缺氧预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑细胞凋亡的影响

目的 :研究缺氧预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑组织缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)mRNA及脑细胞凋亡的影响。方法 :新生 7日龄SD大鼠随机分为空白对照组 (n =12 )、假手术组 (n =12 )、缺氧缺血组 (HIBD组 ,n =15 )和缺氧预处理后缺氧缺血组 (HPC组 ,n =2 1) ,缺氧预处理组在行HIBD模型前 2 4h吸 8%浓度氧 3h。各组大鼠均于 14日龄处死。观察大鼠脑组织神经病理学变化 ;采用末端脱氧核苷酸介导的X DUTP缺口末端标记法测定神经元凋亡的情况 ;采用定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)法测定大鼠脑组织HIF 1αmRNA的表达。结果 :HPC组脑皮层神经细胞变性坏死较HIBD组减轻 ,HPC组大鼠脑组织HIF 1α基因的表达较HIBD组下降 ,HPC组脑细胞凋亡数目较HIBD组减少。结论 :缺氧预处理可保护新生大鼠缺氧缺血性脑损伤 ,减弱HIF 1αmRNA的表达 ,减少脑细胞凋亡     

缺氧缺血大鼠脑组织GLUT-1表达及地塞米松对其表达的影响

目的观察葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)大鼠脑组织的表达,了解地塞米松对GLUT-1表达的影响。方法7日龄新生SD大鼠,分为对照组、缺氧缺血组、地塞米松给药组0.5mg/(kg.d),于HIBD模型制成后0,6,12,24h及72h处死,取脑组织作免疫组化图像分析,观察各组GLUT-1蛋白水平的变化。结果HIBD大鼠脑内GLUT-1表达较对照组增高,24h达高峰(P<0.05);地塞米松给药组GLUT-1蛋白水平6h即达高峰,在72h内维持在较HIBD组更高的水平(P<0.05)。结论HIBD大鼠脑GLUT-1蛋白表达增加;地塞米松可迅速提高GLUT-1蛋白水平并使其维持在较HIBD组更高的水平。在HIBD后早期给予适当剂量的地塞米松可能具有脑保护作用。     

新生鼠缺氧缺血性脑损伤脑组织NgR mRNA和NgR蛋白表达及意义

目的 观察NgR mRNA及NgR蛋白在缺氧缺血新生鼠脑组织中表达量的变化,并探讨其意义.方法 采用经右侧颈总动脉结扎加缺氧处理7日龄SD大鼠制作缺氧缺血脑损伤(HIBD)模型,应用RT-PCR方法检测HIBD新生鼠脑组织NgR mRNA表达的变化;免疫组织化学方法检测NgR蛋白的分布及含量变化;Western Blot检测NgR蛋白含量变化.结果 HIBD新生SD大鼠脑中NgR mRNA与对照组相比,6 h开始升高,12 h达到峰值,24 h有所下降但仍持续在较高水平(P均＜0.05);免疫组织化学方法观察到NgR蛋白在正常新生SD大鼠脑中分布广泛,大脑皮层及海马均有较多NgR分布;免疫组织化学方法和Western Blot方法均发现HIBD新生SD大鼠脑中NgR蛋白6 h开始升高,24 h达到高峰,72 h仍持续在较高水平(P均＜0.05),随即开始下降,与对照组的差异无统计学意义.结论 缺氧缺血性损伤时,NgR mRNA和NgR蛋白含量升高与抑制神经元再生有一定关系,随即出现的含量下降可能与神经元细胞随缺氧缺血时间延长而出现坏死,数量进一步减少,进而使在神经元上表达的NgR随之减少有一定关系.     

川芎嗪对新生鼠缺血缺氧脑损伤HIF-1α表达的影响

目的:探讨实验性大鼠缺血缺氧脑损伤(HIBD)时低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及川芎嗪对HIF-1ɑ表达的影响?方法:新生SD大鼠结扎左侧颈总动脉并置于缺氧环境中,制备HIBD模型?川芎嗪干预组在缺血前和缺血后腹腔注射川芎嗪(50 mg/kg)?应用逆转录PCR和免疫组化方法观察川芎嗪对HIBD新生鼠皮质部位HIF-1α mRNA 及蛋白表达的影响?结果:缺血缺氧2 h后HIF-1α mRNA 及蛋白表达有增加的趋势,但与假手术组相比无统计学意义(P > 0.05);川芎嗪干预组HIF-1α mRNA 及蛋白表达显著增加,明显高于缺血缺氧组(P < 0.05)?结论:川芎嗪促进新生鼠缺血缺氧脑损伤皮质部位HIF-1α mRNA 及蛋白表达,是其神经保护作用的重要机制?     

缺氧预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑细胞凋亡的影响

目的：研究缺氧预处理对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑组织缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA及脑细胞凋亡的影响。方法：新生7日龄SD大鼠随机分为空白对照组(n=12)、假手术组(n=12)、缺氧缺血组(HIBD组，n=15)和缺氧预处理后缺氧缺血组(HPC组，n=21)，缺氧预处理组在行HIBD模型前24h吸8％浓度氧3h。各组大鼠均于14日龄处死。观察大鼠脑组织神经病理学变化；采用末端脱氧核苷酸介导的X-DUTP缺口末端标记法测定神经元凋亡的情况；采用定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法测定大鼠脑组织HIF-1αmRNA的表达。结果：HPC组脑皮层神经细胞变性坏死较HIBD组减轻，HPC组大鼠脑组织HIF-1α基因的表达较HIBD组下降，HPC组脑细胞凋亡数目较HIBD组减少。结论：缺氧预处理可保护新生大鼠缺氧缺血性脑损伤，减弱HIF-1α mRNA的表达，减少脑细胞凋亡。     

新生鼠缺氧缺血脑损伤脑组织中巨噬细胞炎性蛋白1-αmRNA的表达及意义

目的 观察新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑组织中趋化因子巨噬细胞炎性蛋白1-α(MIP-1α)mRNA表达的变化。方法 采用7d龄SD大鼠HIBD模型。用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应方法,动态定量监测皮质海马区脑组织中MIP-1α mRNA在HIBD后不同时点表达的变化。结果 HIBD后6h缺血侧脑组织MIP-1α mRNA表达至高峰,为假手术对照组的近10倍。12及24h组与假手术对照组相比有显著性差异,72h降至对照组水平。结论 HIBD后MIP-1αmRNA表达显著升高,提示MIP-1α可能作为炎性介质在缺氧缺血脑损伤过程中发挥了重要的作用。     

新生大鼠脑缺氧缺血后μ-calpain mRNA及蛋白的表达

目的 观察μ-calpain基因及蛋白在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage, HIBD)脑组织中的表达情况,探讨其在HIBD发生中的作用.方法 7日龄新生SD大鼠随机分为假手术对照组及HIBD后0 h、6 h、12 h、24 h、48 h及72 h各组,采用实时荧光定量RT-PCR及Western blot技术观察μ-calpain mRNA及蛋白随时间变化的表达情况.结果 HIBD后6 h损伤侧脑组织μ-calpain mRNA开始增高,24 h达到高峰(P＜0.05),48～72 h下降,但是仍然高于对照组(P＜0.05);μ-calpain蛋白的活性在HIBD后6～12 h表达增高(P＜0.05),24 h达到高峰(P＜0.01),48～72 h仍处于较高水平(P＜0.05).结论 μ-calpain mRNA及蛋白在HIBD新生鼠脑中表达增高,可能参与了新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的发生.     

新生大鼠缺氧缺血后海马区细胞凋亡及脑红蛋白表达的实验研究

目的探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后海马CA1区脑红蛋白（Ngb）的表达及意义。方法选用60只新生7日龄Wistar大鼠,随机分为三组：sham组（n=6）、正常对照组（n=6）、HIBD组（n=48）。HIBD组建立大鼠缺氧缺血性脑损伤模型以后,分别在HIBD后3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h、7 d、14 d处死老鼠取材,采用免疫组织化学染色方法检测各组海马CA1区Ngb的表达变化情况。结果 HIBD组Ngb阳性细胞数在缺血缺氧后3 h开始下降,其中6 h、12 h、24 h呈逐渐下降趋势（P〈0.05）,到48 h时达最低水平,7 d时与sham组和正常对照比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,14 d时Ngb阳性细胞数基本恢复sham组和正常对照组水平。结论 HIBD后Ngb蛋白的表达呈时相性变化,其表达在缺氧缺血脑损伤中具有神经保护因子的作用。     

加味补阳还五汤对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤低氧诱导因子-1表达的调控

[目的]建立新生SD大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型,观察低氧诱导因子-1（HIF-1）的表达及加味补阳还五汤对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用,为新生儿缺氧缺血性脑损伤提供新的治疗思路。[方法]新生7d龄SD大鼠140只,随机分为空白组（28只）、HIBD模型组（28只）及加味补阳还五汤组（84只）,加味补阳还五汤组按给药剂量分为高、中、低剂量组。每组分别在规定时间点处死,光镜下观察各组大鼠左侧脑组织HE染色的病理改变、组织中HIF-1α蛋白表达,并通过RT-PCR检测HIF-1基因表达。[结果]缺氧缺血后新生大鼠出现不同程度的行为异常,1h后逐渐由兴奋转为抑制,少数发生抽搐;HE染色结果显示,加味补阳还五汤高剂量组各时间点损伤程度比中、低剂量组均有明显减轻;免疫组化结果显示,加味补阳还五汤各剂量组各时间点HIF-1α阳性细胞数均较空白组多,高剂量组各时间点HIF-1α阳性细胞数均较HIBD组明显增多;荧光定量PCR检测结果表明加味补阳还五汤高剂量组HIF-1的表达量高于其他组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。[结论]加味补阳还五汤能通过上调HIF-1的表达来减轻缺氧缺血所致的脑损伤,此研究为临床治疗新生儿缺氧缺血性脑损伤提供了新的治疗思路。     

母爱剥夺缺氧缺血性脑损伤大鼠海马UCHL-1的表达

目的 探讨泛素羧基末端水解酶-1(ubiquitin carboxyl-terminal esterase L-1,UCHL-1)在母爱剥夺缺氧缺血性脑损伤大鼠海马中的定位及蛋白表达变化.方法 选取7日龄SD大鼠作为母爱剥夺缺氧缺血性脑损伤实验模型,随机分为3组:假手术组(Sham组)、缺氧缺血性脑损伤(HIBD)组、母爱剥夺(maternal deprivation,MD)组.实验第35天留取大脑海马组织,通过免疫组织化学法观察UCHL-1的定位表达变化,采用Western Blot (WB)观察UCHL-1的蛋白表达变化.结果 免疫组织化学结果显示,与Sham组比较,HIBD组和MD组UCHL-1的阳性细胞数量均显著减少(P＜0.001);与HIBD组相比,MD组UCHL-1的阳性细胞数显著减少(P=0.002).WB结果显示,与Sham组比较,HIBD组和MD组UCHL-1蛋白表达含量均显著下降(P＜0.001);与HIBD组相比,MD组UCHL-1蛋白表达含量显著下降(P=0.002).结论 UCHL-1在母爱剥夺脑缺氧缺血大鼠海马中表达显著下降,UCHL-1可能对母爱剥夺缺氧缺血性脑损伤海马神经细胞修复发挥重要作用.     

新生大鼠脑缺氧缺血损伤时的COX-2表达变化

目的采用免疫组化方法研究新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时环氧合酶2(COX-2)的表达变化.方法 通过制备新生大鼠左脑的HIBD模型,应用免疫组化方法研究2、6、24、72 h、7 d时不同时相点脑皮层及海马CA1区COX-2免疫化学阳性细胞的表达及免疫细胞化学阳性数表达变化.结果 7日龄Wistar大鼠对照组可见微量COX-2阳性表达,HIBD 2 h后即见明显增高,并于6～24h出现表达高峰,其后出现下降,并可维持明显表达至7d.结论新生鼠HIBD可诱导COX-2表达,并可能参与HIBD后的神经毒性损伤.     

尤瑞克林对脑缺血再灌注大鼠脑组织中IGF-1和IGF-1R表达水平的影响及其机制

目的:观察尤瑞克林对大鼠脑缺血再灌注损伤后缺血区脑组织中胰岛素样生长因子1(IGF-1)及其受体(IGF-1R)表达的影响,分析尤瑞克林的脑保护机制。方法:24只成年SD大鼠随机分为假手术组(n=8)、模型组(n=8)和实验组(n=8)。以线栓法制作大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注模型,假手术组大鼠接受相似手术处理,但是不插入线栓,实验组大鼠再灌注后5 min给予尤瑞克林,假手术组和模型组正常喂养。在缺血2 h再灌注48 h后断头取脑,采用RT-PCR、免疫组织化学和Western blotting法检测各组大鼠缺血区脑组织中IGF-1和IGF-1R mRNA和蛋白的表达及阳性细胞数。结果:与假手术组比较,模型组和实验组大鼠缺血区脑组织中IGF-1和IGF-1R mRNA和蛋白的表达水平及阳性细胞数明显升高(P<0.05);与模型组比较,实验组大鼠缺血区脑组织中IGF-1和IGF-1R mRNA和蛋白的表达水平及阳性细胞数明显升高(P<0.05)。结论:尤瑞克林可改善脑缺血再灌注,其机制可能与促进IGF-1和IGF-1R的表达有关联。     

MIF在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的表达及定位研究*

目的：研究巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）在新生SD大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）大脑皮层中的表达变化及与小胶质细胞的定位关系。方法：建立HIBD模型,采用Western Blot检测缺氧缺血再灌注0h、24h、48h、72h大脑皮层中MIF的表达变化,采用免疫荧光组织染色检测缺氧缺血再灌注48h大脑皮层中MIF表达及与小胶质细胞的定位。结果：在HIBD模型中,MIF表达明显升高,在缺氧缺血再灌注48h时表达丰度最高且与小胶质细胞存在共定位关系。结论：HIBD可诱导大脑皮层中小胶质细胞MIF的表达,MIF的上调可能参与了新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的致病过程。     

电针对缺血缺氧新生大鼠脑内神经前体细胞增殖的影响

目的 :探讨电针刺激大椎、百会穴对缺血缺氧脑损伤 (HIBD)新生大鼠脑内神经前体细胞增殖的影响。方法 :7d龄Wistar大鼠 4 2只随机分为假手术对照组、HIBD组、HIBD后电针组 ,后 2组制备半球性HIBD模型。HIBD后电针组在缺血缺氧后第 2d给予电针刺激大椎、百会穴 15min ,1次 /d ,治疗 2个疗程 ,每个疗程 10d ,2个疗程间隔 2d。各组动物均于缺血缺氧后 2 2d处死 ,处死前经腹腔注射Brdu ,采用抗Brdu抗体进行免疫组化染色 ,镜下观察脑内Brdu阳性细胞的分布。结果 :各组Wistar幼鼠脑组织内侧脑室的室管膜下层、齿状回颗粒细胞层下层及胼胝体等有Brdu阳性细胞分布 ;HIBD组Brdu免疫阳性细胞数高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,低于HIBD后电针组(P <0 .0 5 )。结论 :缺血缺氧促进新生大鼠脑内神经前体细胞增殖 ;电针刺激大椎、百会穴可加强缺血缺氧后新生大鼠脑内神经前体细胞增殖     

趋化因子受体CCR2在新生鼠实验性缺氧缺血损伤脑组织中的表达

目的 观察新生鼠实验性缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑组织趋化因子受体2(CCR2)mRNA与蛋白质水平的表达变化,探讨其在HIBD中的作用.方法 采用结扎7 d龄SD大鼠右侧颈总动脉并暴露于8%氧气环境2.5 h制作HIBD模型, 用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应和SDS-PAGE免疫印迹方法,动态定量监测大脑皮质、海马区脑组织中CCR2 mRNA与蛋白质表达水平在HIBD后不同时间点的变化, 假手术组为对照组.结果 HIBD后24 h右侧脑组织CCR2 mRNA水平最高,72 h仍高于对照组(P＜0.05),7 d恢复至对照组水平(P＞0.05);CCR2蛋白表达量在HIBG后24 h最高,高于对照组(P＜0.05), 3 d仍保持高水平表达(P＜0.05),7 d明显下降.结论 HIBD后CCR2 mRNA及蛋白质表达水平显著升高,其动态变化过程与脑损伤发展过程一致,提示CCR2参与了新生动物HIBD的发生.     

蒲黄黄酮对成年雌性大鼠雌孕激素及其受体的影响

目的研究蒲黄黄酮雌激素样效应对成年雌性大鼠血清雌激素、孕激素含量及子宫组织中雌激素受体-α(ER-α)、雌激素受体-β(ER-β)和孕激素受体(PR)表达的影响。方法将SD大鼠60只随机平均分为五组:正常组、三苯氧胺+蒲黄黄酮组、蒲黄黄酮组、己烯雌酚组和三苯氧胺组。采用放射免疫法检测大鼠血清中雌二醇(E2)和孕酮(P)含量,免疫组化法检测各组大鼠子宫组织中雌激素受体-α(ER-α)、雌激素受体-β(ER-β)以及孕激素受体(PR)的表达水平。结果与正常组和三苯氧胺+蒲黄黄酮组相比,蒲黄黄酮组大鼠子宫内膜中ER-α、ER-β和P的阳性细胞表达及血液中E2和P的含量均显著增加(P<0.01);与己烯雌酚组相比,蒲黄黄酮组大鼠子宫内膜中ER-α、ER-β和P的阳性细胞表达及血液中E2和P的含量无明显变化,无统计学意义(P>0.05)。结论蒲黄黄酮能显著提高大鼠子宫内膜ER-α、ER-β和P的阳性细胞表达及血液中E2和P的含量,具有雌激素样效应。     

单核细胞趋化蛋白1mRNA在新生鼠实验性缺氧缺血损伤脑组织中的表达

目的　观察新生鼠实验性缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑组织趋化因子单核细胞趋化蛋白1(MCP 1)mRNA的表达变化,探讨其在HIBD中的作用。方法　采用结扎7日龄SD大鼠右侧颈总动脉并暴露于8%氧气环境2 .5h制作HIBD模型,采用TaqMan实时荧光定量逆转录聚合酶链反应,动态定量监测大脑皮质、海马区脑组织中MCP 1在HIBD后不同时间点表达的变化,假手术组为对照组。结果　HIBD后6h右侧脑组织MCP 1mRNA表达至高峰,显著高于对照组(P <0 .0 5 )。12h组仍高于对照组(P <0 .0 5 ) ,2 4～72h降至接近对照组水平(P >0 .0 5 )。结论　HIBD后MCP 1mRNA表达显著升高,推测MCP 1参与了缺氧缺血脑损伤的过程。     

IGF-1Rα在移植物动脉硬化形成过程增生平滑肌细胞中的表达

目的通过大鼠胸主动脉腹腔移植模型,探讨移植物动脉硬化(CAA)形成过程中增生内、外膜平滑肌细胞IGF-1Rα表达情况,并观察表达程度与平滑肌细胞增殖程度的关系.方法雄性健康纯系Wistar和SD大鼠分别作为供体和受体,分为急性排斥(A组)、免疫耐受组和同系对照组.取腹腔移植胸主动脉标本进行Masson和免疫组化染色,比较移植术后不同时间内、外膜VSMC增生和纤维化程度以及IGF1Rα在增生外膜和内膜平滑肌细胞上的表达水平,IGF-1Rα与α-actin和PCNA表达程度的关系.结果CAA发生后,α-actin阳性细胞出现在外膜,外膜增生和纤维化程度与IGF-1Rα和PCNA的表达程度一致,增生内膜表面有α-actin、IGF-1Rα和PCNA表达.术后A组外膜IGF-1Rα的表达程度逐渐增高(P＜0.01).术后第8周IGF-1Rα的表达程度与α-actin和PCNA相当.结论IGF-1Rα在CAA平滑肌细胞中高度表达,表达程度与血管尤其外膜平滑肌细胞增生程度密切相关.     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时脑细胞VEGF的表达与凋亡的关系

目的 研究缺氧缺血性脑损伤(HIBD)时血管内皮生长因子(VEGF)的表达及其与脑细胞凋亡的关系.方法 利用新生7日龄Wistar大鼠制备HIBD模型.应用HE染色、电镜、原位缺口末端标记(TUNEL)法及免疫组织化学法研究HIBD时脑细胞凋亡情况、VEGF蛋白的表达及两者的关系.结果 HE染色、TUNEL染色及透射电镜结果均证实,新生大鼠HIBD时凋亡是神经细胞主要的死亡形式.与坏死共存,且凋亡的发生先于坏死.免疫组化检测结果发现,VEGF蛋白在正常大鼠脑的各个部位都有表达,缺氧缺血(H1)大鼠VEGF表达明显增强,HI后即刻VEGF表达增强,1d时迭高峰,3d后逐渐减弱;HI后病变严重的皮质、纹状体中心VEGF表达减弱,在病变较轻部位表达较强,海马也存在不均匀分布的VEGF阳性细胞,尤其CAECA3区域可见较多的阳性细胞散在分布.表明HIBD时脑组织中VEGF的表达除与HI后的时间有关外,还与病变严重程度有关.结论 迟发性的细胞凋亡是HIBD加重及病损区扩展的重要因素.VEGF可能参与了HIBD的发病过程,VEGF出现在凋亡细胞较多的部位,表明其可能与脑细胞凋亡密切相关.     

海马区Bcl-2蛋白在新生大鼠脑缺血后的表达

目的：通过研究新生大鼠脑缺血时Bcl-2蛋白在海马区的表达特点,探讨Bcl-2蛋白在缺血缺氧性脑损伤的作用。方法：48只7日龄新生SD大鼠随机分为1个对照组和7个实验组。给动物吸入含有92%氮气和8%氧气混合气体建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）动物模型,分别在脑损伤后不同时间点（0.5、1、3、6、12、24、48、72 h等）断头处死动物,取海马组织,用免疫组织化学方法检测海马脑神经细胞凋亡及Bcl-2蛋白表达情况。结果：TUNEL染色的阳性细胞数与Bcl-2蛋白阳性的细胞数在HIBD后的不同时间点出现分别有显著差异,海马区Bcl-2蛋白阳性细胞在HIBD后立即出现,6 h达到高峰。结论：Bcl-2蛋白强表达于海马缺血区和缺血周边区的神经元,与神经元的存活或死亡有一定联系。