补阳还五汤和其有效部位对大鼠脑缺血再灌注后IL-1β及相关因子表达的影响

目的 研究补阳还五汤及其有效部位生物碱、苷对大鼠脑缺血再灌注后白细胞介素1β(IL-1β)及其相关因子mRNA表达的影响.方法 采用颈内动脉线栓法建立大鼠MACO再灌注模型,以逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定缺血脑组织IL-1β、IL-1R1、IL-1ra、ICAM-1 mRNA的表达.结果 脑缺血2 h再灌注22 h后,模型组IL-1β、IL-1R1、IL-1ra和ICAM-1 mRNA表达较假手术组均显著增强(P＜0.05和P＜0.01).补阳还五汤组IL-1β表达显著高于假手术组(P＜0.05),而生物碱组和苷组较模型组有所降低;补阳还五汤组IL-1R1表达较模型组显著降低(P＜0.05),而生物碱组和苷组IL-1R1表达均显著高于假手术组(P＜0.05),与模型组接近.补阳还五汤组、生物碱组和苷组IL-1ra表达均显著高于假手术组(P＜0.05和P＜0.01).补阳还五汤组、生物碱组、苷组ICAM-1表达低于模型组(P＜0.05).结论 补阳还五汤及其有效部位生物碱、苷通过抑制IL-1β、IL-1R1、ICAM-1 mRNA的表达,从而减少炎症因子及炎症介质的表达,对缺血脑组织起保护作用.各药对脑缺血后IL-1ra表达无影响.     

补阳还五汤对脑缺血后中性粒细胞浸润及ICAM-1表达的影响

目的观察补阳还五汤对脑缺血再灌注后中性粒细胞浸润和ICAM-1表达的影响。方法术前7天开始罐胃,然后用线栓法诱导大鼠大脑中动脉阻塞模型,再灌24h后采用神经症状评分和梗死周边区存活神经元数评价脑损伤情况,用髓质过氧化物酶(MPO)和ICAM-1免疫组化方法,评价中性粒细胞浸润和ICAM-1表达情况。结果缺血90min再灌24h后,补阳还五汤能显著改善神经症状(P<0·05或P<0·01),增加缺血半球皮层周边区存活神经元数(P<0·05或P<0·01)。与模型组比较,补阳还五汤显著减少缺血半球皮层MPO阳性细胞数(P<0·01)和ICAM-1阳性血管数(P<0·01)。结论补阳还五汤对脑缺血损伤有保护作用,并能减少中性粒细胞浸润和ICAM-1表达。     

补阳还五汤有效部位对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的 研究补阳还五汤有效部位（总苷和黄酮）对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法 采用改良的线栓法,建立大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）脑缺血再灌注模型。将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、银杏叶提取物（100 mg/kg）组和补阳还五汤有效部位高、中、低剂量（200、100、50 mg/kg）组。缺血再灌注24 h后进行神经功能缺失症状评分;TTC染色法检测脑梗死体积;腹主动脉取血并离心,检测血清中乳酸脱氢酶（LDH）活性和丙二醛（MDA）水平,ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）水平。结果 与模型组相比,补阳还五汤有效部位能明显改善脑缺血再灌注大鼠的神经功能障碍,减少大鼠脑组织梗死体积,显著抑制LDH活性,降低MDA和TNF-α、IL-1β、IL-6水平（P＜0.01、0.05）。结论 补阳还五汤有效部位对大鼠脑缺血再灌注损伤具有明显保护作用,其机制可能与抑制炎症因子的分泌和表达及减轻脑组织的炎症反应有关。     

补阳还五汤有效成分部位对大鼠脑缺血后白细胞浸润的影响

目的研究补阳还五汤 (BYHWD)中生物碱、多糖、苷、苷元 4类有效成分部位对大鼠大脑中动脉闭塞 (MACO)后局灶性脑缺血再灌注诱导的多形核细胞 (PMNL)浸润的影响。方法用颈内动脉线栓法建立大鼠MACO模型 ,以检测脑组织髓过氧化物酶 (MPO)活性判定脑组织中多形核细胞的浸润。结果脑缺血 2h再灌注 46h后 ,脑组织MPO活性升高 (P <0 .0 5 ) ,多糖组和生物碱组脑组织MPO活性明显低于模型组 (P<0 .0 5 )。结论脑缺血再灌注后 ,白细胞浸润到损伤区 ,参与了中枢神经系统缺血后的炎症反应。补阳还五汤 4类有效成分部位中多糖、生物碱能降低脑组织MPO活性 ,减轻大脑中动脉闭塞后再灌注脑组织中多形核细胞的浸润 ,这可能是补阳还五汤抗脑缺血再灌注损伤的物质基础和机制之一。     

水蛭注射液对大鼠脑缺血再灌注后TNF-α、IL—1β和ICAM-1蛋白表达的影响

目的：观察水蛭注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后TNF-α、IL-1β和ICAM-1表达的影响，以探讨水蛭注射液对脑缺血再灌注损伤的保护机制。方法：96只健康Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、丹参对照组、水蛭注射液组。采用线栓法制作大鼠脑缺血再灌注损伤模型，规定时间取脑标本，检测相关指标。结果：再灌注3h后脑组织TNF-α、IL-1β和ICAM-1含量明显升高，水蛭注射液可以明显降低脑组织TNF-α、IL-1β和ICAM-1含量（P〈0．01～0．05）。结论：水蛭注射液可降低炎性细胞因子TNF-α、IL-1β和ICAM-1的表达，抗脑缺血后炎症反应，从而起到脑保护作用。     

补阳还五汤及其有效部位对大鼠脑缺血再灌注后caspase表达的影响

目的研究补阳还五汤及其有效部位生物碱、苷对大鼠脑缺血再灌注后脑组织caspase-1、3、8表达的影响。方法采用颈内动脉线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞(M CAO)再灌注模型,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定缺血脑组织中caspase-1、3、8 mRNA的表达。结果脑缺血2 h再灌注22 h后,模型组caspase-1、3、8表达较假手术组均显著增强(P<0.05)。生物碱组、苷组caspase-1表达显著低于模型组(P<0.05);补阳还五汤组、生物碱组、苷组、三七总皂苷组caspase-3与模型组比较均显著降低(P<0.05);生物碱组caspase-8表达较模型组显著降低(P<0.05)。三七总皂苷组caspase-8表达较假手术组显著增强(P<0.05)。结论补阳还五汤及其有效部位通过抑制缺血后脑组织caspase-1、3、8的表达,从而有可能对抗脑缺血再灌注后神经细胞凋亡,保护缺血脑组织。     

羟乙葛根素对脑缺血再灌注大鼠脑组织ICAM-1表达的影响

目的 探讨羟乙葛根素对脑缺血再灌注大鼠脑组织ICAM—1表达的影响：方法 56只大鼠分为假手术组、缺血再灌注组和缺血再灌注＋羟乙葛根素组，制作脑缺血再灌注模型，应用免疫组织化学方法测定ICAM—1的表达情况，并进行组织病理学观察。结果 缺血再灌注组再灌注后12h、24h、48h脑组织ICAM—1的表达显著高缺血再灌注＋羟乙葛根素组（P〈0.05），且核固缩细胞明显增多，淋巴细胞和中性粒细胞附壁和浸润明显；假手术组未见明显的异常变化。结论 羟乙葛根素对缺血再灌注脑组织具有保护作用，其机制可能通过降低ICAM—1的表达，有效地抑制脑缺血再灌注后的炎性反应，从而减轻脑缺血再灌注损伤。     

补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织ET-1基因表达的影响

目的 :观察补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织 ET- 1基因表达的影响 ,探讨其对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 :采用线栓法制成大鼠 MCAO再灌注模型 ,并用地高辛精标记 ET- 1基因进行原位杂交。结果 :补阳还五汤治疗组缺血再灌注侧皮层及尾状核 ET- 1基因表达显著低于生理盐水对照组 (P<0 .0 5 ) ,两组大鼠缺血再灌注侧皮层和尾状核 ET- 1基因表达均显著高于健侧相应脑区 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1)。结论 :脑缺血再灌注可以诱导脑组织 ET- 1基因的异常表达 ,从而进一步加重脑损伤 ,补阳还五汤可在一定程度上下调脑缺血诱导的ET- 1基因的表达 ,可能是其防治缺血性脑血管病的主要作用机制之一。     

补阳还五汤对全脑缺血再灌大鼠皮层神经元NR1的影响

目的：研究补阳还五汤抗全脑缺血后再灌注损伤的分子机制。方法：将66只SD大鼠随机分为3组,即正常组、模型组和药物组（补阳还五汤顸干预）,模型组和药物组再分别设置2、24h2个观察时间点。连续给药5d后．采用改良的Pulsinelli四血管闭塞法复制全脑缺血大鼠模型,再灌后2、24h采用免疫组化法检测各组大鼠皮质神经细胞NMDA受体（N—methyl—D—aspartic acid receptor）亚单位NR1的表达水平。结果：与正常组比较,模型组2、24h2个不同时间点,NR1的表达水平显著升高（P〈0．05）;与模型组比较,药物组再灌注后2、24h2个不同时间点,NR1表达水平显著降低（P〈0．01）。结论：补阳还五汤预干预对全脑缺血再灌注模型大鼠大脑皮层神经元NR1表达水平的增高有调低作用。     

蜂胶黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤后IL-1β、IL-6和TNF-α含量的影响

目的探讨蜂胶黄酮对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用大鼠大脑中动脉栓塞模型（MCAO），研究蜂胶黄酮对脑缺血再灌注脑梗死体积和行为学评分的影响，对脑组织内IL-1β、IL-6和TNF-α含量的影响。结果蜂胶黄酮能够减少MCAO脑梗死体积和行为学评分，降低脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量（P〈0．05）。结论蜂胶黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤有一定保护作用，其作用机制与降低脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α含量有关。     

黄连解毒汤对脑缺血-再灌注大鼠脑组织IL-1β和TNF-a的影响

目的观察黄连解毒汤对缺血性损伤大鼠脑组织炎性因子的影响。方法采用线栓法复制大鼠急性脑缺血再灌注损伤模型,用ELISA法测定大鼠患侧脑匀浆中炎性因子IL-1β和TNF—a的含量。结暴脑缺血2h再灌22h后,模型组大鼠患侧脑组织促炎细胞因子IL-1β和TNF—a均明显升高,与假手术组相比有显著差异（（P〈0．05或P〈0．01）。黄连解毒汤2．5、5和10g／kg组患侧脑组织中的IL-1β含量降低,与模型组相比具有显著差异（P〈0．01）;黄连解毒汤2．5和10g／kg组患侧脑组织中的TNF—a含量降低,与模型组相比具有显著差异（P〈0．001,P〈0．01）。结论黄连解毒汤可降低缺血性损伤后脑组织炎性因子的升高,可能具有抗脑缺血作用。     

替勃龙对去势大鼠脑缺血再灌注后IL-1β及TNF-α表达的影响

目的探讨替勃龙对去势大鼠脑缺血再灌注后IL-1β和TNF-α表达的影响。方法30只雌性成年SD大鼠,随机分为假手术组,手术对照组,替勃龙组。采用大鼠大脑中动脉闭塞制成局灶性脑缺血模型,在缺血2h再灌注24h后立即断头取脑,应用TTC染色观察脑梗死体积,免疫组化法检测IL-1β及TNF-α的表达,并进行组织病理学观察。结果替勃龙用药组较对照组脑梗死体积显著缩小（P〈0．05）;替勃龙组较对照组IL-1β及TNF-α表达减弱（P〈0．01）。结论替勃龙可降低去势大鼠脑缺血再灌注后IL-1β、TNF-α水平,减轻脑缺血再灌注损伤。     

健脑益智方对脑缺血再灌注损伤后白细胞计数、髓过氧化物酶及细胞间黏附分子-1的影响简

目的：探讨健脑益智方对脑缺血再灌注损伤后白细胞计数、髓过氧化物酶及细胞间黏附分子-1的影响。方法：采用健康雄性SD大鼠四动脉闭塞法制备大鼠全脑缺血再灌注模型,于全脑缺血20min。再灌注24h后,测定外周血白细胞总数、非淋巴细胞数及百分比、淋巴细胞数及百分比;大脑皮质和海马中MPO的活性及海马结构内ICAM-I表达情况。结果：模型组大鼠外周静脉血中的白细胞总数、非淋巴细胞计数及其百分比明显升高（P〈0．01）,淋巴细胞百分比降低（P〈0．01）;大鼠脑组织皮质区和海马区的MPO含量均明显升高（P〈0．01,P〈0．05）：ICAM-1阳性神经元平均光密度值高于假手术组（P〈0．01）,平均灰度值低于假手术组（P〈0．01）。与模型组比较,阿司匹林干预后造模组、中药干预后造模组及中药治疗组的白细胞总数、非淋巴细胞总数（P〈0．01）及其百分比均降低（P〈0．05）,淋巴细胞百分比升高（P〈0．05）;MPO的含量均不同程度的降低（P〈0．01,P〈0．05）;ICAM-1阳性神经元平均光密度值均降低（P〈0．01,P〈0．05）,平均灰度值均升高（P〈0．01,P〈0．05）。结论：健脑益智方可抑制大鼠脑缺血再灌注后缺血脑组织中的白细胞（主要是中性粒细胞）的浸润,下调脑组织中细胞间黏附分子-1的表达,并可能通过以上途径阻断其后的炎症级联反应来达到减轻脑缺血再灌注损伤,促进神经功能的修复。     

Sprague-Dawley大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤炎性细胞因子的变化及其意义

目的观察肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）蛋白表达的变化,探讨炎性因子在大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤中的作用。方法 20只SD大鼠,雌雄不拘,采用随机方法将其分为假手术组和缺血/再灌注组,每组10只。制备缺血/再灌注损伤动物模型,采用免疫组化技术检测脑组织中TNF-α和IL-1β含量,用酶标仪检测伊文思蓝（EB）的含量。观察血脑屏障（BBB）通透性的改变及TNF-α和IL-1β蛋白的表达。结果缺血/再灌注组皮质区和海马区TNF-α和IL-1β蛋白表达高于假手术组,差异有统计学意义（P〈0.05）。缺血/再灌注组脑组织伊文思蓝（EB）含量增加,高于假手术组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论脑缺血再灌注可诱导大鼠皮质区及海马区TNF-α和IL-1β蛋白表达的增加,增加BBB的通透性。炎性细胞因子参与了缺血/再灌注损伤的发生和发展过程。干预这些炎性细胞因子将会减轻脑组织缺血再灌注损伤的急性炎症反应。     

异丙酚预处理对缺血再灌注脑损伤大鼠中性粒细胞弹性蛋白酶的影响

目的探讨异丙酚预处理对大鼠脑缺血再灌注（I／R）损伤脑组织中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）的影响。方法SD大鼠30只,随机分为正常对照组（C组）,脑缺血再灌注组（I／R组）,异丙酚预处理组（P组,于脑缺血前10min经腹腔注射异丙酚100mg／Kg）（n=10）。采用大鼠大脑中动脉线栓法建立局灶性脑I／R损伤模型。采用ELISA法检测脑组织NE、TNF-α、IL-1β的表达。结果与C组比较,I／R组和P组NE的活性及TNF-α、IL-1β的含量均明显升高（P〈0．01）;与I／R组比较,P组NE的活性及TNF-α、IL-1β的含量均明显降低（P〈0．01）。结论异丙酚预先给药能够通过抑制脑I／R后脑组织内NE的活化进而抑制TNF-α、IL-1β的过度表达,降低炎性反应,对脑I／R损伤起到保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注 c-fos 表达与神经细胞凋亡关系研究

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后脑组织中c—fos表达水平与神经细胞凋亡的关系。方法采用大脑中动脉线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,参考Longa的5分制法在大鼠麻醉清醒后进行评分;应用免疫组化、TUNEL法检测大鼠脑缺血再灌注后脑组织中c—f08表达水平及神经细胞凋亡情况。结果大鼠脑缺血再灌注后缺血脑组织中c—fos表达明显增加（P〈0．01）,于缺血再灌注12小时后达高峰,且神经细胞凋亡数明显增加（P〈0．01）。结论脑缺血再灌注后神经细胞c—fos表达水平增加,并参与神经细胞凋亡机制。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞NF-κB和IL-6的表达

目的 探讨局灶脑缺血再灌注损伤后神经细胞核因子-κB（NF-κB）和白细胞介素-6（IL-6）表达的变化。方法 成年健康雄性Wistar大鼠32只,随机分为假手术组（n=4）和缺血再灌注组（n=28）,应用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型,免疫组织化学方法检测缺血再灌注6h、12h、1d、2d、3d、7d、14d神经细胞NF-κB和IL-6的表达,并进行图像分析。结果 假手术组大鼠脑组织神经细胞有微弱的NF-κ表达,阳性细胞为淡棕色。脑缺血再灌注6h开始,皮质区和纹状体区神经细胞NF-κB表达逐渐增强,于再灌注1d达高峰,之后逐渐下降。IL-6表达部位和变化规律与NF-κB相似,但其表达高峰在再灌注2d。NF-κB和IL-6的表达水平在缺血再灌注损伤后的变化规律具有显著相关性（r=0．9196,P〈0．01）。结论 NF-κB和IL-6表达在脑缺血再灌注损伤的病理过程中起重要作用。     

补阳还五汤及其主要有效部位对小鼠动脉血栓形成的影响

目的研究补阳还五汤及其生物碱、苷两类有效部位对小鼠角叉菜胶所致动脉血栓形成的影响，探讨该方抗动脉血栓形成的物质基础。方法小鼠背部皮下注射1％角叉菜胶（50mg／kg），同时给予药物，于24h后观察小鼠尾动脉血栓形成长度。结果补阳还五汤原方腹腔注射生药2．5、5、10g／kg，均可使小鼠24h后尾动脉血栓形成长度显著性缩短（P〈0．01）；由该方提取的有效部位生物碱，在腹腔注射0．075、0．15g／kg时，对小鼠尾动脉血栓形成无明显影响（P〉0．05）。在剂量为0．3g／ks时，可使尾动脉血栓长度缩短（P〈0．05）。苷在剂量为0．125、0．25g／kg时也对尾动脉血栓长度无明显影响（P〉0．05），剂量为0．5g／kg时，也可使血栓长度缩短（P〈0．05）。对照药物低相对分子质量肝素LMWH（750u／kg）和噻氯匹啶（0．05g／kg）均可使尾动脉血栓形成长度缩短（P〈0．05）。结论抗凝血药（LMWH）和抗血小板药噻氯匹啶可抑制角叉胶所致的尾动脉血栓形成，表明该模型与凝血功能亢进和血小板活化有关。补阳还五汤及其主要有效部位生物碱和苷可抑制该模型血栓形成，提示该方的作用可能与抑制凝血亢进和血小板活化有关。该方中生物碱和苷可能为其抗血栓的主要有效物质基础。     

辛伐他汀对阿霉素肾病大鼠的治疗作用及白细胞介素-1β表达的影响

目的观察炎症因子自细胞介素-1β（interleukin-1beta,IL-1β）在阿霉素肾病大鼠发生肾小球硬化过程中的表达,探讨辛伐他汀保护阿霉素肾病大鼠肾脏的机制。方法雄性SD大鼠分为正常对照组、阿霉素肾病组（模型组）和阿霉素肾病辛伐他汀治疗组（治疗组）,分别灌胃给药11周。免疫组化法观测。肾组织中IL-1β的定位表达,半定量RT—PCR技术检测肾组织IL—1βmRNA的表达,酶联免疫吸附法检测血清和肾组织中IL-1β的水平,光镜观察肾小球硬化的情况。结果模型组肾组织IL-1β的表达明显增强（P〈0．01）,伴有明显的肾小球硬化及肾功能损害（P〈0．01）;与模型组比较,治疗组肾组织IL—1β的表达、肾小球硬化及肾功能损害均减轻（分别P〈0．05、P〈0．01、P〈0．05）。结论辛伐他汀可能通过降低肾组织内IL-1β的表达,对肾脏起保护作用。     

胰岛素样生长因子-1对局灶性脑缺血/再灌注脑损伤保护机制的研究

目的建立单侧大鼠局灶性脑缺血／再灌注损伤模型，研究胰岛素样生长因子-1（IGF1）对局灶性脑缺血／再灌注损伤影响的可能机制。方法54只SD大鼠建立局灶性脑缺血／再灌注模型，随机分成假手术对照组（6只）、脑缺血／再灌注组（24只）、IGF-1治疗组（24只），各组按再灌注时间不同进一步分为24、48和72h3个亚组。用TTC染色法测量各组脑梗死体积，用原位末端标记技术和免疫组织化学方法对各组大鼠脑缺血中心及周围区神经细胞的凋亡和Bcl-2蛋白表达进行检测。结果TTC染色结果显示，与缺血／再灌注组相比，IGF-1治疗组脑梗死体积明显减小（3个时间段t值分别为：t=3．544，4559，4．271；均P〈0．051；凋亡检测结果显示，与缺血／再灌注组相比，IGF-1治疗组凋亡细胞数明显减少（3个时间段t值分别为：t=5．516，P〈0．001；t=4．281，P〈0．01；t=3．602，P〈0．01）；免疫组织化学检测结果显示，与缺血／再灌注组相比，IGF-1治疗组Bcl-2蛋白表达的细胞数明显增加（3个时间段t值分别为：t=14．362、7．065和7273；均P〈0．001）。结论IGF-1可明显减小脑梗死体积，减少凋亡细胞数，促进Bcl-2蛋白表达增加可能是IGF-1产生脑保护机制的原因之一。