miR-30c-5p通过调节Notch1的表达抑制人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo的迁移、侵袭和管状形成

目的：探讨miR-30c-5p通过调节Notch1表达对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭和管状形成调控的机制,确定其在子痫前期发病中的潜在作用。方法：在体外对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo进行培养,慢病毒系统构建miR-30c-5p过表达及敲低稳转HTR-8/SVneo细胞系。分为对照组、导入miR-30c-5p过表达质粒组和导入miR-30c-5p敲低质粒组。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-30c-5p和Notch1基因的表达量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞中Notch1蛋白的表达量,划痕愈合实验、Transwell侵袭实验和管状形成实验分别检测各组细胞的迁移、侵袭和管状形成能力。结果：与对照组比较,miR-30c-5p过表达质粒组中细胞的miR-30c-5p基因表达水平升高(P<0.0001),细胞Notch1蛋白表达水平下降(P<0.01),细胞迁移(P<0.01)、侵袭(P<0.001)和管状形成能力(P<0.05)均受到抑制。反之,miR-30c-5p敲低质粒组中细...     

miR-1246负向调控PLAC1表达对妊娠期糖尿病患者滋养细胞生物学行为的影响

目的探讨微小RNA-1246(miR-1246)在妊娠期糖尿病(GDM)患者胎盘组织中的表达及其对滋养细胞生物学行为的影响与作用机制。方法收集慈溪市人民医院2017年8月-2019年6月收治的50例GDM患者和50例正常孕妇胎盘组织,采用荧光定量PCR分析胎盘组织中miR-1246与胎盘特异性基因1(PLAC1)mRNA的表达情况,采用免疫组织化学染色法检测PLAC1蛋白表达。脂质体技术体外转染miR-1246模拟物、抑制物及阴性对照(NC)至人滋养层细胞系HTR-8/SVneo,通过CCK-8法、细胞划痕实验、Transwell小室实验及Annexin V-FITC/PI实验分别观察其对细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。采用生物信息学、双荧光素酶报告基因实验及蛋白质印迹分析miR-1246与PLAC1的靶向关系。结果 miR-1246在GDM患者胎盘组织中表达量显著高于健康胎盘组织(P0.01),而PLAC1 mRNA与蛋白在GDM胎盘组织中表达水平显著低于健康胎盘组织中的表达水平(P0.01)。体外转染miR-1246模拟物过表达miR-1246后,可明显抑制HTR-8/SVneo细胞的增殖、侵袭及迁移并促进细胞凋亡(P0.01)。而体外转染miR-1246抑制物抑制miR-1246后,可明显促进HTR-8/SVneo细胞的增殖、侵袭及迁移并抑制细胞凋亡(P0.01)。PLAC1的3'-非编码区(3'-UTR)存在于miR-1246结合序列,miR-1246能够明显降低PLAC1-WT荧光素酶的活性(P0.05)。转染miR-1246模拟物可显著降低PLAC1的蛋白表达水平,而转染miR-1246抑制物结果与此相反(P0.05)。结论 miR-1246在GDM患者胎盘组织中呈现高表达,抑制miR-1246可显著促进胎盘细胞的增殖、迁移及侵袭并抑制其凋亡,miR-1246可能通过负调控PLAC1参与GDM的病理机制。     

阿司匹林对缺氧诱导人HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡及sFlt-1、HIF-1α表达的影响

目的：探讨阿司匹林对缺氧诱导人HTR-8/SVneo滋养细胞凋亡及可溶性类fms酪氨酸激酶-1(sFLT-1)、低氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响。方法：人HTR-8/SVneo滋养细胞分为正常对照组、缺氧模型组(2%O₂、5%CO₂、93%N₂)、阿司匹林低(0.05mmol/L)、中(0.1mmol/L)、高剂量组(0.2mmol/L);培养结束后，MTT法测定细胞活力，流式细胞仪测定细胞凋亡水平及细胞周期，血清培养基基质胶培养测定细胞血管形成能力，RT-PCR法及蛋白印记法测定细胞sFlt-1、HIF-1α水平。结果：缺氧模型组OD值、存活率、血管形成能力、HIF-1α mRNA和蛋白表达均低于正常对照组及阿司匹林各剂量组，但随着阿司匹林剂量增上述各指标逐渐降低；缺氧模型组凋亡率、G1期、sFlt-1 mRNA和蛋白表达均高于正常对照组和阿司匹林各剂量组，但随着阿司匹林剂量增加凋亡率、G1期、sFlt-1 mRNA和蛋白表达逐渐升高(均P<0.05)。结论：低剂量阿司匹林可促进缺氧环境下HTR-8/S...     

二苯甲酮-3对绒毛外滋养层细胞的增殖及miR-17-92基因簇表达的影响

目的研究二苯甲酮-3(benzophenone-3,BP-3)对绒毛外滋养层(HTR-8/Svneo)细胞的增殖及miR-17-92基因簇表达的影响。方法将HTR-8/Svneo细胞分别暴露于含终浓度0(溶剂对照)、0.01、0.1、1 mg/L BP-3的培养基中培养24 h。采用CCK-8法检测细胞活性,采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,采用Real-time PCR方法检测细胞miR-17-92基因簇的表达水平。结果与溶剂对照组相比,1 mg/L BP-3染毒组HTR-8/Svneo细胞的存活率和miR-17、miR-19a mRNA的表达水平均降低,差异有统计学意义(P0.05);而各剂量BP-3染毒组HTR-8/Svneo细胞的凋亡率及miR-18a、miR-19b、miR-20a、miR-92a mRNA的表达水平均无明显变化。且随着BP-3染毒剂量的升高,HTR-8/Svneo细胞的存活率呈下降趋势,凋亡率呈上升趋势。与抑制剂对照组相比,抑制miR-17和miR-19a表达后HTR-8/Svneo细胞存活率均降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 BP-3可通过抑制miR-17-92簇中miR-17、miR-19a的表达,抑制HTR-8/Svneo细胞增殖。     

姜黄素抗辐射诱导内皮细胞凋亡信号的转导机制

目的 探讨姜黄素对辐射诱导血管内皮损伤保护作用及其信号转导机制.方法 对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分离培养后分组以直线加速器进行6 Gyβ线照射,并设未照射组为对照.分别通过光镜及电子显微镜观察细胞形态和超微结构改变;流式细胞仪法观察各组的凋亡率和坏死率;Western blot法检测各组ERK1/2、p-ERK1/2表达;给以MEK1/2通路的特异性阻断剂U0126处理后检测各组细胞凋亡情况.结果 细胞经照射后,形态及超微结构改变均显示为典型的凋亡改变,而姜黄素预处理组的细胞凋亡率和坏死率均明显低于其他实验组,差异有统计学意义(P＜0.05).姜黄素组ERK1/2.p-ERK 1/2表达高于对照组,加入U0126后HUVEC凋亡率明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 放射线照射可导致HUVEC凋亡和坏死,姜黄素对放射后HUVEC凋亡和坏死有保护作用,并且这种保护作用与MEK1/2信号通路激活有关.     

H2O2诱导建立HTR-8/SVneo胎盘滋养细胞氧化应激模型

目的通过观察不同浓度过氧化氢(H2O2)对人胎盘滋养层细胞HTR-8/SVneo处理不同时间后的氧化应激状态,探讨建立H2O2诱导HTR-8/SVneo胎盘滋养细胞氧化损伤模型的最佳条件。方法2017年11月至2018年2月于西安交通大学第一附属医院进行实验研究。将HTR-8/SVneo细胞实验组分别给予不同终浓度的H2O2(50、150、300、500μmol/L),同时设立对照组,相同实验条件下分别继续培养1、3、6、12h,随后对此进行细胞存活率、细胞形态学观察,对超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、过氧化氢酶(CAT)测定,流式细胞仪分析活性氧自由基(ROS)水平和细胞凋亡的水平。结果与对照组比较,300μmol/L 3h经H2O2处理后可降低HTR-8/SVneo细胞的存活率(P=0.00<0.01),而且提高了LDH的释放,促使了SOD、CAT活性的下降和MDA含量的增加(P=0.00<0.01)。300μmol/L3h经H2O2处理后增加了细胞的凋亡率(P=0.00<0.01)及细胞内ROS水平(P=0.00<0.01)。同时,300μmol/L3h经H2O2处理后可明显促进细胞的形态学改变。结论通过H2O2可以成功建立HTR-8/SVneo氧化应激损伤细胞模型,最佳实验条件为300μmol/L H2O2处理3h。     

miR-140通过下调Pin1抑制乳腺癌BT549细胞上皮细胞-间充质转化

目的用miR-140模拟物转染三阴型乳腺癌BT549细胞,检测Pin1在乳腺癌细胞系BT549中的表达情况,研究在BT549细胞中miR-140如何通过Pin1发挥对上皮细胞-间充质转化(EMT)的抑制作用。方法用miR-140模拟物(miR-140模拟物组)、miR-140阴性对照(阴性对照组)转染BT549细胞,同时设置未处理组为空白对照组。利用实时PCR法检测不同组BT549细胞中的Pin1 mRNA表达水平;利用Western Blot检测E-钙黏蛋白及Pin1蛋白的表达水平;利用划痕试验研究转染miR-140对BT549侵袭能力的影响。结果划痕后24 h,miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组划痕宽度相对0 h变化的比例分别为23.4%、41.4%和53.1%。与阴性对照组和空白对照组相比,miR-140模拟物组BT549细胞迁移能力明显降低(χ~2=5.550,P0.05;χ~2=6.995,P0.05)。miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组Pin1 mRNA表达水平分别为(0.55±0.02)、(0.89±0.06)和(1.05±0.06)。miR-140模拟物组Pin1 mRNA表达水平显著低于阴性对照组和空白对照组(t=8.823,P0.05;t=11.480,P0.05)。miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组E-钙黏蛋白表达水平分别为(0.98±0.11)、(0.68±0.07)和(0.38±0.04)。miR-140模拟物组E-钙黏蛋白表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(t=7.990,P0.05;t=21.348,P0.05)。miR-140模拟物组、阴性对照组和空白对照组Pin1蛋白表达水平分别为(0.57±0.12)、(0.78±0.08)和(1.08±0.21)。miR-140模拟物组Pin1蛋白表达水平显著低于阴性对照组和空白对照组(t=8.921,P0.05;t=18.657,P0.05)。结论 miR-140可以抑制Pin1 mRNA转录,进而降低Pin1蛋白的表达水平,抑制EMT的发生。     

GLP-1介导PI3K/Akt通路拮抗AOPP诱导HTR-8/SVneo细胞凋亡的作用

目的:探究磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路在胰高血糖素样肽链-1(GLP-1)拮抗晚期氧化蛋白产物(AOPP)诱导妊娠滋养细胞凋亡的保护作用机制。方法:体外培养妊娠滋养细胞HTR-8/SVneo,将细胞分为对照组、AOPP组、GLP-1组、AOPP+GLP-1组、AOPP+GLP-1+LY294...     

苯并芘代谢产物BPDE的细胞毒性研究及五味子乙素在预防HTR-8/SVneo细胞损伤中的作用

目的:探讨苯并芘[Benzo(a)pyrene,BaP]代谢产物二氢二醇环氧苯并芘[7,8 dihydrodiol 9,10epoxidebenzo(a)pyrene,BPDE]对人绒毛膜外滋养细胞株HTR-8/SVneo的毒性效应及五味子乙素(Schisandrin B,Sch B)对BPDE诱导的HTR8/SVneo细胞损伤的保护作用。方法:以HTR-8/SVneo细胞为载体,构建BPDE对HTR-8/SVneo细胞的染毒模型和Sch B对HTR-8/SVneo细胞的保护模型,利用MTS细胞增殖实验检测不同浓度的BPDE单独给药和Sch B联合BPDE给药对HTR-8/SVneo细胞增殖的影响。结果:5μmol/L BPDE即可使细胞活力显著下降,活细胞数仅占总细胞数的38.23%。经不同浓度的Sch B(0.625、1.25、2.5、5、10和20μmol/L)预处理后再以BPDE干预,细胞活力较前明显上升,分别为40.11%、42.68%、46.47%、47.34%、61.37%和49.87%,其保护作用在0.625～10μmol/L之间呈浓度依赖关系。结论:BPDE对HTR-8/SVneo细胞产生剂量依赖的毒性效应;Sch B(0.625～10μmol/L)对BPDE诱导的细胞损伤有保护作用。     

枸杞多糖对H_2O_2诱导的肾小管细胞损伤的保护作用

目的人肾小管细胞株HK-2在过氧化氢(H_2O_2)的作用下发生损伤,分析加入枸杞多糖(LBP)后其损伤的变化和作用机制。方法将HK-2细胞随机分成4组,每组设6个重复孔,采用不同的方法进行孵育。正常组:培养液;H_2O_2组:浓度为0.10 mmol/L H_2O_2的培养液;LBP组:浓度为100μg/mL LBP的培养液;LBP+H_2O_2组:提前加入LBP孵育1 h后再加入H_2O_2继续孵育30 min。倒置显微镜下观察每组细胞的形态变化;流式细胞仪测定每组细胞的凋亡率;测定各组细胞中丙二醛(MDA)的量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。结果 H_2O_2组:与正常组比较,细胞的形态变圆,贴壁减少,细胞的凋亡率上升[(52.44±1.90)%],LBP组和正常组差异无统计学意义(P0.05),MDA水平增加[(8.95±0.21)μmol/L]而SOD活性减少[(2.26±0.27)KU/g Pro],差异均有统计学意义(均P0.05);LBP+H_2O_2组:与H_2O_2组比较,细胞的形态和贴壁量多均有所恢复,细胞凋亡率显著下降[(33.96±1.53)%],MDA水平减少[(4.95±0.21)μmol/L],SOD活性增加[(3.53±0.31)KU/g Pro],差异均有统计学意义(均P0.05)。结论人肾小管细胞在H_2O_2的作用下发生凋亡,LBP能减少其凋亡率,这与LBP增加细胞中SOD的活性而减少MDA含量密切相关。     

Notch1基因沉默对滋养细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨Notch1基因沉默后对滋养细胞增殖与凋亡生物学功能的影响。方法:构建Notch1蛋白基因干扰质粒,体外培养人早孕期胎盘绒毛膜外滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞进行转染。应用实时荧光PCR计数检测转染后Notch1 mRNA相对表达水平,CCK-8检测细胞转染后活性情况,Western blotting检测Bcl-2凋亡蛋白家族表达情况。结果:同未转染组相比,空白质粒转染组与基因沉默组mRNA相对表达水平分别为0.97±0.03、0.31±0.10,基因沉默组mRNA表达与其它两组差异有统计学意义(P<0.05)。Notch1基因沉默组同空白质粒转染组相比细胞活性明显下降(P<0.05),同时Notch1基因沉默组抗凋亡蛋白Bcl-2表达较空白质粒转染组明显降低(P<0.05),而促凋亡蛋白Bax表达明显增加(P<0.05)。结论:Notch1基因可通过调节Bcl-2凋亡蛋白家族参与滋养细胞增殖与凋亡过程,是胎盘形成发展过程中的正向调节因子。     

柚皮苷对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞损伤保护作用

目的探讨柚皮苷对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞凋亡的保护作用及机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,用H_2O_2诱导建立细胞凋亡模型。实验设对照组、模型组、柚皮苷低、中、高剂量组(10、20、40μmol/L),噻唑蓝法检测细胞活力并用显微镜观察各组细胞形态;原位末端标记法检测H9c2心肌细胞凋亡情况;RT-PCR及Western blot法检测凋亡相关因子Bcl-2、Bax、caspase-3 m RNA及蛋白表达。结果与对照组比较,模型组细胞凋亡率[(17.2±2.1)%]明显升高(P<0.01);与模型组比较,10、20、40μmol/L柚皮苷组细胞凋亡率[分别为(10.7±1.9)%、(5.7±1.2)%、(6.4±1.5)%]均下降(均P<0.05)。与对照组比较,模型组H9c2心肌细胞Bcl-2蛋白表达水平(0.76±0.16)明显下调,Bax、caspase-3蛋白表达水平[分别为(5.42±0.52)、(1.09±0.11)]均上调(均P<0.01);与模型组比较,10、20、40μmol/L柚皮苷组H9c2心肌细胞Bcl-2蛋白表达水平[分别为(1.37±0.11)、(1.65±0.09)、(1.65±0.15)]均上调,Bax、caspase-3蛋白表达水平[分别为(2.78±0.55)、(3.43±0.15)、(2.69±0.26)和(0.59±0.08)、(0.77±0.06)、(0.82±0.05)]均下调(均P<0.05)。结论柚皮苷对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞损伤具有一定保护作用,其机制可能与其对凋亡信号途径的抑制作用有关。     

丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在电磁辐射诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导系统的差别激活与电磁辐射诱导PC12细胞凋亡的关系.方法 经MAPK特异性抑制剂SB203580、U0126预处理的PC12细胞接受65mW/cm2电磁波辐照20min,在辐照后3、24h2个观察时相点,采用蛋白质免疫印迹方法检测ERK1/2、JNK、P38 MAPK蛋白质磷酸化水平,采用Annexine-V-FITC标记流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率.结果 电磁辐射后,PC12细胞ERK1/2的激活可以被U0126明显抑制,而SB203580对其无抑制作用.U0126和SB203580对辐照后JNK的活性无明显影响.SB203580可以明显抑制P38 MAPK的激活,而U0126对P38 MAPK激活的抑制作用不明显.SB203580可以明显减轻电磁辐射诱导的PC12细胞凋亡,而U0126预处理对细胞凋亡无明显影响.结论 电磁辐射诱导PC12细胞凋亡主要通过P38 MAPK信号通路的激活调控,而ERK通路对电磁辐射诱导的细胞凋亡无明显影响,JNK可能对辐照后早期的细胞凋亡有一定促进作用.     

粗壮女贞对氧化损伤血管内皮细胞的保护作用

目的研究粗壮女贞对双氧水损伤人血管内皮细胞的保护作用。方法不同浓度H_2O_2处理HUVEC细胞构建氧化损伤模型,将细胞分为正常组、H_2O_2损伤组和不同浓度粗壮女贞组。采用CCK-8法测各组细胞活性,并测定各组细胞LDH、SOD、CAT、MDA和GSH-Px的活性。结果 500μmol/L H_2O_2为构建氧化损伤HUVEC细胞模型的最适浓度。粗壮女贞在测试浓度下对细胞不具有毒性作用。与H_2O_2损伤组相比,粗壮女贞干预组细胞存活率明显增加(P0.05);粗壮女贞干预组LDH、MDA活性明显降低(P0.05);SOD、CAT、GSH-Px活性明显增加(P0.05)。结论粗壮女贞对氧化损伤的HUVEC细胞具有保护效应。     

枸杞多糖对氧化应激损伤人子宫内膜上皮细胞的保护作用

目的探讨枸杞多糖(LBP)对过氧化氢(H_2O_2)诱导的人子宫内膜上皮细胞(Human endometrial epithelium cells,EECs)损伤的影响。方法实验分4组,正常对照组:正常细胞培养,不添加任何药物;H_2O_2对照组:人子宫内膜上皮细胞中加入0.10 mmol/L H_2O_2;LBP对照组:细胞中加入100μg/ml LBP;LBP+H_2O_2组:细胞先用LBP作用1 h,再加入H_2O_2共同培养30 min。MTT比色法检测各组细胞活力;用比色法检测细胞培养液中过氧化物丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活力;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果 H_2O_2组的EECs存活率降低(52.40±1.31)%,细胞凋亡率增加(45.20±1.32)%,EECs释放MDA的量升高(8.13±1.56)μg/ml,而SOD的活力降低(2.11±0.74)k U/g Pro,与正常对照组相比,其差异有统计学意义(P0.01);与H_2O_2组相比,LBP+H_2O_2组的EECs存活率升高(95.20±8.25)%,细胞凋亡率减少(15.66±0.26)%,EECs释放MDA的量增加(4.32±1.34)μg/ml,而SOD的活力升高(3.33±0.91)k U/g Pro,其差异有统计学意义(P0.01)。结论 LBP能抑制H_2O_2诱导的子宫内膜上皮细胞损伤,对子宫内膜上皮细胞具有明显的保护作用。     

枸杞多糖抑制过氧化氢诱导的子宫内膜间质细胞的凋亡作用

目的通过采用过氧化氢(H_2O_2)诱导人子宫内膜间质细胞(ESCs)凋亡,探讨经过枸杞多糖(LBP)干预后对其凋亡的抑制作用及其机制的研究。方法体外分离、培养ESCs,将其分为4组:正常组:常规培养;H_2O_2组:培养液中加入H_2O_2;LBP组:培养液中加入100μg/ml LBP;LBP+H_2O_2组:LBP先作用1 h后再加入H_2O_2共培养30 min。流式细胞仪分析各组细胞的凋亡率;用比色法检测细胞培养液中丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性;免疫细胞化学法检测细胞质中Bax和bcl-2的水平。结果与正常组相比,H_2O_2组细胞凋亡率增加(50.35±1.83),MDA的含量升高[(8.67±0.63)μmol/L]而SOD的活性降低[(2.09±0.59)KU/g Pro],细胞中Bax表达上调(60.45±7.63)而bcl-2的表达下调(23.59±2.67),其差异有统计学意义(P0.05);与H_2O_2组相比,LBP+H_2O_2组细胞凋亡率明显降低(34.63±1.32),MDA含量下降[(4.58±0.41)μmol/L],SOD活性上升[(3.36±0.41)KU/g Pro],细胞中Bax表达下调(30.65±5.42)而bcl-2的表达上调(53.42±6.39),其差异有统计学意义(P0.05)。结论LBP对H_2O_2导致的ESCs凋亡有抑制作用,其机制是通过提高ESCs中SOD的活性而降低MDA的含量、上调bcl-2并下调Bax的表达水平。     

左卡尼汀对过氧化氢诱导血管内皮细胞氧化应激损伤的影响

目的研究左卡尼汀(L-Ca)对过氧化氢(H_2O_2)诱导人脐静脉内皮(EA.hy926)细胞氧化应激损伤的影响,为探讨L-Ca的心血管保护作用提供理论和实验依据。方法采用750μmol/L H_2O_2作用12 h建立血管内皮细胞氧化应激损伤模型。实验共分为5组:对照组、模型组(H_2O_2组)及L-Ca低、中、高剂量(0.5、1、2 mmol/L)干预组。采用CCK-8法检测细胞活力,检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量,用Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡情况,运用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术分析细胞凋亡水平,qRT-PCR法分析Caspase-9、Caspase-3 mRNA转录水平;用Western blot法对Bcl-2、Bax及Cleaved Caspase-3蛋白表达水平进行分析。采用SPSS 25.0软件进行单因素方差分析和LSD-t检验。结果与对照组相比,模型组细胞活力较低,上清液LDH含量、细胞凋亡率较高,Caspase-9、Caspase-3 mRNA及Cleaved Caspase-3蛋白表达水平较高,Bcl-2/Bax蛋白比值较低;与模型组相比,L-Ca低、中、高剂量组细胞活力均明显升高,上清液LDH含量、细胞凋亡率均显著降低,Caspase-9、Caspase-3 mRNA相对表达量均明显下降,Bcl-2/Bax比值均升高,Cleaved Caspase-3蛋白表达水平均降低,且均有剂量依赖关系,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 L-Ca能够减轻H_2O_2对血管内皮细胞损伤,提高细胞活力,减少细胞凋亡,其机制可能与抑制Caspase-9和Caspase-3级联反应,上调Bcl-2/Bax蛋白比值有关。     

miR-377在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌细胞增殖、侵袭和EMT的影响

目的 观察miR-377在宫颈癌组织和细胞中的表达,探讨miR-377对宫颈癌发展的影响。方法 检测miR-377在宫颈癌组织和Hela、SiHa和Caski细胞、H8细胞中的表达;过表达或下调miR-377后,CCK-8、细胞侵袭实验、Western blot和细胞划痕愈合实验分别检测miR-377对Hela细胞增殖、侵袭、上皮间质转化(EMT)和迁移能力的影响。下调CUL4A表达后,检测Hela细胞增殖、侵袭、迁移和EMT;Western blot检测过表达CUL4A对cAMP/PKA通路的影响。结果 miR-377在宫颈癌组织的表达(0.58±0.24)低于癌旁正常组织(1.05±0.35),miR-377在宫颈癌Hela、Siha和Caski细胞中的表达(0.36±0.09、0.72±0.18、0.75±0.37)低于H8细胞(1.43±0.28),差异均有统计学意义(P<0.01)。过表达miR-377抑制了Hela细胞增殖、侵袭、迁移与EMT,下调miR-377则起到相反作用。miR-377靶向和负调控CUL4A,下调CUL4A抑制了Hela细胞发展;过表达CUL4A...     

青石棉诱导BEAS-2B细胞ERK1/2磷酸化表达的研究

目的 了解青石棉在致癌过程中引起信号转导蛋白变化的特点.方法 使用人呼吸道上皮细胞株（human bronchial epithelial cell line,BEAS-2B）体外培养,以终浓度100 μg/ml的青石棉和100nmoL/L表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）分别刺激BEAS-2B细胞30和120min,使用特异性抗磷酸化细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinase,ERK1/2）、ERK激酶（ERK kinase,MEK1/2）和抗总ERK1/2、MEK1/2抗体进行Western免疫印迹,检测相应的蛋白表达水平.结果 青石棉刺激BEAS-2B细胞30 min后,可诱导磷酸化ERK1/2的快速高表达,且此高表达可持续至120 min,与对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;EGF作为诱导磷酸化ERK1/2的阳性刺激物,在30和120 min两时段内均可诱导ERK1/2的激活,与对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;任何时间段刺激BEAS-2B,在对照、青石棉和EGF组间,总ERK1/2表达差异无统计学意义（P＞0.05）.青石棉刺激BEAS-2B细胞30、120 min后,可诱导磷酸化MEK1/2的快速高表达,与对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 青石棉可快速诱导BEAS细胞产生磷酸化ERK1/2、MEK1/2蛋白的高表达,提示MAPKs参与了青石棉所致疾病的过程.     

α-硫辛酸对氧化损伤大鼠肝细胞及代谢酶影响

目的 探讨α-硫辛酸(α-liplic acid,α-LA)对过氧化氢(H_2O_2)氧化损伤的大鼠肝细胞及糖代谢酶的影响.方法 分别将50,100,200 μmol/Lα-LA作用于大鼠肝细胞24 h后,用H_2O_20.2 moVL损伤1 h,分别检测细胞活力、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和丙二醛(MDA)、细胞中葡萄糖激酶(GK)、糖原合成酶激酶-3(GSK-3)的含量.结果 α-LA各剂量组GsH-Px活力与SOD活性分别为141.552～208.171和10.852～13.151U/(mg·prot),均高于H_2O_2损伤组(P<0.05).α-LA各剂量组MDA含量为12.064～14.142 nmol/(mg·prot),明显低于H_2O_2损伤组(P<0.05).α-LA各剂量组葡萄糖激酶(GK)含量为0.928～1.020 mg/L,明显高于H_2O_2损伤组(P<0.05),不同剂量α-LA组GSK-3含量与H_2O_2损伤组比较差异无统计学意义(P<0.05).结论 α-LA对H_2O_2所致大鼠肝细胞氧化损伤具有一定的保护作用,且提高葡萄糖激酶含量.