To11样受体4在肾移植术后急性排斥反应中的检测及意义

目的 研究外周血单核细胞To11样受体4(TLR4)与肾移植术后急性排斥反应的关系及其临床意义.方法 选取13例肾移植手术1年后发生急性排斥反应的患者,应用流式细胞术测定甲基强的松龙(MP)冲击治疗前、后外周血CD14+单核细胞TLR4表达的百分率,并与20例未发生排斥反应的移植肾功能正常患者相比较,20例健康志愿者作为正常对照.结果 发生急性排斥反应的患者外周血CD14+单核细胞TLR4表达的百分率[(30.45±5.17)%]显著高于移植肾功能正常组[(6.01±0.93)%,P<0.01]及正常对照组[(7.15±0.85)%,P<0.01];MP冲击治疗两周后,急性排斥反应患者TLR4的表达显著下降(P<0.01),其下降程度与激素治疗敏感与否有关.结论 TLR4在肾移植急性排斥反中表达上调,TLR4水平的监测可作为糖皮质激素治疗敏感性的判断指标.     

肾移植后外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA的表达

目的:研究外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA表达水平与同种异体肾移植术后急性排斥反应及慢性移植肾肾病发生的关系。方法:应用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR)的方法检测16例肾移植术后急性排斥患者、8例慢性移植肾肾病患者、8例移植后肾功能正常者、8例尿毒症患者和8例正常人的新鲜外周血单个核细胞中Foxp3 mRNA的表达水平,比较各组的差异及其与急性排斥反应和慢性移植肾肾病发生的关系。结果:急性排斥反应患者外周血中Foxp3 mRNA表达水平低于慢性移植肾肾病患者,差异有统计学意义（P<0.01);慢性移植肾肾病患者外周血中Foxp3 mRNA表达水平明显低于正常人、终末期肾病患者和肾移植后肾功能正常患者,差异有统计学意义（P<0.01);正常人、终末期肾病患者和肾移植后肾功能正常患者之组间Foxp3 mRNA表达水平无显著差异（P>0.05)。结论:外周血中Foxp3 mRNA表达水平可以反应移植肾的功能状态,其可能成为早期诊断移植后急性排斥反应和慢性移植肾肾病的一个无创指标。     

慢性肾炎患者外周血淋巴细胞Toll样受体4的表达及意义

目的 探讨TLR4在慢性肾炎患者外周血淋巴细胞中的表达及意义.方法 用流式细胞术检测22例慢性肾炎患者和30例正常人群外周血B淋巴细胞(CD19+)、T淋巴细胞(CD3+)表面TLR4的表达. 结果 ①慢性肾炎患者CD19+TLR4+细胞百分率[(35.01±25.70)%1显著高于正常对照[(16.42±5.65)%](t=3.850,P<0.01),而CD3+TLR4+细胞百分率[(34.81±24.91)%]与正常对照组[(27.22±16.71)%]比较,差异无显著性(t=1.315,P=0.194);②慢性肾炎患者外周血CD19+TLR4+细胞百分率与尿微量白蛋白排泄率(UAE)(P=0.000374,r=0.703)、尿微量总蛋白浓度(M-TP)呈正相关(P=0.00374,r=0.783),与血白蛋白(ALB)呈负相关(P=0.0285,r=-0.564) .结论 B细胞表面TLR4可能在肾脏炎症性疾病的发生中具有重要作用,有望作为肾小球滤过功能损伤严重程度的指标之一.     

排斥反应时肾移植受者移植肾组织及外周血中CD40的表达

【目的】检测排斥反应时移植肾组织内和外周血中CD40的表达情况。【方法】采取同种异体移植肾患者不同阶段的植肾活检组织和外周血，用免疫组化和流式细胞学方法检测活检组织中和外周血中CD40的表达情况。【结果】53例肾移植受体共行肾活检198次；CD40移植前表达阴性；移植后肾功能稳定期的穿刺标本中偶见弱阳性表达；急性排斥反应（AR）时CD40表达增加，内皮细胞、上皮细胞和炎性浸润细胞的阳性率分别为21％、39％和60％，抗排斥治疗后CD40表达转阴性；非急性排斥反应（N-AR）组中CD40阳性表达率显著低于急性排斥反应组。AR时外周血中CD40^＋和CD154^＋细胞比率显著高于术前水平，抗排斥治疗后恢复至术前水平。【结论】移植肾组织和外周血中CD40分子表达与排斥反应的发生密切相关。     

移植肾急性排斥反应中外周血CD40、CD40L分子的表达及临床意义

目的 研究移植肾出现急性排斥反应时,受者外周血中白细胞CD40、CD40L分子的表达及临床意义.方法 将患者分成2组,急性排斥反应组15例,未出现排斥反应组(对照组)41例,采用流式细胞仪检测56例肾移植受者外周血CD40、CD40L在CD4 、CD8 T细胞表面的表达.结果 当发生急性排斥反应时,受者的外周血CD40、 L分子的表达均增强,排斥组与未排斥组间差异有显著性.结论 肾移植急性排斥反应的发生与CD40、CD40L共刺激通路的活化有十分密切关系,CD40、CD40L分子的表达随急性排斥反应的增加而显著上升.可作为临床上对急性排斥反应的无创性诊断方法之一.     

TOLL样受体2及4在脊柱关节炎患者外周血CD14^＋单核细胞表面的表达及意义

目的观察脊柱关节炎（SpA）患者外周血CD14＋单核细胞Toll样受体2（TLR2）和Toll样受体4（TLR4）的表达变化及其与临床指标的关系,探讨其在SpA的发病中的作用。方法选择2008年7月~2009年1月蚌埠医学院第一附属医院风湿免疫科确诊SpA患者71例,并选择30名健康体检者作为正常对照组。采用流式细胞术检测外周血CD14＋单核细胞表面TLR2、TLR4阳性细胞的表达的百分率及平均荧光强度（MFI）。根据BASDAI评分将SpA患者组分为活动组54例（BASDAI评分〉4分）和非活动组17例（BASDAI评分≤4分）,分别比较活动组、非活动组和正常对照组三组间TLR2、TLR4阳性细胞表达百分率和MFI的差异,并分析TLR2、TLR4阳性细胞表达百分率和MFI与相关临床和实验室指标的相关性。结果 TLR2＋外周血CD14＋单核细胞的表面表达百分率在活动组、非活动组及正常对照组间差异无统计学意义（均P〉0.05）。TLR2＋外周血CD14＋单核细胞表面MFI在各组间差异无统计学意义（均P〉0.05）。TLR4＋外周血CD14＋单核细胞的表面表达的百分率在活动组和非活动组[（42.5±11.1）%、（32.9±9.4）%]与正常组相比[（22.3±7.5）%],差异有高度统计学意义（P〈0.01）,活动组和非活动组之间相比差异有高度统计学意义（P〈0.01）。TLR4＋外周血CD14＋单核细胞的MFI在各组间比较差异无统计学意义（均P〉0.05）。TLR4＋外周血CD14＋单核细胞的表面表达的百分率与ESR和IgA呈正相关（P〈0.05）,TLR2＋外周血CD14＋单核细胞的表面表达的百分率与ESR和IgG呈正相关（P〈0.05）。结论 TLR4在SpA患者外周血CD14＋单核细胞表面表达有显著性变化,提示TLR4可能与SpA发生及病情存在一定的关联,TLR4和TLR2的表达可作为疾病活动度的参考指标。     

慢性阻塞性肺疾病患者和吸烟者CD14+单核细胞Toll样受体的表达及意义

目的 探讨稳定期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者和肺功能正常的吸烟者外周血CD14+单核细胞Toll样受体(TLR)表达的变化及意义.方法 选择COPD稳定期患者30例(COPD组)、健康吸烟者21例(吸烟组)及健康不吸烟者25例(不吸烟组),用肺功能仪测定第一秒用力呼气容积(FEV1)占预计值的百分比(FEV1占预计值%)和FEV1/用力肺活量(FVC);应用流式细胞仪全血双色免疫荧光直标法检测外周血CD14+单核细胞的TLR2、TLR4表达水平,结果 以CD14+细胞TLR相对平均荧光强度(rmfi)和TLR相对阳性细胞百分率(rpcp)表示,并进行TLR2、TLR4表达与肺功能指标相关性分析.结果 COPD组CD14+单核细胞TLR2表达的rmfi(6.3±1.4)和rpcp(52.9%±20.5%)均明显低于吸烟组(分别为8.2±2.2和73.5%±19.O%,均P<0.01)和不吸烟组(分别为11.0±2.4和82.8%±17.9%,均P<0.01);TLR4表达的nnfi(2.2±0.9)明显低于不吸烟者组(3.0±0.5,P<0.01),与吸烟组(2.5±0.6)差异无统计学意义(P>0.05),而rpcp(M=1.3%,Q1～Q3为0.7%～2.4%)则明显低于吸烟组(M=4.7%,Q1～Q3为2.7%～9.4%,P<0.01)和不吸烟组(M:5.3%,Q1～Q3为2.6%～8.4%,P<0.01).吸烟组CD14+单核细胞中TLR2、TLR4表达的rmfi均明显低于不吸烟组(P<0.01,P<0.05);而rpcp与不吸烟组差异无统计学意义(P0.05).CD14+单核细胞TLR2和TLR4的表达与FEV1占预计值%、FEV1/FVC呈显著正相关(均P<0.01).结论 稳定期COPD患者和吸烟者外周血CD14+单核细胞TLR2及TLR4表达显著下调,固有免疫可能受到抑制,TLR表达下调与肺功能下降有关.     

肾移植受者外周血中共刺激分子CD28与CD40/CD154的表达研究

目的检测肾移植受者外周血中共刺激分子CD28与CD40/CD154表达的动态变化情况。方法对同种异体移植肾患者于术前1、术后1、3、7、14、21和28d分别取外周血,对AR受体,在临床诊断急性排斥反应当天和抗排斥治疗1周后额外采血。对白细胞进行免疫荧光双标记,用流式细胞仪检测各共刺激分子在外周血淋巴细胞中的表达。结果术后1、3d内CD28 、CD4 CD28 、CD8 CD28 细胞比率均有显著下降,但术后7d逐渐恢复至术前水平;AR时表达上升,其中CD28 和CD4 CD28 细胞比率显著高于术前水平,抗排斥治疗后下降至术前水平。AR时CD40 和CD154 细胞比率显著高于术前水平,抗排斥治疗后恢复至术前水平。结论外周血淋巴细胞CD28、CD40、CD154在移植后排斥反应时表达上调,提示外周血淋巴细胞共刺激分子的表达在临床肾移植急性排斥反应中起重要作用。     

慢性移植肾病初期外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞变化及意义

摘要：目的研究慢性移植肾病(CAN)发生初期外周血CD4+CD25+Foxp3+T(TREG)细胞变化及意义。方法对25例初发CAN的
受者外周血CD4+CD25+high/CD4+T 比率及Foxp3表达进行了检测,同时与使用同一抗排斥治疗方案、移植肾功能正常的30例受
者、以及未行肾移植的慢性肾功能不全尿毒症期的20例和正常人20例进行比较,研究了CAN发生初期TREG细胞的变化。结
果CAN发生初期的受者,CD4+CD25+Thigh/CD4+比率为0.71±0.33,Foxp3表达率为62.75±10.80;移植肾功正常者,两指标分别为
1.17±0.25及70.42±6.87,移植肾病组两指标均明显低于移植肾功能正常组（P<0.01）。无论移植肾功能正常与否,移植受者的
CD4+CD25+high/CD4+比率和Foxp3表达率均较未行移植尿毒症患者(1.53±0.35及77.86±7.09)及正常人(1.65±0.28及81.35±2.39)
明显降低（P<0.01）,而正常人及未移植尿毒症患者两指标无明显差别。结论与移植肾功能正常者相比,CAN发生初期患者外
周血中CD4+CD25+high/CD4+ 比率及Foxp3表达率均明显降低,且与肌酐增高无关,提示TREG在CAN的发生中具有一定意义。
     

排斥反应时移植肾组织CD40的表达

【目的】检测排斥反应时移植肾组织内CD40的表达情况。【方法】对同种异体移植肾患者行经皮肾穿刺活检获取术前(供肾修整结束时)、术后7 d、1个月、6个月、1年或以上的植肾组织,用免疫组化方法检测活检组织中CD40的表达情况。【结果】53例肾移植受体共行肾活检198次;CD40移植前表达阴性;移植后肾功能稳定期的穿刺标本中偶见弱阳性表达;急性排斥反应(AR)时CD40表达增加,内皮细胞、上皮细胞和炎性浸润细胞的阳性率分别为21%、39%和60%,抗排斥治疗后CD40表达转阴性;非急性排斥反应(N-AR)组中CD40阳性表达率显著低于急性排斥反应组。【结论】CD40分子表达与排斥反应的发生密切相关。     

外周血CD4+CD25+ 调节性T细胞在大鼠肾移植中的动态变化及应用研究

目的监测CD4+CD25+调节性T细胞在大鼠同种异体肾移植外周血中的动态变化,研究其在预测排斥反应和免疫耐受中的价值。方法流式细胞术监测CD4+CD25+调节性T细胞在大鼠同种异体肾移植外周血中的动态变化。结果CD4+CD25+调节性T细胞在大鼠同种异体肾移植急性排斥反应过程中明显低于同系对照组,而CsA组CD4+CD25+调节性T细胞明显高于同系对照组。结论 CD4+CD25+调节性T细胞在抑制肾脏移植排斥反应中发挥重要作用,动态监测外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的水平可预测和判断急性排斥反应的发生,了解肾脏移植后受体和移植肾之间的免疫反应程度或耐受状态。     

The kinetic level of CD4+CD25+ regulatory T cells in peripheral blood of rat with renal allograft

目的 监测CD4+CD25+调节性T细胞在大鼠同种异体肾移植外周血中的动态变化,研究其在预测排斥反应和免疫耐受中的价值.方法 流式细胞术监测CD4+CD25+ 调节性T细胞在大鼠同种异体肾移植外周血中的动态变化.结果 CD4+CD25+调节性T细胞在大鼠同种异体肾移植急性排斥反应过程中明显低于同系对照组,而CsA组CD4+CD25+ 调节性T细胞明显高于同系对照组.结论 CD4+CD25+ 调节性T细胞在抑制肾脏移植排斥反应中发挥重要作用,动态监测外周血中CD4+CD25+ 调节性T细胞的水平可预测和判断急性排斥反应的发生,了解肾脏移植后受体和移植肾之间的免疫反应程度或耐受状态.     

双膜滤过治疗降低肾移植患者群体反应性抗体水平的临床观察

目的探讨分子筛治疗对移植肾失功患者群体反应性抗体(panel reactive antibody,PRA)含量及再次肾移植排异反应的影响。方法选择2008年1-12月第三军医大学新桥医院肾内科就诊的初次肾移植后慢性移植肾功能不全合并PRA阳性的移植肾失功患者10例进行5次分子筛治疗,检测PRA、配型的变化,再次肾移植的排异反应。结果与分子筛治疗前[(40.8±6.2)%]比较,PRA水平[(18.8±3.4)%]显著下降(P<0.05)。PRA抗体阳性特异性位点和阳性频率均明显减少。Ⅰ、Ⅱ类抗原配型错配率也显著降低,10例患者接受肾移植均未发生超急性排异反应。结论分子筛治疗可有效减少再次肾移植患者PRA水平和移植肾超急性排异反应。     

TLR4mRNA在大鼠肾移植急性排斥反应中的表达及意义

目的探讨大鼠肾移植术后急性排斥反应时TLR4 mRNA的表达及意义。方法建立大鼠肾移植模型,将大鼠分为健康对照组(6例),同基因移植组(30例),异基因移植组(C组,30例),采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术分别于术后1、2、3、5及7 d检测受体大鼠血液及移植肾TLR4 mRNA的表达,同时检测其外周血肌酐,并在光镜下观察肾脏组织病理变化。结果异基因移植组TLR4mRNA的表达和血肌酐明显高于健康对照组和同基因移植组,且TLR4 mRNA表达在造模后第1天即明显升高,组织病理学也观察到排斥现象。结论 TLR4mRNA有助于早期诊断肾移植急性排斥反应的发生,可能作为一种新的监测标志物。     

三色和双色荧光标记流式细胞术对肾移植免疫反应新指标TLR4的监测

目的 比较三色和双色荧光标记流式细胞术（FCM）在肾移植术后免疫指标TLR4监测中的优缺点。方法 选取10例肾移植术后病例,分别采用三色和双色FCM检测外周血单核细胞中CD14、TLR4和CD80表达情况,计算CD14阳性单核细胞中TLR4和CD80的表达百分率并进行统计比较。结果 两种方法检测CDl4阳性单核细胞中TLR4和CD80阳性表达百分率均无显著性差异（P=0．198,P=0．872）,两种方法对相同血标本的检测结果均呈正相关关系（积矩相关系数r=l,P=0．000;积矩相关系数r=0．999,P=0．0001。另外,应用三色FCM还可同时获得单核细胞中TLR4和CD80双阳性的表达情况。结论 三色和双色FCM检测TLR4的结果无显著性差异,但三色FCM可同时显示TLR4与其下游分子CD80双阳性表达情况,对揭示TLR4参与移植免疫反应机制具有重要价值,而且血标本用量少。节约单克隆抗体。     

伴有急性排斥反应的移植肾功能延迟恢复的诊治

目的探讨移植肾功能延迟恢复（DGF）伴急性排斥反应的临床诊断与治疗。方法总结我院6年来275例次肾移植患者，28例术后出现DGF，综合肾穿刺活检、移植肾彩超及临床情况而确定为DGF合并急性排斥反应13例，确定DGF合并急性排斥反应后即用甲基强的松龙（MP）冲击治疗，2例冲击治疗效果不佳，即使用ATG治疗，2例MP冲击治疗后血肌酐再度升高者，将环孢素A改为FK506。结果诊断DGF合并急性排斥时，13例患者血肌酐水平在267～748μmol/L，均在治疗后8～15d降至〈200μmol/L，随访3个月除1例患者于肾功能恢复正常后1个月死于肺部感染外，10例患者血肌酐正常，2例患者血肌酐在140～190μmol／L。结论早期行移植肾穿刺活检非常重要，确诊后应减少肾毒性药物，使用MP冲击治疗，对MP冲击治疗效果不佳者，可用ATG、FK506，效果良好。     

肾移植术后早期天然免疫分子Toll样受体4动态变化的规律

目的探讨天然免疫分子Toll样受体4（TLR4）在肾移植术后早期的动态变化规律及其在肾脏移植免疫中的作用。方法对18例肾移植术后早期病例进行了研究,采用三色标记流式细胞术检测肾移植术后第1、4、7天CD14阳性单核细胞中TLR4及其下游分子CD80的表达水平,同时观察患者术后恢复情况,根据术后2周内有无排斥反应将18例病例分为排斥组（3例）和无排斥组（15例）。对TLR4和CD80在排斥组和无排斥组的表达情况进行分析。结果（1）无排斥组肾移植术后第1、4、7天TLR4的表达水平呈下降趋势,分别为（21．38±16．02）％、（13．38±7．90）％和（4．28±3．74）％,术后第7天表达低于术后第1天和第4天表达,差异有统计学意义（均P〈0．05）;排斥组TLR4表达水平分别为（3．59±1．18）％、（21．5±20．54）％、（17．05±12．92）％,有不同程度升高（P〉0．05）。（2）排斥组（3例）术后第4天TLR4水平与术后第1天的环比（d4／d1）高于无排斥组（15例）,差异有统计学意义（P〈0．05）;排斥组（2例）术后第7天TLR4水平与术后第4天的环比（d7／d4）高于无排斥组（15例）,差异有统计学意义（P〈0．05）。排斥组1例术后第5天因移植肾急性排斥反应行移植肾切除术,术后第7天与第4天TLR4表达水平环比下降。（3）无排斥组肾移植术后第1、4、7天CD80的表达呈下降趋势,但差异无统计学意义（P〉0．05）。排斥组CD80的表达则有不同程度的升高,但差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论肾移植术后早期TLR4的表达变化规律与患者免疫反应能力相一致;肾移植术后早期排斥组TLR4表达水平环比明显高于无排斥组。     

血红素加氧酶-1和热休克蛋白70在肾移植中的表达

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)和热休克蛋白70(HSP70)在大鼠肾移植急性排斥反应中的表达及意义.方法 建立大鼠同种异体肾移植模型.实验分为Ⅰ组(正常对照)、Ⅱ组(同基因移植:SD大鼠→SD大鼠)、Ⅲ组(异基因移植:Wistax大鼠→SD大鼠)、Ⅳ组(异基因移植环孢霉素A干预).用免疫组化法检测移植肾组织中HO-1和HSP70的表达,并观察其与病理学检查的相关性.结果 同基因移植组移植肾中HO-1和HSP70的表达水平在术后无明显变化(P>0.05);异基因移植组移植肾中HO-1和HSPT0的表达在术后第1、3天和第7天逐渐升高(P<0.01),且与病理分级间存在正相关(r=0.911,P<0.01;r=0.869,P<0.01).结论 HO-1和HSP70参与肾移植急性排斥反应,监测HO-1和HSPT0的表达可能为急性排斥反应的早期诊断和治疗提供新的方法.     

系统性红斑狼疮患者外周血CD14+单核细胞表面TLR2、TLR4表达的变化

目的:探讨系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血单核细胞表面Toll样受体2(toll-likereceptor-2,TLR2)和Toll样受体4(toll-like receptor-4,TLR4)表达的变化。方法:流式细胞术分别检测75例SLE患者(SLE组)和44名正常人(对照组)外周血单核细胞表面TLR2和TLR4的阳性率和平均荧光强度(meam fluorescence intensity,MFI)。统计分析TLR2和TLR4阳性率和MFI与相关临床与实验室指标的相关性。结果:TLR2在SLE组外周血CD14+单核细胞表面的阳性率和MFI均低于对照组;而TLR4在SLE组外周血CD14+单核细胞表面的阳性率高于对照组,但MFI表达低于对照组(P<0.01)。TLR2阳性率与SLE活动指数呈负相关(P<0.01)。结论:TLR2和TLR4在SLE患者外周血CD14+单核细胞表面表达有显著变化,提示可能与SLE的发生及病情存在一定的关联。     

肾移植患者外周血CD95的水平表达及其临床意义研究

目的 探讨肾移植患者外周血CD95的水平表达及其临床意义。方法 回顾性分析2017年7月至2019年8月进入我院实施肾移植手术的患者90例临床资料,依据术后3个月内是否出现急性排斥反应分为A组(未出现排斥反应,65例),B组(出现排斥反应,25例)。于术前、术后1周时检测两组外周血CD95,应用二元Logistic回归分析检验肾移植患者外周血CD95的水平表达对患者术后发生排斥反应的影响;绘制ROC曲线,并使用ROC曲线下面积(AUC)评价肾移植患者外周血CD95的水平表达对术后发生排斥反应的预测价值。结果 术前,B组外周血CD95水平表达高于A组,但差异无统计学意义(P＞0.05);术后1周,B组外周血CD95水平表达高于A组,差异有统计学意义(P＜0.05);经二元Logistic回归分析,肾移植患者外周血CD95水平表达对术后排斥反应有影响(OR＞1,P＜0.05);绘制ROC曲线,结果显示外周血CD95水平表达预测术后排斥反应的AUC为0.826,＞0.7,预测价值较好。最佳截断取值：11.152,可以获得的敏感度及特异度分别为0.956、0.861。结论 肾移植术后出现排斥反应的患者CD95水平较高,且CD95表达水平能作为肾移植术后受者排斥反应的辅助诊断指标,可起到预测排斥反应的作用。