黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的H9C2心肌细胞凋亡的影响

目的:探讨黄芪甲苷(Astragaloside IV,ASIV)对异丙肾上腺素(Isoproterenol,ISO)诱导的H9C2心肌细胞凋亡的抑制作用及机制。方法:H9C2心肌细胞传代后随机分为正常对照组、异丙肾上腺素(10μmol/L)组、普萘洛尔(2μmol/L)组和黄芪甲苷(25、50、100μmol/L)组,采用流式细胞术检测H9C2心肌细胞凋亡率;运用JC-1荧光探针检测各组细胞线粒体膜电位的变化;采用Western Blot分别测定线粒体和胞浆中细胞色素C(Cytochrome C,Cyt-C)的蛋白表达。结果:与正常对照组相比,异丙肾上腺素组的凋亡率显著增加,线粒体膜电位降低,细胞色素C外流,线粒体细胞色素C表达减少而胞浆中表达增多。与模型组相比,黄芪甲苷(50、100μmol/L)组能明显降低凋亡率,提高线粒体膜电位及减少细胞色素C外流,且呈一定剂量依赖性。结论:黄芪甲苷可通过线粒体凋亡途径抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞凋亡。     

黄芪甲苷通过CaMKⅡ信号通路对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的保护作用

目的:从钙调素蛋白依赖激酶Ⅱ(Ca MKⅡ)信号通路的角度探讨黄芪甲苷(AsⅣ)对异丙肾上腺素(Iso)诱导乳鼠心肌细胞肥大的保护作用及其可能机制。方法:原代培养新生乳鼠心肌细胞,10 mol/L异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大,观察KN93(Ca MKⅡ抑制剂)、黄芪甲苷3,10,30 mol/L剂量组对肥大细胞的影响。采用消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;考马斯亮蓝试剂盒检测心肌细胞中总蛋白含量;罗丹明-鬼笔环肽染色观察细胞骨架;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心房利钠肽(ANP)mRNA表达;Wertern blot检测心肌细胞Ca MKⅡ表达。结果:与正常对照组细胞比较,异丙肾上腺素模型组细胞体积、总蛋白含量、ANPmRNA和Ca MKⅡ表达分别增加98.14%、52.63%、87.37%和55.22%。黄芪甲苷可有效抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,黄芪甲苷30 mol/L组可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥大,使模型组细胞体积减小49.67%、总蛋白含量降低33.87%、ANPmRNA表达降低40.00%,Ca MKⅡ的表达降低31.73%。结论:黄芪甲苷可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,其机制可能与抑制Ca MKⅡ信号通路有关。     

黄芪甲苷对异丙肾上腺素致乳鼠心肌细胞肥大的影响及其机制

目的 探讨黄芪甲苷对异丙肾上腺素（ISO）致乳鼠心肌细胞肥大的抑制作用及其机制。方法 原代培养新生SD大鼠心肌细胞48 h,分别加入不同浓度的黄芪甲苷、IκBα磷酸化抑制剂BAY11-7082、β-受体阻滞剂普萘洛尔作用30 min,加入ISO 10 μmol/L继续培养48 h。消化分离法及计算机图像分析系统检测细胞体积;考马斯亮蓝法检测细胞中蛋白的量;RT-PCR法检测心肌细胞ANP和TLR4基因的表达;Western blotting法检测心肌细胞TLR4、p65和IκBα蛋白的表达;ELISA法检测细胞外液中TNF-α、IL-6的量。结果 与对照组比较,模型组心肌细胞体积明显增大,总蛋白的量增加,ANP基因、TLR4基因和蛋白、p65蛋白表达上调,IκBα蛋白表达下调,细胞外液中TNF-α、IL-6的量显著增加（P＜0.01）。黄芪甲苷、BAY11-7082和普萘洛尔均能有效抑制ISO诱导的心肌细胞肥大,使心肌细胞体积减小,总蛋白的量降低,ANP 基因、TLR4基因和蛋白、p65蛋白表达下调,IκBα蛋白表达上调（P＜0.05）,且上述作用呈一定的剂量相关性。结论 黄芪甲苷对ISO诱导的心肌细胞肥大有保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。     

黄芪甲苷减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤的机制研究

目的：探讨黄芪甲苷预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤及自噬的影响。方法：大鼠90只,分别划分成HIRI组、Sham组、干预组,根据再灌注时间分为术后4、8、16 h 3个亚组。HIRI组和干预组均建立肝脏缺血再灌注（I/R）模型。检验谷丙(ALT)及谷草（AST)转氨酶的含量;光镜下观察肝细胞及肝小叶等结构的变化;免疫印迹法分析Beclin-1的表达含量;在电镜下寻找肝细胞中自噬小体的数量差异。结果：1）同Sham组比较,HIRI组大鼠血清ALT和AST水平明显升高(P<0.05),于8 h达到顶峰。与HIRI组比较,干预组ALT和AST水平均明显降低(P<0.05);2）病理学结果示HIRI组大鼠肝脏出现了不同程度的损伤,而干预组的肝损伤明显改善;3）Western Blot结果现示,同Sham组比较,HIRI组Beclin-1蛋白灰度比均明显升高(P<0.05),于8 h达到顶峰。与HIRI组比较,干预组Beclin-1蛋白灰度比均明显降低(P<0.05);4）电镜结果示,HIRI组肝细胞中的自噬小体数量较Sham组在术后8 h明显上升(P<0.05);而干预组自噬小体较HIRI组在术后8 h明显减少(P<0.05)。结论：黄芪甲苷预处理可减轻大鼠肝缺血再灌注损伤,其可能的机制之一是通过降低大鼠HIRI时的自噬水平。     

黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导大鼠主动脉氧化应激和炎症的影响

目的:研究黄芪甲苷(Astragaloside IV,As IV)对异丙肾上腺素(Isoprenaline,ISO)诱导的大鼠主动脉内皮细胞损伤的影响并从氧化应激和抗炎症方面探讨其可能的机制。方法:以异丙肾上腺素15mg/kg腹腔注射7天制备大鼠主动脉内皮损伤模型。60只SD大鼠随机分为6组,在异丙肾上腺素造模前一天给予不同剂量的黄芪甲苷(25、50、100mg/kg)和普萘洛尔40mg/kg或羧甲基纤维素钠(1%)灌胃,第二天同时腹腔注射15mg/kg异丙肾上腺素连续7天。通过循环内皮细胞计数确定内皮细胞损伤程度;通过二氢乙锭(hydroethidine)荧光染色的方法原位定性超氧阴离子;Western-blot测定cu/zn SOD、NF-k B p65、Ik B-α蛋白表达;RT-PCR测定IL-1β,TNF-αmRNA的表达。结果:异丙肾上腺素作用后,外周血液中循环内皮细胞比空白增多了253.59%;血管中超氧阴离子增加了115.12%;cu/zn SOD表达下降了22.80%;p65表达升高了34.40%,IkB-α蛋白表达降低了33.30%;同时主动脉血管组织中炎症因子IL-1β、TNF-α的mRNA表达量分别上升了162.41%、108.20%。与异丙肾上腺素组相比,黄芪甲苷不同剂量组均有所改善,且在黄芪甲苷(50mg/kg)效果最明显,表现为外周血循环内皮细胞数目减少了49.34%,血管组织中超氧因子减少了42.42%,p65蛋白表达降低了16.47%,cu/zn SOD、IkB-α的蛋白表达分别升高了18.37%、29.10%,主动脉血管组织中IL-1β、TNF-α的mRNA表达分别降低了35.02%、43.25%。结论:黄芪甲苷能改善异丙肾上腺素诱导的大鼠主动脉血管内皮细胞的损伤,其机制可能是从抗氧化和抗炎症方面来保护血管内皮细胞,进而改善血管舒缩功能。     

黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的大鼠原代心肌细胞损伤的抗凋亡作用

目的:研究黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的SD大鼠乳鼠原代心肌细胞损伤的抗凋亡作用,并探讨相关的作用机制。方法:利用酶解法和差速贴壁方法从出生1~3 d的正常SD大鼠的乳鼠心脏中分离得到原代心肌细胞,种于24孔板,体外培养48 h后,设置空白组、模型组、美托洛尔组及黄芪甲苷低、中、高剂量组。预先给予各组对心肌细胞有害的儿茶酚胺类物质异丙肾上腺素(ISO),造成体外原代心肌细胞损伤模型,空白组心肌细胞不加ISO;30 min后予各治疗组相应浓度的美托洛尔(2.336μg·L~(-1))及黄芪甲苷低、中、高剂量(3,10,30μmol·L~(-1))。BCA法检测总蛋白含量,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测原代心肌细胞的B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关蛋白X(Bax)及Bcl-2相关k蛋白(Bak)的表达,流式细胞学法检测各组细胞的凋亡率,Hochest/PI双染法镜下观察各组细胞细胞核的形态,从而检测细胞的凋亡情况。结果:与空白组比较,各给药组(10~40μmol·L~(-1))原代心肌细胞的活力上调(P0.05);HOCHEST/PI双染结果显示,与模型组比较,美托洛尔组及黄芪甲苷中、高剂量亮蓝色凋亡细胞明显减少;细胞流式结果显示,与模型组比较,美托洛尔组凋亡率下调(P0.01),黄芪甲苷中剂量组凋亡率下调(P0.05),黄芪甲苷高剂量组凋亡率下调(P0.01);Bcl-2灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bcl-2的表达上调(P0.01),黄芪甲苷低剂量组Bcl-2表达上调(P0.05),黄芪甲苷中、高剂量组Bcl-2表达上调(P0.01);Bak灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bak的表达下调(P0.05),黄芪甲苷高剂量组Bak表达下调(P0.05);Bax灰度值结果显示,与模型组比较,美托洛尔组Bax的表达下调(P0.01),黄芪甲苷高剂量组Bax表达下调(P0.05)。结论:黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的大鼠原代心肌细胞损伤有抗凋亡作用。     

黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的H9C2心肌细胞维生素D受体mRNA表达的影响

目的:探讨黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的H9C2心肌细胞损伤模型存活率及维生素D受体mRNA表达的影响。方法:取正常生长的细胞,用80μmol·L~(-1)的异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导H9C2心肌细胞肥大的模型,并随机分为5组:正常组,模型组,模型组+黄芪甲苷(10μmol·L~(-1))组,模型组+黄芪甲苷(30μmol·L~(-1))组,模型组+黄芪甲苷(60μmol·L~(-1))组。运用MTT法检测心肌细胞的存活率,Real-Time PCR法检测各组H9C2心肌细胞维生素D受体mRNA的表达量。结果:MTT法显示使用异丙肾上腺素会诱导H9C2心肌细胞损伤,而不同剂量的黄芪甲苷可提高心肌细胞的活性,且黄芪甲苷的浓度在30μmol·L~(-1)时,细胞存活率最高。Real-Time PCR检测结果显示,不同剂量的黄芪甲苷对异丙肾上腺素诱导的肥大H9C2心肌细胞维生素D受体mRNA相对表达量与模型组相比,其表达均明显上调(P0.05)。结论:黄芪甲苷对H9C2心肌细胞损伤具有保护作用,其机制可能与其通过维生素D轴调节VDR基因表达水平有关。     

芍药苷对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌肥大的抑制作用及其机制研究

目的:探讨芍药苷(PEF)对异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠心肌肥大的抑制作用及其潜在的机制。方法:雄性SD大鼠40只,随机分成5组,每组8只,正常组,模型组,PEF低、中、高剂量组(20,40,80 mg·kg-1),除正常组外,大鼠每天ih给予ISO(5 mg·kg-1,连续10 d)以诱导心肌肥大模型,ih ISO的同时ig给予PEF。给药结束后,分离心脏,测量全心重与体重以及左心室重与体重的比值;HE染色观察心肌细胞大小的改变;RT-q PCR检测肥大标志物心钠素(ANP)和脑钠素(BNP)以及心肌营养素-1(CT-1)的mRNA表达;Western blot和DCFH-DA荧光法分别检测心肌组织中CT-1蛋白的表达和活性氧(ROS)的水平。结果:与正常组比较,模型组全心重与体重、左心室重与体重的比值以及心肌细胞横截面积和ANP,BNP mRNA表达明显增加,同时心肌组织中CT-1 mRNA和蛋白表达以及ROS的水平也明显升高(P0.01);与模型组比较,PEF明显降低全心重与体重、左心室重与体重的比值以及心肌细胞横截面积和ANP,BNP mRNA表达,心肌组织中CT-1 mRNA和蛋白表达以及ROS的水平也明显降低。结论:PEF可抑制ISO诱导的心肌肥大,其机制可能与减少ROS的产生进而下调CT-1的表达有关。     

黄芪甲苷抑制IKK/NF-κB炎症通路减轻高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤

[目的]观察黄芪甲苷减轻高糖诱导H9c2细胞损伤的作用机制。[方法]通过高糖孵育诱导H9c2心肌细胞损伤模型,MTT法测定细胞存活率,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量,蛋白印迹(Western Blot)法检测细胞内IκB激酶β(IKK-β)、核转录因子κB(NF-κB)、p-NF-κB及TNF-α蛋白表达水平。[结果]给予高糖处理H9c2心肌细胞12 h能明显下调细胞存活率(P0.05);黄芪甲苷(20、40、80μmol/L)预处理10 min可呈剂量依赖性增强细胞活力,降低细胞培养液上清中TNF-α和IL-6的含量(P0.05),下调IKK-β蛋白表达(P0.05),抑制NF-κB磷酸活化水平(P0.05),并降低TNF-α蛋白表达(P0.05)。[结论]黄芪甲苷可通过抑制IKK/NF-κB炎症通路过度激活减轻高糖诱导的H9c2心肌细胞损伤。     

黄芪甲苷对H9c2心肌细胞能量代谢的影响及其机制

目的:探讨黄芪甲苷(Astragaloside IV,As IV)对H9c2心肌细胞能量代谢的影响及其机制。方法:H9c2心肌细胞培养,传代后随机分为6组,空白组、模型组、不同浓度黄芪甲苷用药组及普萘洛尔组。培养液中分别加入黄芪甲苷(25、50、100μmol/L)及普萘洛尔(2μmol/L)预处理,30min后加入Iso(10μmol/L)继续培养48 h。消化分离法及计算机图像分析系统检测细胞体积;考马斯亮蓝法检测细胞中蛋白的量;real-time RT-PCR法检测心肌细胞心房钠尿肽(ANP)mRNA的表达;Western blotting法检测心肌细胞PGC-1α、PDK4蛋白的表达;酶联免疫吸附测定(Elisa)法检测细胞外液中三磷酸腺苷(ATP)、单磷酸腺苷(AMP)及游离脂肪酸(FFA)的含量。结果:与正常对照组相比,模型组心肌细胞体积明显增大,总蛋白的量增加,ANP mRNA表达上调,PGC-1α、PDK4蛋白表达下调,心肌细胞中FFA含量及ATP/AMP比值减少。黄芪甲苷(50、100μmol/L)、普萘洛尔(2μmol/L)均能有效抑制Iso诱导的心肌细胞肥大,使心肌细胞体积减小,总蛋白的量降低,ANP mRNA表达下调,PGC-1α、PDK4蛋白表达上调。结论:黄芪甲苷对Iso诱导的H9c2心肌细胞肥大有保护作用,改善肥大心肌细胞的能量代谢表达水平,其机制可能与PGC-1α信号通路有关。     

黄芪甲苷对谷氨酸诱导大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的:探讨黄芪甲苷对谷氨酸诱导大鼠海马神经元损伤的保护作用及其机制。方法:将培养7~9天大鼠海马细胞随机分为对照组、黄芪甲苷组、谷氨酸损伤组、黄芪甲苷预处理组。采用噻唑蓝法测定细胞存活率,比色法测定培养液中乳酸脱氢酶含量,流式细胞仪测定细胞凋亡率;2,7-二氢二氯荧光黄双乙酸钠探针法检测细胞中活性氧的水平,酶联免疫吸附法检测细胞上清液中8-羟基脱氧鸟苷的含量。结果:0.1 mmol/L谷氨酸作用于海马神经元24小时后,细胞存活率下降、培养液中乳酸脱氢酶含量、细胞凋亡率、细胞中活性氧的水平及上清液中8-羟基脱氧鸟苷的分泌量均明显升高。于损伤前加入黄芪甲苷(0.08,0.40,2.00mg/L)孵育30 min可以不同程度提高细胞存活能力,减少乳酸脱氢酶的漏出,降低细胞凋亡率和上清液中8-羟基脱氧鸟苷的分泌量,但以0.40,2.00 mg/L黄芪甲苷预处理组效果更明显。单纯黄芪甲苷组存活率、细胞凋亡率与正常对照组相比无显著差异,但细胞中活性氧的水平以及上清液中8-羟基脱氧鸟苷的分泌量明显降低。结论:黄芪甲苷预处理能减轻谷氨酸诱导的海马神损伤,其机制可能与其抗氧化有关。     

黄芪甲苷减轻5-氟尿嘧啶诱导大鼠心肌细胞凋亡的实验研究

目的 本研究评估黄芪甲苷对5-氟尿嘧啶诱导大鼠心肌损伤心肌结构及功能的保护作用,同时探索黄芪甲苷对心肌细胞凋亡的影响.方法 选取8周龄雄性SD大鼠,分为对照组、模型组、黄芪甲苷干预组.以5-氟尿嘧啶注射液,隔日1次,腹腔注射7次建立心脏毒性模型组;干预组给与黄芪甲苷稀释液,灌胃,连续2周进行干预.检测血清心肌酶CK-M...     

黄芪甲苷对缺血再灌注诱导的大鼠心肌细胞及线粒体自噬的调节作用机制研究

目的:研究黄芪甲苷对缺血再灌注诱导的大鼠心肌细胞及线粒体自噬的调节作用机制。方法:选取75只SD健康大鼠,10只作为空白组,其余大鼠建立心肌缺血再灌注模型。最终建模成功64只,将建模成功大鼠分为模型组、低、中、高剂量组各16只。模型组和低、中、高剂量组建立心肌缺血再灌注大鼠模型。建模成功后,低、中、高剂量组大鼠腹腔注射1 mg/kg、2 mg/kg、4 mg/kg的黄芪甲苷。在大鼠给药1周后检测大鼠指标变化。结果:高剂量组大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)、心肌磷酸肌酸激酶(CK)以及谷草转氨酶(AST)心肌梗死面积、心肌细胞凋亡指数、心肌细胞自噬体数量、Bax、Caspase-3、PINK1、Parkin、p62、LC3Ⅱ表达量均低于低剂量组、中剂量组,Bcl-2表达量高于高于低剂量组、中剂量组(P<0.05)。结论:黄芪甲苷通过作用于PINK1/Parkin通路,共同调控自噬蛋白和凋亡蛋白,进而起到调节心肌缺血再灌注大鼠线粒体自噬,抑制心肌细胞凋亡的作用,且呈剂量依赖。     

盐酸药根碱抗异丙肾上腺素诱导的心肌H9c2细胞肥大作用研究

[目的]研究盐酸药根碱对异丙肾上腺素诱导的H9c2心肌细胞肥大的影响。[方法]采用体外培养的心肌H9c2细胞,通过检测细胞总蛋白的方法评价细胞肥大程度,采用实时聚合酶链反应(PCR)的方法检测盐酸药根碱对异丙肾上腺素诱导的心钠肽(ANP)和脑钠肽(BNP)mRNA水平上升的影响。使用钙-4试剂盒检测细胞内钙离子浓度。细胞转染β1肾上腺素受体,考察盐酸药根碱与β1肾上腺素受体竞争性结合能力。采用Western blot方法考察盐酸药根碱对异丙肾上腺素(ISO)诱导的ERK通路磷酸化的影响。[结果]盐酸药根碱显著抑制异丙肾上腺素诱导的H9c2细胞肥大。盐酸药根碱显著抑制异丙肾上腺素诱导的H9c2细胞中ANP及BNP mRNA水平上升;ISO及盐酸药根碱与β1肾上腺素受体均具有一定的结合能力。盐酸药根碱抑制ISO诱导的ERK信号通路激活。[结论]盐酸药根碱能通过与β1肾上腺素受体结合发挥抑制ERK信号通路激活而抗心肌肥大作用。     

黄芪甲苷对缺氧/复氧损伤H9c2心肌细胞的影响

目的:观察黄芪甲苷对缺氧/复氧损伤H9c2心肌细胞干预作用。方法:H9c2心肌细胞培养,传代后随机分为5组,对照组、缺氧/复氧组、黄芪甲苷药物预处理组:培养液中加入终浓度分别为25、50和100μmol/L的黄芪甲苷预处理,12h后进行缺氧/复氧处理。分别收取细胞培养上清液,用酶联免疫吸附技术(Elisa)测定上清液中的白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),并检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;采用RT-PCR技术检测NF-κB的基因表达。结果:黄芪甲苷(25、50、100μmol/L)预处理12h后可明显降低IL-6、TNF-α、MDA的含量,可明显提高SOD含量,并可以减低核转录因子NF-κB P65基因表达水平,并且具有一定的量效关系。结论:黄芪甲苷保护缺氧/复氧对H9c2心肌细胞损伤,通过提高SOD含量,降低MDA含量,发挥抗氧化作用,并且抑制炎性因子IL-6、TNF-α分泌,其机制与减低核转录因子NF-κB P65基因表达水平有关。     

南葶苈子抑制氧化应激与自噬通路抗H_2O_2诱导的H9c2细胞损伤作用研究

目的探究南葶苈子水提物(DS)对H_2O_2诱导的心肌H9c2细胞损伤的保护作用及潜在机制。方法使用高效液相色谱与质谱联用方法分析鉴定DS中主要成分峰。采用H_2O_2处理制备H9c2细胞损伤模型,分为对照组、模型组、普罗布考组及DS 100、200、400μg/m L组,MTT法检测H9c2细胞活力;流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞自噬水平、线粒体膜电位;试剂盒检测细胞氧化应激相关指标;Incell-Western法检测凋亡通路关键蛋白和自噬标志性蛋白表达水平。结果共分析鉴定了DS中含量最高的7种成分。与模型组比较,DS可以提高H9c2细胞活力(P0.05、0.01)与细胞存活率(P0.01),改善线粒体膜电位水平(P0.01),调节凋亡通路关键蛋白Caspase-3和Bax/Bcl-2蛋白表达(P0.01),抑制心肌细胞凋亡;并能极显著降低细胞自噬水平(P0.01),升高自噬标志性蛋白自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)、p62表达水平(P0.01),抑制心肌细胞自噬;降低心肌活性氧(ROS)水平(P0.01),调节细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)水平(P0.01),改善心肌细胞氧化应激。结论 DS可以有效保护由H_2O_2引起的H9c2细胞损伤,其机制可能与改善细胞的氧化应激、抑制细胞凋亡和自噬有关,其物质基础可能与所含的黄酮苷类成分有关。     

苦瓜皂苷L 对异丙肾上腺素诱导的大鼠H9c2 心肌细胞肥大的作用研究

目的探究苦瓜皂苷L 对异丙肾上腺素诱导的大鼠H9c2 心肌细胞肥大的保护作用及机制。方法（1）体外 培养大鼠H9c2 心肌细胞,采用MTT 法评价不同浓度的异丙肾上腺素（0.625、1.25、2.5、5、10 μmol·L-1）和不 同浓度的苦瓜皂苷L（1.625、3.125、6.25、12.5、25.0 μg·mL-1）对心肌细胞活力的影响。（2） 采用异丙肾上腺素 诱导心肌细胞肥大模型。实验分为正常组、模型组、苦瓜皂苷L 干预组和苦瓜皂苷L 单独组。分别通过细胞 拍照结合ImageJ 软件测量、荧光定量PCR 法考察苦瓜皂苷L 12.5 μg·mL-1 对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞表 面积和心肌肥大相关胚胎基因ANP、β-MHC 及α-SKA 表达的影响。在此基础上,选择参与甘油磷脂代谢的 酶VI 组磷脂酶A2（PLA2G6）、二酰甘油激酶ζ（DGKZ）、甘油磷酸胆碱磷酸二酯酶1（GPCPD1）为指标,评价苦 瓜皂苷L 对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞上述3 种酶基因表达的影响;进一步以PLA2G6 和DGKZ 蛋白为指 标,采用Western Blot 法考察苦瓜皂苷L 对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞PLA2G6 和DGKZ 蛋白表达的影 响。结果（1）与正常组比较,异丙肾上腺素（0.625~10 μmol·L-1）和苦瓜皂苷L（1.625~25 μg·mL-1）对心肌细胞 活力没有明显影响（P＞0.05）。本研究选用异丙肾上腺素10 μmol·L-1 和苦瓜皂苷L 12.5 μg·mL-1 进行实验。 （2）与正常组比较,模型组心肌细胞表面积增加（P＜0.05）,心肌肥大相关胚胎基因ANP、β-MHC、α-SKA 表 达上调（P＜0.05）,PLA2G6、DGKZ、GPCPD1 mRNA 表达上调（P＜0.05）,PLA2G6 和DGKZ 蛋白表达增加 （P＜0.05）;与模型组比较,苦瓜皂苷L 干预组能够降低心肌细胞表面积（P＜0.05）,下调心肌肥大相关胚胎基 因ANP、β-MHC、α-SKA 表达（P＜0.05）, 下调PLA2G6、DGKZ、GPCPD1 mRNA 表达（P＜0.05）, 降低 PLA2G6 和DGKZ 蛋白表达（P＜0.05）。结论苦瓜皂苷L 可缓解异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,可能与 其抑制甘油磷脂代谢酶PLA2G6 和DGKZ 的表达有关。     

黄芪甲苷对博来霉素诱导的小鼠特发性肺纤维化自噬和焦亡的影响

目的:探究黄芪甲苷对特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)小鼠自噬和焦亡的影响及其作用机制,为黄芪抗肺纤维化的研究治疗提供新思路。方法:C57bl/6小鼠随机分为4组,分别为假手术组、模型组、黄芪甲苷组和地塞米松组。小鼠模型行气管切开术,滴注博来霉素(BLM)诱导成模。黄芪甲苷组和地塞米松组每天分别灌胃黄芪甲苷(50 mg·kg-1)和地塞米松(0.125 mg·kg-1),假手术组和模型组每天予等量生理盐水。小鼠于14 d取材,通过组织病理学染色评估黄芪甲苷对IPF诱导的肺损伤的治疗作用,通过蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中,LC3Ⅱ,白细胞介素-1β(IL-1β),IL-18和半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)的水平以评估炎症反应程度和焦亡水平的表达水平。以苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)三色染色观察肺组织形态和胶原纤维的表达水平。免疫组化(IHC)及Western blot分析自噬和焦亡标记蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组肺组织炎症反应明显、胶原蛋白显著增加(P0.05),与模型组比较,黄芪甲苷组明显抑制肺组织炎症反应,下调胶原蛋白表达(P0.05)。IHC和Western blot检测结果均显示,黄芪甲苷能显著提高LC3Ⅱ蛋白表达(P0.05)同时抑制p62蛋白积累(P0.05),降低Caspase-1,IL-1β和IL-18蛋白表达(P0.05,P0.01)的表达水平。结论:黄芪甲苷治疗显着改善了BLM诱导的小鼠肺纤维化,其作用机制可能与抑制焦亡并增强自噬有关。研究表明黄芪甲苷在抑制肺纤维化方面具有的治疗潜力。     

黄芪甲苷防治心肌纤维化研究进展

心肌纤维化(myocardial fibrosis, MF)是指心脏成纤维细胞过度增殖、细胞外基质(extracellular matrix, ECM)过度堆积为主要表现的疾病,是多种心血管疾病发展到一定阶段的共同病理改变,表现为心肌重构及心肌代谢紊乱,最终导致心力衰竭而引发死亡。黄芪甲苷具有抗炎、抗氧化应激、抗细胞凋亡、改善心肌缺血再灌注等药理作用,在心肌纤维化防治方面有着良好的潜力。文章旨在对黄芪甲苷防治心肌纤维化的机制进行综述,为黄芪甲苷临床治疗心肌纤维化提供参考。     

固相萃取HPLC法研究黄芪总苷、黄芪甲苷在大鼠体内的黄芪甲苷血药浓度

目的 建立了固相萃取HPLC测定大鼠血清中黄芪甲苷含量的方法,比较黄芪总苷(AST)、黄芪甲苷(AST-Ⅳ)在大鼠腹腔注射给药后相同时间大鼠血清中AST-Ⅳ的含量.方法 分别以AST、AST-Ⅳ(按AST-Ⅳ计20 mg/kg相等剂量)二种药物大鼠腹腔注射,给药后30,60,75,90,105,120 min测定大鼠血清中AST-Ⅳ的含量,并对两种药物结果 进行分析、比较.结果 在大鼠腹腔注射等量AST-Ⅳ,测得AST、AST-Ⅳ两种药物各时点血清中AST-Ⅳ浓度前者均是后者3倍以上,且最高浓度前者是后者的3.5倍.结论 以AST-Ⅳ血药浓度为指标,AST较AST-Ⅳ更易于吸收.