免疫组织化学染色技术的应用体会

随着免疫组织化学染色技术的广泛应用,病理学研究产生了划时代的飞跃。根据标记物的不同,免疫组织化学技术可分为免疫荧光细胞化学技术、免疫酶细胞化学技术、免疫铁蛋白技术、免疫金-银细胞化学技术、亲和免疫细胞化学技术、免疫电子显微镜技术等。不同的免疫细胞化学技术各具有独特的试剂和方法,但其基本技术方法是相似的,都包括抗体的制备,组织材料的处理。免疫染色,对照试验,显微镜观察等步骤。下面以美国ZYMED公司SP试剂盒免疫组化染色步骤为例谈几点体会。     

细胞（蜡）块联合免疫细胞化学技术通过胸腔积液检测诊断恶性肿瘤的价值

目的探讨细胞蜡块联合免疫细胞化学染色技术在胸腔积液诊断恶性肿瘤中的应用。方法来自笔者所在医院的406例胸腔积液标本常规离心、涂片后观察,其中56例沉渣包埋制成细胞蜡块,结合免疫细胞化学染色明确诊断。结果 56例胸腔积液细胞块确诊阳性47例(包括转移性肺腺癌43例,鳞状细胞癌2例,乳腺癌1例,卵巢浆液性癌1例),阴性9例,细胞蜡块联合合免疫组织化学染色的癌细胞检出率高于传统涂片者(P<0.05)。结论细胞块联合免疫细胞化学技术在胸腔积液诊断恶性肿瘤中的应用效果优于传统涂片。对准确判定病理分型,指导临床治疗具有重要辅助作用。     

免疫组织化学抗原修复液PBS与EDTA的比较

免疫组织化学也称免疫细胞化学,是用标记抗体寻找组织细胞抗原的方法,来检测细胞中化学成分的科学技术.由于免疫组织化学技术特异性强,敏感性高,操作简单,设备要求简单,且该技术在组织中定位性能好,因此,常常应用于临床病理诊断及科学研究.影响免疫组织化学技术的因素有许多,其中抗原修复技术是关键步骤.本研究比较抗原修复过程中修复液柠檬酸盐缓冲液与EDTA缓冲液的使用,旨在优化抗原修复过程.     

体外循环对婴幼儿先天性心脏病单个核免疫细胞功能的影响

体外循环(CPB)可导致免疫功能失调,并且婴幼儿的免疫功能尚不健全,使患儿术后极易发生感染,甚至发展为多器官功能衰竭(MSOF),危及生命[1].单个核免疫细胞在细胞免疫中发挥主要作用.本研究采用流式细胞仪、免疫组织化学染色及组织化学染色3种技术,动态观察先天性心脏病婴幼儿体外循环前后外周血淋巴细胞、单核细胞、NK细胞的表达水平的变化及核仁组成区嗜银蛋白(AgNORs)的变化,以探讨体外循环对细胞免疫功能的影响.     

免疫细胞化学染色在甲状腺细胞学诊断中的应用

甲状腺细针抽吸细胞学检查(fine-needle aspiration．FNA)是诊断甲状腺疾病尤其是术前诊断的形态学方法之一。但是，由于细针抽吸位置的局限性，涂片中难以找到特征性病变细胞而影响确切诊断。笔者对免疫组织化学染色方法进行一些改进，清楚地显示甲状腺细针抽吸细胞的3种免疫标记，为用FNA诊断甲状腺疾病寻找新指标，提供一个稳定的免疫细胞化学染色方法。     

传统涂片联合细胞块及免疫细胞化学染色技术诊断浆膜腔积液的应用价值

目的 探讨传统涂片联合细胞块及免疫细胞化学染色技术诊断浆膜腔积液，尤其是恶性浆膜腔积液的应用价值。方法 收集2022年1-6月空军军医大学第一附属医院病理科接收的浆膜腔积液标本659例，其中胸腔积液416例，腹腔积液221例，心包积液22例；男389例，女270例，年龄11～102岁，中位年龄64岁。分析传统涂片制片方法、细胞块制作、免疫细胞化学染色技术和细胞病理学诊断结果并学习相关文献。结果 659例患者中采用单纯传统涂片诊断为良性浆膜腔积液303例(45.98%),恶性浆膜腔积液123例(18.66%),意义不明的、可疑恶性233例(35.36%);659例患者中72例采用传统涂片联合细胞块及免疫细胞化学染色技术，其中诊断为良性浆膜腔积液8例(11.11%)、恶性浆膜腔积液64例(88.89%),并进一步确诊了恶性细胞的组织起源。结论 传统涂片联合细胞块及免疫细胞化学染色技术相对于单纯传统涂片不仅能提高阳性标本检出率，还对确定组织来源、确诊肿瘤原发灶有很重要的帮助。     

人肌源性干细胞的培养与鉴定

目的探讨人肌源性十细胞的分离、培养、鉴定的方法，为临床应用提供实验依据。方法采用消化法分离肌源性十细胞，应用差速贴壁法纯化干细胞；采用结蛋白（desmin）、Sca-1免疫细胞化学染色对细胞进行鉴定。结果成功获得高纯度的肌源性干细胞，免疫组织化学方法能够有效鉴定肌源性干细胞。结论可通过体外原代培养扶得高纯度肌源性干细胞，具有干细胞特征，为组织工程的临床应用提供种子细胞。     

微波-EDTA脱钙技术在免疫组织化学染色中的应用研究

目的探讨微波(MW)-乙烯二胺四乙酸钠(EDTA)快速脱钙技术对骨及软组织抗原活性的影响.方法根据实验条件将待脱钙组织分为4组,即MW-EDTA(15℃),Jenkins脱钙-固定液(20℃),10%EDTA(20℃)和10%硝酸(20℃),其中MW-EDTA方法中EDTA的浓度分别是4%、7%、10%、13%和16%.应用免疫组织化学LSAB染色,光镜观察免疫组织化学染色结果.结果MW-EDTA脱钙的免疫组织化学染色阳性细胞显著高于Jenkins脱钙-固定液(20℃)、10%ED-TA(20℃)及10%硝酸脱钙(20℃)3种脱钙方法,其时间明显缩短.其中用10%和13%浓度的EDTA脱钙的组织,其免疫组织化学染色阳性细胞又明显多于EDTA浓度为4%、7%和16%者.结论以MW-10%EDTA技术进行组织脱钙,其脱钙时间短、免疫组织化学染色效果好.     

微波技术在免疫组织化学染色中的作用

本研究在免疫组织化学染色体应用微波炉技术，建立快速有效的免疫组织化学染色方法，结果表明，采用微波技术可以将传统的ＡＢＣ免疫组织化学染色时间由２４ｈ缩短为１ｈ用１２种抗体对染色表明效果稳定，与传统染色效果相比一部分呈色明显增强，起到了常规方法中起不利的良好的抗原修复作用，且脱片率降低，非特异性背景染色减少，认为可以在免疫染色体甚至在其它病理中推广应用。     

Cajal细胞和一氧化氮合酶表达阳性神经元在慢传输便秘大鼠结肠中的分布

目的研究Cajal细胞和一氧化氮合酶（NOS）表达阳性神经元在慢传输便秘（STC）大鼠结肠中的分布。方法便秘大鼠结肠组织全层铺片和冰冻切片的NADPH-黄递酶（NADPH—d）组织化学法和C—kit免疫细胞化学双重染色。结果便秘大鼠结肠肌间丛内NOS阳性神经元分布较稀疏，数量减少，染色深浅不一，节间纤维较细小，染色较淡；Cajal细胞分布极不均匀，有的视野密集，突起连接杂乱，有的视野稀少，突起不能相互连接形成网络。NADPH—d组织化学和C—kit免疫细胞化学双重染色未发现二者的共存，但可见C—kit阳性细胞及突起存在于NOS表达阳性神经元附近。结论STC肌间神经丛的抑制性神经递质NO可能有调节Cajal细胞的功能。     

还原型谷胱苷肽诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化形成神经细胞

目的 研究还原型谷胱苷肽(GSH)对大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)的诱导分化作用.方法 用SD大鼠股骨、胫骨以及肱骨骨髓细胞体外培养.采用GSH诱导rBMSCs 24h,免疫细胞化学染色评价神经细胞特异性烯醇化酶(NSE)表达率.结果 诱导6、24h时,MSCs分化成神经元样细胞,形成网络状结构,免疫细胞化学染色诱导出的神经元样细胞NSE表达阳性率分别为(64.0±4.3)%和(71.0±5.0)%.结论 GSH可诱导MSCs分化形成神经元样细胞.     

微波EPOS免疫组织化学染色技术

EPOS显色系统是免疫组织化学新技术,在一抗上预先标上过氧化酶(HRP),将这种抗体用于免疫组织化学染色只需1次孵育。具有敏感、省时和背景低等特点。为了提高工作效率,便于临床病理的快速诊断,我们应用微波辐射技术对EPOS免疫组织化学染色新方法进行了改良。实验结果表明,应用微     

MG132诱导HepG_2细胞凋亡及其对p53表达的影响

目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人肝癌细胞系HepG2的致凋亡作用及其对凋亡相关基因p53蛋白表达的影响。方法采用多个浓度(2,5,10μmol/L)的蛋白酶体抑制剂MG132处理HepG2细胞;流式细胞术和Hoechst荧光染色检测细胞凋亡;免疫细胞化学检测HepG2细胞p53蛋白含量。结果对照组HepG2细胞凋亡率低于5%,在2,5,10μmol/LMG132作用下,细胞凋亡率分别为42.9%,66.1%和72.8%,MG132诱导HepG2细胞凋亡具有剂量—效应关系。经Hoechst荧光染色可见细胞染色质浓缩等凋亡改变。免疫组织化学检测HepG2细胞p53蛋白表达水平增高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导HepG2细胞凋亡,其作用呈剂量—效应关系;p53蛋白表达增加与MG132抑制泛素—蛋白酶体系统降解细胞内p53蛋白有关。     

加强体外诊断试剂的管理工作

体外诊断试剂是指采用免疫学、微生物学、分子生物学等原理或方法制备的、在体外用于对人类疾病的诊断、检测及流行病学调查等的诊断试剂.体外诊断试剂的品种和种类繁多,以方法学分类有酶免、放免、荧光和化学发光、分子生物学、免疫组化、免疫细胞化学等,以检测对象分类有细胞水平、蛋白分子水平以及基因水平等的检测对象,以临床应用上分类有初筛、初筛后确证、诊断和疗效观察等,以所使用的技术分类有标记免疫技术、分子杂交技术、基因扩增技术等.由此可见体外诊断试剂的多样性和复杂性.     

人类外周神经在化学萃取前后的组织形态变化研究

目的研究人类外周神经在化学萃取前后的组织形态变化，探讨化学萃取法制备人类长段粗大去细胞神经的可行性。方法用TritonX-100和脱氧胆酸钠对人体长段胫神经作不同次数的萃取处理，经常规HE染色、砂罗铬花青、网状纤维组织化学染色和S-100免疫组织化学染色后，在光镜下观察神经萃取前后的组织形态变化，并比较不同萃取次数对神经结构的影响。结果人体长段胫神经经2次萃取后，其轴突、髓鞘、许旺细胞及其他结缔组织中的细胞均已消失，仅见网格纤维，而神经基底膜管、神经柬膜等纤维性支架保存完整，与未经萃取的神经相仿。萃取1次者仍残留少量细胞碎屑，而萃取3次者，细胞清除更彻底，但纤维性支架结构明显破坏。结论人类长段粗大神经干经化学萃取后不含细胞，而保留有完整的纤维性支架结构。化学萃取法制备人类长段粗大去细胞神经可行。     

p57 Kip2免疫组织化学染色鉴别葡萄胎和流产伴绒毛水肿的意义

目的 探讨p57kip2免疫组织化学染色鉴别葡萄胎和流产伴绒毛水肿的意义.方法 观察组织学伴有绒毛水肿的诊断病例58例(完全性葡萄胎18例、部分性葡萄胎19例、流产伴绒毛水肿11例、不明确流产伴绒毛水肿和葡萄胎分类的10例)以及正常胎盘3例的p57kip2免疫组织化学染色表达情况.结果 正常绒毛、部分性葡萄胎、流产伴绒毛水肿显示p57kip2阳性,核表达于细胞滋养细胞和绒毛问质细胞,而完全性葡萄胎在滋养细胞和绒毛问质细胞上显示阴性.根据组织学形态诊断分类与结合p57kip2诊断结果比较分析,在p57kip2染色的敏感度96%(46/48).结论 p57kip2免疫组织化学染色在鉴别葡萄胎和流产伴绒毛水肿是一个有价值的诊断方法,是葡萄胎敏感和特异的标记.     

细胞学涂片HE褪染免疫细胞化学的临床应用

在胸部恶性肿瘤诊断中，纤维支气管镜涂片和胸水细胞学涂片检查是重要手段之一，但因涂片面积大、耗费试剂多、标本制作重复性差等方面的原因，使免疫细胞化学(Immunocytochemistry，ICC)不能像病理组织学作免疫组织化学(Immunohistochemistry，IHC)一样常规开展。笔者在临床细胞学检验中，对经HE染色的细胞学涂片中的可疑     

子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的分离培养

目的　建立一种获得高产量子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的分离培养方法。方法　通过胶原酶消化法、系列过滤法及贴壁纯化等技术分离纯化培养人子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞 ,并通过光镜及免疫细胞化学染色进行鉴定。结果　腺上皮细胞呈蝌蚪形 ,漩涡状生长。角蛋白免疫细胞化学染色阳性 ,纯度约 90 %。基质细胞呈梭形或多角形 ,平行状生长。波形蛋白染色反应阳性 ,纯度达 95 %。每例子宫肌瘤切除标本可获得 (10～2 5 )× 10 6 原代基质细胞和 (4～ 6 )× 10 6 原代腺上皮细胞 ,每例诊断性刮宫获得的原代细胞数约为前者的 1/ 2～2 / 3。结论　改良培养程序可获得高产量的纯化的子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞。     

子宫颈涂片小细胞癌1例报告

目的 探讨子宫颈小细胞癌(small cell carcinoma of cervix,SCCC)的临床细胞学特征、诊断及鉴别诊断.方法 用膜式超薄液基细胞学检测技术(ThinPrep cytology test,TCT)技术,通过巴氏染色,用光镜及免疫组化方法观察其细胞学表现,同时复习相关文献.结果 TCT细胞涂片上可见较多出血坏死及核碎片背景中见散在及团簇状排列的瘤细胞,细胞较小,约淋巴细胞2～3倍,细胞膜不清,胞质少,细胞核圆形及卵圆形,核浆比增大,核膜增厚,细颗粒状染色质,部分瘤细胞1-2个细小核仁,可见病理性核分裂.细胞块切片免疫细胞化学染色:细胞角蛋白(CK)、嗜铬素A(CgA,)、突触素(Syn)强阳性,人乳头状瘤病毒(HPV)18阳性,高分子角蛋白(34βE12)阴性.结论 宫颈原发性小细胞癌是一种宫颈罕见的高度恶性肿瘤,主要依据细胞学形态,结合免疫组织化染色有助于协助诊断.     

评价乳腺癌免疫组织化学染色及质量控制的临床效果

目的 分析乳腺癌免疫组织化学染色的临床效果及质量控制的方式。方法 选入我院于2017年10月至2018年10月进行治疗的乳腺癌患者50例,将50例患者的病理标本分成两份,一份进行免疫组织化学染色,列为免疫组织化学染色组,另外一份进行常规处理,列为常规组,对比两组不同的染色方式的结果、免疫组织化学染色组的染色结果、两种检测方式的显色结果以及染色质量优良率、染色方式的满意度。结果 (1)免疫组织化学染色诊断准确率优于常规组（90.00%vs. 60.00%）,组间具有统计学意义（χ2=12.0000,P=0.0005）。(2)免疫组织化学染色组进行ER、PR、CerbB-2、P53、Ki67检测,阳性率分别为76.00%、56.00%、58.00%、72.00%、80.00%。(3)常规组染色后较为鲜艳,并且细胞核呈现出较为鲜明的蓝色,细胞质则能够出现深浅不一的粉红色,核仁为红色;免疫组织化学染色组：ER、PR中切片为深褐色,CerbB-2下切片的细胞核为蓝色,细胞膜为褐色。免疫组织化学染色组方案下的染色质量优良率为96.00%,常规组方案下的染色质量优良率为84.00%,免疫组织化学染色...