鼠在迷宫各入水点搜索水下平台的游泳距离及潜伏期；并应用免疫组化方法检测大鼠海马神经肽Y的表达。结果：在实验过程每组有5只大鼠陆续死亡，60只大鼠完成实验并进入结果分析。①血管性痴呆模型组与假手术组、苯甲酸雌二醇组、大豆异黄酮组相比。游泳距离及潜伏期明显延长（P〈0．05）。假手术组、苯甲酸雌二醇组、大豆异黄酮组差异不明显。②血管性痴呆模型组大鼠海马各亚区及齿状回神经肽Y阳性细胞分布稀疏，数目较假手术组、苯甲酸雌二醇组、大豆异黄酮组明显减少（P〈0．05）。而假手术组与苯甲酸雌二醇组、大豆异黄酮组相比较无明显变化（P〉0．05）。结论：植物雌激素可取代雌激素，增加血管性痴呆大鼠海马神经肽Y的表达，提高大鼠空间学习记忆能力，对中枢神经系统缺血性病变起保护作用。     

针刺督脉组穴对血管性痴呆大鼠海马CA1区NGB与HIF-1α表达的影响

目的：研究针刺对血管性痴呆（VD）大鼠海马CA1区脑红蛋白（Ngb）和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法：随机分为假手术组、VD模型组以及电针治疗组,选用改良双侧CCA阻断法（2-VO）法建立VD大鼠模型,分别于造模后第3天和针刺治疗结束后,使用Morris水迷宫检测大鼠认知水平,Tunel法观察海马细胞形态,并检测各组海马中的ATP浓度,Western blot法检测Ngb和HIF-1α表达水平,RT-PCR法检测p53RFPmRNA、NgbmRNA、HIF-1αmRNA表达水平。结果：与假手术组比较,造模后大鼠的学习记忆功能受损,海马神经细胞凋亡增加,Ngb水平应激性升高（P<0.05）,HIF-1α表达水平增高（P<0.05）;较模型组,针刺组大鼠的学习记忆能力及神经元凋亡情况显著改善,ATP浓度增加,p53RFPmRNA下将,Ngb和HIF-1α表达水平显著增高（P<0.05）。结论：针刺可以通过增加海马区Ngb和HIF-1α的表达水平,抑制海马神经元的凋亡,从而改善血管痴呆模型动物学习记忆。