miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响及机制

目的探讨miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响以及潜在的作用机制。方法设置miR-con组、miR-219a-5p组、anti-miR-con组、anti-miR-219a-5p组、miR-219a-5p+pcDNA组、miR-219a-5p+pcDNA-SMC4组、miR-con+SMC4-WT组、miR-con+SMC4-MT组、miR-219a-5p+SMC4-WT组、miR-219a-5p+SMC4-MT组,转染均用脂质体法。qRT-PCR检测miR-219a-5p和SMC4 mRNA表达水平;Western Blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果相较于人正常皮肤细胞HaCaT,皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2、Colo-16、SCL-1中SMC4 mRNA和蛋白表达水平显著升高,miR-219a-5p表达水平显著降低(P<0.05)。过表达miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡;促进Caspase-3蛋白表达,抑制Cyclin D1蛋的表达;抑制Wnt/β-catenin信号通路激活。miR-219a-5p靶向负调控SMC4的表达,转染SMC4野生型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05);而转染SMC4突变型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性差异不显著。且过表达miR-219a-5p,SMC4表达水平显著降低;抑制miR-219a-5p表达,SMC4表达水平显著升高。过表达SMC4能逆转miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2的增殖抑制和凋亡促进的作用。结论 miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin及SMC4信号通路有关,将为皮肤鳞状细胞癌的预防和治疗提供新靶点。     

miR-218对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响及机制研究

目的探讨上调miR-218基因表达对子宫内膜癌细胞活力、凋亡的影响及机制。方法以Lipofectamine TM2000为载体,将miR-218模拟物(mimics)及阴性对照(Scramble)转染人子宫内膜癌HEC-1B细胞,未转染的细胞作为空白组,转染48 h,qRT-PCR检测miR-218 mRNA表达; MTT法及流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡率; Western blotting检测HMGB1、β-catenin、cyclin D1、Bax蛋白表达。以转染miR-218 mimics后的HMGB1表达及双荧光素酶报告实验验证HMGB1与miR-218的靶向关系。结果转染miR-218 mimics的HEC-1B细胞miR-218 mRNA表达明显高于空白组,差异有统计学意义(P0. 05)。miR-218 mimics组与空白组比较细胞活力降低,凋亡率升高,HMGB1、β-catenin和cyclin D1表达降低,Bax表达升高,差异均有统计学意义(P0. 05)。miR-218 mimics可明显抑制野生型HMGB1-3'UTR质粒转染后的细胞荧光素酶活性,而对突变型HMGB1-3'UTR质粒转染后的细胞荧光素酶活性无影响。结论 miR-218可能通过靶向HMGB1抑制Wnt/β-catenin信号降低子宫内膜癌细胞活力,诱导细胞凋亡。     

miR-155对喉鳞状细胞癌Hep2细胞增殖影响及机制

目的探讨miR-155对喉鳞状细胞癌Hep2细胞增殖影响及具体机制。方法采用miR-155 NC和miR-155 inhibitor转染Hep2细胞,realtime-PCR法检测转染效果,细胞计数盒-8(CCK-8)法检测不同转染时间(12、24、36、48、60、72 h)细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;Western blot检测Hep2细胞中细胞周期蛋白A1(cyclin A1)、cyclin D1、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/叉形头转录因子(Foxo3a)信号通路相关蛋白表达量。结果 miR-155 inhibitor组中miR-155表达量(0.34±0.03)明显低于miR-155 NC组(1.25±0.10),且转染24、36、48、60、72 h后,miR-155 inhibitor组Hep2细胞活力明显低于miR-155 NC组;与miR-155 NC组比较,miR-155 inhibitor组Hep2细胞凋亡率明显提高,细胞周期阻滞于G1期,cyclin A1、cyclin D1、PI3K、p-AKT表达下调,Foxo3a表达上调,差异均有统计学意义(均P0.01)。结论 miR-155表达下调可降低Hep2细胞活力、增加细胞凋亡率,其机制可能与miR-155调控PI3K/AKT/Foxo3a信号通路有关。     

miR-126调控Shh通路抑制卵巢癌细胞增殖的机制研究

目的探讨miR-126对Shh通路活化和卵巢癌细胞增殖的影响,为临床诊疗卵巢癌提供新靶点。方法选取2017年1月-2018年12月在浙江衢化医院病理确诊并进一步行手术切除治疗的卵巢癌患者20例为研究对象,取其癌性组织及其邻近癌旁组织作为组织标本。检测癌性组织及癌旁组织的miR-126相对表达量。转染miR-126mimics、miR-126inhibitor及阴性对照试剂后,检测癌细胞的miR-126相对表达量、Shh蛋白表达量、细胞周期以及癌细胞的增殖活性。结果实时荧光定量PCR检测结果显示,卵巢癌组织中miR-126的相对表达量明显高于癌旁组织(P0.05)。卵巢癌细胞转染后,①mimics组的miR-126相对表达量升高于NC组(P0.05),inhibitor组的miR-126相对表达量低于NC组(P0.05);②与NC组卵巢癌细胞增殖活性比较,inhibitor组卵巢癌细胞增殖活性增高(P0.05),mimics组卵巢癌细胞增殖活性降低(P0.05);③与NC组比较,inhibitor组G1期细胞群体明显增多,S期细胞群体减少,mimics组G1期细胞群体明显减少,S期细胞群体增多(P0.05);④与NC组比较,inhibitor组Shh蛋白表达水平升高(P0.05),mimics组Shh蛋白表达水平(P0.05)。结论卵巢癌与miR-126作用相关,抑制卵巢癌细胞增殖的可能作用机制是miR-126调控Shh通路抑制癌细胞生长。     

MicroRNA miR-34a-5p通过靶向MDM4抑制巨噬细胞氧化应激损伤的研究

目的 探究MicroRNA miR-34a-5p通过靶向MDM4抑制巨噬细胞氧化应激损伤的机制。方法 本研究内容为MicroRNA miR-34a-5p能通过MDM4抑制ox-ldl诱导的巨噬细胞凋亡和氧化应激,将其分为空白对照组(THP-1人单核细胞组)、AS对照组(ox-ldl),miR-34a-5p质粒转染组、miR-34a-5p质粒转染组+oxldl,采取RT-qPCR检测microRNA miR-34a-5p和mRNA MDM4表达,采取TUNEL染色检测巨噬细胞的凋亡,采取western blot检测MDM4、ROS、MDA和SOD蛋白,采取红油O染色法评价巨噬细胞内脂质沉积,评价mi R-34a-5p是否靶向调控MDM4、MDM4抑制巨噬细胞氧化应激损伤诱导的凋亡、ox-ldl诱导巨噬细胞内脂质沉积变化情况。结果 mi R-34a-5p质粒转染组、miR-34a-5p质粒转染组+ox-ldl的microRNA miR-34a-5p表达、mRNA MDM4表达高于空白对照组、AS对照组(P<0.05);miR-34a-5p质粒转染组、miR-34a-5p质粒转染组+ox-ldl下miR-34a-5p表达、ROS水平、MDM4水平、MDA水平、SOD水平高于空白对照组、AS对照组(P<0.05);油红O染色法检测中,5ug/mL LDL下细胞内红染脂滴轻度增加,200mg/mL LPS细胞内红染颗粒显著增多,加入10ng/mL RPMI-1640能明显减少脂质聚集。结论 MicroRNA miR-34a-5p能通过MDM4抑制ox-ldl诱导的巨噬细胞凋亡和氧化应激,为调控AS的发生发展提供基础研究证据,为AS诱发的心脑血管疾病诊断和治疗方面提供依据。     

LINC00943靶向调控miR-125a-5p对幽门螺杆菌诱导的人胃黏膜上皮细胞GES-1损伤的影响

目的 探讨LINC00943对幽门螺杆菌(Hp)诱导的人胃黏膜上皮细胞GES-1损伤的影响及其分子机制。方法 将GES-1细胞分为Control组、Hp组、Hp+si-NC组、Hp+si-LINC00943组、Hp+miR-NC组、Hp+miR-125a-5p组、Hp+si-LINC00943+anti-miR-NC组和Hp+si-LINC00943+anti-miR-125a-5p组,实时荧光定量PCR检测LINC00943和miR-125a-5p表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫蛋白印迹检测凋亡蛋白表达;酶联免疫吸附法检测白细胞介素-8(IL-8)和IL-1β、乳酸脱氢酶(LDH)水平;双荧光素酶报告基因实验检测LINC00943和miR-125a-5p靶向关系。结果 与Control组比较,Hp组LINC00943表达、凋亡率、Bax蛋白、IL-8、IL-1β、LDH升高,miR-125a-5p表达、Bcl-2蛋白降低(P<0.05);敲减LINC00943或过表达miR-125a-5p可减轻Hp诱导的GES-1细胞损伤;LINC00943靶向调控miR-125a-5p...     

微小RNA-15a-3p通过肿瘤蛋白D52增强Hela细胞放射敏感性的实验研究

目的 研究微小RNA-15a-3p(microRNA-15a-3p,miR-15a-3p)的表达与Hela细胞放射敏感性的关系，探讨肿瘤蛋白D52(Tumor protein D52,TPD52)参与调节的机制。方法 设立空白对照组、放射组、miR-15a-3p mimics组和IR+miR-15a-3p mimics组。各组细胞培养结束后，采用CCK-8试剂盒测定细胞活力，结晶紫染色测定单克隆形成数目，FACScan流式细胞仪检测凋亡，Transwell室测定细胞侵袭水平，RT-PCR法及蛋白印迹法测定miR-15a-3p、TPD52 mRNA和蛋白水平。结果 与宫颈癌Hela细胞组比较，IR组、miR-15a-3p mimics组、IR+miR-15a-3p mimics组OD值、存活率、单克隆形成数目、穿膜数、TPD52 mRNA和蛋白降低（t=10.965、8.321、9.654、10.215、14.654、12.698、17.632、10.214、9.874、13.658、17.987、20.321、23.214、14.474、16.214、18.695、17.459、19....     

miR-125a-5p在人乳腺癌细胞侵袭和转移中的作用机制研究

目的探讨miR-125a-5p在人乳腺癌细胞侵袭与转移中的作用机制。方法采用荧光定量PCR检测人乳腺细胞MCF-10A和乳腺癌细胞中miR-125a-5p的表达量,利用瞬时转染技术将过表达质粒转染到MDA231中,检测miR-125a-5p质粒在乳腺癌MDA231、MCF-7细胞中的转染效率,利用趋化运动实验与Transwell侵袭试验检测趋化运动能力和运动能力。结果人乳腺癌淋巴结转移、组织分期及雌激素受体均与miR-125a-5p表达水平有关,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-125a-5p在MDA231和MCF-7中表达量较MCF-10A中低,差异有统计学意义(P<0.05);MDA231与MCF-7相比,MDA231中表达量更低,差异有统计学意义(P<0.05)。GAB2在MDA231/miR-125a-5p细胞组的表达量低于MDA231组和MDA231/NC组,差异均有统计学意义(P<0.05);在AntimiR-125a-5p/MCF-7组中的表达量高于AntiNC/MCF-7和MCF-7组,差异均有统计学意义(P<0.05)。穿过基质胶...     

miR-214对HepG2细胞增殖及细胞周期影响

目的探讨miR-214对Hep G2细胞增殖及细胞周期的影响。方法 Realtime-PCR法检测肝癌细胞株SMMC-7721、Hep G2、SK-Hep-1、Huh 7、Hep3B及正常肝细胞L-02中miR-214表达量,并利用脂质体转染miR-214NC及miR-214 mimics,采用Realtime-PCR法检测转染效果;采用MTT法、流式细胞术分别检测miR-214对肝癌细胞活力、凋亡及细胞周期影响;蛋白印迹(WB)检测miR-214对肝癌细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1),细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4),生存素(survivin)及增值细胞核抗原(PCNA)表达影响。结果 miR-214在肝癌细胞SMMC-7721、SK-Hep-1、Huh 7、Hep3B、Hep G2中表达量[分别为(1.25±0.10)、(1.43±0.10)、(0.95±0.09)、(0.98±0.01)、(0.82±0.08)]明显低于正常肝细胞L-02(2.52±0.23),其中Hep G2中miR-214表达量最低。miR-214 mimics组Hep G2细胞中miR-214表达量(2.38±0.23)明显高于miR-214 NC组(0.83±0.08),miR-214mimics组Hep G2细胞活力(0.37±0.03)明显低于miR-214 NC组(0.78±0.07);与miR-214 NC组比较,miR-214mimics组Hep G2细胞凋亡率明显升高,细胞周期阻滞于G1期,cyclin D1、CDK4、survivin及PCNA表达量下调,差异均有统计学意义(P0.01)。结论上调miR-214表达可抑制肝癌细胞增殖,其机制可能与调控细胞周期相关蛋白表达水平有关。     

miR-103对鼻咽癌SUNE1细胞生物学行为的影响

目的 探讨miR-103对鼻咽癌SUNE1细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 采用脂质体转染试剂将miR-103 mimic、miR-103 NC、miR-103 inhibitor瞬时转染至SUNE1细胞,RT-PCR检测miR-103的转染效率,CCK-8实验检测其细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞的迁移能力和侵袭能力,流式细胞术检测其细胞凋亡能力,Western blot检测相关蛋白表达水平。结果 与SUNE1组相比,miR-103 mimic组的miR-103表达量升高,miR-103 inhibitor组的miR-103表达量降低;在48 h和72 h时,miR-103 mimic组细胞生长速率均明显升高,miR-103 inhibitor组生长速率明显降低;miR-103 mimic组细胞迁移能力和侵袭能力均显著提升,而miR-103 inhibitor组均显著减弱;在miR-103 mimic组中vimentin蛋白的表达升高、PARP-1蛋白的表达降低,在miR-103 inhibitor组中vimentin和cyclinD1蛋白的表达降低,PARP-1蛋...     

miR-183在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达及其对p53蛋白的调节作用

目的探讨miR-183在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达及其对p53蛋白表达和细胞增殖、凋亡的影响。方法采用LipofectaminerTM2000脂质体将miR-183的特异性抑制剂反义寡核苷酸转染到Ishikawa细胞(实验组),不相关序列、脂质体和未转染组细胞分别为阴性对照组、脂质体对照组和空白对照组。采用CCK-8法和流式细胞仪分别检测各组子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖和凋亡情况;采用RT-PCR检测miR-183和p53 mRNA在各组子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达水平;采用Western blot检测p53蛋白在各组子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达水平。结果 CCK-8检测结果显示:转染0~24 h,实验组、空白对照组、脂质体对照组子宫内膜癌Ishikawa细胞增速相似,阴性对照组子宫内膜癌Ishikawa细胞增速略快;转染24~48 h,实验组、空白对照组和脂质体对照组子宫内膜癌Ishikawa细胞增速较快;转染48~72 h,实验组子宫内膜癌Ishikawa细胞较其余3组增长速度快;转染72~96 h,4组子宫内膜癌Ishikawa细胞继续保持增长状态,且达到对数生长期,实验组子宫内膜癌Ishikawa细胞较其余3组增速快。流式细胞学检测结果显示:转染3 d后,实验组较其余3组早期凋亡率明显降低,差异有统计学意义(P0.05);阴性对照组较其余3组早期凋亡率明显增高,差异有统计学意义(P0.05)。RT-PCR结果显示:实验组miR-183表达水平明显低于其余3组,差异有统计学意义(P0.05);实验组p53 mRNA表达水平明显低于其余3组,差异有统计学意义(P0.05)。Western blot检测结果显示:实验组p53蛋白表达水平明显高于其余3组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-183在子宫内膜癌Ishikawa细胞中有表达,miR-183抑制剂能有效抑制miR-183在子宫内膜癌Ishikawa细胞中的表达,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调p53蛋白表达。miR-183可能通过抑制p53蛋白表达而抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进凋亡,从而影响子宫内膜癌的发生、发展及预后。     

miR-203a-3p靶向调控VEGF-C表达对卵巢癌恶性生物学特征的影响

目的 探究miR-203a-3p通过靶向调控血管内皮生长因子C(VEGF-C)表达影响卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制.方法 收集2019年2月至10月在清华大学第一附属医院就诊的20例卵巢癌患者手术切除的癌组织及对应癌旁组织.使用实时荧光定量聚合酶链式反应检测20例手术切除的卵巢癌组织及对应癌旁组织中miR-203a-3p的表达.体外培养SKOV3细胞,将miR-203a-3p和pc-VEGF-C单独或者共同转染于SKOV3细胞,实验分为:Control组、miR-203a-3p组、pc-VEGF-C组和miR-203a-3p+pc-VEGF-C组.在miRNA靶向数据库TargetScanHuman中,对miR-203a-3p与VEGF-C的靶向关系进行预测,并利用双荧光素酶报告基因实验对其靶向关系进行验证;利用克隆形成实验检测各组SKOV3细胞的克隆形成率以观察其体外增殖活性,并利用Western blot实验检测增殖标志蛋白PCNA相对表达水平;利用划痕实验检测各组24h内划痕愈合率以观察其迁移能力;Transwell实验检测侵袭能力;Western blot检测侵袭、迁移相关蛋白表达.结果 卵巢癌组织中miR-203a-3p表达(0.47±0.10)较正常癌旁组织中miR-203a-3p表达(0.99±0.09)显著下调(t=17.112,P<0.05).miR-203a-3p与VEGF-C存在可结合的位点,相比Control组,miR-203a-3p组VEGF-C蛋白相对表达水平、荧光素酶活性显著降低(q值分别为12.430、5.047,P<0.05);miR-203a-3p组卵巢癌细胞克隆形成率、PCNA蛋白相对表达水平均显著降低(q值分别为11.773、12.246,P<0.05);miR-203a-3p组单位面积细胞侵袭数和细胞愈合率均显著降低(q值分别为6.258、5.325,P<0.05);miR-203a-3p组E-cadherin表达显著升高,Vimentin、N-cadherin表达均显著降低(q值分别为4.082、7.746、7.570,P<0.05).结论 miR-203a-3p可以通过靶向调控V EG F-C表达抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与抑制增殖相关蛋白和调控上皮间质化过程相关.     

miR-150-5p在卵巢癌中的表达及其生物学功能研究

目的探讨微小RNA-150-5p(miR-150-5p)在卵巢癌组织中的表达水平及其通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对卵巢癌细胞增殖和凋亡能力的影响。方法选取2016年4月—2018年12月于武警上海总队医院妇科就诊的82例卵巢癌患者作为研究对象,患者年龄22～65周岁,平均(43.5±6.8)岁。采用qRT-PCR检测病变组织及其相应癌旁组织中miR-150-5p的表达水平。以人卵巢癌SKOV3细胞株作为空白对照组,转染miR-150-5p抑制剂的人卵巢癌SKOV3细胞株作为miR-150-5p抑制剂组,转染阴性对照质粒的人卵巢癌SKOV3细胞株作为阴性对照组,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,生物信息学网站Targetscan预测miRNA-150-5p与PI3K的靶向结合情况,荧光素酶试验验证miR-150-5p与PI3K的靶向关系,Western blotting检测Cleaved caspase-3、PI3K、Akt、磷酸化蛋白激酶B(Phosphorylated protein kinase,p-Akt)p-Akt蛋白的表达。结果 82例卵巢癌患者病变组织及相应癌旁组织中miR-150-5p的相对表达水平分别为(1.64±0.10)和(0.99±0.08),差异有统计学意义;空白对照组和阴性对照组中miR-150-5p的表达差异无统计学意义,miR-150-5p抑制剂组中miR-150-5p的相对表达量为(0.11±0.03),明显低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义。空白对照组和阴性对照组24 h、48 h和72 h细胞增殖率的差异无统计学意义,而miR-150-5p抑制剂组24 h、48 h和72 h细胞增殖率的差异分别为(9.61±1.32)%、(24.54±3.61)%和(33.78±3.72)%,同一时间点均明显低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义。空白对照组和阴性对照组48 h细胞凋亡率的差异无统计学意义,而miR-150-5p抑制剂组的细胞凋亡率为(16.65±2.93)%,明显高于空白对照组[(0.74±0.10)%]和阴性对照组[(1.79±0.21)%],差异有统计学意义。荧光素酶报告基因分析证实miR-150-5p与PI3K存在靶向结合位点。miR-150-5p抑制剂组PI3K、p-Akt蛋白表达低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义;Cleaved caspase3蛋白表达高于空白对照组和阴性对照组(P0.01);结论 miR-150-5p在卵巢癌中作促癌基因,其调控作用可能与PI3K/Akt信号通路有关。     

靶向抑制人滋养层细胞表面抗原-2基因表达诱导宫颈癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨抑制人滋养层细胞表面抗原-2(TROP2)基因表达对宫颈癌细胞凋亡的影响。方法空白对照组(Control组)、阴性对照无意义小干扰RNA siRNA序列组(Control siRNA组)和转染TROP2的靶向siRNA序列组(TROP2 siRNA组)转染人宫颈癌Hela细胞,48 h后蛋白印迹检测TROP2、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase3)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果转染TROP2-siRNA后能显著降低TROP2的蛋白表达;TROP2-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于Control组,β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于Control组(P0.01),Control-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达与Control组差异无统计学意义(P0.05)。结论抑制宫颈癌细胞中TROP2基因表达可促进癌细胞的凋亡,其机制与上调Cleaved caspase3蛋白表达及下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

咪唑安定联合miR-135a-5p影响宫颈癌细胞HeLa增殖 迁移及侵袭的机制研究

目的 探讨咪唑安定对宫颈癌细胞HeLa增殖、迁移及侵袭的影响及分子机制。方法 以RPMI-1640培养基对HeLa细胞常规培养，分别用25、50、100μmol/L的咪唑安定处理，记为低、中、高剂量组，常规培养的细胞作为NC组；将miR-135a-5p抑制剂及阴性对照转染至HeLa细胞，记为anti-miR-135a-5p组、anti-miR-NC组；miR-135a-5p抑制剂及阴性对照转染至HeLa细胞后用100μmol/L的咪唑安定处理，记为anti-miR-135a-5p+高剂量组、anti-miR-NC+高剂量组。CCK-8检测细胞活性；Western blot法检测蛋白表达；克隆形成实验检测细胞克隆；实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-135a-5p表达水平；Transwell检测细胞迁移和侵袭。结果 不同剂量咪唑安定处理后，HeLa细胞活性、CyclinD1、MMP2、MMP9表达、细胞克隆、迁移和侵袭数量、miR-135a-5p表达降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)。下调miR-135a-5p降低HeLa细胞活性、MMP2、CyclinD1、M...     

miR-96-5p靶向IRS1对麦芽酚铝致PC12细胞凋亡的影响

目的探讨miR-96-5p在麦芽酚铝致PC12细胞凋亡中的影响及其作用机制。方法于2021年1月, 取对数生长期的PC12细胞, 分为空白对照组和低、中、高剂量组, 分别采用0、100、200、400 μmol/L的麦芽酚铝处理24 h, 收集各组细胞, 采用流式细胞术检测细胞凋亡率, qRT-PCR检测miR-96-5p和胰岛素受体底物1(IRS1)mRNA表达水平, Western blotting检测半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)、活化型半胱氨酸蛋白酶3(Cleaved-caspase3)、IRS1、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化葡萄糖合成激酶3β(p-GSK3β)蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验检测miR-96-5p和IRS1的靶向结合关系。采用miR-96-5p inhibitor转染PC12细胞24 h构建miR-96-5p抑制细胞和阴性对照细胞, 将细胞分为空白对照组、阴性对照组、铝染毒组、铝染毒+阴性对照组、铝染毒+miR-96-5p抑制组、miR-96-5p抑制组, 采用miR-96-5p inhibitor和IRS1 siRNA转染PC12细胞24...     

siRNA抑制NFBD1基因表达对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的:研究siRNA抑制NFBD1基因表达对人肝癌HepG2细胞凋亡的作用原理及caspase途径在此过程中的作用。方法:应用流式细胞法及RT-PCR检测沉默NFBD1对人肝癌HepG2细胞凋亡及凋亡基因组表达水平的影响。MTT法检测NFBD1 siRNA对HepG2细胞的抑制作用。结果:转染48 h后,转染组与阴性对照组和空白组相比,NFBD1mRNA表达明显减弱,转染组NFBD1 mRNA较空白组相对下降74.75%;HepG2细胞组中促凋亡基因Bc1-xl表达减少,Bid及caspase-3表达量增加(P<0.05)。MTT结果显示NFBD1 siRNA能明显抑制HepG2细胞增殖,抑制率达到92.131±0.893%。流式法检测结果显示转染组细胞凋亡明显高于阴性对照组和空白组。结论:NFBD1可通过改变Bc1-xl/Bid的表达比,激活caspase-3来诱导HepG2细胞凋亡。     

pLXSN-Tum-5致人脐静脉内皮细胞凋亡作用及机制

目的探讨pLXSN-Tum-5病毒颗粒对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的生长抑制和诱导凋亡作用及机制。方法采用不同浓度的pLXSN-Tum-5病毒颗粒作用HUVEC,利用噻唑蓝法和Hoechst-33342染色法检测细胞生长及其形态变化;RT-PCR和Western blotting方法检测细胞中Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA和蛋白表达变化。结果与对照组(pLXSN)比较,pLXSN-Tum-5病毒颗粒转染组HUVEC的存活率明显降低,呈剂量效应关系;细胞内可见凋亡小体;对照组HUVEC内Bcl-2和caspase-3 mRNA和蛋白表达分别为(0.721±0.041)、(0.654±0.034)和(0.956±0.032)、(0.356±0.054);与对照组比较,20μmol/L pLXSN-Tum-5病毒颗粒转染组HUVEC内Bcl-2和caspase-3mRNA和蛋白水平[分别为(1.134±0.0524)、(1.012±0.0641)和(1.612±0.067)、(0.712±0.0647)]明显上调(P0.05)。结论 Tum-5可抑制HUVEC增殖,诱导HUVEC凋亡,其机制可能与上调Bax/Bcl-2和caspase-3表达有关。     

miR-146a-5p及miR-9-3p对炎症反应及脂代谢调节因子的作用

目的 通过检测microRNA-146a-5p(miR-146a-5p)、microRNA-9-3p(miR-9-3p)对HepG2细胞白介素受体相关激酶-1(interleukin receptor-associated kinase-1,IRAK-1)、ATP结合盒转运蛋白A1(ATP-binding gassette transporter A1,ABCA1)蛋白水平表达的影响，探讨miR-146a-5p及miR-9-3p对炎症反应及脂代谢调节因子作用。方法 以HepG2细胞为试验对象，分别进行miR-146a-5pmimics转染及miR-9-3pmimics转染，采用Westernblot检测miR-146a-5p对HepG2细胞IRAK-1蛋白表达的影响及miR-9-3p对HepG2细胞ABCA1蛋白水平表达的影响。结果 miR-146a-5p转染组IRAK-1蛋白水平显著低于对照组；miR-9-3p转染组ABCA1的蛋白水平显著低于对照组，差异均具有统计学意义（P=0.001）。结论 miR-146a-5p能够显著下调HepG2细胞IRAK-1蛋白表达，miR-9-3p能...     

壬基酚对大鼠前列腺细胞凋亡影响及机制

目的 探讨壬基酚对大鼠前列腺组织细胞凋亡及caspase-3、caspase-8和caspase-9 mRNA表达影响.方法 健康清洁级Wistar雄性大鼠50只,按体重随机分为5组,分别为12.5、25、50、100 mg/kg壬基酚染毒组和对照组(橄榄油),每组10只;皮下注射染毒(1 mL/kg),每天1次,连续染毒30 d;Tunel法观察前列腺前叶组织细胞凋亡,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法观察组织中caspase-3、caspase-8、caspase-9 mRNA表达.结果 12.5、25、50、100 mg/kg壬基酚染毒组大鼠前列腺细胞凋亡率分别为(3.07±1.31)％、(5.21±1.47)％、(6.31±1.29)％、(8.90±0.18)％,均低于对照组的(12.73±2.19)％(P＜0.05);与对照组比较,12.5、25、50、100 mg/kg壬基酚染毒组大鼠前列腺组织细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9 mRNA表达均降低(P＜0.05).结论 壬基酚可致雄性大鼠前列腺细胞凋亡率下降,其机制可能与前列腺细胞caspase-3、caspase-8和caspase-9 mRNA表达降低有关.