血管紧张素Ⅱ对RIN-m细胞PDX-1 mRNA及蛋白表达的影响

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(ATⅡ) 对胰十二指肠同源盒1(PDX-1)表达的影响及其与胰岛素(Ins) 分泌的关系.方法 测定RIN-m细胞在基础、ATⅡ及氯沙坦作用下Ins 分泌量、细胞内Ins 含量及细胞内PDX-1 mRNA 和蛋白的表达水平.结果 在100nmol/L ATⅡ作用下, 葡萄糖刺激后Ins 分泌量、细胞内Ins 含量及PDX-1表达水平均明显降低(P均<0.05).上述作用可被ATⅡ受体阻滞剂氯沙坦部分逆转.结论 抑制PDX-1表达水平可能是ATⅡ影响胰岛β细胞Ins合成及分泌的机制之一.     

乳腺癌组织中Bmi-1、EZH2蛋白的表达变化及意义

目的观察乳腺癌组织中Bmi-1、EZH2蛋白的表达变化,探讨其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测81例乳腺癌组织及其癌旁正常乳腺组织中的Bmi-1、EZH2蛋白。结果乳腺癌组织中Bmi-1、EZH2蛋白阳性率分别为64.20%、77.78%,正常乳腺组织为28.40%、38.27%,P均〈0.01。Bmi-1蛋白表达与乳腺癌TNM分期、淋巴结转移有关（P均〈0.05）,EZH2蛋白表达与乳腺癌淋巴结转移有关（P〈0.05）,二者在乳腺癌组织中的表达呈正相关（r=1.000,P〈0.01）。结论乳腺癌组织中Bmi-1、EZH2蛋白高表达,二者在乳腺癌的发生、发展中起重要作用。     

胰腺十二指肠同源框-1基因真核表达载体的构建和转染

目的应用阳离子脂质体介导含有大鼠胰腺十二指肠同源框-1（PDX-1）基因的真核表达载体转染胰腺导管上皮细胞。方法利用逆转录聚合酶链反应技术克隆大鼠PDX-1基因，酶切后插入经相同酶切及磷酸化处理的含绿色荧光蛋白（GFP）的空白载体pEGFP—C2，构成重组质粒，再进行HindⅢ、BglⅡ双酶切筛选、鉴定并测序；阳离子脂质体介导转染后，荧光显微镜下观察荧光并计算转染效率从而对转染条件进行优化。结果限制性酶切分析证实重组后的载体成功载人PDX-1基因；克隆的目的片断经序列测定与Genebank公布的序列一致；转染条件优化后重组载体在胰腺导管上皮细胞中有效表达。结论在国内首次成功克隆了大鼠PDX-1基因，并构建了含有PDX-1基因的真核表达载体；通过优化转染条件提高了转染效率。为将表达PDX-1基因的胰腺导管上皮细胞作为组织工程的种子细胞提供了实验依据。     

人TAT-PDX-1融合蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化

目的构建人TAT-PDX-1表达载体,并对其融合蛋白进行纯化。方法采用RT-PCR技术从人胰腺组织中获得目的基因hPDX-1,将TAT序列与PDX-1克隆到原核表达载体pET-28a;用IPTG诱导、表达融合蛋白;NiNTAagaros纯化融合蛋白,Western blot鉴定。结果目的片段PDX-1被有效扩增,DNA序列测定表明所构建重组质粒pET28a-TAT-h PDX-1与设计相同;TAT-PDX-1融合蛋白在大肠杆菌中获得高效表达并成功纯化。结论成功地获得了TAT-hPDX-1融合基因的表达产物,为进一步研究及临床应用奠定了基础。     

游离脂肪酸对βTc6细胞PDX-1表达及胰岛素分泌能力的影响

目的 探讨游离脂肪酸对胰岛β细胞胰-十二指肠同源盒因子-1(PDX-1)的表达及相应的β细胞增殖活性和胰岛素分泌功能变化的影响.方法 0.25～1.00 mmol/L游离脂肪酸干预小鼠胰岛素瘤细胞系βTc6细胞24～48 h,应用RT-PCR法检测转录因子PDX-1 mRNA表达,四甲基偶氮唑盐法检测细胞的增殖活性,放射免疫法检测葡萄糖刺激的胰岛素分泌水平,并观察细胞形态变化.结果 经0.25～1.00 mmol/L游离脂肪酸干预24 h,βTc6细胞PDX-1 mRNA的转录逐步增加,但随着干预时间进一步延长至48 h,PDX-1 mRNA的转录逐渐回落,特别是用1.00 mmoL/L游离脂肪酸干预48 h后,βTc6细胞PDX-1 mRNA的表达低于空白对照组.经过0.50～1.00 mmol/L游离脂肪酸24～48 h的干预之后,βTc6细胞形态学上呈现凋亡趋势,细胞增殖活力以及葡萄糖刺激的胰岛素分泌功能降低,而0.25 mmol/L游离脂肪酸24 h的干预未见此类现象.结论 短时间低浓度的游离脂肪酸干预可介导β细胞转录因子PDX-1的表达上调,对β细胞的增殖活性和胰岛素分泌能力无明显影响;而长时间高浓度的游离脂肪酸干预则将导致PDX-1 mRNA的表达下调,并使β细胞的增殖活性和胰岛素分泌能力受损.     

乳腺癌组织中PTEN、HIF-1α的表达及意义

采用免疫组化法检测44例乳腺癌(观察组)组织中第10染色体磷酸酶基因(PTEN)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),与对照组作比较,分析PTEN表达与乳腺癌临床病理参数的关系及其与HIF-1α表达的相关性.结果显示,对照组PTEN均呈高表达,观察组PTEN低表达者占47.7%(21/44)、高表达者占52.3%(23/44),两组相比,P<0.01;对照组HIF-1α表达均阴性,观察组HIF-1α高表达者占56.82%(25/44)、低表达者占43.18%(19/44),两组相比,P<0.01;VrEN表达与乳腺癌是否有淋巴结转移、乳腺癌雌激素受体状态及局部是否复发相关(P均<0.05),PTEN与HIF-1α表达呈显著负相关(r=-0.374,P<0.05).认为乳腺癌组织PTEN低表达、HIF-1α过表达,这对乳腺癌的预后判断有一定的价值.     

高浓度葡萄糖、脂肪酸和糖皮质激素对PDX-1表达和胰岛素分泌功能的影响

SD大鼠胰岛细胞分别在含5.6mmol／L葡萄糖、33mmol／L葡萄糖、0．6mmol／L软脂酸或20nmol／L地塞米松培养液中培养3d，RIA测定基础和葡萄糖刺激后胰岛素分泌量，免疫组化法测定细胞内胰十二指肠同源盒蛋白1（PDX-1）蛋白表达和原位杂交法测定细胞内PDX-1 mRNA表达。结果显示高浓度葡萄糖、脂肪酸和糖皮质激素对PDX-1蛋白表达和胰岛素分泌均有抑制作用。     

乳腺癌组织中p53的表达变化及意义

目的观察p53在乳腺癌组织中的表达,探讨其意义。方法采用免疫组织化学法检测127例乳腺癌组织中的p53。结果乳腺癌组织中p53阳性率为49％,其表达与临床分期、淋巴结转移有关（P〈0．05）,与年龄、肿瘤大小及组织学分型无关（P〉0．05）。结论053在乳腺癌组织中高表达,可做为判断乳腺癌转移的指标之一。     

乳腺癌组织Elf-1和MMP-2的表达及意义

应用免疫组化SP法检测60例乳腺癌、13例乳腺小叶增生和15例乳腺纤维腺瘤及7例癌旁正常乳腺组织中的Elf-1和MMP-2蛋白表达情况。结果EM-1、MMP-2在癌旁正常乳腺组织中均无表达。乳腺癌组织中Elf-1、MMP．2阳性表达率分别为83．3％、73．3％,显著高于乳腺小叶增生组织的23．1％、30．8％和乳腺纤维腺瘤组织的20．0％、20．0％,且与肿瘤大小、组织学分级、TNM分期、病理分型及淋巴结转移密切相关（P均〈0．05）。乳腺癌中Elf-1与MMP-2的表达呈正相关（r=0．525,P〈0．01）。认为Elf-1与MMP-2的表达水平与乳腺癌的临床病理特征有关,可作为判定乳腺癌生物学行为的参考指标。     

乳腺癌患者血清Cyclin D1表达变化及意义

用ELISA法检测43例乳腺癌、12例良性乳腺肿瘤患者及12位健康成年女性查体者血清中Cyclin D1的水平。结果乳腺癌患者血清Cyclin D1水平明显高于良性乳腺肿瘤患者及健康查体者（P〈0.05）,且术前明显高于术后（P〈0.05）,临床分期Ⅱ期以上及发生淋巴结转移患者的血清Cyclin D1水平均明显升高（P〈0.05）。认为患者血清Cyclin D1水平可作为评价乳腺癌预后的指标。     

乳腺癌组织中Cyclin D1和VEGF的表达及意义

目的探讨乳腺癌组织中细胞周期素（Cyclin）D1和血管内皮生长因子（VEGF）在乳腺癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化EliVision Plus法检测57份乳腺浸润性导管癌组织（乳腺癌组）及20份乳腺纤维腺瘤组织（对照组）标本中Cyclin D1和VEGF的表达,分析其与乳腺癌临床病理特征的关系及两者表达的相关性。结果乳腺癌组Cyclin D1阳性率（54．38％）明显高于对照组（20％）,P〈0．01;Cyclin D1阳性表达与患者年龄、肿瘤直径、腋窝淋巴结转移、组织学分级无关。乳腺癌组VEGF阳性率（61．40％）明显高于对照组（35％）,P〈0．05;VEGF阳性表达与乳腺癌腋窝淋巴结转移、组织学分级有关（P〈0．05）,与患者年龄、肿瘤直径无关。乳腺癌组织中Cyclin D1与VEGF的阳性表达呈正相关（r=0．287,P〈0．05）。结论Cyclin D1和VEGF高表达在乳腺癌的发生、发展中起重要作用;二者可能存在协同作用。     

乳腺癌组织中Cks1的表达及其对乳腺癌细胞凋亡的抑制作用

目的观察Cks1在乳腺癌组织中的表达,探讨其意义。方法采用免疫组化SP法检测100例乳腺癌组织中的Cks1;同时用RNA干扰敲降Cks1表达,观察其对乳腺癌细胞凋亡的影响。结果乳腺癌组织中Cks1阳性率为59％,与淋巴结转移和临床分期有关（P〈0．05）;敲降Cks1表达可显著增加乳腺癌细胞的凋亡。结论Cks1表达可促进乳腺癌发生发展,与其抑制细胞凋亡有关。     

乳腺癌组织中VEGF的表达变化及意义

目的观察血管内皮生长因子（VEGF）在乳腺浸润性导管癌组织中的表达变化,并探讨其与淋巴结转移的关系。方法采用免疫组化法检测60例乳腺浸润性导管癌组织（A组）和25例乳腺良性病变组织（B组）中的VEGF。结果 A组VEGF阳性表达率为78.3%,B组为12.0%（P〈0.05）。VEGF的表达与乳腺癌淋巴结转移和临床分期有关（P〈0.05）。结论乳腺癌组织中VEGF表达水平增高。VEGF表达上调可促进乳腺癌淋巴结转移和病情进展。     

乳腺癌组织中HER-2的表达变化及意义

目的观察乳腺癌组织中人表皮生长因子受体2（HER-2）的表达变化,并探讨其意义。方法取56例乳腺癌组织及20例正常乳腺组织,采用免疫组化染色法检测HER-2蛋白,半定量RT-PCR法检测HER-2 mRNA。结果乳腺组织中HER-2蛋白阳性32例,HER-2mRNA表达量为0．64385±0．256418,正常乳腺组织中分别为1例、0．45183±0．00116,两者相比,P〈0．001;HER-2 mRNA表达量与乳腺癌TNM分期有关（P〈0．001）。结论乳腺癌组织中HER-2高表达在乳腺癌的发生发展中起重要作用。     

CDX2与DNMT1 mRNA在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:研究尾型同源盒转录因子2(CDX2)mRNA和DNA甲基化转移酶1(DNMT1)mRNA在胃癌组织中的表达,探讨其临床意义.方法:应用实时定量PCR(qRT-PCR)检测60例患者胃癌与相应远癌胃组织中CDX2与DNMT 1mRNA的表达,并分析其与胃癌临床病理特征的关系以及两者表达的相关性.结果:CDX2和DNMT1 mRNA在远癌胃组织中表达较低,在胃癌组织中表达显著升高;CDX2 mRNA的表达与胃癌的Lauren分型、临床TNM分期和淋巴结转移等因素有关(P<0.05),而DNMT1 mRNA的表达与分化程度、临床TNM分期和淋巴结转移等因素有关(P<0.05).两者在胃癌中的表达呈明显负相关(r=-0.385,P<0.05).结论:胃癌组织中CDX2表达下调与病情进展有关,DNMT1可能参与该过程的调控.     

胃癌组织中DMBT1蛋白的表达变化及意义

目的 观察胃癌组织中DMBT1蛋白的表达变化,并探讨其在胃癌发生、发展中的作用.方法 采用免疫组化法检测50例人胃癌组织及其相应癌旁正常胃黏膜组织中的DMBT1蛋白.结果 胃癌组织中DMBT1蛋白表达明显低于癌旁正常组织(P＜0.01);低、未分化癌组织中DMBT1蛋白表达明显低于高、中分化癌,Ⅲ～Ⅳ期明显低于Ⅰ～Ⅱ期,伴淋巴结转移者明显低于无淋巴结转移者(P均＜0.05).结论 胃癌组织中DMBT1表达变化与胃癌分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关,DMBT1可能参与胃癌的浸润、转移及恶性转化.     

乳腺癌组织中MMP-7的表达变化及意义

目的探讨乳腺癌组织中基质金属蛋白酶（MMP）-7的表达与乳腺癌临床病理参数的关系。方法采用免疫组化SP法检测50例乳腺癌组织中MMP-7和血管内皮细胞CD34的表达,分析MMP-7与乳癌患者的年龄、肿瘤大小、组织学类型、淋巴结转移及肿瘤ER、PR、PCNA、p53、C-erbB-2表达及微血管密度的关系。结果MMP-7在直径〉2 cm、有淋巴结转移及PCNA、p53、C-erbB-2阳性乳腺癌组织中的阳性表达率显著高于相应对照组乳腺癌组织中的阳性表达率（P均〈0.05）。结论乳腺癌组织中MMP-7表达与肿瘤直径、有无淋巴结转移、MVD及PC-NA、p53、C-erbB-2表达相关。检测乳腺癌组织中MMP-7表达有助于判断乳腺癌血管生成情况和预后。     

乳腺癌中BP1及mTOR的表达及临床意义

目的探讨BP1及mTOR蛋白表达与乳腺癌发生发展之间的关系。方法运用双重免疫组织化学技术检测85例乳腺癌、癌旁组织及正常乳腺组织中BP1、mTOR的表达。结果BP1、mTOR蛋白在乳腺癌组织中高表达,且两者呈正相关（r=0．271,P=0．012）;两者同乳腺癌临床分期、病理分级相关（P〈0．01）,且BP1蛋白与雌激素受体（ER）存在相关性（P〈0．01）,mTOR蛋白与淋巴结转移存在相关性（P〈0．01）。结论BP1及mTOR与乳腺癌发生与发展相关,可作为药物治疗乳腺癌的靶点。     

ZEB1-AS1在结肠癌中表达及与铂类药物化疗敏感性的关系

目的 探讨结肠癌组织中锌指E-盒结合同源异形盒(ZEB)1-反义链(AS)1的表达及其与铂类药物化疗敏感性的关系。方法 选取结肠癌患者120例为研究组,收集患者手术过程中切除的癌组织及癌旁正常组织,实时荧光定量(qRT)-PCR法检测癌组织及癌旁组织中ZEB1-AS1的表达情况;分析ZEB1-AS1高低表达与临床病理特征的相关性;分析ZEB1-AS1高低表达与铂类化疗客观有效率的关系;Kaplan-Meier法分析ZEB1-AS1与5年生存期的关系;Cox回归模型分析影响患者预后不良的因素。结果 研究组ZEB1-AS1水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结肠癌患者ZEB1-AS1表达与年龄、性别、肿瘤直径不相关(P>0.05),与TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。ZEB1-AS1低表达患者治疗有效率显著高于ZEB1-AS1高表达患者(P<0.05)。Kaplan-Meier分析结果显示,ZEB1-AS1高表达患者5年生存率显著低于ZEB1-AS1低表达患者(P<0.05)。多因素Cox分析显示,TNM分期Ⅳ期、淋巴结转移、化疗无效、...     

RCC组织中KISS-1蛋白的表达变化及意义

目的观察。肾细胞癌（RCC）组织中KISS-1蛋白的表达变化,并探讨其临床意义。方法采用免疫组化法检测50例RCC、15例癌旁组织及15例正常肾组织中KISS-1蛋白。结果RCC组织中的KISS-1蛋白的阳性表达率为32．00％,明显低于癌旁组织的73．00％和正常肾组织的66．67％（P均〈0．05）;KISS-1蛋白与RCC的临床分期、淋巴结转移及分化程度有关（P均〈0．05）,KISS-1蛋白阳性表达率与RCC分化程度呈负相关（rs=-0．481,P=0．000）。结论RCC组织中KISS-1蛋白表达明显下调,其对RCC的发生发展有一定的抑制作用;KISS-1蛋白可能成为预测RCC恶性程度的新的生物学指标。