铜绿假单胞菌主动外排表型及OprM基因检测

目的对淮北地区铜绿假单胞菌主动外排表型及OprM基因存在情况进行分析,探讨铜绿假单胞菌多重耐药的主动外排分子机制。方法采用外排泵抑制剂碳酰氰基-对-氯苯腙(CCCP)对铜绿假单胞菌环丙沙星(CIP)敏感性的逆转试验,筛选铜绿假单胞菌主动外排表型阳性菌;采用PCR法扩增主动外排表型阳性菌的OprM基因。结果在CCCP作用下,36株铜绿假单胞菌中有24株菌对CIP的敏感性提高4倍以上,主动外排表型阳性率为66.7%(24/36);在OprM基因的PCR扩增试验中,有16株(44.4%,16/36)扩增出848 bp的OprM基因片段。结论主动外排表型在临床铜绿假单胞菌中广泛存在;OprM基因在铜绿假单胞菌主动外排菌中最常见。     

铜绿假单胞菌MexAB-OprM、MexXY-OprM主动外排系统的耐药作用

目的探讨MexAB-OprM、MexXY-OprM主动外排系统(外排泵)在多重耐药铜绿假单胞菌耐药机制中的作用。方法选取36株临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌,采用琼脂二倍稀释法,测定环丙沙星对铜绿假单胞菌的MIC及进行泵抑制剂碳酰氰基-对-氯苯腙(CCCP)存在情况下的干预试验;用实时定量RT-PCR测定结构基因mexA、mexX的mRNA表达水平来判断MexAB-OprM、MexXY-OprM外排泵表达情况;用PCR法分别扩增其调控基因mexR、mexZ,并对其产物测序,用Blast软件在GenBank与已知序列比较,研究其过度表达的机制。结果在CCCP作用下,36株铜绿假单胞菌中24株菌对环丙沙星的敏感性(MIC)由20～320 mg/L提高到2.5～40 mg/L,主动外排表型阳性率为66.7%(24/36),15株菌高表达Mex-AB-OprM外排系统(41.7%),21株高表达MexXY-OprM外排系统(58.3%)。15株高表达MexAB-OprM外排系统铜绿假单胞菌同时表达MexXY-OprM外排系统;12株干预试验阴性的铜绿假单胞菌均无mexA、mexX高表达;随机选择mexA、mexX高表达的4株细菌均发生mexR、mexZ基因突变,出现氨基酸替代。结论主动外排系统MexAB-OprM、MexXY-OprM在多重耐药铜绿假单胞菌中过度表达是铜绿假单胞菌多重耐药的机制之一;外排泵MexAB-OprM、MexXY-OprM高表达分别与调控基因mexR、mexZ发生变异有关。     

多重耐药铜绿假单胞菌MexAB-OprM的表达及mexR基因的突变

目的 分析MexAB-OprM主动外排系统在铜绿假单胞菌耐药性中的作用,并讨论MexAB-OprM高表达与mexR基因突变的关系.方法 L-酚丙氨基-L-氨基酰-β-萘胺(MC207,110)联合环丙沙星(CIP)筛选13株多重耐药铜绿假单胞菌主动外排系统表型;RT-PCR检测13株多重耐药和7株全敏感的铜绿假单胞菌结构基因mexB的mRNA相对含量,推测MexAB-OprM表达水平;对6株MexAB-OprM高表达的多重耐药铜绿假单胞菌进行mexR基因扩增、测序和比对.结果 13株多重耐药铜绿假单胞菌9株主动外排系统表型阳性,阳性率69.2%;所有检测株中均有MexAB-OprM表达,其中有6株多重耐药株高表达;6株多重耐药高表达株中有5株存在mexR基因的突变.结论 MexAB-OprM主动外排系统高表达是导致本院铜绿假单胞菌多重耐药的重要原因,而mexR基因的突变又是导致MexAB-OprM高表达的主要原因.     

消毒剂诱导的铜绿假单胞菌对抗生素敏感性的变化及相关机制的探讨

目的探讨铜绿假单胞菌在体外经消毒剂诱导后,对抗生素最低抑菌浓度的变化,并对变化机制进行初步研究。方法收集临床上铜绿假单胞菌菌株68株,采用VITEK．2全自动细菌分析仪鉴定并进行药敏分析;琼脂二倍稀释法分别测定碘伏、戊二醛、氯己定对铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度（MIC）;在低于MIC浓度下逐步诱导8次,微量稀释法测定诱导前后铜绿假单胞菌对12种抗生素的MIC,同时再将诱导后对抗生素MIC升高的菌株,接种在含有外排泵抑制剂PAβN的琼脂平板,测定其外排泵表型。结果68株铜绿假单胞菌经3种消毒剂诱导后共有6株铜绿假单胞菌对一种或多种抗生素的敏感性较诱导前有明显变化,对氟喹诺酮类、头孢类及碳氢酶烯类等多种抗生素MIC升高,碘伏及戊二醛诱导效果明显,两种消毒剂诱导后的5种菌株外排泵表型测定为阳性。结论消毒剂可以诱导某些铜绿假单胞菌对抗生素的敏感性发生变化,其中主动外排系统在诱导过程中起主要作用,应合理使用消毒剂,以降低耐药菌扩散及医院感染的发生。     

铜绿假单胞菌耐药机制研究进展

铜绿假单胞菌是临床常见的条件致病菌.随着抗生素广泛应用和不合理使用导致细菌抗生素耐药性增加,临床已分离到大量多重耐药菌株,给临床治疗带来极大的困难.铜绿假单胞菌耐药机制十分复杂,该文就外膜通透性障碍、作用靶位改变、产生灭活酶、形成生物膜和主动外排泵系统等耐药机制做一综述.     

75株碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌ERIC-PCR菌种分型及其主要耐药机制研究

目的探讨碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌同源性及其主要耐药机制。方法收集临床标本946份,分离出碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌,采用琼脂稀释法进行体外药物敏感性试验;采用肠杆菌基因间重复一致序列为引物的聚合酶链反应(ERIC-PCR)进行耐药菌株同源性分析;筛选其金属β-内酰胺酶并测定主动外排系统表型来分析碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌的耐药性。结果共检测出75株碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌;ERIC-PCR同源性分析显示75株菌株共分为8个型别,其中A型占34.7%(26株)、B型占22.7%(17株);75株碳青霉烯类耐药的铜绿假单胞菌中有13株为产酶株,产酶率为17.3%;外排泵抑制剂MC207110可以使34株美罗培南耐药株的最低抑菌浓度(MIC)较单药时下降4倍或以上,占63.0%。结论本院分离的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌主要有两种类型,产生碳青霉烯水解酶和外排泵机制是碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌耐药的重要机制。     

铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药机制探讨

目的探讨铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药机制。方法取铜绿假单胞菌55株。采用外膜蛋白图谱,紫外吸收法测定外膜微孔蛋白OprD2基因含量;采用纸片协同试验检测β-金属酶;采用Etest试验观察氰氯苯腙对亚胺培南最低抑菌浓度(M IC)的影响。结果铜绿假单胞菌耐药株OprD2基因相对含量明显低于敏感株(P<0.01),且检出产β-金属酶4株,有17.4%菌株存在主动外排泵出机制。结论OprD2基因的减少,产生β-金属酶及存在主动外排泵出机制是唐山地区铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因。     

全耐药铜绿假单胞菌中多药外排泵mRNA表达的定量RT-PCR检测

目的分析4种重要的药物外排泵系统在临床分离的全耐药铜绿假单胞菌与全敏感铜绿假单胞菌中表达的差异。方法用SYBR G reenⅠ实时定量RT-PCR方法检测临床分离鉴定的全耐药和全敏感铜绿假单胞菌中4种外排泵M exAB-OprM、M exCD-OprJ、M exEF-OprN、M exXY-OprM的mRNA。结果全耐药菌株较全敏感菌株多药外排泵M exAB、M exXY、M exCD、M ex-EF的mRNA表达明显增高(P<0.01)。以敏感菌株拷贝平均数×4判定明显高表达,则全耐药菌M exAB高表达率为18.9%;M exXY高表达率为13.5%;M exCD高表达率为56.8%;M exEF高表达率为35.1%。37株全耐药菌有1种外排泵高表达的8株;2种外排泵高表达的10株;3种外排泵高表达的4株;4种外排泵同时高表达的2株,4种外排泵表达均未增高的有13株。结论药物外排泵系统在临床全耐药铜绿假单胞菌耐药机制中起着重要作用,研究结果提示可能还存在其他耐药机制或存在外排泵功能与其表达量存在差异的情况。     

泛耐药铜绿假单胞菌对β内酰胺类抗生素的耐药机制研究

目的探讨泛耐药(pan-drug resistant,PDR)铜绿假单胞菌对β内酰胺类抗生素的耐药机制。方法以相应方法分别检测PDR铜绿假单胞菌对β内酰胺类抗生素的主要耐药机制:常见β内酰胺酶的表达,膜孔蛋白OprD的缺失,及耐药结节分化家族(RND)主动外排系统的激活。结果 20株PDR铜绿假单胞菌中,可检出的产β内酰胺酶的菌株16株(80%):产AmpCs酶菌株16株(80%),其中产超广谱AmpCs酶(extended-spectrum AmpCβ-lactamases,ESACs)12株(60%),产ES-BLs菌株14株(70%),产金属β内酰胺酶(MBLs)1株(5%);膜孔蛋白OprD呈不同程度缺失的菌株11株(55%);主动外排系统中MexA-MexB-OprM、MexC-MexD-OprJ、MexE-MexF-OprN、MexX-MexY-OprM呈过度激活的菌株分别为5株(25%)、3株(15%)、4株(20%)、1株(5%)。65%PDR铜绿假单胞菌存在2种或2种以上耐药机制,以高产β内酰胺酶合并膜孔蛋白OprD缺失最多见。结论高产AmpCs和(或)ESBLs,合并膜孔蛋白OprD的缺失或主动外排泵的激活,是PDR铜绿假单胞菌对β内酰胺类抗生素的主要耐药机制。     

基层医院与三级医院耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药表型及耐药机制研究

目的分析北京地区基层医院与三级医院耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药表型及其耐药机制,为临床的合理用药提供依据。方法采用K-B法检测两所医院耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药表型,应用PCR方法对耐亚胺培南铜绿假单胞菌相关基因(金属酶基因IMP、VIM;主动外排系统基因OprM、mexA、mexB;外膜蛋白Opr D2基因)进行检测。结果两所医院耐亚胺培南铜绿假单胞菌对阿米卡星、庆大霉素、哌拉西林/他唑巴坦敏感性均排在前三位;检出基因IMP(11.4%、5.0%)、OprM(90.9%、97.5%)、mexA(100.0%、100.0%)、mexB(100.0%、100.0%)和OprD2(52.3%、60.0%),VIM基因均未检出。结论外排泵系统和外膜蛋白OprD2基因缺失是两个医院介导铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要机制,具有流行病学意义。     

外膜孔蛋白OprD和青霉素结合蛋白在铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药中的作用

铜绿假单胞菌是人体的一种条件致病菌,目前在我国医院获得性感染中占有非常重要的地位,并且随着抗菌药物的广泛应用,其对亚胺培南的耐药率逐年上升,这给临床抗感染治疗带来了很大的困难.目前认为铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药机制主要有如下几个方面:β-内酰胺酶的水解作用、细菌外膜孔蛋白的通透性降低、作用靶位(如青霉素结合蛋白)的改变、主动外排系统高表达、生物膜的产生等[¨].本实验室前期对广州市收集的亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的情况进行了研究,在此基础上,本研究对这些菌株进行了OprD和青霉素结合蛋白(penicillinbinding proteins,PBPs)这两方面的检测,以全面了解广州地区铜绿假单胞菌分离株对亚胺培南的耐药机制.     

美罗培南耐药铜绿假单胞菌多药外排泵研究

目的 研究美罗培南耐药铜绿假单胞菌的多药外排泵机制.方法 采用琼脂稀释法测定美罗培南对141株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC),同时观察加入泵抑制剂MC207110后的美罗培南对141株铜绿假单胞菌MIC变化,检测多药外排泵机制.实时定量PCR检测外排泵mRNA水平的表达.PCR扩增外排泵编码基因及调控基因并测序分...     

铜绿假单胞菌耐药机制的研究进展

铜绿假单胞菌是1种条件致病菌,在健康人皮肤、呼吸道等部位均可存在。随着抗生素的广泛应用,逐渐表现出耐药性增强。其耐药机制主要涉及整合子、金属蛋白酶的产生和膜微孔蛋白oprD2缺失、膜外排泵MexAB-OprM、MexEF-OprN以及铜绿假单胞菌生物被膜等。因此,对铜绿假单胞菌耐药机制的研究,能为临床治疗铜绿假单胞菌感染提供积极可行的重要意义。     

烧伤患者亚胺培南耐药铜绿假单胞菌耐药情况和耐药基因研究

目的探讨烧伤患者亚胺培南耐药铜绿假单胞菌耐药情况和耐药基因。方法选取2015年2月至2017年2月该院烧伤科收集的31株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌,采用纸片扩散法进行药敏试验,聚合酶链反应(PCR)检测铜绿假单胞菌亚胺培南耐药相关基因及外膜蛋白基因OprD2,琼脂稀释法检测氰氯苯腙对亚胺培南最小抑菌浓度(MIC)的影响。结果亚胺培南耐药铜绿假单胞菌对庆大霉素、头孢哌酮、头孢吡肟、氨曲南耐药率较高,耐药率均大于60.00%;31株亚胺培南耐药铜绿假单胞菌中,IMP基因阳性6株,阳性率为19.35%;VIM基因阳性3株,阳性率为9.68%;OprD2基因缺失5株,阳性率为16.13%。OXA-10和GES耐药基因未检测到;16.13%的菌株存在主动外排的耐药机制。结论亚胺培南耐药铜绿假单胞菌对大部分抗菌药物耐药率较高,其耐药机制与细菌膜微孔蛋白基因OprD2缺失、细菌产IMP型金属-内酰胺酶及细胞主动外排机制有关;临床上应加强细菌耐药的监测以及抗菌药物的合理应用,减少耐药菌株的产生。     

连续4a铜绿假单胞菌感染分布及耐药变迁

目的：了解近4a铜绿假单胞菌在我院的分布，动态观察其耐药性发展情况。方法：采用回顾性方法统计分析近4a广西医科大学第七附属医院铜绿假单胞菌的标本来源及耐药状况。结果：共收集铜绿似单胞菌,108株，其中呼吸道标本检出率最高67．89％。铜绿假单胞菌对常用抗生素具有明显的耐药性。结论：加强对铜绿假单胞菌进行规范的连续的耐约监测，及时发现耐药菌株，对临床调整治疗方案、预防医院感染的发生十分生要。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药特征及其耐药机制研究

目的分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌对常用抗菌药物的耐药特征,并研究对亚胺培南的耐药机制。方法采用Micro-Walkaway-40进行细菌鉴定和药物敏感试验,应用PCR法对铜绿假单胞菌亚胺培南耐药相关基因（IMP、VIM、GIM、OXA）和膜微孔蛋白基因oprD2进行检测,琼脂稀释法检测氰氯苯腙（cccp）对耐亚胺培南铜绿假单胞菌MIC的影响。结果 65株耐亚胺培南铜绿假单胞菌对舒普深、特治星、阿米卡星的耐药率分别为38.5%、43.1%和44.6%,对头孢他啶、马斯平和环丙沙星的耐药率分别为50.8%、53.8%和55.4%;65株耐亚胺培南铜绿假单胞菌中,IMP阳性11株（16.9%）、VIM 4株（6.2%）,oprD2基因缺失5株（7.7%）,其余耐药基因未检出;CCCP检测阳性时,亚胺培南的MIC值下降,提示存在主动外排机制的菌株7株（10.8%）。结论耐亚胺培南铜绿假单胞菌多重耐药现象较为严重,其耐药机制主要与细菌产IMP型金属β-内酰胺酶、细胞主动外排机制以及膜微孔蛋白基因oprD2缺失有关。     

铜绿假单胞菌致病、耐药机理研究进展

铜绿假单胞菌是重要的条件致病菌 ,其致病机制复杂而多样。本文综述了国外近几年研究铜绿假单胞菌的胞外产物、外膜屏障及主动转运系统的致病、耐药机理。了解铜绿假单胞菌的致病机理对预防及治疗其引起的感染具有指导意义。     

铜绿假单胞菌致病、耐药机理研究进展

铜绿假单胞菌是重要的条件致病菌，其致病机制复杂而多样。本文综述了国外近几年研究铜绿假单胞菌的胞外产物、外膜屏障及主动转运系统的致病、耐药机理。了解铜绿假单胞菌的致病机理对预防及治疗其引起的感染具有指导意义。     

MexAB—OprM主动外排系统在全耐药铜绿假单胞菌耐药中的作用及机制

目的探讨MexAB—OprM主动外排系统（外排泵）在全耐药铜绿假单胞菌耐药机制中的作用及其过度表达的机制。方法联合L-酚丙氨基-L-氨基酰-β-萘胺（MC-207,110）和环丙沙星（CIP）,测定26株全耐药铜绿假单胞菌的MIC;用RT—PCR法扩增MexAB—OprM内膜转运蛋白MexB的结构基因mexB和内参照基因16SrDNA片段,根据mexB与16SrDNA扩增产物的电泳扫描比值,分析mexB mRNA的表达水平,判断MexAB—OprM的表达情况;用PCR法扩增MexAB—OprM调控基因mexR并对其产物测序,用Blast软件在GenBank中与已知序列比对。结果联合MC-207,110后有20株（76．9％）CIP的MIC值下降4倍及以上;26株全耐药铜绿假单胞菌中有22株MexAB-OprM高表达,其中有15株mexR基因发生变异,13株发生点突变,出现氪基酸替换．2株发生插入突变,导致氨基酸插入;点突变位点是336G—A、603G—A、660G—A、584C—G、653T—A,后两者导致氨基酸替换103Ala—Gly、126Val—Glu,插入突变是在470和474核苷酸间插入碱基GGC,导致66和68氨基酸间插入Ala。结论MexAB—OprM主动外排系统的高表达对铜绿假单胞菌的耐药性起重要作用,调控基因mexR的突变是其高表达的原因之一。     

碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM的研究

目的研究铜绿假单胞菌对碳青霉烯类耐药与外排泵MexAB-OprM的相关性。方法琼脂稀释法测定亚胺培南和美罗培南对75株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC),联合外排泵抑制剂MC207110进行外排泵表型的筛选;用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增MexAB-OprM融合蛋白结构基因mexA以及内参基因rpoD,并测定其mRNA的表达量,用PCR扩增MexAB-OprM相对高表达菌株的外排泵调节基因mexR、nalC和nalD,对扩增产物进行DNA双向测序;结果进行BLAST比对分析。结果 75株铜绿假单胞菌中外排泵表型阳性菌株13株,其中10株细菌的MexAB-OprM相对表达量增高,此高表达MexAB-OprM菌株的调节基因mexR、nalC及nalD均阳性。其中9株菌nalC均发生第71位氨基酸突变(甘氨酸→谷氨酸)、8株菌同时还有第209位氨基酸突变(丝氨酸→精氨酸),仅发现1株菌nalD第158位氨基酸突变(苏氨酸→异亮氨酸),8株菌mexR发生突变。结论外排泵MexAB-OprM的高表达在铜绿假单胞菌对碳青霉烯类耐药中可能起到重要作用。MexAB-OprM的高表达与其调节基因突变相关。