姜黄素诱导人胃癌SGC7901细胞自噬性凋亡的研究

目的 观察姜黄素体外诱导人胃癌SGC7901细胞自噬性凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制.方法 用不同浓度的姜黄素处理SGC7901细胞,MTT法检测细胞增殖;单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverin,MDC)荧光染色和Hoechst33342荧光染色观察细胞自噬和凋亡的发生;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白NF-κB、自噬相关蛋白Beclin1及LC3Ⅱ的表达.结果 姜黄素可呈剂量依赖性明显抑制SGC7901的生长.MDC染色显示,40μmol/L姜黄素在作用12h后即可诱导SGC7901细胞发生自噬,24 h自噬减少;Hoechst33342荧光染色显示,40μmol/L姜黄素诱导凋亡在24 h最明显;流式细胞术显示,40μmol/L姜黄素作用24h时SGC7901细胞凋亡率明显增加.Western blot检测显示,姜黄素诱导SGC7901细胞自噬性凋亡过程中,凋亡相关蛋白NF-κB、自噬相关蛋白Beclin1及LC3的表达均上调.结论 姜黄素通过诱导自噬性凋亡抑制人胃癌细胞SGC7901的生长,其机制与NF-κB、Beclin1及LC3蛋白的表达上调有关.     

苦参素诱导胃癌SGC—7901细胞凋亡的初步研究

目的　探讨苦参素对胃癌细胞株SGC - 790 1的抑制增殖效应及凋亡诱导作用。方法　用苦参素处理SGC - 790 1细胞 ,采用MTT法检测药物对细胞的抑制作用 ,倒置显微镜观察细胞形态学改变。结果　在苦参素作用下 ,SGC - 790 1细胞呈凋亡改变。细胞凋亡的同时 ,细胞周期发生特定的改变。结论　苦参素能抑癌细胞增殖 ,能诱导胃癌细胞凋亡     

二氢青蒿素联合顺铂对胃癌SGC7901细胞增殖和耐药因子表达的影响

目的探讨二氢青蒿素(DHA)联合顺铂(CDDP)对人胃癌SGC7901细胞增殖和耐药因子表达的影响。方法将体外培养的人胃癌SGC7901细胞株和人胃黏膜上皮细胞GES-1细胞株分为6组,即SGC7901对照组(0.1%二甲基亚砜100μl)、SGC7901 DHA组(25μmol/L DHA 100μl)、SGC7901 CDDP组(2.5μg/ml CDDP 100μl)、SGC7901 DHA+CDDP组(25μmol/L DHA和2.5μg/ml CDDP各100μl)、GES-1对照组(0.1%二甲基亚砜100μl)和GES-1 DHA组(25μmol/L DHA 100μl)。采用磺酰罗丹明染色法检测各组细胞增殖的抑制情况,以光密度(OD)值表示;反转录聚合酶链反应检测耐药因子多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、谷胱甘肽转移酶-π(GST-π)、B细胞淋巴瘤/白血病蛋白-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA水平,以各目的基因片段密度值/内参照β-actin密度值表示;蛋白质印迹法检测上述耐药因子蛋白水平,以各目的蛋白条带吸光度值/内参照β-actin吸光度值表示。结果 SGC7901对照组、SGC7901 DHA组、SGC7901CDDP组、SGC7901 DHA+CDDP组OD值分别为(0.77±0.14)、(0.58±0.13)、(0.52±0.12)、(0.30±0.05),差异有统计学意义(F=18.71,P<0.05);SGC7901 DHA组、SGC7901 CDDP组及SGC7901 DHA+CDDP组OD值与SGC7901对照组比较,差异亦有统计学意义(t值分别为3.60、4.05和6.81,P<0.05)。GES-1对照组OD值为(0.79±0.13),GES-1 DHA组为(0.78±0.12),差异无统计学意义(t=-1.24,P>0.05)。SGC7901对照组、SGC7901 DHA组、SGC7901 CDDP组、SGC7901 DHA+CDDP组各耐药因子mRNA和蛋白水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);SGC7901 DHA组、SGC7901 CDDP组及SGC7901 DHA+CDDP组MDR1、MRP1、GST-π、Bcl-2mRNA和蛋白水平较SGC7901对照组降低,差异均有统计学意义(P<0.05);TopoⅡ和Bax mRNA和蛋白水平较SGC7901对照组升高,差异亦有统计学意义(P<0.05)。GES-1对照组与GES-1 DHA组各耐药因子mRNA和蛋白水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 DHA对胃癌SGC7901细胞生长具有明显的抑制作用,可增强化疗药物CDDP对SGC7901细胞增殖抑制作用,并能通过不同途径特异性抑制胃癌SGC7901细胞耐药因子的表达。     

沙培林诱导SGC7901胃癌细胞凋亡及机制的研究

目的:观察沙培林在体外诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡的作用,并探讨其分子机制. 方法:分别以不同浓度(0、0.001、0.01、0.1和0.5 KE/ml)的沙培林干预SGC7901细胞6、12、24和48h后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测SGC7901细胞的生长情况;用膜连蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)加碘化丙啶(PI)双染法观察沙培林作用后SGC7901细胞的凋亡情况;用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测沙培林干预后细胞survivin、caspase-3 的mRNA表达变化情况. 结果:沙培林处理后,胃癌SGC7901细胞生长受到抑制,抑制率在一定范围内呈剂量、时间相关性.沙培林作用48h后,流式细胞仪检测SGC7901细胞凋亡显示:随着沙培林浓度的提高,细胞的凋亡率也增加.半定量RT-PCR检测发现:沙培林可以使SGC7901细胞survivin mRNA表达减少,caspase-3 mRNA表达上升(P<0.05). 结论:沙培林在体外可抑制SGC7901细胞增殖,并诱导其发生凋亡,提示该药有治疗胃癌的潜在价值.沙培林诱导SGC7901细胞发生凋亡的生物学效应可能与survivin mRNA表达下调,caspase-3 mRNA表达上升有关.     

吴茱萸碱诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡及机制研究

目的观察吴茱萸碱对胃癌SGC7901细胞的抑制作用,探讨其可能的分子机制。方法体外培养人胃癌SGC7901细胞,用不同浓度的吴茱萸碱作用于SGC7901细胞24h。MTT比色法观察吴茱萸碱对SGC7901细胞增殖活性的影响;倒置相差显微镜及荧光电镜观察细胞凋亡状态;流式细胞仪检测SGC7901细胞凋亡情况;用RT-PCR检测不同浓度的吴茱萸碱干预24h后SGC7901细胞Survivin和Caspase-3m RNA表达。结果吴茱萸碱能抑制SGC7901细胞增殖,呈剂量依赖性;倒置相差显微镜及荧光电镜下均观察到典型的细胞凋亡状态;吴茱萸碱可诱导SGC7901细胞凋亡,且随剂量增加作用增强;随吴茱萸碱浓度的增加,细胞内Survivin基因表达强度逐渐降低,Caspase-3表达强度逐渐增强。结论吴茱萸碱能抑制人胃癌SGC7901细胞增殖并诱导其凋亡,SGC7901细胞中Survivin m RNA表达水平显著降低,从而可能下调其对Caspase-3的抑制作用,使细胞凋亡增加。     

丹参酮ⅡA诱导SGC7901胃癌细胞凋亡及机制

目的观察从丹参中提纯的单体——丹参酮ⅡA（TanⅡA）在体外对SGC7901胃癌细胞的诱导凋亡作用,并对其分子机制作初步探讨。方法分别采用不同浓度梯度（1．0、2．0、4．0、6．0、8．0和10．0mg／L）的TanⅡA干预SGC7901胃癌细胞24、48、72h后,用四唑盐（MTT）比色法绘制肿瘤细胞生长曲线。采用以上浓度梯度的TanⅡ干预SGC7901细胞24h,或采用10．0mg／L的TanⅡA干预0、12、24、36、48h,应用碘化丙叮（PI）及AnnexinV双重染色法,通过流式细胞仪观察SGC7901的细胞周期及凋亡率。用透射电镜直接观察细胞凋亡形态。用RT-PCR检测不同浓度的TanⅡA干预24h后SGC7901细胞p53的mRNA表达。结果MTT法显示TanⅡA具有良好的抑制胃癌增殖作用,并时间、剂量依赖性地诱导肿瘤细胞凋亡。透射电镜下观察到典型的细胞凋亡形态,流式细胞术（FCM）显示TanⅡA可使SGC7901细胞周期阻滞于G1／S期。PCR检测发现随着TanⅡA干预浓度的逐步上升,胞内p53mRNA表达亦逐步上升。结论TanⅡA在体外可通过细胞周期阻滞及诱导凋亡达到良好的抑制胃癌细胞增殖效应,诱导胞内p53基因表达上调是所涉分子机制之一。     

熊果酸体外抗胃癌细胞SGC7901机制的研究

目的探讨熊果酸(urso lic ac id,UA)体外抑制胃癌细胞SGC 7901生长的作用机制。方法体外培养人胃癌细胞株SGC 7901,M TT法观察不同浓度UA作用不同时间对细胞生长的影响;不同浓度UA(0~40μm o l/L)处理SGC 7901细胞24 h后,倒置显微镜观察细胞形态变化;荧光染料Hoechst 33258染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况;W estern B lotting法检测凋亡相关蛋白B cl-2和B ax的表达。结果20~40μm o l/L UA可抑制SGC 7901的生长,并呈浓度和时间依赖性,其作用12、24、36、48 h的IC50分别为(57.50±1.18)、(34.28±2.05)、(27.54±1.11)、(24.83±1.02)μm o l/L。20~40μm o l/L UA作用24 h后,SGC 7901细胞变圆,出现不同程度的漂浮;同时细胞被阻滞于G0/G1期并发生凋亡,随药物浓度升高,凋亡率增加,凋亡相关蛋白B cl-2表达减少,B ax无明显变化。结论熊果酸对SGC 7901细胞具有较强的抗肿瘤活性,其机制可能与细胞毒作用、增殖抑制作用以及下调凋亡相关蛋白B cl-2表达而促进凋亡有关。     

BHRF1基因对丝裂霉素诱导胃癌细胞SGC7901凋亡影响

目的探讨EB病毒早期基因BHRF1的表达对丝裂霉素诱发胃癌细胞SGC7901凋亡的影响。方法构建pcDNA3.1-BHRF1表达载体,应用脂质体转染法将BHRF1表达载体转染胃癌细胞系SGC7901,MTT法检测细胞生长情况。实验分为细胞对照组、空载体对照组和目的基因转染组,细胞对照组仅接种SGC7901细胞,空载体对照组将pcDNA3.1空载体转染入SGC7901细胞中,目的基因转染组将重组质粒pcDNA3.1-BHRF1转染入SGC7901细胞中。分别培养24、48和72 h后,用浓度为30 mg/L的丝裂霉素处理,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33258荧光染色方法检测凋亡小体。结果 pcDNA3.1-BHRF1重组质粒构建成功。MTT实验显示目的基因转染能明显拮抗由于丝裂霉素作用导致的细胞生长抑制;BHRF1转染+丝裂霉素处理组凋亡小体明显少于对照组,细胞凋亡率明显低于对照组,差异均有统计学意义(F=6 250.510,q=56.992、51.613,P<0.01)。结论 BHRF1基因具有明显拮抗丝裂霉素诱导胃癌SGC7901细胞凋亡的作用。     

三氧化二砷体外诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的 :探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对人胃癌SGC 790 1细胞抑制生长、诱导凋亡的生物学效应。方法 :光学显微镜观察细胞形态 ,四甲基偶氮唑蓝 (MTT)还原法检测As2 O3 对该细胞株生长的影响 ,流式细胞仪 (FCM )及 3′ OH末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞。结果 :SGC 790 1细胞经As2 O3 作用后 ,细胞增殖受到明显抑制 ,且呈剂量和作用时间依赖关系 ,细胞周期分析显示G2 M期阻滞 ;FCM检测在细胞周期G1期前出现低于 2倍体的凋亡峰 ;TUNEL标记发现DNA链的断裂。结论 :As2 O3 能抑制人胃癌SGC 790 1细胞增殖 ,并诱导该细胞系凋亡 ,其发生机制可能与细胞周期阻滞有关。     

三氧化二砷人外诱导人胃癌SGC0—7901细胞凋亡的研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3)对人胃癌SGC－7901细胞和抑制生长,诱导凋亡的生物学效应,方法：光学显微镜观察细胞形态,四甲基偶氮唑蓝（MTT）还原法检测As2O3对该细胞株生长的影响,流式细胞仪（FCM）及3‘－OH末标记法（TUNEL）检测凋亡细胞,结果：SGC－7901细胞经As2O3作用后,细胞增残受到明显抑制,且呈剂量和作用时间依赖关系,细胞周期分析显示胃癌SGC－7901细胞增残,并诱导该细胞系凋亡,其发生机制可能与细胞周期阻滞有关。     

去氢木香内酯诱导胃癌细胞自噬和凋亡及氧化应激

目的 探索去氢木香内酯(DHCL)对胃癌细胞SGC-7901自噬、凋亡及氧化应激的影响.方法 将体外培养SGC-7901细胞分为DHCL 0μmol/L组、DHCL 10μmol/L组、DHCL 20μmol/L组和DHCL 40μmol/L组.CCK-8法检测各组细胞增殖,免疫荧光检测细胞自噬活性,流式细胞仪检测细胞...     

多西紫杉醇联合TRAIL诱导人胃癌细胞SGC7901的凋亡观察

目的:探讨多西紫杉醇联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor Necrosis Factor-related poptosis-inducing ligand,TRAIL)体外诱导胃癌细胞凋亡的作用及可能机制.方法:采用MTT法检测不同浓度(1、5、10、20、40ìg/ml),不同时间(12、24、36、48h)T多西紫杉醇的抗癌活性并计算其亚毒性剂量.用流式细胞仪检测多西紫杉醇(亚毒性剂量)及TRAIL(200ng/ml)单独及联合应用后SGC7901的凋亡率.RT-PCR法检测DR4,DR5在加药前后的表达.结果:对照组(C组)、亚毒性剂量的多西紫杉醇(P组)、TRAIL(T组)及二者联合(T P)作用24h后胃癌细胞的凋亡率分别为2.09%、10.65%、7.79%和24.51%,T P组凋亡率明显升高,与C组、T组、P组两两比较时,差异具有统计学意义(P<0.05):多西紫杉醇处理组DR5表达增加.结论:多西紫杉醇与TRAIL具有协同抗胃癌作用,其机制可能与DR5表达的上调有关.     

人胃癌细胞SGC7901端粒酶的亲和纯化

尽管已意识到端粒酶可能是目前已知特异性最好的肿瘤标志，但端粒酶的临床应用迄今未能得以普及推广，其原因之一是人端粒酶的蛋白组份仍不十分清楚。为此，我们利用端粒酶核糖核蛋白的特性，尝试建立一种亲和纯化人端粒酶的手段，以期获得具有完整活性的亲和纯人胃癌端粒酶并推动端粒酶结构及应用性研究的深入。     

survivin反义寡核苷酸激活caspase-3诱导SGC7901胃癌细胞凋亡的实验研究

目的研究转染生存素（survivin）反义寡核苷酸诱导SGC7901胃癌细胞凋亡及其可能的作用机制。方法实验分为空白对照组（Control组）、脂质体组（Lip组）、正义寡核苷酸组（Sodn组）及反义寡核苷酸组（Asodn组）。人工合成正、反义寡核苷酸,经脂质体将survivin正、反义寡核苷酸转染人胃癌细胞48h后,MTT检测细胞增殖抑制率,Western blot检测caspase-3蛋白表达改变,Hoechst染色观察细胞凋亡形态改变及流式细胞仪检测凋亡率。结果Hoechst染色荧光显微镜下Control组、Lip组及Sodn组细胞核呈正常的蓝色,而Asodn组细胞核染色增强、核质浓缩、核碎裂,呈凋亡改变;Asodn组细胞增殖抑制率、细胞凋亡率、caspase-3蛋白表达均增高,与Control组、Lip组及Sodn组相比差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论survivin反义寡核苷酸可诱导胃癌细胞凋亡,其作用机制可能是通过激活caspase-3表达,启动凋亡信号传导。     

SKI-Ⅱ促胃癌SGC7901细胞凋亡的实验研究

目的:研究鞘氨醇激酶(sphingosine kinase,SphK)抑制剂SKI-Ⅱ对人胃癌SGC7901细胞凋亡的影响,并探讨其具体作用机制.方法:常规培养人胃癌SGC7901细胞,SKI-Ⅱ单用或联合顺铂(DDP)干预,流式细胞术检测细胞凋亡率;电镜下观察用药后细胞超微结构的改变;免疫细胞化学、Western b...     

多糖对人胃癌SGC7901细胞生长抑制的研究

目的研究多糖对人胃癌SGC7901细胞生长的抑制作用。方法培养人胃癌SGC7901细胞,采用多糖处理后观察其形态变化、凋亡率、BCL－2蛋白及BAX蛋白的表达。结果多糖可以抑制入胃癌SCC7901细胞的增殖,并呈现出对剂量和时间的依赖性。用10mg／ml的多糖处理培养细胞48h后,细胞凋亡率达到39．72％;并出现明显的DNA片段化;BCL－2蛋白的表达下降,而BAX蛋白的表达增加。结论多糖可以通过诱导细胞发生凋亡来抑制入胃癌SGC7901细胞的生长,从而达到}台疗胃癌的目的。     

维胺酸对人胃癌细胞SGC─7901的分化诱导作用

应用图象分析、聚丙烯酰胺凝胶同工酶电泳、放免、伴刀豆球蛋白凝集反应等，观察了维胺酸对人胃癌细胞系ＳＧＣ－７９０１的分化诱导作用。结果发现，一定剂量的维胺酸对细胞的生长、增殖有抑制作用，使细胞内ＤＮＡ平均含量下降，核面积变小，ＬＤＨ同工酶谱发生变化，Ｈ型亚基升高，Ｍ型亚基降低，细胞ＣＥＡ分泌量和ＣｏｎＡ凝集反应均显著下降。光镜下，细胞铺展较好，排列较有序，叠堆生长少见，细胞质嗜碱性降低。以上结果说明，维胺酸对细胞形态以及生理、生化等方面均有影响，并产生一定的分化诱导作用     

维胺酸对人胃癌细胞SGC—7901的分化诱导作用

应用图象分析、聚丙烯酰胺凝胶同工酶电泳、放免、伴刀豆球蛋白凝集反应等，观察了维胺酸对人胃癌细胞系ＳＧＣ－７９０１的分化诱导作用。结果发现，一定剂量的维胺酸对细胞的生长、增殖有抑制作用，使细胞内ＤＮＡ平均含量下降，核面积变小，ＬＤＨ同工酶谱发生变化，Ｈ型亚基升高，Ｍ型亚基降低，细胞ＣＥＡ分泌量和ＣｏｎＡ凝集反应均显著下降。光镜下，细胞铺展较好，排列较有序，叠堆生长少见，细胞质嗜碱必降低，以上结果说明     

自噬及自噬性细胞死亡抑制紫杉醇诱导的胃癌细胞凋亡

目的明确自噬和自噬性细胞死亡在胃癌SGC-7901及BGC-823细胞紫杉醇处理过程中的存在,探讨其对紫杉醇诱导的凋亡敏感性的作用。方法流式细胞仪和MTT法分别检测紫杉醇诱导SGC-7901及BGC-823细胞的凋亡率和总死亡率,死细胞DAPI染色荧光显微镜检测非凋亡性细胞死亡,吖啶橙染色流式细胞仪和荧光显微镜分别定量、定性检测自噬和自噬性细胞死亡的存在,自噬特异性阻断剂3-甲基腺嘌呤和紫杉醇共同作用细胞后流式细胞术检测细胞死亡率和凋亡率的变化。结果紫杉醇处理SGC-7901及BGC-823细胞早期(24h内)可出现明显的细胞自噬性变化,自噬高峰期出现紫杉醇诱导3~6h,自噬性细胞死亡存在并可能是紫杉醇诱导的非凋亡性细胞死亡的主要形式,抑制紫杉醇诱导的细胞自噬可以促进紫杉醇诱导细胞凋亡的发生。结论紫杉醇可以诱导胃癌SGC-7901及BGC-823细胞自噬及自噬性细胞死亡,并且紫杉醇诱导的胃癌细胞自噬会拮抗胃癌细胞凋亡的发生,从而为胃癌化疗耐受提供新的解释,可能为胃癌治疗提供新的途径。