Toll样受体mRNA在人肾癌细胞786-0和正常肾细胞HK-2中的表达及意义

目的 探讨Toll样受体(TLR)在肾癌发生、发展中的作用和意义.方法 培养人肾癌细胞786-0(786-0实验组)和正常肾细胞HK-2(HK-2对照组).实时荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)检测TLR1～TLR10 mRNA在786-0实验组及HK-2对照组细胞中的表达规律.结果 786-0实验组和HK-2对照组细胞均表达TLR1～TLR6、TLR8～TLR10,而不表达TLR7.TLR1、TLR2、TLR4～TLR6、TLR8、TLR10在786-0实验组表达均高于HK-2对照组细胞[(4.40±0.19)×10-2、(1.77±0.24)×10-2、(5.03±0.62)×10-2、(3.93±0.86)×10-2、(6.11±0.48)×10-2、(1.89±0.47)×10-2、(2.84±0.57)×10-2比(0.84±0.27)×10-2、(0.40±0.04)×10-2、(0.95±0.73)×10-2、(0.56±0.25)×10-2、(0.49±0.16)×10-2、(0.20±0.07)×10-2、(0.27±0.08)×10-2,P＜0.01],而TLR3、TLR9在786-0实验组与HK-2对照组细胞的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TLR在人肾癌细胞和正常肾细胞细胞中的表达有差异,TLR1、TLR2、TLR4～TLR6、TLR8、TLR10在人肾癌的发生、发展中可能发挥一定的作用.

Abstract：

Objective To investigate the expression of toll-like receptors (TLR1-TLR10) in human renal carcinoma cell 786-0 and normal renal cell HK-2 and discuss the significance of TLRs in the development of renal carcinoma. Methods Human renal carcinoma cell 786-0 ( experimental group) and normal renal cell HK-2 (control group) were cultured. The expression of TLR1-TLR10 was detected by realtime fluorogenic quantitative PCR (FQ-PCR). Results The FQ-PCR analysis demonstrated that 786-0 cell line and HK-2 cell line expressed TLR1-TLR6 and TLR8-TLR10 mRNA. Yet neither had an expression of TLR7. Moreover, the expression levels of TLR1, TLR2, TLR4, TLR5, TLR6, TLR8 and TLR10 in the experimental group were significantly higher than those in HK-2 cell line [(4.40 ±0.19) × 10-2, ( 1.77 ±0.24) × 10-2,(5.03 ±0.62) × 10-2,(3.93 ±0.86) × 10-2, (6.11 ±0.48) × 10-2,(1.89 ±0.47) ×10-2,(2.84±0.57) × 10-2 vs (0.84 ±0.27) × 10-2,(0.40 ±0.04) × 10-2,(0.95 ±0.73) × 10-2,(0.56±0.25) ×10-2,(0.49 ±0.16) × 10-2,(0.20 ±0.07) × 10-2,(0.27 ±0.08) × 10-2,P＜0.01].There was no significant change in the expressions of TLR3 and TLR9 between 786-0 and HK-2 cell line (P ＞0. 05). Conclusion The expressions of TLR1, TLR2, TLR4, TLR5, TLR6, TLR8 and TLR10 are significantly higher in 786-0 cell line than those in HK-2 cell line. They may play key roles in the development of renal carcinoma.     

结核病患者中性粒细胞表面Toll样受体2和Toll样受体4的表达及意义

目的:检测结核病患者外周血中性粒细胞(PMN)体外感染结核分枝杆菌(M.tb)前后表面Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)的表达,并探讨其意义。方法:采用流式细胞仪检测结核病患者PMN表面TLR2和TLR4的表达,同时检测正常人PMN表面TLR2和TLR4的表达率;再用M.tb感染结核病患者和正常人外周血,检测PMN表面TLR2和TLR4表达情况。结果:结核病患者外周血感染M.tb前PMN表面TLR2和TLR4表达率明显高于正常人(P0.01);结核病患者和正常人外周血在感染M.tb后PMN表面TLR2和TLR4表达率均较感染前明显降低(P0.01)。结论:结核病患者PMN表面TLR2和TLR4的表达和活化有助于机体抵御结核感染,TLR2和TLR4共同参与了宿主对M.tb的免疫应答。     

Toll样受体2及Toll样受体4在大鼠实验性变应性鼻炎中的表达

目的 采用动物攻击性行为指标评估实验动物玩具对小鼠福利的影响.方法 60 只 BALB/c雄性小鼠随机分为实验组与对照组,每组 30 只,实验组放置动物玩具,对照组不放置,在 7d 内每天观察记录小鼠受到攻击的伤害程度和攻击数,分析比较第 4、7 天小鼠受到攻击的伤害程度及攻击数,计算第 4、7 天实验组相对对照组的攻击风险系数.结果 第4 、7 天实验组和对照组分别有10%(3/30)、30%(9/30)的小鼠在尾巴、耳朵、身体背部受到不同程度的伤害.第4、7天对照组小鼠受到的攻击风险系数分别是实验组的2.8倍和3.9倍.结论 实验动物玩具对小鼠攻击性行为引起的伤害具有一定的防范效果.     

人表皮角质形成细胞Toll样受体表达

目的 研究人表皮角质形成细胞Toll样受体表达谱.方法 培养人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK),采用分散酶分离表皮.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测10种Toll样受体mRNA表达,流式细胞仪检测HaCaT细胞和NHEK表面Toll样受体2和4蛋白的表达.结果 HaCaT细胞、NHEK以及分离的表皮均有全部10种Toll样受体mRNA表达,其表达强弱各不相同.流式细胞仪检测显示HaCaT细胞和NHEK表面有Toll样受体4蛋白的表达,而Toll样受体2无明显表达.结论 人表皮角质形成细胞中有Toll样受体1～10 mRNA的组成性表达.     

Toll样受体3和Toll样受体4在原发性IgA肾病患儿肾组织中的表达及意义

目的 探讨Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)3和TLR4在原发性IgA肾病患儿肾组织中的表达及意义.方法 选择2014年7月至2019年6月新乡医学院第一附属医院收治的64例原发性IgA肾病患儿为研究对象,所有患儿于超声引导下定位穿刺获取肾组织标本行病理学检查,根据牛津分类法将患儿分为M0组...     

Toll样受体2在类固醇性痤疮中的表达

目的 研究Toll样受体2(TLR2)在类固醇痤疮发病过程中的作用.方法 收集62例类固醇激索性痤疮患者皮肤组织,免疫组织化学法检测TLR2的表达水平;体外培养皮肤角质形成细胞系Hacat细胞,实时定量PCR及Western blot法检测地塞米松对TLR2表达的影响.结果 类固醇痤疮患者的痤疮样皮损TLR2的表达较正常组明显增高.地塞米松能显著上调静止Hacat细胞TLR2的表达;也能进一步增强痤疮丙酸杆菌刺激的Hacat细胞中TLR2的表达.结论 皮质类固醇激素对TLR2表达的增强作用可能参与了类固醇激素性痤疮的发生发展.     

尿毒症患者单个核细胞Toll样受体4表达及意义

目的 探讨尿毒症患者外周血单个核细胞(PBMC)表面Toll样受体4(TLR4)表达的临床意义.方法 用FITC荧光标记的抗TLR4单抗对80例维持性血液透析患者[(随机分为普通透析液组(CD)和超纯透析液组(UPD)]、40例尿毒症非透析患者和40例正常人(对照组)的外周血单个核细胞表面TLR4分子进行免疫荧光染色,应用流式细胞仪检测.结果 (1)普通血液透析组、非透析组、对照组3组间TLR4表达分别为(18.1±3.7)%、(24.5±4.6)%、(31.6±5.8)%差异有统计学意义(P<0.05);(2)使用超纯透析液(UPD)与普通透析液(CD)透析6个月时TLR4表达(23.1±3.2)%与(18.1±3.7)%差异有统计学意义(P<0.05);普通血液透析3、6、12个月TLR4表达为(22.6±3.9)%、(18.1±3.7)%、(14.7±2.6)%差异有统计学意义(P<0.05),使用超纯透析液治疗后TLR4表达略有下降,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 在尿毒症非透析及透析患者中TLR4表达均降低;使用超纯透析液较普通透析液TLR4表达增多;随普通透析时间延长,TLR4表达减少,使用超纯透析液对TLR4表达无明显影响.     

Fas和FasL在人绒癌细胞中的表达及其生物学意义

目的 观察Fas/FasL在绒毛膜癌细胞JEG-3、BeWo和Jurkat中的表达情况,探讨Fas/FasL与人绒癌细胞免疫逃逸的机制.方法 免疫荧光染色法、RT-PCR、免疫印迹检测fas/fasl的表达.台盼蓝细胞拒染、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测、流式细胞计数法检测绒癌细胞与Jurkat细胞共培养后对Jurkat细胞的抑制情况.结果 ①发现绒癌细胞上均有Fas及FasL表达;②与Jurkat细胞相比,在基因和蛋白水平,绒癌细胞中Fas表达低下,而FasL表达升高.③绒癌细胞与Jurkat细胞共培养可诱导Jurkat细胞存活率下降(P＜0.05),随共培养时间延长Jurkat细胞凋亡率升高(P＜0.05);④用中和抗体NOK-2封闭细胞表面FasL后,Jurkat细胞的凋亡率从(17.86±5.59)%下降到(6.88±1.05)%.结论 与Jurkat细胞相比绒癌细胞Fas表达下调而FasL的表达升高,证实Fas/FasL系统表达异常后可以使绒癌细胞逃离免疫监视.     

Toll样受体-2和血红素加氧酶-1在复发性鼻息肉中的表达及意义

目的：研究复发性鼻息肉组织中TLR-2、HO-1的表达和意义,并探讨2者表达与鼻息肉复发的关系．方法采用免疫蛋白印记技术,检测复发性鼻息肉组20例组织、鼻息肉组20例组织及正常对照组20例钩突粘膜组织中TLR-2、HO-1蛋白表达情况,并比较分析2者之间的关系．结果复发性鼻息肉组织中TLR-2、HO-1的表达量与鼻息肉组织相比差异有统计学意义（P〈0.05）;鼻息肉组织中TLR-2、HO-1的表达量与正常鼻黏膜组织相比差异有统计学意义（P〈0.05）;TLR-2和HO-1在各组的表达量存在明显的相关性（P〈0.05）．结论 TLR-2、HO-1在鼻息肉复发机制中发挥着重要作用,2者可能作为鼻息肉患者术后随诊和复发趋势判断的客观指标．     

阴离子交换蛋白2在人正常绒毛细胞和绒癌JAR细胞中的差异表达

目的 探讨阴离子交换蛋白2在人正常绒毛细胞和绒癌JAR细胞中的表达差异,以及该通道蛋白的表达改变与绒癌发生的关系.方法 人正常绒毛滋养细胞的原代培齐、纯化及鉴定;人绒毛膜癌JAR细胞株的培养.将原代纯化培养的人正常绒毛细胞设为正常组,人绒毛膜癌JAR细胞株设为绒癌组.以免疫组织化学法检测人正常绒毛滋养细胞和绒毛膜癌细胞株JAR细胞膜上AE2的表达.以RT-PCR技术检测人正常绒毛滋养细胞及绒癌JAR细胞中AE2 mRNA的表达水平.结果 在正常组中,原代培养的人正常绒毛滋养细胞上仅能从显微镜中肉眼观察到AE2的极低表达,以致摄影效果不佳.而在绒癌组中,绒癌JAR细胞膜上AE2的阳性细胞率为(91.59±12.10)%,远高于正常组.在正常人绒毛滋养细胞与人绒癌JAK细胞株中,均检测到AE2 mRNA的表达.绒癌组AE2的OD值为(0.85±0.21);正常组AE2的OD值分别为(0.19±0.01).绒癌组AE2的OD值明显高于正常组(P＜0.05).结论 AE2表达异常上调,滋养细胞内、外的水电解质平衡将被破坏,可能是导致绒癌发生的原因之一.     

Toll样受体4在早产中的表达及意义

早产占分娩总数的5％～15％。尽管围生期保健在不断发展,但早产仍是导致围生儿发病及死亡的主要原因。目前对早产的病因尚未明确。近年来随着生殖免疫学的发展,Toll样受体尤其是Toll样受体4在早产中的研究越来越受到重视。本文将对此进行综述。     

Toll样受体在不同转移能力人乳腺癌细胞株中的差异表达及意义研究

目的探讨Toll样受体在不同转移能力人乳腺癌细胞株中的差异表达及意义。方法分别选取高转移能力人乳腺癌细胞株MDA-MB231与低转移能力人乳腺癌细胞株MCF-7,采用RT-PCR、实时荧光定量PCR及细胞免疫荧光检测测定其蛋白水平及TLR1-TLR10mRNA水平,比较两株细胞TLRs表达情况及差异性。结果人乳腺癌细胞株MCF-7mRNA、MDA-MB-231 mRNA、蛋白水平均存在TLRs广泛表达;两种细胞株TLR4、TLR6、TLR8及TLR9 m RNA水平表达存在明显的差异性(P0.05);MDA-MB-231的TLR4、TLR6、TLR7及TLR5水平明显高于MCF-7(P0.05)。结论 TLRs在不同转移能力人乳腺癌细胞株中表达广泛但水平存在差异,其中TLR4受体差异表现最为明显,考虑TLRs表达差异与乳腺癌细胞转移能力相关。     

Toll样受体在胎盘中的表达研究

Toll样受体(TLRs)是近几年发现的天然免疫受体,它们能特异性地识别病原微生物的结构成分,激活天然免疫。目前已克隆鉴定出13种TLR,其中TLR1~10在胎盘中有表达,表明TLRs在胎盘的先天性免疫过程中可能起重要作用。     

RT-PCR及激光共聚焦检测人绒毛和绒癌细胞中AE2的表达

目的 探讨在人正常绒毛细胞和绒癌JAR细胞中阴离子交换蛋白2(AE2,Anion Exchanger2)的表达差异及意义.方法 以RT-PCR技术及免疫荧光激光共聚焦技术检测人正常绒毛滋养细胞和绒毛膜癌细胞株JAR细胞膜上AE2的表达.结果 ①在人绒毛滋养细胞与人绒癌JAR细胞株中,均检测到AE2mRNA的表达.绒癌组AE2的OD值为(0.85±0.21);正常组AE2的OD值分别为(0.19±0.01).绒癌组AE2的OD值明显高于正常组(P<0.05).②免疫荧光激光共聚焦实验证实AE2在绒癌组呈红色阳性表达,在正常组中未见红光,当加强激发强度后,仍可探及AE2在正常组的表达.结论 AE2在绒癌中表达异常升高,可能引起滋养细胞内水电解质平衡紊乱,导致绒癌发生.     

Leptin mRNA在早孕绒毛滋养细胞中的表达

目的测定早孕绒毛滋养细胞中leptin mRNA表达,探讨leptin在胎盘形成过程中的可能作用.方法取妊娠6～8周绒毛80份,分离、培养细胞滋养细胞并经光电镜、免疫细胞化学鉴定;提取细胞总RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定滋养细胞leptin mRNA表达.结果①经光电镜、免疫细胞化学染色鉴定,细胞角蛋白-7(CK-7)染色强阳性,β-hCG染色个别细胞弱阳性,vimentin染色阴性,表明分离培养的细胞为滋养细胞.②滋养细胞表达leptin mRNA在235 bp处有区带.结论培养的早孕绒毛滋养细胞表达leptin mRNA,leptin可能在胚胎着床、滋养细胞浸润过程中起调控作用.     

系统性红斑狼疮病人外周血浆细胞样树突状细胞中Toll样受体7的表达及其意义

目的:检测系统性红斑狼疮（SLE）病人外周血中浆细胞样树突状细胞（pDC）中Toll样受体7（TLR7）的表达,探讨其意义。方法:选取SLE病人52例（SLE组）和正常健康人28名（对照组）,利用流式细胞术检测外周血TLR7+的pDC细胞在各组中的比例。结果:SLE病人外周血单核细胞（PBMC）中pDC相对计数显著低于对照组（P<0.01）,SLE组和正常对照组髓样树突状细胞水平差异无统计学意义（P>0.05）。感染组SLE病人外周血pDC水平显著低于非感染组（P<0.01）,初发组SLE病人外周血髓样树突状细胞水平低于复发组（P<0.05）,pDC水平与外周血CRP呈负相关关系（P<0.05）。SLE病人外周血PBMC内pDC中TLR7+细胞的比例显著高于对照组（P<0.01）。血液系统受累组pDC内TLR7+细胞比例高于无血液系统受累组（P<0.05）。TLR7+pDC细胞比例在抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体阳性组及阴性组之间差异均无统计学意义（P>0.05）;TLR7+pDC细胞比例和蛋白尿分级呈显著正相关关系（P<0.01）。结论:SLE病人外周血TLR7+的pDC细胞比例显著升高,且与临床病情活动性有一定的相关性。     

Toll样受体2/4在人牙龈上皮细胞的表达研究

目的:探讨Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)和Toll样受体4(toll-like receptor 4,TLR4)在人牙龈上皮细胞(human gingival epithelial cells,HGECs)的表达情况,以及上述受体在脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激下表达水平的改变?方法:采用逆转录PCR技术检测TLR2?TLR4 在HGECs的基因表达,采用real-time PCR技术和流式细胞技术检测1 μg/ml牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)?LPS或1 μg/ml大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli) LPS刺激后,该细胞TLR2?TLR4表达水平的改变?结果:来自不同个体的HGECs均表达TLR2,TLR4 mRNA?1 μg/ml P.gingivalis LPS刺激后,TLR2基因和蛋白表达水平均明显增高(P < 0.05);1 μg/ml E.coli LPS刺激后,TLR4基因和蛋白表达水平明显增高(P < 0.05)?结论:TLR2?TLR4在HGECs存在稳定表达,并能被LPS的刺激活化,提示上述两种受体可能参与了牙周组织的炎症和免疫反应?