环磷酰胺对人γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901作用的影响

目的探讨环磷酰胺对人γδT细胞杀伤胃癌细胞SGC-7901作用的影响。方法异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞,不同浓度的环磷酰胺诱导γδT细胞24 h,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测环磷酰胺对γδT细胞增殖率的影响,LDH法检测γδT细胞对胃癌细胞的杀伤活性,流式细胞仪检测诱导前后的γδT细胞的凋亡率及NKG2D受体表达水平。结果γδT细胞培养10天时从扩增前4.21%增加到70.35%,当环磷酰胺浓度在0.05~2.0 ng/L时能够促进人γδT细胞的生长,增殖率随着该药物浓度的增高而增高,浓度大于2.0 ng/L时抑制γδT细胞的生长,γδT细胞杀伤活性与对照组比较明显增高,凋亡率与对照组比较明显降低,且γδT细胞表面NKG2D表达水平明显高于对照组。结论环磷酰胺在一定的浓度范围内,促进γδT细胞的增殖,提高γδT细胞对胃癌细胞的杀伤活性,抑制γδT细胞的凋亡,增强γδT细胞表面NKG2D的表达水平,为环磷酰胺在肿瘤免疫治疗中提供了一定的理论依据。     

白桦脂酸对γδT细胞杀伤胰腺癌细胞功能影响及机制研究

目的:观察白桦酯酸作用前后对人γδT细胞增殖及对胰腺癌SW-1990细胞杀伤活性的影响,探讨其发生的机制。方法:分离健康者外周血单个核细胞(PBMC)在体外经多种细胞因子诱导为γδT细胞,收集培养第7天的γδT细胞,给予不同浓度白桦酯酸诱导48h,CCK8法检测白桦酯酸对γδT细胞增殖的影响,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测胰腺癌SW-1990细胞增殖率;γδT细胞分泌细胞因子的检测;流式细胞术(FCM)检测白桦酯酸作用前后γδT细胞穿孔素(PFP)、颗粒酶B(GrB)、NKG2D、CD107a的表达变化;乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定白桦酯酸对γδT细胞杀伤胰腺癌细胞株SW-1990的活性影响。结果:白桦酯酸浓度在0.013～1.6μg/mL时能促进γδT细胞生长;经白桦酯酸诱导后的γδT细胞PFP、GrB、CD107a、NKG2DIFN-γ和TNF-а的表达显著高于对照组(P<0.05),对胰腺癌SW-1990细胞的杀伤活性亦显著高于对照组(P<0.05)。结论:白桦酯酸在一定浓度范围内能够促进γδT细胞增殖,并增强其对胰腺癌SW-1990细胞的杀伤活性,其机制可能与上调γδT细胞表面PFP、GrB、CD107a、NKG2D的表达和增加γδT细胞IFN-γ和TNF-а分泌有关。     

吡罗昔康提高γδT细胞杀伤胃癌细胞作用的机制研究

目的探讨吡罗昔康提高γδT细胞杀伤胃癌细胞作用的机制。方法按常规方法培养γδT细胞;在培养第9天的γδT细胞中加入不同浓度吡罗昔康（分别为0.01、0.02、0.04、0.08、0.16 mmol/L）诱导,24 h后收集培养上清液用于细胞因子γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素12（IL-12）检测,沉淀细胞用流式细胞术测定穿孔素、粒酶B和NKG2D及用LDH法检测γδT细胞杀伤胃癌细胞活性。结果吡罗昔康浓度为0.04 mmol/L时诱导的γδT细胞穿孔素和粒酶B分别为78.7%和71.8%,明显高于对照组（分别为51.4%和60.9%）。吡罗昔康能显著抑制γδT细胞NKG2D的表达,并随着药物浓度的增加作用越明显。γδT细胞经吡罗昔康诱导24 h后,培养上清液中IFN-γ和IL-12浓度与对照组比较没有明显变化;但能抑制TNF-α的分泌,并且随着药物浓度的增加抑制作用越明显。γδT细胞杀伤胃癌细胞BCG-823的活性在0.04 mmol/L时最高（75%）,明显高于对照组（58%）。结论经吡罗昔康诱导后γδT细胞杀伤BCG-823活性明显增高的机制可能与γδT细胞表达较高浓度的穿孔素和粒酶B有关。     

舒林酸对人γδT细胞的作用研究

目的:探讨舒林酸在预防消化道肿瘤中对人γδT细胞的影响.方法:异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞.不同浓度的舒林酸诱导γδT细胞和胃腺癌细胞(SGC-7901),流式细胞术检测培养前后的γδT细胞表面标记及检测舒林酸诱导的γδT细胞和SGC-7901细胞凋亡百分率.乳酸脱氢酶法测定γδT细胞的杀伤活性.结果:γδT细胞培养10天时从扩增前4.21%增加到70.35%,CD44达94.0%.舒林酸在100 μmol/L时对γδT细胞的生长抑制率达42.1%,明显高于对SGC-7901抑制率(7.4%).γδT细胞和胃腺癌细胞SGC-7901细胞经不同浓度的舒林酸诱导24 h后杀伤SGC-7901细胞作用在12.5 μmol/L时最强.舒林酸浓度在100 μmol/L时对γδT细胞作用24 h的凋亡率(52.71%)显著高于SGC-7901细胞(7.88%).结论:舒林酸在临床常规使用的药物浓度时可增强γδT细胞杀伤瘤细胞作用,超过这一浓度可明显抑制γδT细胞的增殖能力和杀伤活性,而对胃癌细胞株抑制作用不明显.这一结果为临床非甾体类药物预防消化道肿瘤的用量提供了实验依据.     

γ-氨基丁酸及其拮抗剂对γδT细胞的作用

目的研究γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)及其A受体拮抗剂印防己毒素(picrotoxin,PTX)对人外周血γδT细胞的增殖、细胞表面受体的表达、杀伤活性的影响及其可能的作用机制。方法在体外用不同浓度的GABA和PTX与人γδT细胞作用后,用MTT比色法和流式细胞仪(FCM)以及乳酸脱氢酶(LDH)法分别检测人γδT细胞的增殖能力、T细胞表面受体的表达和杀伤活性的变化。结果 GABA能显著地抑制γδT细胞的生长(P<0.01),并具有浓度依赖性,PTX对GABA的抑制细胞增殖有拮抗作用;GABA显著降低γδT细胞表面受体NKG2D的表达,增加γδ-TCR的表达,PTX有轻微的协同作用;GABA抑制了γδT细胞对人胰腺癌细胞株SW1990的杀伤活性,PTX能够拮抗GABA的此项作用。结论这些结果提示GABA可能通过多种途径对γδT细胞发挥作用,其杀伤活性主要由其表面受体NKG2D介导的,并且需要γδT细胞同时表达γδ-TCR和NKG2D两种受体。     

舒林酸提高γδT细胞杀伤胃癌细胞机制研究

目的探讨舒林酸提高γδT细胞杀伤胃癌细胞的作用机制。方法常规方法培养γδT细胞,收集培养第9天的γδT细胞用不同浓度的舒林酸（1、2、4、8、16、32μmol／L）诱导24h,收集培养上清液用于细胞因子γ-干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF—α）和白细胞介素12（IL-12）检测,沉淀细胞用于穿孔素、粒酶B、NKG2D流式细胞测定和用乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测γδT细胞杀伤胃癌细胞株（SGC-7901和BCG-823）活性。每组测试样本和指标均设未加药物诱导的对照组。结果舒林酸浓度在8μmol／L时,γδT细胞穿孔素和粒酶B达最高[分别为（71．5±5．3）％和（78．3±7．1）％],明显高于对照组[分别为（51．4±7．3）％和（60．9±7．1）％]。γδT细胞经不同浓度的舒林酸诱导后培养上清液中IL—12和TNF-α浓度没有差异;舒林酸在8μmol／L时上清液中IFN-γ浓度达最高[（246．1±20．7）ng／L],明显高于对照组[（196．1±13．2）ng／L];当舒林酸浓度达32μmol／L时,γδT细胞分泌的3种细胞因子明显低于对照组,两者比较有显著性差异（P〈0．05）。γδT细胞经舒林酸诱导后杀伤SGC-7901和BCG-823细胞活性在8μmol／L时达到峰值,此时对SGC-7901和BCG-823的杀伤活性分别为（73．6±3．9）％和（76．3±3．9）％,与对照组[（60．1±3．7）％和（59．2±4．5）％]比较有明显差异（P〈0．05）。结论舒林酸诱导后γδT细胞杀伤SGC-7901和BCG-823活性明显增高的机制可能与γδT细胞表达穿孔素和粒酶B及分泌的IFN-γ有关。     

MHV-3诱导小鼠暴发性肝炎模型中γδT细胞的活化性受体表达

目的探讨暴发性肝炎初期疾病急速恶化的机制,探讨在3型鼠肝炎病毒（MHV-3）诱导的小鼠爆发性肝炎模型中,小鼠感染病毒前后γδT细胞其活化受体NKG2D表达情况。方法建立MHV-3诱导小鼠暴发性肝炎模型,在不同感染时间点0、24、48h时对小鼠肝组织行苏木精-伊红染色（HE染色）,观察肝脏病理学改变,并检测血清谷丙转氨酶（ALT）和谷草转氨酶（AST）水平。采用流式细胞学方法标记γδT细胞,并标记其NKG2D的表达。结果MHV-3诱导小鼠暴发性肝炎模型中,γδT表面所表达活化性受体NKG2D表达增高。结论小鼠暴发性肝炎初期,肝脏重要的天然免疫效应细胞γδT细胞表面活化性受体NKG2D表达增高。     

吡罗昔康对人γδT细胞和消化系统肿瘤细胞的作用比较

目的:探讨吡罗昔康对人γδT细胞杀伤消化系统肿瘤细胞株的影响。方法:用异戊烯焦磷酸法体外扩增人外周血γδT细胞。用不同浓度的吡罗昔康诱导γδT细胞和消化系统肿瘤SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116、LOVO细胞株,用MTT法检测吡罗昔康对这些细胞的抑制率和用乳酸脱氢酶法测定γδT细胞的杀伤活性,用流式细胞术检测诱导前后的γδT细胞和SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞凋亡百分率。结果:γδT细胞培养10d时从扩增前4.21%增加到70.35%。吡罗昔康各种浓度对SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株抑制率明显高于γδT细胞。0.01~0.04mmol/L吡罗昔康诱导24h后的γδT细胞对5种肿瘤细胞的杀伤活性最高,浓度超过0.04mmol/L时杀伤活性呈下降趋势;SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞经不同浓度的吡罗昔康诱导24h后γδT细胞对其的杀伤活性与对照组比较无明显变化。0.16mmol/L吡罗昔康诱导24h对SGC-7901、SW-1990、SW-480、SW-1116和LOVO细胞株的凋亡率分别为12.26%、13.46%、14.59%、25.64%和39.36%,显著高于γδT细胞(8.16%)。结论:吡罗昔康在临床常规使用的药物浓度时可增强γδT细胞杀伤肿瘤细胞作用,超过这一浓度可明显抑制γδT细胞和肿瘤细胞的增殖能力和杀伤活性及增加细胞的凋亡率;吡罗昔康对肿瘤细胞株的抑制率明显高于γδT细胞。这一结果为临床吡罗昔康预防消化道肿瘤的用量提供了实验依据。     

白藜芦醇对人γδT细胞生长和杀伤功能的影响

目的 探讨白藜芦醇对人外周血γδT细胞生长和杀伤功能的影响。方法 用异戊烯焦磷酸法体外扩增人γδT细胞,不同浓度的白藜芦醇作用γδT细胞后,MTT法检测γδT细胞生长情况,流式细胞术检测给药前后γδT细胞杀伤功能相关标志物颗粒酶B、穿孔素和CD107a的表达。结果 人外周血单核细胞（PBMC）培养10 d后,γδT细胞比例从扩增前的3.12%增至80.46%;白藜芦醇浓度为0.2～12.5 μmol/L时能促进γδT细胞生长,其中以1.56 μmol/L作用最明显,使细胞增殖率高出对照组约15.90%;白藜芦醇1.56 μmol/L可上调γδT细胞杀伤功能相关标志物颗粒酶B、穿孔素、CD107a表达,随着给药浓度增高,γδT增殖及其颗粒酶B、穿孔素、CD107a表达逐渐降低。结论 白藜芦醇在一定浓度范围内可促进γδT细胞增殖,且增强γδT细胞杀伤功能相关标志的表达,这可能是其抗肿瘤作用机制之一。     

茶多酚对人γδT淋巴细胞和结肠癌细胞株SW-480的影响

目的:观察茶多酚对人γδT细胞杀伤肿瘤细胞活性的影响和诱导人结肠癌细胞株(SW-480)凋亡和死亡的作用。方法:在体外用不同浓度的茶多酚诱导人γδT细胞和SW-480细胞株,然后测定人γδT细胞杀瘤活性和对肿瘤细胞的作用。用不同浓度的茶多酚分别诱导SW-480细胞4 h后,弃含有茶多酚的培养液再继续培养24 h,然后测定其死亡和凋亡数,用γδT细胞作对照组。结果:茶多酚浓度350 mg/L,作用γδT细胞4 h后能明显增强γδT细胞的杀伤肿瘤细胞活性,与未诱导组和其他浓度组相比,P<0.01;γδT细胞对经茶多酚处理后的SW-480细胞杀伤活性也明显高于对照组(P<0.01)。各种浓度的茶多酚分别与γδT和SW-480细胞作用4 h,弃诱导液再继续培养24 h后,均能诱导其死亡和凋亡,在茶多酚浓度350 mg/L、诱导时间4 h时最明显;同一浓度的茶多酚诱导SW-480细胞死亡和凋亡率明显高于γδT细胞组。结论:茶多酚在一定浓度时能明显提高γδT细胞对肿瘤的杀伤活性;经茶多酚处理的SW-480细胞更易被γδT细胞杀伤。茶多酚浓度在350 mg/L时能诱导SW-480细胞凋亡而对人γδT细胞无影响。     

γ-氨基丁酸对人末梢血γδT细胞作用的实验研究

目的 研究γ-氨基丁酸(GABA)对人外周血γδT细胞的增殖、细胞周期、凋亡的变化、杀伤活性的影响及其可能的作用机制.方法 在体外用不同浓度的GABA与人γδT细胞作用后,用MTT比色法和流式细胞仪(FCM)以及乳酸脱氢酶(LDH)法分别检测人γδT细胞的增殖能力、T细胞周期、凋亡和杀伤活性的变化.结果 GABA能显著抑制γδT细胞的生长(P＜0.01),并具有浓度依赖性; GABA显著影响细胞周期比例的分布,促进细胞凋亡;GABA抑制γδT细胞对人胰腺癌细胞株SW-1990的杀伤活性.结论 GABA能显著抑制γδT细胞的增殖,抑制γδT细胞的杀伤活性.提示GABA可能是通过影响细胞周期及凋亡对γδT细胞发挥作用,进而影响其杀伤活性.     

乙醇及二甲基亚砜对人γδT细胞和αβT细胞凋亡与细胞活性的影响

目的观察不同浓度的乙醇及二甲基亚砜(DMSO)对人γδT细胞和αβT细胞凋亡与细胞活性的影响. 方法分别用结核杆菌低分子多肽抗原(Mtb-Ag)、CD3单抗(CD3mAb)刺激正常人外周血单个核细胞,分别获得Mtb-Ag激活的T细胞(αβT细胞为主)及CD3mAb激活的T细胞(γδT细胞为主);用不同浓度的乙醇及二甲基亚砜分别作用于γδT细胞和γδT细胞4、24 h后,应用Annexin-V-FITC/PI染色,流式细胞术检测不同T细胞亚群的凋亡,应用四唑盐(MTT)法检测T细胞的活性. 结果 Mtb-Ag激活的T细胞中γδT细胞比例可达70%～90%;CD3mAb激活的T细胞中γδT细胞比例>90%;与对照组相比,除浓度为1.0%及2.0%的DMSO作用于γδT细胞24h的诱导凋亡作用明显(P<0.05)及浓度为2.0%的DMSO作用于γδT细胞4h对细胞活性抑制明显(P<0.05)外,低浓度乙醇及DMSO(≤2.0%)对人γδT细胞和γδT细胞的诱导凋亡作用及对细胞活性的抑制作用均无显著性(P>0.05);与对照组相比,除5.0%乙醇作用于γδT细胞4 h及5.0% DMSO作用于γδT细胞4 h诱导细胞凋亡作用不明显(P>0.05)外,高浓度乙醇和DMSO(5.0%)对γδT细胞和γδT细胞的诱导凋亡作用及对细胞活性的抑制作用均增加(P<0.05). 结论乙醇及二甲亚砜(DMSO)均可诱导人γδT细胞和αβT细胞凋亡,且能抑制二者的细胞活性.     

不同来源细胞因子诱导的杀伤细胞体外杀伤作用比较

目的比较晚期恶性肿瘤患者自身来源的细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)与健康人来源的CIK细胞对肺癌细胞株A549杀伤作用的差异,初步探讨差异形成的机制,为临床应用健康人CIK细胞治疗恶性肿瘤提供理论依据。方法提取晚期恶性肿瘤患者及健康人外周血单个核细胞(PBMC),加入细胞因子诱导成CIK细胞,LDH释放法检测不同来源PBMC及CIK细胞对A549杀伤活性,流式细胞仪检测细胞表型及NK细胞活化受体(NKG2D)表达水平,ELISA法检测患者及健康人血浆游离MHCⅠ类相关链A分子(sMICA)水平。结果健康人来源的CIK细胞各亚群有更高的NKG2D受体表达,而血浆游离MICA浓度较晚期恶性肿瘤患者低,表现出更有效的抗肿瘤作用。结论健康人CIK细胞治疗恶性肿瘤有良好的应用前景。     

γδT细胞对宫颈癌细胞体外杀伤作用的探讨

目的:探讨宫颈癌组织中是否存在γδT细胞以及γδT细胞在体外抗肿瘤作用.方法:免疫组织化学法检测10例宫颈癌组织中γδT细胞的数量,固相抗体包被法体外扩增出特异性的γδT细胞后用流式细胞仪检测其纯度,乳酸脱氢酶释放实验检测γδT细胞对宫颈癌细胞株SiHa、HeLa细胞的杀伤能力.结果:免疫组化结果显示人宫颈癌组织中肿瘤浸润γδT细胞阳性染色较癌旁组织显著增强,该细胞通过固相抗体包被法体外扩增30 d之后用流式细胞仪检测细胞表面TCRγδ的阳性率高达(91.2±1.2)％,乳酸脱氢酶释放实验显示体外扩增的γδT细胞能够杀伤宫颈癌细胞株SiHa、HeLa细胞,并且其杀伤效应随效应细胞/靶细胞的比例增高而增强.结论:宫颈癌组织中存在γδT细胞,该细胞在体外对宫颈癌细胞具有杀伤作用,其杀伤效应随效应细胞/靶细胞的比例增高而增强.     

乙醇及二甲基亚砜对人γδT细胞和αβ细胞凋亡与细胞活性的影响

目的　观察不同浓度的乙醇及二甲基亚砜 (DMSO)对人γδT细胞和αβT细胞凋亡与细胞活性的影响。方法　分别用结核杆菌低分子多肽抗原 (Mtb Ag)、CD3单抗(CD3mAb)刺激正常人外周血单个核细胞 ,分别获得Mtb Ag激活的T细胞 (αβT细胞为主 )及CD3mAb激活的T细胞(γδT细胞为主 ) ;用不同浓度的乙醇及二甲基亚砜分别作用于γδT细胞和γδT细胞 4、2 4h后 ,应用Annexin V FITC/PI染色 ,流式细胞术检测不同T细胞亚群的凋亡 ,应用四唑盐(MTT)法检测T细胞的活性。结果　Mtb Ag激活的T细胞中γδT细胞比例可达 70 %～ 90 % ;CD3mAb激活的T细胞中γδT细胞比例 >90 % ;与对照组相比 ,除浓度为 1 0 %及 2 0 %的DMSO作用于γδT细胞 2 4h的诱导凋亡作用明显 (P <0 0 5 )及浓度为 2 0 %的DMSO作用于γδT细胞 4h对细胞活性抑制明显 (P <0 0 5 )外 ,低浓度乙醇及DMSO(≤ 2 0 % )对人γδT细胞和γδT细胞的诱导凋亡作用及对细胞活性的抑制作用均无显著性 (P >0 0 5 ) ;与对照组相比 ,除 5 0 %乙醇作用于γδT细胞 4h及 5 0 %DMSO作用于γδT细胞 4h诱导细胞凋亡作用不明显 (P >0 0 5 )外 ,高浓度乙醇和DMSO(5 0 % )对γδT细胞和γδT细胞的诱导凋亡作用及对细胞活性的抑制作用均增加 (P <0 0 5 )。结论     

扩增的NK细胞对胃癌细胞的杀伤作用及其机制

目的：探讨扩增的自然杀伤（NK）细胞对胃癌细胞的杀伤作用,阐明其作用机制。方法：提取和分离15例胃癌患者外周血单个核细胞（PBMCs）。观察扩增前后NK细胞形态表现,检测扩增前后NK细胞百分比,计算扩增后NK细胞扩增倍数,检测扩增前后NK细胞对胃癌细胞的杀伤作用,流式细胞术检测NK细胞表面活化性受体NKG2D和DNAM-1以及抑制性受体KIR2DL1和KIR3DL1的表达百分比。结果：扩增前NK细胞呈圆形,细胞体积比较小,细胞呈散在分布,扩增后NK细胞体积明显增大,细胞呈不规则形态。扩增后NK细胞百分比明显高于扩增前（P<0.01）,扩增后NK细胞数是扩增前的（596±152）倍。在效靶比为5∶1时,扩增后NK细胞对胃癌细胞的杀伤活性明显强于扩增前（P<0.01）。扩增后NK细胞表面活化性受体NKG2D和DNAM-1表达百分比明显高于扩增前（P<0.01）。扩增后NK细胞表面抑制性受体KIR2DL1和KIR3DL1表达百分比明显低于扩增前（P<0.05）。结论：扩增后NK细胞对胃癌细胞杀伤作用明显强于扩增前,其机制可能与扩增后NK细胞表面活化性受体表达升高和抑制性受体表达降低有关联。     

γδT细胞对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨γδT细胞对人宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响。方法从宫颈癌患者手术切除的肿瘤组织分离肿瘤浸润淋巴细胞,固相抗体包被法体外扩增得到γδT细胞(效应细胞),与人宫颈癌HeLa细胞(靶细胞)按照不同的比例共培养24h或48h后,MTT法检测HeLa细胞增殖情况,流式细胞术(FCM)检测细胞的凋亡。结果γδT细胞与HeLa细胞按不同效靶比共培养24h和48h后,MTT法检测结果显示,增殖率均较对照组显著降低(P<0.05)并显示了剂量依赖性,效靶比为32∶1时,50%以上的细胞停止增殖;γδT细胞与HeLa细胞(效靶比为4∶1)共培养24h后FCM分析结果显示,HeLa细胞凋亡率较对照组显著增强(P<0.01)。结论γδT细胞对人宫颈癌HeLa细胞增殖有抑制作用并呈现剂量依赖性,对细胞凋亡有促进作用。     

CIK细胞体外杀伤人肝癌细胞免疫学机制的实验研究

目的 探讨CIK(cytokine induced killer)细胞体外杀伤人肝癌细胞的机制。方法 取健康志愿者的成分血,用淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离获得外周血单个核细胞(PBMC),采取本室常规方法培养诱导成CIK细胞。体外诱导CIK杀伤人肝癌细胞,电镜下观察肝癌细胞的形态特征改变;用TUNEL法检测肝癌细胞的凋亡;免疫细胞化学法检测并比较FasL在单个核细胞和CIK细胞表面的表达;用MTT法检测抗FasL单克隆抗体对CIK细胞杀伤肝癌细胞活性的影响。结果 电镜观察CIK细胞能促进细胞凋亡超微结构的改变,表现为细胞固缩、微绒毛脱失、核染色体边集、核固缩;TUNEL LI的分析显示：CIK作用后肝癌细胞凋亡指数明显增高;FasL在CIK细胞表达增加;抗Fas单抗可抑制CIK杀伤肝癌细胞的活性。结论 免疫活性细胞CIK能诱导肝癌细胞的凋亡,Fas／FasL途径在其中起一定的作用。     

唑来膦酸刺激人外周血单个核细胞体外扩增γδT细胞及其在肝癌非特异性免疫中的作用

目的探讨唑来膦酸刺激人外周血γδT细胞的增殖作用,同时测定增殖后的γδT细胞对人肝癌细胞的杀伤效能。方法以不同浓度的唑来膦酸联合IL-2刺激健康人外周血γδT细胞增殖。以流式细胞仪检测相关表型,3H-TdR掺入法测定细胞增殖程度。以γδT细胞作为效应细胞,分别以不同人肝癌细胞作为靶细胞。以SRB法测定效应细胞对靶细胞的杀伤效能。结果外周血γδT细胞增殖明显,唑来膦酸为1μmol/L浓度时,γδT细胞增殖最明显。所得γδT细胞对3种肝癌细胞均表现出明显的杀伤作用。结论唑来膦酸能明显促进人外周血γδT细胞的增殖,且扩增的γδT细胞在体外对肝癌细胞有显著的杀伤作用。     

麦考酚酸体外对肝脏自然杀伤细胞活性及其受体表达的影响

目的 探讨麦考酚酸(MPA)对肝脏自然杀伤(NK)细胞活性的影响及其机制.方法 分离C57BL/6小鼠肝脏NK细胞,用不同浓度MPA处理24 h后,3H-TdR释放法检测NK细胞杀伤活性,ELISA法检测培养上清IFN-γ,IL-2,IL-10含量,流式细胞术检测NK细胞受体NKG2D,NKG2A,Ly49A的表达情况.结果 不同浓度MPA处理后肝脏NK细胞杀伤活性较正常对照明显降低(P＜0.01),IFN-γ,IL-2分泌量降低,而IL-10分泌量增高,NK细胞活化性受体NKG2D和抑制性受体Ly49A的表达下调,抑制性受体NKG2A的表达上调,高浓度的MPA作用后结果更明显.结论 MPA通过下调肝脏NK细胞活化性受体NKG2D并上调抑制性受体NKG2A而抑制肝脏NK细胞活性并影响细胞因子的分泌.