非吞噬细胞氧化酶4在转化生长因子-β诱导A549细胞迁移中的作用

目的探讨非吞噬细胞氧化酶4(NOX4)在转化生长因子β(TGF-β)诱导A549细胞迁移中的作用。方法实验分组:TGF-β(刺激)组,空白对照组,二甲苯基碘(DPI,NOX4抑制剂)组,TGF-β+DPI组,二甲基亚砜(DMSO)(溶剂对照)组。流式细胞仪检测ROS表达;Western blot检测NOX4、snail、E-cadherin蛋白表达;划痕实验检测A549细胞迁移能力。结果经Quantity One软件定量后,TGF-β组NOX4表达为:1.80±0.07,TGF-β+DPI组为0.49±0.03(F=327.071,P<0.001);上皮间质转化相关蛋白:TGF-β组snail蛋白为9.0±0.6,TGF-β+DPI组为1.8±0.3(F=119.097,P<0.001);TGF-β组E-cadherin蛋白为0.5±0.1,TGF-β+DPI组为3.3±0.3(F=71.063,P<0.001);以上结果表明DPI可以抑制A549细胞NOX4表达且可以抑制其EMT进程。TGF-β+DPI组与TGF-β组比较,划痕愈合率降低(F=33.899,P<0.001);表明DPI可以抑制A549细胞的迁移。结论 DPI抑制NOX4的表达后,TGF-β诱导的A549细胞迁移被抑制,并且与TGF-β诱导的上皮间质转化进程有关。     

下调DJ-1基因对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭影响的研究

目的 探讨下调DJ-1基因对甲状腺乳头状癌细胞体外增殖和侵袭能力的影响。方法 下调人甲状腺乳头状癌细胞TPC-1中DJ-1的表达,应用Western印迹法检测细胞经过转染前后DJ-1蛋白表达水平;通过迁移和侵袭实验检测下调DJ-1表达前后甲状腺乳头状癌细胞发生迁移和侵袭行为的情况。结果 转染si DJ-1组DJ-1蛋白的相对表达量明显较空白对照组和转染非特异性对照组减弱(P<0.05),而后两者之间比较,DJ-1蛋白相对表达量相似,差异无统计学意义(P>0.05)。在细胞迁移和侵袭实验中,转染si DJ-1组中迁移穿膜和侵袭穿膜的细胞数量均明显少于空白对照组和转染非特异性对照组(t迁移=4.494,4.481,t侵袭=4.039,3.594,P<0.05),而空白对照组和转染非特异性对照组之间,差异无统计学意义(t=2.068,2.141,P>0.05)。结论 DJ-1基因在人甲状腺乳头状细胞迁移、侵袭中发挥着重要的作用。     

宫颈锥切术对不同病理类型宫颈癌患者免疫功能及临床疗效的影响

目的 探讨不同病理类型的宫颈癌患者接受宫颈锥切术治疗后免疫功能变化及临床疗效。方法 选择2022年1月1日—2023年1月1日金华市人民医院收治的ⅠA1期宫颈癌患者107例作为研究对象，根据病理活检结果将入组患者划分为鳞癌组(70例)、腺癌组(22例)及腺鳞癌组(15例)。所有患者均接受宫颈锥切术治疗。比较各组患者治疗前年龄、体质量指数(BMI)、妊娠史、高血压疾病患病率、糖尿病患病率及人乳头瘤病毒感染情况等一般临床资料；比较各组患者治疗前后CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD4+/CD8+比值及自然杀伤(NK)细胞比例变化；比较各组患者术后复发情况。结果 术后鳞癌组、腺癌组及腺鳞癌组患者平均CD4+T细胞比例(42.24±4.51 vs. 38.65±2.97,t=5.351;42.61±3.37 vs. 38.36±3.01,t=3.693;42.36±2.99 vs. 38.20±2.62,t=3.619、均P<0.05)、CD4+/CD8+(25.33±2.69 vs. 27.29±2.38,t=4.994;24.96±3.21 vs. 27.74±2.86,t=5.365;25.06±2.31 vs. 27.98±2.71,t=2.587、均P<0.05)较术前均显著升高，平均CD8+T细胞比例(25.33±2.69 vs. 27.29±2.38,t=4.435;24.96±3.21 vs. 27.74±2.86,t=3.890;25.06±2.31 vs. 27.98±2.71,t=3.580、均P<0.05)均显著降低，但各组间差异无统计学意义(F=0.068、0.182、0.048,均P>0.05);术后3个月鳞癌组(22.80±3.66 vs. 20.66±4.26,t=3.030、P<0.05)、腺癌组(22.50±2.64 vs. 21.23±5.23,t=2.866、P<0.05)及腺鳞癌组患者NK细胞比例(22.96±2.83 vs. 18.91±3.96,t=4.587、P<0.001)较术前均显著升高，术后6个月鳞癌组(24.93±3.97 vs. 20.66±4.26,t=6.027、P<0.001)、腺癌组(25.17±3.37 vs. 21.23±5.23,t=3.708、P<0.05)及腺鳞癌组患者NK细胞比例(23.46±5.24 vs. 18.91±3.96,t=2.520、P<0.05)较术前均显著升高，但各时间点组间差异均无统计学意义(F=0.094、0.947,均P>0.05);术后3个月(10.00%vs. 9.09%vs. 13.33%,χ2=2.661、P>0.05)、术后6个月(15.71%vs. 18.19%vs. 20.00%,χ2=0.376、P>0.05)各组患者间CIN及宫颈癌复发率比较差异均无统计学意义(均P>0.05);Pearson相关性检验表明，术后3个月鳞癌组、腺癌组及腺鳞癌组患者NK细胞比例与CD4+/CD8+比值均存在显著正相关(r=0.310、0.424、0.436,均P<0.05)。结论 宫颈锥切术能够显著改善不同病理类型的早期宫颈癌患者T细胞功能和NK细胞功能，患者术后复发率较低，对于不同病理分型的早期宫颈癌患者均具有较高的临床应用价值。     

强心颗粒通过调控Rac1/NOX/ROS轴抑制慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证大鼠心肌细胞凋亡研究

目的 检测强心颗粒通过调控Rac1蛋白磷酸化抑制慢性心力衰竭心气虚兼血瘀水肿证活性氧(ROS)诱导心肌细胞凋亡的机制。方法 应用多柔比星联合丙硫氧嘧啶(PTU)法复制病证结合心力衰竭大鼠模型;分为正常组、模型组、强心颗粒组以及强心颗粒+Rac1过表达组。干预4周后检测各组大鼠心肌总Rac1、磷酸化Rac1(P-Rac1)以及下游蛋白NOX2、NOX4的表达情况,对比各组心肌ROS含量、8-OHdG核染(+)比例、心肌细胞凋亡指数。结果 正常组未死亡,模型组存活率为58.33%,强心颗粒组存活率为72.73%,强心颗粒+Rac1过表达组存活率为72.73%。ROS检测结果显示,模型组心肌细胞ROS荧光强度为34.44±1.63,强心颗粒组为18.39±1.50,强心颗粒+Rac1过表达组为26.23±2.01,强心颗粒组低于模型组(t=20.32,P<0.001),强心颗粒+Rac1过表达组高于强心颗粒组,t=10.04,P<0.01。免疫组化结果显示,模型组心肌细胞8-OHdG核染(+)比率为19.21±2.33,强心颗粒组为11.78±1.26,强心颗粒+Rac1过表达组...     

Smac对子宫内膜癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的 研究Smac高表达对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法 选择Ⅱ型子宫内膜癌HEC-1-A细胞(低分化腺癌细胞、雌激素受体阴性),应用脂质体法将Smac的过表达质粒pcDNA3.1-Smac转染HEC-1-A细胞,实验分为Smac过表达组、空载体组和空白对照组。应用qRT-PCR和Western blot法检测转染后Smac mRNA及蛋白表达情况。CCK-8法检测过表达Smac对细胞增殖能力的影响。Transwell小室侵袭及迁移实验观察细胞侵袭及迁移能力的变化。结果 Smac过表达组Smac mRNA及蛋白表达比空载体组和空白对照组明显增加(F=172.065,P=0.001;F=697.953,P=0.001)。过表达Smac后,HEC-1-A细胞增殖能力明显减弱(P<0.05)。侵袭及迁移实验结果显示,与空载体组比较,Smac过表达组穿膜细胞数均明显减少(t=9.082,P=0.016;t=6.241,P=0.013)。结论 过表达Smac可明显抑制HEC-1-A细胞的增殖,并显著减弱细胞的侵袭及迁移能力,Smac可为Ⅱ型子宫内膜癌的靶向治疗提供新的研究方向。     

敲减CCDC132表达对宫颈癌HeLa细胞生长和凋亡的影响

目的分析敲减CCDC132表达对宫颈癌HeLa细胞生长和凋亡的影响。方法以CCDC132-shRNA(shCCDC132组)和阴性对照Ctrl-shRNA (shCtrl组)慢病毒感染人宫颈癌HeLa细胞后,采用荧光显微镜观察HeLa细胞感染效率,应用实时荧光定量PCR检测HeLa细胞中CCDC132 mRNA表达水平,应用Western blot检测HeLa细胞中CCDC132蛋白表达水平,应用Celigo细胞计数法检测HeLa细胞生长情况,应用流式细胞仪检测HeLa细胞凋亡情况,应用Caspase-3活性检测试剂盒检测HeLa细胞Caspase-3活性。结果 shCtrl组宫颈癌HeLa细胞中CCDC132 mRNA和蛋白表达结果分别为(1.00±0.11)和(0.21±0.03),shCCDC132组宫颈癌HeLa细胞中CCDC132 mRNA和蛋白表达结果分别为(0.42±0.03)和(0.05±0.01)。与shCtrl组比较,shCCDC132组CCDC132 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(t=15.261,P 0.001; t=15.179,P 0.001)。与shCtrl组比较,shCCDC132组细胞生长明显受到抑制(均P 0.05)。shCtrl组宫颈癌HeLa细胞凋亡率和Caspase-3相对活性分别为(6.36±1.15)%和(1.00±0.05),shCCDC132组宫颈癌HeLa细胞凋亡率和Caspase-3相对活性分别为(17.54±2.62)%和(3.86±0.12),与shCtrl组比较,shCCDC132组细胞凋亡率和Caspase-3活性均显著升高(t=11.722,P0.001; t=66.000,P0.001)。结论敲减CCDC132表达可抑制宫颈癌HeLa细胞生长,诱导细胞凋亡。     

p38α丝裂原活化蛋白激酶在食管鳞癌细胞Eca109中的功能研究

目的 探讨p38α丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)在食管鳞癌细胞Eca109中的可能作用.方法 构建p38α特异性的shRNA干扰载体,瞬时转染Eca109细胞,运用qRT-PCR、免疫印迹分别检测p38α干扰后在mRNA、蛋白水平上的沉默效果;运用MTT和流式细胞仪检测p38α干扰后Eca109细胞增殖,细胞周期和凋亡的变化;运用细胞划痕实验检测p38α干扰后细胞迁移能力的改变.作为平行反向验证,转染含有p38α全长cDNA的真核过表达质粒,运用免疫印迹检测p38α过表达后在蛋白水平上的表达效果;运用MTT和流式细胞仪检测p38α过表达后细胞增殖,细胞周期和凋亡的变化;运用细胞划痕实验检测p38α的变化后细胞迁移能力的改变.结果 p38α基因在受干扰后,测定其蛋白水平表达水平(22.970±2.857)较空质粒组(35.658 ±2.286)降低,差异具有统计学意义(t=-4.475,P＜0.01).观察Eca109细胞的增殖变化,发现干扰48 h后吸光度值(0.951±0.086)大于对照组细胞(0.811 ±0.012)(t=3.20,P＜0.05),表明Eca109细胞增殖加快.观察细胞周期和凋亡变化发现,干扰48 h后凋亡率(17.400±5.495)较空质粒组(1.000 ±0.721)增加(t=40.06,P＜0.01);干扰72 h后细胞迁移速度(0.034±0.031)较空质粒组(0.278±0.021)加快(t=-5.79,P＜0.01),表明浸润能力增加.p38α在过表达后,检测到其内源性p38α蛋白表达水平(41.170±2.357)高于对照组(35.658±2.286)(t=4.41,P=0.005);48 h过表达组吸光值(0.472±0.089)与对照组细胞吸光值(0.811±0.012)相比,细胞增殖受到抑制(t=-7.50,P＜0.01),细胞生长活动在G1期受阻(t=4.80,P＜0.01),并且其细胞凋亡(32.233±1.457)高于空质粒组(1.000±0.721)(t=17.20,P＜0.01),细胞迁移[(0.770±0.054) mm]较空质粒组[(0.278±0.021) mm]减慢并且浸润受到抑制(t=11.00,P＜0.01).结论 p38dMARK抑制食管鳞癌细胞Eca109的发生发展过程.     

血浆miR-451水平与子宫内膜异位症的关系

目的:探讨血浆微小RNA451(mi R-451)与子宫内膜异位症(EMs)的关系,并观察mi R-451对体外培养的子宫内膜基质细胞的增殖和迁移的作用。方法:选取2014年1月—2015年5月于深圳市罗湖区人民医院就诊的EMs患者(EMs组)54例,正常对照组59例,采血并提取血浆总RNA。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time q PCR)检测血浆mi R-451的表达强度。通过CCK-8实验检测mi R-451对异位子宫内膜基质细胞增殖的调控作用;采用损伤愈合实验探讨过表达mi R-451后异位子宫内膜基质细胞的迁移变化。结果:EMs患者血浆mi R-451表达水平低于对照组[(0.53±0.14)vs.(1.00±0.20),t=14.50,P<0.01];过表达mi R-451后EMs基质细胞的相对迁移活性下降[(1.00±0.12)vs.(0.74±0.02),t=4.73,P=0.001]。结论:EMs患者血浆mi R-451水平减低;mi R-451可能通过抑制异位内膜基质细胞增殖和迁移发挥作用。     

miR-369-3p和COL11A1对卵巢癌细胞增殖 迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-369-3p和COL11A1对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并分析其分子机制。方法实时定量PCR(qRT-PCR)检测正常卵巢上皮细胞IOSE80和卵巢癌细胞SKOV-3中miR-369-3p、COL11A1 mRNA的水平,在卵巢癌SKOV-3细胞中转染miR-369-3p模拟物和pcDNA-COL11A1以过表达miR-369-3p、COL11A1,CCK8法和Transwell实验分别检测卵巢癌SKOV-3细胞增殖、迁移及侵袭能力,蛋白印迹实验(Western blot)检测细胞中COL11A1、Cyclin D1、p21、MMP-2及MMP-9蛋白水平,双荧光素酶报告系统验证miR-369-3p与COL11A1的调控关系。结果与正常卵巢上皮细胞IOSE80(1.00±0.05、1.01±0.08及0.28±0.03)相比,卵巢癌细胞SKOV-3中的miR-369-3p水平(0.41±0.04)显著降低,COL11A1 mRNA(3.26±0.31)和蛋白(0.64±0.06)水平显著升高,差异均有统计学意义(t=21.083、27.643及16.100,P0.05)。过表达miR-369-3p可降低Cyclin D1、MMP-2及MMP-9蛋白表达量,提高p21表达量,降低细胞OD值、迁移及侵袭细胞个数;miR-369-3p靶向负调控COL11A1的表达;过表达COL11A1可逆转miR-369-3p过表达对SKOV-3细胞增殖、侵袭及迁移的影响。结论 miR-369-3p通过靶向COL11A1调控SKOV-3细胞增殖、迁移及侵袭。miR-369-3p是卵巢癌潜在分子靶点。     

扶正合剂联合miR-210对乳腺癌细胞增殖 迁移 侵袭的影响及机制研究

目的 探究扶正合剂联合miR-210对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法 体外培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,采用扶正合剂进行干预。将anti-miR-NC、anti-miR-210分别转染至MDA-MB-231细胞；将miR-NC、miR-210 mimics分别转染MDA-MB-231细胞，再使用扶正合剂处理细胞。CCK-8检测细胞增殖能力，Transwell小室检测细胞迁移和侵袭，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-210表达，Western blot检测CyclinD1、p21、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果 与正常对照组(0.56±0.05)比较，乳腺癌细胞组OD值明显上调，为(0.96±0.09),差异有统计学意义(t=11.655,P=0.000);与乳腺癌细胞组比较，扶正合剂组OD值显著降低，为(0.32±0.03),差异有统计学意义(t=20.239,P=0.000)。正常对照组迁移细胞数、侵袭细胞数、MMP-2蛋白及MMP-9蛋白表达水平分别为(62.31±5.30)个、(70.33±8.26)个、(0.25±0.02)、(0....     

土荆芥种子总黄酮提取物通过诱导细胞凋亡、自噬和周期阻滞抑制人肝癌SMCC-7721细胞增殖

目的探究土荆芥种子总黄酮提取物对肝癌细胞增殖的抑制作用及机制。方法采用AO/EB染色法观察细胞的凋亡情况;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;电镜观察细胞的亚显微结构;利用高通量测序技术分析细胞转录组的变化,Western blotting检测自噬和凋亡相关蛋白;线粒体膜电位探针试剂盒检测线粒体膜电位的的变化;活性氧(ROS)测定试剂盒检测活性氧的水平。结果土荆芥种子总黄酮提取物以剂量依赖性方式抑制SMCC-7721细胞的增殖(t=44.014,P0.05),并使细胞周期停滞在G2期(t=77.071,P0.01)。电子显微镜观察到细胞核膜皱缩,出现核碎裂,核内染色质聚集,线粒体肿胀、嵴断裂,细胞内出现许多自噬体和自噬溶酶体。转录组测序后,进行DEG富集分析,显示细胞凋亡相关基因Caspases-3、Caspases-4表达水平上调,Caspases-9的表达水平下调,细胞周期蛋白P21、CDK、Cyclin明显上调(P0.01);GO分析主要富集在自噬反应生物学过程;KEGG分析主要富集在自噬、凋亡、细胞衰老和铁死亡信号通路。Western blotting结果表明SMMC-7721细胞中随着土荆芥种子总黄酮浓度的上升凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9和Bad蛋白的表达均上调,Bcl-2蛋白表达下调均具有统计学差异(t=7.624,P0.01;t=32.071,P0.01;t=9.383,P0.01;t=11.832,P0.01);自噬相关蛋白AMPK、Beclin-1蛋白的表达上调,LC3-I向LC3-II的转化量也逐渐增加,而mTOR蛋白的表达下调(t=9.280,P0.01;t=4.577,P0.05;t=17.007,P0.01;t=7.96,P0.01)。细胞内线粒体膜电位降低(t=20.585,P0.05)。ROS含量上升(F=14.925,P0.01)。结论土荆芥种子总黄酮提取物通过诱导细胞凋亡、自噬和周期阻滞抑制人肝癌SMCC-7721细胞增殖。     

siRNA干扰△Np63基因表达对人宫颈癌Siha细胞增殖及凋亡影响研究

目的 通过抑制宫颈癌细胞株Siha中△Np63的表达,探讨△Np63对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 将宫颈癌细胞株Siha分为实验组和对照组,实验组转染△Np63的特异性siRNA,对照组转染阴性对照siRNA.实时荧光定量PCR(QRT-PCR)及蛋白质印迹法检测Siha细胞转染前后△Np63基因在mRNA及蛋白水平的变化;CCK8法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果 实验组Siha细胞转染siRNA后,△Np63的mRNA表达为0.32±0.06,低于阴性对照组0.95±0.08(t=10.92,P＜0.05).实验组Siha细胞转染siRNA后,△Np63的蛋白表达为0.32±0.09,低于阴性对照组1.00±0.06(t=9.78,P＜0.05).实验组Siha细胞生长速度明显低于阴性对照组,实验组Siha细胞凋亡率为2.13±0.75,低于阴性对照组14.19±1.36(t=15.36,P＜0.05).结论 人宫颈癌细胞株中存在△Np63的表达,特异性siRNA可下调宫颈癌细胞株Siha中△Np63基因的表达,对细胞的增殖具有负性调节作用,并能诱导细胞凋亡.     

不同的游离脂肪酸对人乳腺癌细胞凋亡和侵袭的影响

目的探讨不同游离脂肪酸(FFAs)对MDA-MB-231人乳腺癌细胞凋亡和迁移的影响.方法用50、200、500 umol/L三种不同浓度的油酸(0A)和棕榈酸(PA)分别刺激MDA-MB-231细胞,采用实时定量PCR分析细胞中PTEN的mRNA含量,蛋白免疫印迹法检测PTEN和Bcl-2的蛋白表达,原位末端标记法(TUNEL)观察细胞的凋亡情况,小室迁移实验测定细胞的迁移能力.结果OA使MDA-MB-231细胞中PTEN的mRNA和蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达升高(P均＜0.05);PA则使PTEN的mRNA和蛋白表达水平上升,Bcl-2蛋白表达下降(P均＜0.05).显微镜下观察到PA刺激后的MDA-MB-231细胞凋亡增加.迁移实验显示OA和PA都能使乳腺癌细胞侵袭能力增强.结论PA可能通过上调PTEN的表达促进MDA-MB-231人乳腺癌细胞凋亡,但同时也增强细胞的侵袭能力.OA也可增强癌细胞侵袭能力.     

磷脂酰肌醇3-激酶/雷帕霉素靶蛋白抑制剂联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂对宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的 探讨磷脂酰肌醇3-激酶/雷帕霉素靶蛋白(PI3K/mTOR)抑制剂BEZ235联合组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA对宫颈癌HeLa细胞增殖与凋亡的影响,分析其相关机制。方法 将宫颈癌HeLa细胞分为对照组(未加任何药物刺激)、BEZ235组(100 nmol/L)、SAHA组(10μmol/L)、联合给药组(BEZ235 100 nmol/L+SAHA 10μmol/L)。采用噻唑蓝(MTT)法检测宫颈癌HeLa细胞活力,采用Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡情况,采用蛋白质印迹法检测bcl-2蛋白、Bax蛋白及PI3K/AKT/mTOR信号通路激活情况。结果 对照组、BEZ235组、SAHA组及联合给药组宫颈癌HeLa细胞OD值分别为(0.77±0.05)、(0.62±0.05)、(0.60±0.04)、(0.45±0.05)。与对照组比较,BEZ235组、SAHA组及联合给药组宫颈癌HeLa细胞OD值均显著降低(t=5.959,P<0.05;t=7.690,P<0.05;t=13.280,P<0.05)。与BEZ235组和SAHA组比较,联合给药组宫颈癌HeLa细胞OD值均显著降低(t=7.187,P<0.05;t=6.631,P<0.05)。BEZ235组和SAHA组宫颈癌HeLa细胞OD值比较差异无统计学意义(t=1.183,P>0.05)。对照组、BEZ235组、SAHA组及联合给药组宫颈癌HeLa细胞凋亡率分别为(5.72±0.34)%、(13.11±0.67)%、(18.36±0.75)%、(30.46±1.10)%。对照组、BEZ235组、SAHA组及联合给药组bcl-2相对表达量分别为(0.84±0.06)、(0.47±0.05)、(0.40±0.04)、(0.20±0.04),Bax相对表达量分别为(0.19±0.03)、(0.46±0.05)、(0.67±0.05)、(0.82±0.05)。对照组、BEZ235组、SAHA组及联合给药组p-AKT相对表达量分别为(0.97±0.08)、(0.72±0.07)、(0.54±0.07)、(0.22±0.05),p-mTOR相对表达量分别为(0.84±0.06)、(0.43±0.07)、(0.61±0.08)、(0.16±0.05)。结论 PI3K/mTOR抑制剂BEZ235、组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA单独或联合应用能显著抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,诱导细胞凋亡,且具有协同效应,与PI3K/AKT/mTOR信号通路进一步抑制有关。     

芹黄素对肾癌A498细胞凋亡及HIF-1α/NF-κB信号通路的影响

目的探讨芹黄素对肾癌A498细胞凋亡及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。方法体外培养人肾癌A498细胞, 分为不同浓度芹黄素(10、20、40 μmol/L)组、芹黄素(40 μmol/L)+HIF-1α激动剂二甲基二酰氨基乙酸(DMOG)组、HIF-1α抑制剂利非西呱(YC-1)组、对照组。采用CCK-8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖, Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡, Western blot实验检测凋亡蛋白及HIF-1α/NF-κB通路蛋白表达。结果芹黄素显著抑制A498细胞增殖, 且抑制作用呈浓度依赖性(P<0.001)。与对照组比较, 10、20、40 μmol/L芹黄素组和YC-1组A498细胞凋亡率[(4.35±1.04)% vs (10.06±1.13)%、(18.52±2.58)%、(32.17±2.63)%、(26.94±2.41)%]、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)和切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)蛋白表达量均显著升高, B淋巴细胞瘤2(Bcl-...     

DEHP与BaP联合诱导Chang liver细胞线粒体介导细胞凋亡作用

目的 研究邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)与苯并(a)芘(BaP)联合染毒对Chang liver细胞的毒性.方法 DEHP(62.5、125、250、500和1000 μmol/L)与BaP(64 μmol/L)单独或联合染毒Chang liver细胞24h,检测细胞活力、细胞内活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位(MMP)、细胞凋亡率和Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)以及半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达量.结果 联合染毒各组细胞存活率均低于DEHP单独染毒组(t =6.22、4.64、6.64、5.84、7.29,P＜0.01),但胞内ROS水平均升高(t=4.57、2.23、2.39、2.22、2.16,P ＜0.05或P＜0.01);≥250μmol/L DEHP与BaP联合染毒组的MMP分别为(80.12±6.41)％、(69.92±5.56)％和(53.76±1.88)％,均低于BaP单独染毒组的(165.93±5.09)％(t=10.92、12.51、14.62,P＜0.01);细胞凋亡率分别为(7.73±1.91)％、(11.00±3.04)％和(14.20±3.96)％,均高于BaP单独染毒组的(1.55±0.21)％(t=3.96、6.06、8.11,P＜0.01);此外,活化caspase-3的高表达和升高的Bax/Bcl-2比值也被检出.结论 较高浓度DEHP与BaP联合染毒Chang liver细胞促发ROS水平升高和线粒体膜电位降低,并导致了细胞凋亡;Bax、Bcl-2和活化caspase-3参与了此调控过程.     

预诱导HSP90α对HepG2细胞热应激的影响

目的 探讨预诱导热休克蛋白90α(HSP90α)后,细胞热应激反应的变化,并探索诱导细胞热习服的策略。方法 将人肝细胞癌细胞系HepG2培养于42℃细胞培养箱制作热应激模型,用不损伤细胞活性浓度的HSP90抑制剂17-DMAG诱导HSP90α表达增多,通过流式细胞术检测细胞活性氧（ROS）含量和凋亡,CCK-8检测细胞活性,Western blot检测蛋白变化。结果 热应激0.5～4 h后,细胞内ROS含量逐渐升高（F=332.22,P<0.01）;在37℃恢复至24 h后,热应激1～4 h组细胞内γH2AX较0 h组显著增多,同时细胞活性也随热应激时间延长而降低（F=59.97,P<0.01）,热应激4 h组活性只有0 h组的（71.39±2.55）%;使用5 nmol/L 17-DMAG预处理24 h诱导HSP90α表达增多后,能显著减少热应激后的γH2AX和细胞凋亡率（F=62.79,P<0.01）,使热应激4 h组细胞凋亡率从（26.06±2.48）%降至（15.93±1.67）%。结论 通过诱导HSP90α表达增多能减少细胞热应激后的DNA损伤和凋亡,有利于...     

柴胡皂苷D对SGC-7901细胞生长及迁移抑制作用

目的探讨柴胡皂苷D对胃癌SGC-7901细胞生长、迁移抑制作用及机制。方法实验设对照组、低、中、高剂量柴胡皂苷组(5、10、20μmol/L柴胡皂苷D);采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞24、48和72 h细胞增殖情况;采用原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测各组细胞凋亡;Transwell检测各组细胞迁移能力;实时定量荧光PCR技术(real time PCR)检测各组细胞中norrin及livin表达;蛋白印迹法检测各组细胞norrin、livin、p57和cyclin E表达。结果 MTT结果显示,与对照组比较,低、中、高剂量柴胡皂苷组SGC-7901细胞增殖受到明显抑制,呈剂量效应关系(P<0.05);Transwell结果显示,与对照组[(190±7)个/视野]比较,低、中、高剂量柴胡皂苷组细胞迁移数量[分别为(114±9)、(87±6)、(38±4)个/视野]均减少(均P<0.05);与对照组(4.94±1.14)比较,低、中、高剂量柴胡皂苷组SGC-7901细胞凋亡指数[分别为(8.46±1.18)、(11.76±2.85)、(34.34±7.74)]均增加(均P<0.05);与对照组比较,中、高剂量柴胡皂苷组SGC-7901细胞中norrin、livin mRNA及蛋白表达均减少(均P<0.05),各剂量组SGC-7901细胞中cyclinE蛋白表达均明显减少,p57表达明显增加,且呈剂量效应关系(均P<0.05)。结论柴胡皂苷D对胃癌细胞生长、迁移具有抑制作用,其机制可能与柴胡皂苷D减少norrin、livin表达,延长细胞周期、促进细胞凋亡有关。     

麦角胺联合奥沙利铂诱导骨肉瘤细胞增殖和凋亡行为变化

目的探讨麦角胺与奥沙利铂联合应用对骨肉瘤细胞的影响。方法通过使用麦角胺和奥沙利铂分别或联合作用于骨肉瘤细胞,分为空白对照组、麦角胺组、奥沙利铂组和联合用药组。采用细胞增殖实验检测不同处理对骨肉瘤细胞增殖情况的影响;通过克隆形成检测不同处理对骨肉瘤细胞增殖能力的影响;通过细胞凋亡实验检测不同处理对骨肉瘤细胞凋亡行为的影响;Transwell细胞侵袭实验检测不同处理对骨肉瘤细胞侵袭行为的影响;裸鼠成瘤实验检测不同处理对骨肉瘤细胞侵袭行为的影响;Western blot检测PCNA蛋白水平。结果与空白对照组相比,麦角胺、奥沙利铂或联合用药均可抑制骨肉瘤细胞的生长[(1.54±0.23)vs(1.28±0.19)vs(0.78±0.12)vs(0.34±0.08),P0.01];与空白对照组相比,麦角胺和奥沙利铂处理组中的骨肉瘤细胞集落明显减少,麦角胺和奥沙利铂联合应用时,细胞集落数明显少于单用麦角胺和奥沙利铂[(146.7±17.9)vs(41.2±6.6)vs(38.4±7.1)vs(12.6±4.3),P0.05];与空白对照组相比,麦角胺和奥沙利铂处理组中的骨肉瘤凋亡细胞数目明显减少,麦角胺和奥沙利铂联合应用时,细胞凋亡数目明显多于单用麦角胺和奥沙利铂[(0.80±0.10)%vs(8.31±0.12)%vs(11.62±1.39)%vs(18.32±3.16)%,P0.05];与空白对照组相比,麦角胺和奥沙利铂处理组中的骨肉瘤侵袭细胞数目明显减少,麦角胺和奥沙利铂联合应用时,细胞侵袭数目明显少于单用麦角胺和奥沙利铂[(121.3±11.3)vs(68.1±7.6)vs(64.2±7.1)vs(24.6±2.6),P0.05];与空白对照组相比,麦角胺组裸鼠移植瘤的体积和肿瘤均明显缩小[体积(3.16±0.31)cm~3 vs(0.75±0.13)cm~3,P0.05;重量(3.08±0.24)g vs(0.69±0.13)g,P0.05],与空白对照组相比,麦角胺组、奥沙利铂组和联合用药组PCNA蛋白的水平均明显降低[(8.14±0.46)vs(6.32±0.27)vs(3.18±0.19)vs(1.99±0.19),P0.05]。结论麦角胺可显著促进骨肉瘤细胞的凋亡行为,进而抑制其增殖与侵袭,与药物奥沙利铂联合使用效果更佳。     

凝血因子Ⅱ对肝癌细胞生物学功能的影响及其可能机制预测

目的 本研究以肝癌细胞为研究对象，探索凝血因子Ⅱ（简称F2）对肝癌细胞系的增殖、迁移、侵袭以及凋亡等生物学行为的影响，寻找新的肝癌预后标志物，为肝癌治疗提供潜在靶点。方法 利用ICGC数据库验证F2在肝癌中的表达水平及其与预后的关系。通过重组慢病毒载体构建稳定过表达和稳定敲低的肝癌细胞株，后通过CCK-8实验、平板克隆实验、划痕实验、Transwell细胞侵袭实验、流式细胞术、免疫印迹实验检测F2对肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响。最后利用生物学信息方法进行通路富集分析。结果 F2在肝癌组织中表达下调（P<0.001），且与患者总生存时间更短有关（P<0.01）。CCK-8、平板克隆实验结果显示，F2对肝癌细胞的增殖起抑制作用（P<0.05）；划痕实验、Transwell细胞侵袭实验结果显示，F2对肝癌细胞的迁移和侵袭起抑制作用（P<0.05）；流式细胞术和免疫印迹结果显示，F2诱导肝癌细胞凋亡（P<0.05）。F2的潜在相关基因主要参与胆固醇代谢、PPAR信号通路、凝血等过程。结论F2对肝癌细胞的增殖、迁移、侵袭有一定的抑制作用，并诱导肝癌细胞...