miR-363通过靶向于MCL-1增强顺铂对乳腺癌细胞的杀伤活性

目的探究microRNA-363(miR-363)是否能增强顺铂对乳腺癌细胞的杀伤活性及机制。方法利用生物信息学、定量PCR及Western blot法,验证miR-363能否在体外调节乳腺癌细胞系MDA-MB-231 MCL-1的表达水平;MTT法检测miR-363联合顺铂对乳腺癌细胞系MDA-MB-231的杀伤活性;构建MCL-1真核表达载体,MTT法检测MCL-1表达载体转染对miR-363联合顺铂治疗乳腺癌疗效的影响。结果乳腺癌细胞系MDA-MB-231的miR-363表达水平显著低于正常乳腺细胞系MCF-10A,差异有统计学意义(P0.05)。miR-363转染后,乳腺癌细胞系MDA-MB-231 MCL-1的mRNA表达水平及蛋白表达水平相比于NCO转染组均下降,差异有统计学意义(P0.05)。MTT结果表明,miR-363联合顺铂组对MDA-MB-231细胞的杀伤活性显著高于miR-363组和顺铂组,差异有统计学意义(P0.05)。miR-363联合顺铂在MCL-1表达载体转染后对MDA-MB-231细胞的杀伤活性显著低于未转染MCL-1表达载体的miR-363联合顺铂组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-363通过靶向与MCL-1增强顺铂对乳腺癌细胞的杀伤活性。     

不同乳腺癌细胞体外侵袭力差异及影响因素

目的探讨不同乳腺癌细胞系体外侵袭能力的差异并筛选其影响基因。方法以2种常见的乳腺癌细胞系MCF-7(低转移株)和MDA-MB-231(高转移株)为研究对象,通过细胞划痕实验、细胞黏附实验以及Transw ell侵袭实验分析2种乳腺癌细胞体外侵袭能力差异,实时荧光定量PCR筛选肿瘤侵袭转移相关基因在细胞间的表达差异并采用细胞免疫组化SP法进一步确认。结果 MDA-MB-231细胞24、48 h的平均迁移距离分别为(218.75±20.16)、(211.50±16.54)μm,明显高于MCF-7细胞的迁移距离[分别为(130±29.62)、(119.50±25.65)μm](P0.01);MDA-MB-231细胞黏附能力明显高于MCF-7细胞;MDA-MB-231细胞24 h平均穿膜细胞数[(57.75±4.19)个]明显多于MCF-7细胞[(35.50±4.20)个](P0.01);实时荧光定量PCR结果显示,与MCF-7细胞比较,MDA-MB-231细胞中细胞间黏附分子1(ICAM-1)及乳腺癌候选抑制蛋白1(BCSC-1)表达水平[分别为(0.09±0.01)、(0.15±0.03)]均明显降低(P0.01),而基质金属蛋白酶14(MMP-14)表达水平(14.43±1.01)明显升高(P0.01)。细胞免疫组化结果显示,MDA-MB-231细胞ICAM-1以及BCSC-1的表达水平明显低于M CF-7细胞,而M M P-14表达水平明显高于M CF-7细胞。结论乳腺癌细胞系M DA-M B-231的体外侵袭能力明显高于MCF-7细胞,细胞侵袭力可能与细胞内ICAM-1、BCSC-1低表达及MMP-14高表达有关。     

miR-369-3p和COL11A1对卵巢癌细胞增殖 迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-369-3p和COL11A1对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并分析其分子机制。方法实时定量PCR(qRT-PCR)检测正常卵巢上皮细胞IOSE80和卵巢癌细胞SKOV-3中miR-369-3p、COL11A1 mRNA的水平,在卵巢癌SKOV-3细胞中转染miR-369-3p模拟物和pcDNA-COL11A1以过表达miR-369-3p、COL11A1,CCK8法和Transwell实验分别检测卵巢癌SKOV-3细胞增殖、迁移及侵袭能力,蛋白印迹实验(Western blot)检测细胞中COL11A1、Cyclin D1、p21、MMP-2及MMP-9蛋白水平,双荧光素酶报告系统验证miR-369-3p与COL11A1的调控关系。结果与正常卵巢上皮细胞IOSE80(1.00±0.05、1.01±0.08及0.28±0.03)相比,卵巢癌细胞SKOV-3中的miR-369-3p水平(0.41±0.04)显著降低,COL11A1 mRNA(3.26±0.31)和蛋白(0.64±0.06)水平显著升高,差异均有统计学意义(t=21.083、27.643及16.100,P0.05)。过表达miR-369-3p可降低Cyclin D1、MMP-2及MMP-9蛋白表达量,提高p21表达量,降低细胞OD值、迁移及侵袭细胞个数;miR-369-3p靶向负调控COL11A1的表达;过表达COL11A1可逆转miR-369-3p过表达对SKOV-3细胞增殖、侵袭及迁移的影响。结论 miR-369-3p通过靶向COL11A1调控SKOV-3细胞增殖、迁移及侵袭。miR-369-3p是卵巢癌潜在分子靶点。     

GPX3高表达对乳腺癌细胞增殖 侵袭 迁移及Nrf2/ARE信号通路的影响

目的 探讨谷胱甘肽过氧化物酶3(GPX3)高表达对乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及核转录相关因子2/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)信号通路的影响,以期为乳腺癌的临床诊治提供理论依据。方法 选取2017年2月—2019年2月在绍兴文理学院附属医院进行手术治疗的80例乳腺癌患者,检测乳腺癌和癌旁组织中GPX3 mRNA、GPX3蛋白表达水平,并探究乳腺癌患者临床病理特征与GPX3蛋白表达的关系。将乳腺癌细胞MDA-MB-231分为3组：GPX3组、NC组、空白组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测转染效率;采用CCK-8法检测细胞增殖情况;采用Transwell法检测细胞迁移、侵袭能力;采用蛋白免疫印迹法检测Nrf2/ARE信号通路相关蛋白Nrf2、血红素氧合酶1(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达情况。结果 乳腺癌组织中GPX3 mRNA表达水平为(0.41±0.07),明显低于癌旁组织(1.05±0.13),差异有统计学意义(t=22.937,P<0.05)。癌旁组织中GPX3蛋白阳性表达率(85.00%)高于乳腺癌组织(15.00%),差异有统计学...     

不同的游离脂肪酸对人乳腺癌细胞凋亡和侵袭的影响

目的探讨不同游离脂肪酸(FFAs)对MDA-MB-231人乳腺癌细胞凋亡和迁移的影响.方法用50、200、500 umol/L三种不同浓度的油酸(0A)和棕榈酸(PA)分别刺激MDA-MB-231细胞,采用实时定量PCR分析细胞中PTEN的mRNA含量,蛋白免疫印迹法检测PTEN和Bcl-2的蛋白表达,原位末端标记法(TUNEL)观察细胞的凋亡情况,小室迁移实验测定细胞的迁移能力.结果OA使MDA-MB-231细胞中PTEN的mRNA和蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达升高(P均＜0.05);PA则使PTEN的mRNA和蛋白表达水平上升,Bcl-2蛋白表达下降(P均＜0.05).显微镜下观察到PA刺激后的MDA-MB-231细胞凋亡增加.迁移实验显示OA和PA都能使乳腺癌细胞侵袭能力增强.结论PA可能通过上调PTEN的表达促进MDA-MB-231人乳腺癌细胞凋亡,但同时也增强细胞的侵袭能力.OA也可增强癌细胞侵袭能力.     

miR-491对肾上腺皮质癌细胞增殖迁移能力影响

目的微小RNA结合mRNA的3′非翻译区(3′-UTR),在转录后调节基因表达并在癌症发展中起重要作用。本研究探讨miR-491在肾上腺皮质癌(adreenocortical,ACC)中作用。方法 CCK-8实验评估miR-491对ACC细胞增殖影响,细胞划痕和Transwell实验检测ACC细胞迁移和侵袭能力;流式细胞仪检测miR-491对ACC细胞周期影响。结果转染72h后,H295R细胞中miR-NC mimic组和转染miR-491mimic组A值分别为0.73±0.06和0.95±0.04,t=5.356,P=0.001;SW13细胞中miR-NC mimic组和转染miR-491mimic组A值分别为0.78±0.05和0.97±0.04,t=3.274,P=0.031。H295R细胞中miR-NC mimic组和转染miR-491mimic组侵袭数分别为33.24±2.02和70.56±2.63,t=19.543,P=0.004;miR-NC mimic组和转染miR-491mimic组细胞迁移距离分别为0.74±0.03和1.26±0.07,t=11.832,P=0.002。SW13细胞中miR-NC mimic组和转染miR-491mimic组侵袭数分别为42.25±3.21和78.56±2.93,t=14.943,P=0.001;miR-NC mimic组和转染miR-491mimic组细胞迁移距离分别为0.85±0.04和1.46±0.08,t=11.812,P=0.003。H295R细胞中miR-NC mimic组G1/G0期和S期细胞占细胞总数比例分别为(81.17±3.63)%和(9.86±2.13)%,miR-491mimic组分别为(56.60±1.63)%和(29.91±1.83)%,t值分别为12.482和10.463,均P0.001。结论 miR-491上调促进了ACC细胞增殖、侵袭和迁移能力,miR-491可能在ACC中充当致癌基因。     

乌斯他丁对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231MMP-9的表达及增殖侵袭的影响

[目的]探讨鸟斯他丁对体外培养的乳腺癌细胞MCF-7(雌激素受体阳性)、MDA-MB-231(雌激素受体阴性)MMP-9(基质金属蛋白酶)的表达及增殖侵袭的影响. [方法]将体外培养的乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231分别分为4组:对照组、UTI高、中、低剂量组,分别用相应药物处理.分别检测两种细胞的增殖能力、浸袭能力、MMP-9基因的表达. [结果]鸟斯他丁明显抑制MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖侵袭能力,并能使两种细胞中MMP-9基因的转录水平下降. [结论]鸟斯他丁能抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭作用,并能降低两种细胞MMP-9基因的表达.     

miR-140通过下调Pin1抑制乳腺癌BT549细胞上皮细胞-间充质转化

目的用miR-140模拟物转染三阴型乳腺癌BT549细胞,检测Pin1在乳腺癌细胞系BT549中的表达情况,研究在BT549细胞中miR-140如何通过Pin1发挥对上皮细胞-间充质转化(EMT)的抑制作用。方法用miR-140模拟物(miR-140模拟物组)、miR-140阴性对照(阴性对照组)转染BT549细胞,同时设置未处理组为空白对照组。利用实时PCR法检测不同组BT549细胞中的Pin1 mRNA表达水平;利用Western Blot检测E-钙黏蛋白及Pin1蛋白的表达水平;利用划痕试验研究转染miR-140对BT549侵袭能力的影响。结果划痕后24 h,miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组划痕宽度相对0 h变化的比例分别为23.4%、41.4%和53.1%。与阴性对照组和空白对照组相比,miR-140模拟物组BT549细胞迁移能力明显降低(χ~2=5.550,P0.05;χ~2=6.995,P0.05)。miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组Pin1 mRNA表达水平分别为(0.55±0.02)、(0.89±0.06)和(1.05±0.06)。miR-140模拟物组Pin1 mRNA表达水平显著低于阴性对照组和空白对照组(t=8.823,P0.05;t=11.480,P0.05)。miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组E-钙黏蛋白表达水平分别为(0.98±0.11)、(0.68±0.07)和(0.38±0.04)。miR-140模拟物组E-钙黏蛋白表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(t=7.990,P0.05;t=21.348,P0.05)。miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组Pin1蛋白表达水平分别为(0.57±0.12)、(0.78±0.08)和(1.08±0.21)。miR-140模拟物组Pin1蛋白表达水平显著低于阴性对照组和空白对照组(t=8.921,P0.05;t=18.657,P0.05)。结论 miR-140可以抑制Pin1 mRNA转录,进而降低Pin1蛋白的表达水平,抑制EMT的发生。     

MicroRNA-21与乳腺癌细胞MDA-MB-231放射敏感性之间关系的研究

目的:研究MicroRNA-21与乳腺癌细胞MDA-MB-231放射敏感性之间关系及其表达规律。方法:①对乳腺癌细胞MDA-MB-231分别转染miR-21 mimics、miR-21 mimics Scramble(阴性对照)、miR-21 inhibitor、miR-21 inhibitorScramble(阴性对照),转染后进行集落形成实验,通过存活分数(Surviving Fraction SF)的变化检测其辐射敏感性是否发生变化;②时程实验:3Gy X-Ray照射后,分别于0、4、8、12、24 h后,实时荧光定量PCR检测miR-21的表达;③量效实验:0、1、2、4、6Gy X-Ray分别照射细胞24 h后,实时荧光定量PCR检测miR-21的表达。结果:MDA-MB-231细胞转染miR-21mimics后,SF明显升高,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05);MDA-MB-231细胞转染miR-21 inhibitor后,SF明显降低,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.05);3GyX射线照射乳腺癌细胞株MDA-MB-231后,miR-21表达量上调,与对照组比较差异具有显著性(P<0.05),并在12 h时达到峰值,24 h时恢复到照前水平;miR-21的表达量随着照射剂量的增加而发生变化,2Gy时达到峰值,照射剂量进一步加大,miR-21表达量开始下调,与对照组比较具有显著性差异(P<0.05),6Gy时miR-21表达量明显低于未照射组。结论:miR-21对于增加乳腺癌细胞株MDA-MB-231的辐射抗性具有一定作用。     

Hedgehog信号通路阻断剂Cyclopamine对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭的影响

目的探讨Hedgehog信号通路阻断剂Cyclopamine对人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的影响及其可能的机制。方法 2016年6—12月体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞,用Hedgehog信号通路阻断剂Cyclopamine作用于MDA-MB-231细胞24 h后,分别采用划痕实验和Transwell小室实验检测MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力,ELISA检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达。计量资料组间两两比较采用t检验,P0.05为差异有统计学意义。结果与对照组相比,Cyclopamine能显著抑制实验组MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭,对比差异有统计学意义(P0.05)。Hedgehog信号通路被Cyclopamine阻断后,MDA-MB-231细胞中血管内皮生长因子的表达水平显著下降,对比差异有统计学意义(P0.05)。结论阻断Hedgehog信号通路可以抑制MDA-MB-231细胞的侵袭,其作用机制可能与降低VEGF的表达有关。     

PTEN抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231体外增殖及其机制的探讨

目的:观察PTEN对乳腺癌细胞MDA-MB-231体外增殖和迁移的影响,进一步探讨其可能机制.方法:选用人乳腺癌细胞MDA-MB-231并体外培养,质粒转染技术建立过表达PTEN的稳定细胞株MDA-MB-231/PTEN作为实验组,空载体细胞株MDA-MB-231/pcDNA3.1作为阴性对照组,以未转染细胞为正常对照组,RT-PCR检测各组细胞PTEN的表达水平,MTT法检测各组MDA-MB-231细胞的增殖能力,Transwell小室迁移实验检测各组MDA-MB-231细胞的迁移能力.结果:PTEN在MDA-MB-231/PTEN细胞中表达稳定,且其表达量明显高于阴性对照组和正常对照组,而阴性对照组和正常对照组PTEN表达量差异无统计学意义.转染PTEN基因可显著抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移能力.结论:PTEN与乳腺癌的增殖和迁移有关,对乳腺癌细胞的体外增殖和迁移能力起到抑制作用.     

Parkin蛋白抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的有氧糖酵解和增殖迁移

目的 评估Parkin蛋白对乳腺癌MDA-MB-231细胞有氧糖酵解和生长增殖的影响。方法 首先采用Western blot检测Parkin蛋白在人乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达。随后构建高表达Parkin的乳腺癌MDA-MB-231细胞株为实验组,以转染空载体的MDA-MB-231细胞为对照组,分别采用葡萄糖、乳酸和ATP检测试剂盒检测两组细胞葡萄糖摄取量,乳酸和ATP生成量,并通过Western blot检测糖酵解相关蛋白GLUT1、PKM2和LDHA表达水平;运用细胞增殖实验、平板克隆及细胞划痕实验评估细胞的增殖和迁移能力;采用Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和cleaved Caspase-3的表达水平。结果 与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-231细胞Parkin蛋白表达水平显著下降（P<0.01）。高表达Parkin可使乳腺癌MDA-MB-231细胞的葡萄糖摄取和乳酸生成下降,ATP水平上升（P<0.05）,其增殖和迁移能力下降（P<0.01）;与对照组相比,Parkin组细胞糖酵解相关蛋...     

氯胺酮对乳腺癌细胞迁移及NET-1、RhoA表达的影响

目的探究氯胺酮对乳腺癌细胞迁移及神经上皮细胞转化基因1(NET-1)、RHo A表达的影响。方法以乳腺癌细胞系MDA-MB-231为研究对象,根据于培养基中添加不同浓度的氯胺酮分为4组:空白对照组(0μg/ml)、氯胺酮低剂量组(5μg/ml)、氯胺酮中剂量组(10μg/ml)、氯胺酮高剂量组(20μg/ml);采用Transwell迁移实验及细胞划痕实验观察各组细胞迁移情况;应用荧光实时定量PCT(qRT-PCR)检测各组乳腺癌MDA-MB-231细胞中NET-1、RhoA基因表达情况;应用蛋白免疫印记(Western blot)法检测各组乳腺癌MDA-MB-231细胞中NET-1、RhoA蛋白表达情况。结果与空白对照组相比,氯胺酮组MDA-MB-231细胞的迁移数目明显降低(P0.05),且随着氯胺酮剂量的增加,迁移数目逐渐降低;与空白对照组相比,氯胺酮组MDA-MB-231细胞的迁移超出划痕部分明显减少(P0.05),且随着氯胺酮剂量的增加,迁移部分逐渐减少;与空白对照组相比,氯胺酮组MDA-MB-231细胞中NET-1、RhoA基因及蛋白的表达水平均显著下调(P0.05),且随着氯胺酮剂量的增加,NET-1、RhoA基因的表达及蛋白表达水平均逐渐下调。结论氯胺酮可能通过下调NET-1、RhoA基因及蛋白的表达,抑制乳腺癌细胞的迁移,达到治疗或缓解乳腺癌病症的目的。     

miR-26b调控MCF-7细胞MCL-1蛋白的表达并诱导凋亡

目的探讨microRNA-26b(miR-26b)的作用靶点及其对MCF-7细胞的抑制作用。方法通过荧光定量PCR方法及Western blot方法检测正常乳腺细胞系MCF-10A及乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231及MDAMB-435的miR-26b及MCL-1的表达水平。MTT法检测miR-26b转染对MCF-7细胞活力的影响,Annexin V/PI染色法检测miR-26b转染对MCF-7细胞凋亡的影响。通过生物信息学分析预测miR-26b的靶基因,并将miR-26b转染入MCF-7细胞,检测miR-26b对MCL-1表达水平的影响。结果相比于MCF-10A细胞,乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231及MDA-MB-435的miR-26b表达水平均显著下降,同时MCL-1表达水平均显著上升,提示miR-26在乳腺癌中其肿瘤抑制作用可能调节细胞MCL-1的表达。进一步研究发现MCL-1基因的3'-UTR区存在miR-26b的假定结合位点,且在乳腺癌细胞中转染miR-26b后,MCL-1的表达下降。转染miR-26b可抑制MCF-7细胞的活力并诱导其发生凋亡。结论 miR-26b下调MCF-7细胞MCL-1蛋白的表达并诱导其发生凋亡。     

miR-181b靶向鼠双微体-2对宫颈癌Caski细胞侵袭、迁移的影响及机制

目的探讨miR-181b靶向鼠双微体-2 (MDM2)对宫颈癌Caski细胞侵袭、迁移的影响及机制。方法应用RTPCR检测宫颈癌组织miR-181b mRNA表达,RT-PCR及免疫组化法检测MDM2表达。用miRcramble、miR-181b mimics、阴性对照siRNA (NC组)及靶向抑制MDM2的si NRA (si-MDM2)转染人宫颈鳞癌Caski细胞,通过转染miR-181b mimics后MDM2表达及转染si-MDM2后miR-181b表达检测初步证实miR-181b与MDM2的靶向关系,miR-NC、Wt-MDM2+miR-181b mimics和Mut-MDM2+miR-181b mimics共转染后双荧光素酶活性检测确定MDM2是否为miR-181b的靶基因。应用Transwell小室检测过表达miR-181b或抑制MDM2表达后Caski细胞侵袭及迁移能力,应用Western blotting检测MDM2、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、STAT3及p-STAT3的蛋白表达。结果 miR-181b在宫颈癌中的表达显著低于正常宫颈组织(P0. 05),MDM2在宫颈癌中的表达显著高于正常宫颈组织(P0. 05)。MDM2是miR-181b的靶基因。miR-181b mimics和si-MDM2均可抑制Caski细胞侵袭及迁移能力,下调MMP-2、MMP-9和p-STAT3的蛋白表达(P0. 05)。结论 miR-181b可靶向MDM2抑制宫颈癌Caski细胞侵袭及迁移能力,机制与下调STAT3信号有关。     

OPN反义基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移能力的影响

目的:探讨OPN反义基因(ANOPN)对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞生长及迁移能力的影响。方法:构建人骨桥蛋白反义基因真核表达质粒pcDNA3.1-ANOPN,将质粒pcDNA3.1-ANOPN、空载体pcDNA3.1(+)和等量的脂质体分别转染人乳腺癌细胞系MDA-MB-231,将转染细胞分别命名为MDA-ANOPN、MDA-vect和MDA,在体外观察各组细胞的迁移能力。结果:MDA-MB-231细胞比MDA-vect及MDA细胞迁移能力弱(P<0.01)。结论:ANOPN可抑制人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的迁移能力。     

miR-125a-5p在人乳腺癌细胞侵袭和转移中的作用机制研究

目的探讨miR-125a-5p在人乳腺癌细胞侵袭与转移中的作用机制。方法采用荧光定量PCR检测人乳腺细胞MCF-10A和乳腺癌细胞中miR-125a-5p的表达量,利用瞬时转染技术将过表达质粒转染到MDA231中,检测miR-125a-5p质粒在乳腺癌MDA231、MCF-7细胞中的转染效率,利用趋化运动实验与Transwell侵袭试验检测趋化运动能力和运动能力。结果人乳腺癌淋巴结转移、组织分期及雌激素受体均与miR-125a-5p表达水平有关,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-125a-5p在MDA231和MCF-7中表达量较MCF-10A中低,差异有统计学意义(P<0.05);MDA231与MCF-7相比,MDA231中表达量更低,差异有统计学意义(P<0.05)。GAB2在MDA231/miR-125a-5p细胞组的表达量低于MDA231组和MDA231/NC组,差异均有统计学意义(P<0.05);在AntimiR-125a-5p/MCF-7组中的表达量高于AntiNC/MCF-7和MCF-7组,差异均有统计学意义(P<0.05)。穿过基质胶...     

双歧杆菌完整肽聚糖对结肠癌细胞株SW480上皮-间质转化的调控作用研究

目的研究双歧杆菌完整肽聚糖(whole peptidoglycan,WPG)对结肠癌细胞株SW480上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)、侵袭和迁移能力的调控作用,阐明WPG抑制结肠癌细胞EMT从而影响肿瘤转移的分子机制。方法常规培养结肠癌细胞株SW480,分为NC组(阴性对照组)、EMT组(TGF-β1诱导EMT组)、EMT+WPG组、WPG组。给予WPG(116μg/ml)孵育48 h后,western-blot法检测EMT相关标志蛋白E-cadherin、Vimentin及转移相关蛋白MMP-2、MMP-9的表达,transwell检测细胞的侵袭及转移能力。结果 TGF-β1诱导SW480细胞中EMT发生。与NC组相比,EMT组E-cadherin、MMP-2、MMP-9表达升高(P=0.004 8、0.002 6、0.000 4),而Vimentin表达降低(P=0.000 7),且增加了SW480细胞的侵袭(P=0.001 3)及迁移数量(P0.01);经WPG处理后(EMT+WPG组)E-cadherin、MMP-2、MMP-9表达降低(P=0.013、0.031 5、0.000 9),而Vimentin表达升高(P=0.000 1),且细胞侵袭(P=0.012 1)及迁移数量减少(P0.01)。单纯给予WPG对SW480细胞中E-cadherin、Vimentin、MMP-2、MMP-9表达及对细胞侵袭及迁移无影响(P=0.518、0.238、0.281、0.315 3)。结论双歧杆菌完整肽聚糖能抑制结肠癌细胞株SW480的EMT进程,降低结肠癌细胞的侵袭及转移能力。     

利多卡因抑制乳腺癌和前列腺癌细胞侵袭的作用和机制研究

目的 研究利多卡因对乳腺癌和前列腺癌细胞侵袭、迁移的作用及作用机制。方法 不同浓度利多卡因处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞和前列腺癌PC-3细胞。采用MTT试验测定细胞活力,划痕实验评估细胞迁移距离,Transwell试验检测细胞侵袭能力。同时,使用Fluo-3 AM荧光探针对细胞内游离 Ca2+([Ca2+]i)进行测量,并测定各细胞中瞬时受体电位阳离子通道亚家族V成员6(TRPV-6)mRNA和蛋白质的表达水平。结果 划痕试验及Transwell侵袭试验结果显示:与0μM利多卡因相比,100μM、1mM利多卡因处理后对MDA-MB-231、PC-3癌细胞迁移(MDA-MB-231:q100μM=4.549,q1mM =6.675;PC-3:q100μM =3.618,q1mM=5.992)、侵袭(MDA-MB-231:q100μM=3.480,q1mM =4.156;PC-3:q100μM =4.828,q1mM=7.331)均存在抑制作用。Fluo-3 AM染色后发现100μM、1mM处理的MDA-MB-231、PC-3 的[Ca2+]i下降(P<0.05)。qPCR与Western blot结果显示,100μM、1mM利多卡因处理后,两类癌细胞中的TRPV-6 mRNA及蛋白表达含量均降低(P＜0.05)。结论 利多卡因在低于临床浓度的情况下可抑制MDA-MB-231,PC-3细胞的侵袭和迁移,此机制可能与钙流入速率及TRPV-6表达下调相关。     

miR-103对鼻咽癌SUNE1细胞生物学行为的影响

目的 探讨miR-103对鼻咽癌SUNE1细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 采用脂质体转染试剂将miR-103 mimic、miR-103 NC、miR-103 inhibitor瞬时转染至SUNE1细胞,RT-PCR检测miR-103的转染效率,CCK-8实验检测其细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞的迁移能力和侵袭能力,流式细胞术检测其细胞凋亡能力,Western blot检测相关蛋白表达水平。结果 与SUNE1组相比,miR-103 mimic组的miR-103表达量升高,miR-103 inhibitor组的miR-103表达量降低;在48 h和72 h时,miR-103 mimic组细胞生长速率均明显升高,miR-103 inhibitor组生长速率明显降低;miR-103 mimic组细胞迁移能力和侵袭能力均显著提升,而miR-103 inhibitor组均显著减弱;在miR-103 mimic组中vimentin蛋白的表达升高、PARP-1蛋白的表达降低,在miR-103 inhibitor组中vimentin和cyclinD1蛋白的表达降低,PARP-1蛋...