低氧状态下红景天苷经HIF-1α信号通路调节人成骨样MG-63细胞表型表达的研究

目的研究低氧状态下红景天苷对成骨细胞表型表达的调控作用及其作用机制。方法 MTT法检测细胞增殖能力;采用Annexin V/PI双染法分析低氧诱导的细胞凋亡情况;磷酸苯二钠法检测成骨细胞分化的早期标志性基因碱性磷酸酶(ALP)活性;RT-PCR技术检测低氧诱导因子(HIF)-1α、血管内皮生长因子(VEGF)、抑癌基因VHL蛋白(p VHL)、骨钙素(OC)、成骨细胞特异性转录因子Runx2及Osterix mRNA表达水平;采用ELISA法检测VEGF及OC的蛋白表达水平和I型胶原的含量;Western blot技术检测HIF-1α、p VHL、Osterix、Runx2的蛋白表达水平;免疫荧光共聚焦显微镜技术观察HIF-1α的核转位情况;荧光素酶报告基因检测技术检测HIF-1α的转录活性。结果低氧状态下红景天苷促进MG-63细胞增殖,抑制由低氧诱导的MG-63细胞凋亡,促进Osterix、Runx2表达及通过增加ALP活性、Ⅰ型胶原和OC含量促进成骨细胞分化成熟。进一步研究发现,低氧状态红景天苷可下调HIF-1α的表达及核转位,而上调其转录活性及下游靶基因VEGF的表达。结论低氧状态下红景天苷通过调节HIF-1α/VEGF信号通路促进成骨细胞增殖和分化,同时抑制由低氧诱导的成骨细胞凋亡。     

羟基红花黄色素A上调低氧状态下血管内皮细胞中缺氧诱导因子-1α的表达

羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)是从菊科植物红花中提取的查尔酮类化合物。本实验观察HSYA对低氧状态(1% O₂)下人脐静脉内皮细胞株(Eahy926)增殖的促进作用及其调节Eahy 926细胞中林希氏基因(von Hippel-Lindau gene，VHL)，抑癌基因p53(tumor suppressor gene p53，p53)和降解缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α，HIF-1α)的作用。采用MTT法测定低氧状态下HSYA(100、 10和1 μmol·L^-1)对Eahy 926细胞增殖率的影响。免疫组织化学方法测定VHL与p53蛋白表达数量和定位。RT-PCR方法检测细胞中VHL、 p53和HIF-1α的转录水平。Western blotting方法检测VHL、 p53和HIF-1α的蛋白表达。与低氧模型对照组相比，HSYA(100 μmol·L^-1)促使细胞增殖率升高，HIF-1α转录和蛋白表达水平显著增强，呈时间依赖性。给药8 h后，VHL与p53的蛋白表达和转录水平均明显降低。HSYA诱导HIF-1α表达增加并提高低氧状态下细胞增殖率的作用，可能通过抑制VHL和p53两种HIF-1α的降解调节因子实现。     

多西紫杉醇抑制宫颈癌细胞低氧诱导因子-1α基因低氧性活化的影响

目的:探讨多西紫杉醇对宫颈癌细胞低氧诱导因子-1α基因表达的影响。方法:Hela细胞在正常条件下(氧气浓度20%)培养后,对照组在正常条件下继续培养24小时,试验组转入缺氧条件下培养24小时,氧气浓度分别为1%。采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测HIF-1αmRNA表达变化,蛋白质免疫印迹法测定HIF-1α蛋白水平表达变化,MTT法检测肿瘤细胞抑制率。结果:多西紫杉醇可抑制宫颈癌细胞生长,正常对照组有一定水平的HIF-1αmRNA表达,但几乎检测不到HIF-1α蛋白表达,低氧条件下HIF-1αmRNA表达维持在高水平,但HIF-1α蛋白则明显升高(t=2.471～5.474,P<0.01);加入5×10-6mmol/L和20×10-6 mmol/L的多西紫杉醇后则可明显抑制HIF-1α蛋白和mRNA在低氧下的增高,而对常氧下的HIF-1α基因表达无影响。结论:多西紫杉醇可抑制宫颈癌细胞生长,且可抑制HIF-1α基因的低氧性活化。     

HIF SUMO化在高原低氧适应中的作用

低氧诱导因子-1是参与调节机体氧平衡的重要核转录因子。作为一种蛋白质,它的主要亚基HIF-1α受到多种翻译后的化学修饰,如泛素化、类泛素化等的影响,从而使其蛋白的稳定性、入核以及对下游基因的促转录活性受到调节。因此,研究HIF-1α翻译后的修饰,不仅有助于理解类似转录因子自身的调控,更能对HIF-1作为一个高原病的治疗靶标提供思路。     

HIV.1的转录因子NF-kB及其抑制剂的研究进展

在病毒复制循环过程中,HIV-1的转录是其中的关键步骤,可作为HIV-1治疗的新靶点.在此过程涉及的所有因子中,细胞核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)是HIV-1转录过程中重要的诱导剂.NF-κB通过与HIV-1的长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)增强子区的连接来激活HIV-1的转录.许多化合物通过抑制NF-κB的活性来抑制HIV-1的转录.本文综述了NF-κB对HIV-1转录过程的调节及当前NF-κB抑制剂的研究进展.     

α-synuclein过表达下调Nurr1转录活性的机制研究

目的研究α-synuclein过表达对多巴胺能神经元核受体相关因子-1(Nurr1)转录活性的影响及作用机制。方法 PC12细胞转染α-synuclein质粒后,采用双荧光素酶检测方法和Western blot方法分别检测Nurr1转录活性及蛋白水平变化情况。同时检测调控Nurr1转录活性的GSK3β/β-catenin通路中相关信号蛋白水平变化。结果与对照组相比,α-synuclein过表达可明显降低Nurr1转录活性,但对Nurr1蛋白水平无明显影响。通过检测GSK3β/β-catenin中相关信号蛋白发现,α-synuclein过表达可明显降低GSK3β(Ser9)磷酸化水平和β-catenin蛋白水平。结论α-synucle-in可能通过调控GSK3β/β-catenin通路下调Nurr1转录活性。     

缺氧诱导因子-1与宫颈癌关系的研究进展

缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)就是一个在缺氧状态下重要的转录调节因子.HIF-1在人体各种肿瘤中的过度表达,提示其与肿瘤进展和转移密切相关[1].近年来研究显示HIF-1与宫颈癌的关系密切,因此,了解HIF-1在宫颈癌中的研究进展具有重要意义.1缺氧诱导因子-1的生物学特性1.1结构缺氧诱导因子l(hypoxia-inducible factor1,HIF-1)于1992年在低氧诱导促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)基因的转录激活中发现,能特异性地结合于促红细胞生成素编码区下游的缺氧反应元件(hypoxia response element,HRE)的特异性DNA序列.HIF-1为异二聚体蛋白聚合物,由120KD的α亚基和91-94KD3亚基组成.HIF-1β在任何状态下都表达,而HIF-1α只在氧浓度低于6％时才表达,正常氧浓度下IF-1的半衰期＜1-2min[2],所以HIF-1α是HIF-1的功能亚单位.1.2机制HIF-1α的401 -603氨基酸残基位有一个氧依赖性降解区,对HIF-1α的稳定性起重要作用.     

缺氧诱导因子-1、葡萄糖转运蛋白与大肠腺癌

肿瘤的形成离不开低氧环境,而缺氧诱导因子-1α(HIF-1a)是一种在低氧条件下大量存在的调节蛋白,是调节细胞内氧代谢的关键因子之一,也是迄今为止发现的唯一的一个特异性缺氧状态下发挥活性的转录因子。恶性肿瘤在生长过程中,其微环境缺氧和对葡萄糖的摄取及代谢增加,这一功能主要由葡萄糖转运蛋白对葡萄糖的跨膜转运来完成。研究HIF-1、GLUT1与大肠腺癌的关系为临床对肿瘤预后判断和指导治疗提供了新的思路和途径。1HIF-1和GLUT1结构特点及功能1.1HIF-1的结构特点及功能:HIF-1是由分子量为120KD的α亚基和分子量为91～94KD的β亚…     

低氧对大鼠骨髓间充质干细胞HIF-1α表达影响的研究

目的通过体外不同氧浓度下培养大鼠骨髓间充质干细胞,RT-PCR方法检测,观察正常氧浓度和低氧浓度对HIF-1α(缺氧诱导因子-1α)表达的影响。方法分离雄性Wistar大鼠骨髓间充质干细胞体外培养,鉴定其CD34、CD44的表达,分为正常氧浓度组和低氧浓度组培养24h,RT-PCR方法检测,不同氧浓度对细胞HIF-1α表达的影响。结果贴壁法培养的细胞表达CD44,不表达CD34;正常氧浓度培养的细胞较少有HIF-1α的表达,低氧浓度培养的细胞HIF-1α的表达明显增加。结论细胞低氧可激活HIF-1α的表达,低氧浓度培养的细胞的HIF-1α表达较正常氧浓度培养的细胞的表达明显增加。     

大鼠肺动脉平滑肌细胞原代培养及低氧对缺氧诱导因子- 1α的影响

目的获得活力稳定、高度纯化的体外培养大鼠血管平滑肌细胞,为肿瘤研究提供实验材料;并探讨低氧对抗肿瘤药物研究新靶点：缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的影响。方法无菌下取SD大鼠心肺组织,然后分离出肺动脉段,分离肺动脉中膜层,用组织块贴壁法培养,倒置相差显微镜观察细胞形态、普通免疫组织化学法（SP法）进行细胞鉴定。随后,将体外培养的大鼠PASMCs,设计常氧组、低氧组H2,H6,H12,H24,用Western blotting法检测HIF-1α的蛋白表达。结果用组织贴块法成功培养大鼠PASMCs,得到生长稳定、纯度高的PASMCs,且培养与纯化可以同时进行,可获得稳定传代的细胞;HIF-1α蛋白在常氧组有少量表达,在低氧条件下,其表达明显增加。结论成功建立体外大鼠肺动脉平滑肌细胞原代培养模型;低氧条件下促进其中HIF-1α的表达;这提示HIF-1α蛋白的表达可能是肿瘤细胞适应缺氧环境的重要原因。     

HIF-1α和STAT3分子表达与大肠癌淋巴转移的关系

目的:探讨缺氧诱导因子(HIF-1α)、信号转导和转录活化因子3(STAT3)在大肠癌淋巴转移中的作用机制。方法:采用荧光实时定量聚合酶链反应和免疫组织化学染色方法检测60例大肠癌组织及远癌切端大肠癌组织HIF-1α、STAT3和血管内皮生长因子(VEGF)-C的mRNA转录水平和蛋白表达情况,同时以抗podoplanin单克隆抗体标记大肠癌微淋巴管计数淋巴管密度(LVD),分析上述指标与大肠癌淋巴结转移之间的相互关系。结果:大肠癌组织中HIF-1α、STAT3和VEGF-C分子的mRNA转录水平及蛋白表达水平明显高于远癌切端大肠癌组织(P<0.05),大肠癌组织中HIF-1α、STAT3与VEGF-C分子mRNA转录水平及蛋白表达水平呈正相关,有淋巴结转移患者LVD高于无淋巴结转移患者(P<0.05)。结论:大肠癌组织较远癌切端大肠组织有更为密集的淋巴系统,大肠癌组织中HIF-1α、STAT3、VEGF-C是调节大肠癌淋巴管形成的关键因子。     

HIF-1α抑制剂在白血病治疗中的研究进展

缺氧诱导因子(Hypoxia-inducible factor,HIF-1)是一种氧平衡转录因子,在人体细胞内广泛分布,能在各种缺血缺氧环境中激活并发挥作用.其主要由HIF-1α和HIF-1β2个亚基组成.HIF-1α是唯一的氧气调节亚单位,其激活可引起细胞增殖、凋亡抑制、代谢转移和癌症进展,因此,该基因的启动常提示肿...     

HIF-1α和HIF-2α在低氧性肺动脉高压中的不同作用研究进展

低氧诱导因子家族(HIFs)是机体应对低氧环境时的主要调节因子,它们与低氧引起的肺组织细胞损伤以及异常增殖有关,其中又以低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和低氧诱导因子-2α(HIF-2α)的作用最为明显。该文主要对HIF-1α、HIF-2α在结构功能上的异同和在低氧性肺动脉高压中作用的研究现状作一综述。     

HIV-1反式激活抑制剂的研究进展

转录反式激活因子（Tat）在HIV-1的转录和复制过程中起着十分重要的调节作用。Tat蛋白与反式激活应答区（TAR）RNA及正向转录延伸因子（P-TEFb）形成三元复合物,不仅促使转录完全,并且显著提高转录效率。Tat蛋白对HIV-1转录水平的重要调控作用及其结构的高度保守使它成为研究抗艾滋病药物的新靶点。该文将简要介绍HIV-1 Tat介导的反式激活过程,并对近年报道的以TAR、Tat和P-TEFb为靶点的小分子抑制剂进行综述。     

缺氧诱导因子1α与核因子κB在炎症缺氧环境中相互作用研究进展

慢性炎症是一系列临床难治疾病（包括心血管损伤、炎性肠病、癌症等）的病理学基础,而缺氧是慢性炎症引起组织损伤的重要病理生理学机制。缺氧诱导因子1α（hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α）对组织适应缺氧具有调节作用。缺氧时,HIF-1α通过激活适应性转录反应以协调低氧组织中的氧供应和代谢活性,此过程涉及血管生成因子和血管活性物质等细胞因子的上调。调节免疫应答和细胞凋亡的核因子κB（nuclear factor-κB,NF-κB）具有与HIF-1α类似的功能,即在低氧条件下通过改变氧依赖性羟脯氨酸化酶活性来调节缺氧状态。此文讨论了在多种炎症性疾病中HIF-1α与NF-κB激活通路之间的相互作用,以及HIF-1α和NF-κB通路作为炎症性疾病治疗靶点的潜力。     

HIV-1的转录因子NF-κB及其抑制剂的研究进展

在病毒复制循环过程中，HIV-1的转录是其中的关键步骤，可作为HIV-1治疗的新靶点。在此过程涉及的所有因子中，细胞核因子κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)是HIV-1转录过程中重要的诱导剂。NF-κB通过与HIV-1的长末端重复序列(long terminal repeat，LTR)增强子区的连接来激活HIV-1的转录。许多化合物通过抑制NF-κB的活性来抑制HIV-1的转录。本文综述了NF-κB对HIV-1转录过程的调节及当前NF-κB抑制剂的研究进展。     

雷帕霉素下调HIF-1α、VEGF基因表达抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的体外研究

目的 研究雷帕霉素对人胃癌SGC-7901细胞生长影响及雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路下游作用靶点缺血诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的影响.方法 采用MTT法检查不同浓度(5、10、20、40、80、160) ng/ml雷帕霉素作用72 h对SGC-7901细胞增殖的影响;采用Western blot法检测雷帕霉素处理前、后SGC-7901细胞对HIF-1α、VEGF蛋白的影响.结果 雷帕霉素作用于SGC-7901细胞后,SGC-7901细胞增殖明显呈剂量依赖性抑制;雷帕霉素10、20、40 ng/ml作用于SGC7901细胞72 h后,HIF-1α和VEGF蛋白表达量均明显呈剂量依赖性下调(P＜0.05).结论 体外应用雷帕霉素可显著抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,这可能与抑制mTOR信号通路下游作用靶点HIF-1α和VEGF蛋白有关.     

Jun转录因子家族与肝细胞癌的研究进展

肝细胞癌（HCC）是目前世界范围内发病率与致死率均较高的恶性肿瘤,其发病机制较为复杂,与众多癌基因的异常激活有关。Jun转录因子家族是激活剂蛋白-1(AP-1)成员之一,其家族成员包括JunB、c-Jun、JunD和v-Jun,通过激活或抑制多种靶基因转录,参与多种癌症的发生发展。近年来,研究发现Jun转录因子家族参与调控肝癌细胞增殖、迁移、凋亡等多种细胞功能,与HCC的发生发展密不可分。本文就Jun转录因子家族成员与HCC发生发展的研究进展进行综述。     

基于低氧微环境的小分子激活前药与HIF-1抑制剂研究进展

低氧是实体瘤普遍存在的特征,是肿瘤细胞增殖、转移、侵袭、产生放疗抗性的重要原因。因此,肿瘤缺氧被认为是肿瘤诊断与治疗的一个重要靶点。低氧激活前药可在缺氧微环境下通过电子还原靶向低氧区域的肿瘤细胞,产生并释放细胞毒性代谢产物,从而杀死肿瘤细胞。目前已报道的低氧激活前药主要包括硝基化合物、醌类、氮氧化物、金属配合物、偶氮化合物五大类。而低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)也在肿瘤细胞的低氧存活与发展中扮演重要角色,抑制HIF-1可抑制其下游基因主导的肿瘤血管生成、转移、耐药等生存发展进程。当前,已有低氧激活前药与HIF-1抑制剂正处于临床试验阶段,并表现出良好的抗肿瘤活性,并有可能在未来的肿瘤诊断与治疗中发挥重要作用。