二甲基亚砜(DMSO)对人肝癌HepG2 细胞的诱导分化作用的实验研究

目的:探讨二甲基亚砜(DMSO)对人肝癌HepG2细胞的诱导分化作用。方法:体外培养人肝癌HepG2细胞,用DMSO干预细胞,MTT法检测药物对细胞增殖活力的影响;倒置相差显微镜和瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态学的变化;放射免疫法检测细胞甲胎蛋白（AFP）和清蛋白(ALB)的分泌量;酶促反应试剂盒检测细胞中γ-谷胺酰转肽酶（γ-GT）、碱性磷酸酶（ALP）的活性。结果:用DMSO处理HepG2细胞72h后,能显著抑制细胞的增殖（P＜0.05）;细胞的形态向成熟细胞分化;细胞AFP的分泌量和γ-GT酶的活性明显降低,ALP活性和ALB含量则显著升高（P＜0.05）。结论:DMSO具有诱导人肝癌HepG2向正常细胞分化的作用并抑制细胞增殖。     

复方苦参注射液对SGC-7901，HepG2和BEL-7402肿瘤细胞作用的实验研究

 目的 通过观察复方苦参注射液（岩舒注射液）对SGC-7901，HepG2和BEL-7402肿瘤细胞的作用，探讨其在恶性肿瘤治疗中的作用机制。方法 本实验选用SGC-7901、HepG2和BEL-7402细胞，采用MTT法检测岩舒注射液对于各肿瘤细胞的体外杀伤率，流式细胞仪检测岩舒注射液作用后的肿瘤细胞的细胞周期、凋亡率及bcl-2、CD44V6和nm23基因表达的变化。结果 岩舒注射液浓度达到150 μl／ml时HepG2，SGC-7901和BEL-7402细胞存活率最低。岩舒注射液终浓度100 μl／ml作用后的HepG2细胞G0／G1期、G2／M期明显增高，S期的细胞数量明显减少，凋亡率（2.8 %）明显高于对照组（0.2 %）；SGC7901细胞G2／M期细胞明显增多，S期细胞明显减少，凋亡率（4.6 %）明显高于对照组（0.8 %）；100 μl／ml岩舒注射液浓度作用后的nm23为97.85 %，明显高于对照组（41.01 %），CD44V6为10.29 %明显低于对照组（12.26 %）。结论 岩舒注射液对于SGC-7901，HepG2和BEL-7402细胞具有明显的体外杀伤作用，并影响SGC-7901、HepG2的细胞周期，促进其凋亡；同时能够明显的抑制BEL7402细胞体内CD44V6的表达，促进抑转移因子nm23的表达，具有明显的抑制肿瘤转移的作用。     

ATPR对ECA-109、PANC-1、HeLa细胞增殖及分化的影响

背景与目的:由于全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)治疗急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)存在一些不良反应,使得其进一步的临床应用受到了限制。目前,寻找具有更好疗效的维甲酸衍生物已成为研究热点。该研究旨在观察新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)对食管癌细胞株ECA-109、胰腺癌细胞株PANC-1、宫颈癌细胞株HeLa生长和分化的影响。方法:采用MTT法检测细胞的生长抑制率;流式细胞仪测定细胞周期的变化;酶联免疫吸符实验(ELISA)检测食管癌细胞分化指标鳞状上皮癌相关抗原SCC-Ag活性、胰腺癌细胞标志物CA199和宫颈癌细胞标志物CA125水平。结果:ATPR能够抑制肿瘤细胞增殖;并使G0/G1期细胞表达量增加,S期细胞表达量减少,细胞阻滞在G0/G1期;ECA-109中SCC-Ag活性下降,PANC-1中CA199和HeLa中CA125水平下降。结论:ATPR对上述3种实体瘤细胞株具有不同程度的诱导分化作用。     

PDGF-D对人肝癌细胞增殖及VEGF表达影响研究*

目的：研究血小板源性生长因子D（PDGF-D）对人肝癌细胞株BEL-7402增殖及其血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法：体外培养肝癌细胞株BEL-7402和肝癌旁非瘤性细胞株QSG-7701,采用RT-PCR 方法检测PDGF-D 与PDGFR βmRNA 在BEL-7402和QSG-7701的表达情况;将浓度分别为0（对照）、5、10、20、50、100、200 μ g/mL 的人重组PDGF-DD蛋白加入BEL-7402中,采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测肝癌细胞的生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期变化;半定量RT-PCR 检测VEGF及PDGFR β mRNA 表达情况,ELISA 检测PDGF-DD干预细胞后培养上清中VEGF蛋白的表达情况。结果：PDGF-D 及PDGFR βmRNA 在BEL-7402中高表达,与QSG-7701相比差异有统计学意义（P<0.05）。 PDGF-DD干预细胞后,可促进人BEL-7402增殖,浓度为100 μ g/mL 时达最高峰;细胞周期分布变化,G0/G1 期细胞数减少,S 期细胞数增加,与对照组相比差异有统计学意义;RT-PCR 结果显示,VEGF 及PDGFR β RI 值,实验组（除5 μ g/mL 组外）与对照组相比差异有统计学意义;ELISA 结果显示,加入PDGF-DD各浓度组VEGF蛋白浓度较对照组增高,差异有统计学意义,并呈量效依赖性关系。结论：PDGF-DD能促进BEL-7402的增殖,上调PDGFR β 及VEGF的表达。PDGF-D 及其信号传导系统在肝癌的发生、发展中可能发挥重要的作用,可作为肝癌预后预测指标和治疗靶点。     

5-Aza-CdR诱导肿瘤细胞NY-ESO-1抗原的表达

目的：探讨甲基化抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-2′-deoxycytidine, 5-Aza-CdR）对肿瘤细胞中NY-ESO-1抗原表达的诱导作用。方法：常规培养人胃癌细胞株SGC-7901、人肝癌细胞株H2P和MHCC97-H、人结肠癌细胞株HT-29和LoVo及人脑胶质瘤细胞株U251,RT-PCR和免疫细胞化学法检测5-Aza-CdR作用前后肿瘤细胞中NY-ESO-1 mRNA和蛋白的表达。结果：RT-PCR与免疫细胞化学检测仅见胃癌SGC-7901细胞阳性表达NY-ESO-1,其余5株肿瘤细胞不表达NY-ESO-1。NY-ESO-1阴性的肝癌细胞株H2P、结肠癌细胞株LoVo及脑胶质瘤细胞株U251经5-Aza-CdR（终浓度分别为1、5和10 μmol/L）处理6 d后,细胞形态和生长速度均无明显改变,而NY-ESO-1 mRNA和蛋白均被诱导为阳性表达,并随5-Aza-CdR浓度增加而阳性表达逐渐增强。结论：5-Aza-CdR能诱导肝癌、结肠癌、脑胶质瘤等肿瘤细胞中NY-ESO-1抗原的表达,为肿瘤免疫治疗提供了一条新思路。     

阿司匹林对胃癌细胞株SCG—7901作用的相关机理研究

目的：探讨阿司匹林（ASA）对胃癌细胞株SGC-7901作用的相关机理，为寻找其新的药物用途奠定理论基础。方法；用MTT法检测药物对细胞的抑制率；用流式细胞仪测定细胞周期；用琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡，^3H-TdR同位素示踪测定细胞DNA合成。结果：ASA对SGC-7901细胞株的细胞作用具有量效和时效依赖关系。ASA对细胞DNA合成有抑制作用。并可使SGC-7901细胞周期中S期及G2/M期比例升高，G1期比例下降，呈一定的剂量效应关系。琼脂糖凝胶电泳结果未见典型的阶梯状凋亡条带。结论：阿司匹林对SGC-7901细胞株存在着细胞毒作用。其细胞毒作用可能与抑制DNA的合成，阻止细胞周期有关系。     

大蒜素对人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823生长的影响

目的：研究大蒜素对人胃癌细胞株SGC-7901、BGC-823增殖抑制作用及对细胞周期的影响。方法：传代培养人胃癌细胞，MTT法测定细胞增殖抑制率并测定药物半数抑制率（IC50）；流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果：大蒜素对SGC-7901和BGC-823两种细胞的生长均有明显的抑制作用，且呈浓度依赖性，72h IC50分别为20和30μg／mL；以72h IC50浓度大蒜素分别作用于两种胃癌细胞株24、48h后，流式细胞检测与对照组比G0／G1期细胞减少，G2／M期细胞明显增加，P〈0．01。提示两种胃癌细胞株经大蒜素处理后．细胞周期阻滞于G2／M期。结论：大蒜素可使人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823细胞的增殖明显受到抑制；细胞周期被阻滞在G2／M期。     

Sorafenib联合紫杉醇不同给药顺序作用于人肝癌细胞BEL-7402的效应

背景与目的：Sorafenib是一种多靶点的抗肿瘤药物,其治疗原发性肝癌的疗效已经初步得到证实。本研究应用Sorafenib与紫杉醇（paclitaxel,TAX）联合．观察两药不同的给药顺序作用于人肝癌细胞BEL-7402的不同效应,初步探讨产生这种差异的机制。方法：采用MTY法检测Sorafenib与紫杉醇单药作用于BEL-7402细胞的IC50流式细胞术检测Sorafenib与紫杉醇不同给药顺序作用后,BEL-7402细胞周期和凋亡率的变化。Western blot检测不同给药顺序作用后的BEL-7402细胞Bcl-2的表达情况。结果：Sorafenib和紫杉醇单药作用于BEL．7402细胞48h的IC50分别为（2.43±0.32） μg/mL、（1.89±0.72） μg/mL。分析Sorafenib、紫杉醇单药,先用紫杉醇再加入Sorafenib,先用Sorafenib再加入紫杉醇及紫杉醇与Sorafenib同时作用后BEL-7402细胞周期及凋亡率的变化,结果显示：①Sorafenib主要将细胞阻滞在S期,而紫杉醇主要将细胞阻滞在G2-M期。②先用紫杉醇再给予Sorafenib组细胞S期及G2-M期均有延长,且较其他组获得较高的凋亡率（36.43±2.29）％（P〈0．01）。Western blot显示先用紫杉醇再给予Sorafenib组BEL-7402细胞的Bcl-2表达的水平最低。结论：Sorafenib联合紫杉醇不同给药顺序作用于BEL-7402细胞,先应用紫杉醇诱导再序贯给予Sorafenib时细胞凋亡率更高：产生这种不同效应的可能机制为两种药物作用于不同的细胞周期,以及不同给药方法后的Bcl-2的表达水平不同。     

蜂毒肽突变体Melittin-K1抑制人肝癌细胞BEL-7402生长的作用

目的:为了提高蜂毒肽Melittin的抗肿瘤活性,我们设计出新型多肽并将其命名为Melittin-K1。并对多肽Melittin-K1抑制人肝癌细胞BEL-7402生长的作用进行研究。方法:采用CCK-8法检测细胞活力。扫描电镜拍照结合培养基上清中乳酸脱氢酶（lactic dehydrogenase,LDH）的表达水平来评价细胞膜的损伤水平。构建BEL-7402细胞裸鼠异种移植瘤模型来评价Melittin-K1、Melittin体内对肝癌生长的影响以及毒性。结果:与Melittin相比,Melittin-K1抑制BEL-7402细胞生长的作用更显著;与L02细胞相比,BEL-7402对Melittin-K1的杀伤作用更敏感;Melittin-K1体外抑制BEL-7402细胞生长呈时间、剂量依赖性。扫描电镜以及LDH检测结果均显示Melittin-K1处理组细胞膜的破损情况严重。BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型结果表明,Melittin-K1体内显著抑制肿瘤生长,其抗肿瘤作用明显高于同剂量Melittin。Melittin-K1和Melittin体内毒性小,主要表现在,与模型组相比,体重曲线、肝功指标均未发生明显改变。结论:Melittin-K1能够明显抑制肝癌细胞BEL-7402的增殖,是一种极具潜力的抗肝癌药物。     

8-氯腺苷增强肿瘤细胞对TRAIL杀伤作用敏感性的研究

目的研究8-氯腺苷（8-Cl-Ado）增强肿瘤细胞对肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体（TARIL）杀伤作用的敏感性及其分子机制。方法以重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（rsTRAIL）和（或）8-Cl-Ado处理乳腺癌细胞MCF-7和肝癌细胞BEL-7402,以MTT比色法测定细胞存活率,分析药物处理对细胞凋亡的影响;构建NF-KBDNA结合序列虫荧光素酶报告质粒,并转染适当的细胞株,测定NF-KB的转录活性;以不同胱天蛋白酶的抑制剂预处理所试细胞株,再加入rsTRAIL处理,测定胱天蛋白酶抑制剂对细胞凋亡的影响。结果8-CI-Ado显著增强了乳腺癌细胞MCF-7和肝癌细胞BEL-7402对rsTRAIL诱导细胞凋亡的敏感性;8-CI-Ado与rsTRAIL联合可使肝癌细胞株BEL-7402内NF-KB活性下降,从而促进细胞凋亡,而住乳腺癌细胞株MCF-7中未观察钊相同的现象;胱天蛋白酶家族抑制剂对BEL-7402细胞的凋亡无影响,但可显著抑制MCF-7细胞的凋亡,但胱天蛋白酶-3、-9和-8的特异性抑制剂对MCF-7细胞株的生长均无影响。结论8-CI-Ado可显著增强乳腺癌和肝癌细胞对rsTRAIL细胞毒作用的敏感性,在此两种细胞中,8-Cl-Ado与rsTRAIL联合作用可分别激活胱天蛋白酶依赖的和非依赖的细胞凋亡信号途径。     

Inhibition of Growth and Induction of Differentiation ofSMMC-7721 Human Hepatocellular Carcinoma Cells byOncostatin M

Oncostatin M (OSM) is a multifunctional cellular regulator acting on a wide variety of cells, which haspotential roles in the regulation of gene activation, cell survival, proliferation and differentiation. Previousstudies have shown that OSM can induce morphological and/or functional differentiation and maturation ofmany tumor cells. However, the action of OSM on the induction of differentiation of human hepatocellularcarcinoma (HCC) has not been reported. Here, we investigated the effects of different concentrations of OSMon human HCC cell line SMMC-7721 growth, proliferation, cell cycling, apoptosis and differentiation in vitro.Cell growth was determined via MTT assay, proliferation by cell cycle analysis, apoptosis by flow cytometry,morphology by transmission electronic microscopy, and cell function by detection of biochemical markers.Our results demonstrated that OSM strongly inhibited the growth of SMMC-7721 cells in a dose-dependentmanner, associated with decreased clonogenicity. Cell cycle analysis revealed a decreased proportion of cells inS phase, with arrest at G0/G1. The apotosis rate was increased after OSM treatment compared to the control.These changes were associated with striking changes in cellular morphology, toward a more mature hepaticphenotype, accompanied by significant reduction of the expression of AFP and specific activity of γ-GT, withremarkable increase in secretion of albumin and ALP activity. Taken together, our findings indicate that OSMcould induce the differentiation and reduce cell viability of SMMC-7721 cells, suggesting that differentiationtherapy with OSM offers the opportunity for therapeutic intervention in HCC.     

中药方剂1号对胃癌细胞体外生长及细胞周期的影响

背景与目的:探讨中药方剂1号对人胃癌细胞SGC-7901体外生长及细胞周期的影响。材料与方法:四甲基偶氮唑蓝(3-[4,5-dimethylthiazol-2-y1]-2,5dipheny1tetrazoliumbromide,MTT)还原法检测中药方剂1号对SGC-7901细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期时相分布。结果:中药方剂1号生药能抑制SGC-7901的增殖。在实验浓度范围内,随着剂量的增加,抑制作用更加明显;同一剂量下,72h内药物作用时间越长,抑制作用越明显。中药方剂1号作用48h后,SGC-7901细胞的G0/G1期和S期的细胞减少,G2 M期的细胞增多。结论:中药方剂1号能够抑制人胃癌细胞SGC-7901的体外增殖,其作用机制可能与干扰细胞周期有关。     

BEL-7402 人肝癌细胞分化指标的研究

 目的　探讨肝癌细胞分化的特异指标。方法　用公认的细胞分化诱导剂维甲酸 (RA)、丁酸钠 (SB)和肝细胞毒剂四氯化碳处理 BEL- 740 2人肝癌细胞 ,观察细胞增殖、软琼脂集落形成率、核质比例和各项生化指标的变化。结果　 1 0 μmol/L RA、2 .5mmol/L SB和 1 mmol/L CCl4 均显著抑制肝癌细胞增殖 ,并使其软琼脂集落形成率明显减少 (P<0 .0 5) ,但 RA和 SB处理后 ,细胞核质比例明显减小 (P<0 .0 1或 P<0 .0 5) ,鸟氨酸氨基甲酰转移酶 (OCT)、酪氨酸 -α-酮戊二酸转氨酶 (TAT)和碱性磷酸酶 (ALP)比活力明显升高 ,AFP分泌量和 -谷氨酰转肽酶 ( - GT)比活力明显下降 (P<0 .0 1或 P<0 .0 5) ,而 CCl4 对核质比例和上述生化指标的影响则与 RA和 SB相反。结论　细胞核质比例、AFP分泌量、TAT、OCT和 ALP比活力可作为判断肝癌细胞分化的有用指标 ,其变化与毒性反应有明显的区别。     

Tripartite motif-containing 3 (TRIM3) inhibits tumor growth and metastasis of liver cancer

Background:Reduced expression of tripartite motif-containing 3 (TRIM3) has been reported to be involved in the pathogenesis of human glioblastoma.In our previous research,we found that TRIM3 expression was markedly reduced in human primary hepatocellular carcinoma (HCC) tissues and that low TRIM3 expression was associated with short survival of HCC patients.However,the role of TRIM3 in liver cancer remains unknown.This study aimed to investigate the function of TRIM3 in liver cancer cells.Methods:The protein levels of TRIM3 in five liver cancer cell lines (SK-Hep1,Hep3B,Huh7,HepG2,Bel-7402) and one normal liver cell line (L02) were detected with Western blotting.HepG2 and Bel-7402 cells with IowTRIM3 expression were infected with recombinant lentiviruses overexpressing TRIM3 (LV-TRIM3),whereas Huh7 and Hep3B cells with high TRIM3 expression were transfected with TRIM3-targeted small interfering RNA (siTRIM3).The functions of TRIM3 in the proliferation,colony formation,cell cycle,migration,invasion,and apoptosis of the above cell lines were examined.The effect of TRIM3 on tumor growth and metastases in nude mice was also investigated.Results:TRIM3 was overexpressed in HepG2 and Bel-7402 cells with LV-TRIM3 infection,which further reduced proliferation,colony formation,migration,and invasion of both cell lines.Cell cycle analysis showed thatTRIM3 overexpression induced G0/G1 phase arrest in HepG2 and Bel-7402 cells.Moreover,apoptosis was not increased in HepG2 or Bel-7402 cells overexpressing TRIM3.Contrarily,silencing TRIM3 expression in Huh7 and Hep3B cells by siTRIM3 led to significantly decreased percentages of both cells in the G0/G1 phase and promoted cell proliferation,colony formation,migration,and invasion.In vivo experiment results confirmed thatTRIM3 overexpression suppressed tumor growth and metastasis.Conclusions:TRIM3 plays a tumor-suppressing role in the regulation of liver cancer development by reducing cell proliferation through cell cycle arrest at the G0/G1 phase.     

白英总苷抗肿瘤作用初步研究

目的研究白英总苷体内外抗肿瘤作用。方法采用MTT法考察白英总苷体外对人肝癌BEL-7402细胞及人胃腺癌SGC-7901细胞的增殖抑制作用;以小鼠S180肉瘤及H22肝癌为模型,考察白英总苷体内对肿瘤生长的抑制作用。结果白英总苷对人肝癌BEL-7402细胞及人胃腺癌SGC-7901细胞有显著地增殖抑制作用,且均呈现良好的浓度-效应依赖关系,作用48h的IC50值分别为(180.22±6.32)μg/ml和(114.89±4.89)μg/ml;白英总苷对小鼠S180肉瘤有显著的抑制作用,且呈现良好的剂量-效应关系,三次重复实验,高剂量组的抑瘤率达到33.76%±3.24%;白英总苷各剂量对小鼠H22肝癌抑制作用均不显著。结论白英总苷体内外有一定的抗肿瘤作用。     

PDCD5对胃癌SGC-7901细胞株细胞周期的影响

目的:通过检测PDCD5蛋白对胃癌细胞株SGC-7901的细胞周期的影响,探讨PDCD5蛋白对胃癌的作用。方法:培养胃癌细胞株SGC-7901。构建pEGFP-C1-PDCD5质粒并转染SGC-7901细胞,使其表达PDCD5蛋白。另外在SGC-7901细胞的培养基中,加入重组人PDCD5(rhPDCD5)蛋白直接作用。采用MTT比色法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,免疫荧光技术和Western blot检测相关周期蛋白的变化。结果:在以上两种作用方式下,SGC-7901的增殖均受到抑制,细胞增殖率明显降低(P<0.01),细胞出现G0/G1期阻滞(P<0.05)。经过两种作用方式处理后的细胞周期蛋白Cyclin D1和Cyclin E明显下降(P<0.01)。结论:转染PDCD5质粒与rhPDCD5蛋白均能够起到对胃癌细胞株SGC-7901周期阻滞的作用。且两种方式作用的效果和机制无明显差异。可以为临床胃癌治疗提供新的思路。     

miR-361-5p通过靶向CCND1逆转胃癌SGC-7901细胞奥沙利铂耐药性

目的:探讨miR-361-5p对胃癌SGC-7901细胞奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)耐药性的影响及其作用机制.方法:采用qPCR法检测miR-361-5p在胃癌细胞MKN-45、MGC80-3、SGC-7901和OXA耐药细胞SGC-7901/OXA中的表达水平.利用脂质体转染技术分别将miR-361-5...     

γ-生育三烯酚对人胃癌SGC-7901细胞的抑制作用及机制

目的：探讨γ-生育三烯酚（γ-tocotrienol）对人胃癌细胞SGC-7901抑制作用。方法：采用离体细胞培养技术,利用细胞生长曲线,单细胞凝胶电泳、琼脂糖凝胶电泳、透射电镜技术等方法,观察γ-生育三烯酚对SGC-7901细胞生长抑制及其肿瘤细胞的损伤作用。结果：γ-生育三烯酚可明显抑制SGC-7901细胞增殖,抑制作用随作用浓度增加、作用时间延长而增强;并能引起人胃癌细胞株SGC-7901细胞DNA分子的损伤以及细胞超微结构变化,如线粒体损伤和形成凋亡小体,且与γ-生育三烯酚作用的浓度存在一定的相关性。结论：γ-生育三烯酚对SGC-7901细胞生长有明显抑制作用,其抑制机制与参与DNA损伤、诱导细胞凋亡有关。