干扰赖氨酰氧化酶基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长、增殖的影响

目的探讨抑制赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)基因表达对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生长、增殖的影响及其机制。方法将乳腺癌MDA-MB-231细胞分为实验组(RNAi组)、阴性对照组(Mock组)和空白对照组(Con组);设计合成特异性慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV)转染MDA-MB-231细胞。以荧光定量PCR检测LOX mRNA及增殖因子Ki-67、cyclinD1的表达;Western blot法检测LOX基因蛋白的表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、细胞集落形成实验观察各组细胞生长及增殖情况。结果转染LOX-RNAi-LV后,MDA-MB-231细胞中LOXmRNA和蛋白表达水平明显降低,细胞生长、增殖能力明显减弱,细胞集落形成率明显降低,相关增殖因子Ki-67和cyclin D1 mRNA的表达均明显下降(P<0.05)。结论转染LOX-RNAi-LV可有效干扰乳腺癌MDA-MB-231细胞中LOX mRNA和蛋白的表达,抑制肿瘤细胞的生长、增殖,其作用机制可能与下调Ki-67、cyclinD1的表达有关。     

干扰LOX表达对MDA-MB-231细胞侵袭迁移影响及其机制的探讨

目的:研究干扰赖氨酰氧化酶(LOX)基因表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231体外侵袭迁移能力的影响,并探讨相关机制及意义。方法:设计合成特异性慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV)转染MDA-MB-231细胞,实时定量PCR检测LOX mRNA和侵袭转移相关因子MMP-2、MMP-9和HIF-1α的mRNA表达,蛋白质印迹法检测LOX蛋白表达,细胞侵袭迁移实验(Transwell)检测细胞侵袭迁移能力。结果:转染LOX-RNAi-LV后,乳腺癌MDA-MB-231细胞LOXmRNA和蛋白表达水平明显降低,与空白组相比,抑制率分别为89.2%和82.97%。MMP-2(F=225.271,P=0.0000)、MMP-9(F=35.373,P=0.000 01)和低氧诱导因子HIF-1α(F=341.081,P=0.0000)的mRNA表达均明显降低。细胞侵袭迁移实验显示,干扰组穿过Transwell小室滤过膜的细胞数明显少于对照组(侵袭实验F=269.557,P=0.000 5;迁移实验F=164.321,P=0.000 3)。结论:转染LOX-RNAi-LV能有效地干扰LOX在乳腺癌细胞MDA-MB-231中表达,抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移能力,其作用机制可能与下调MMP-2、MMP-9和HIF-1α表达有关。     

LOX在乳腺癌中的表达及与MMP-2、MMP-9相关性的实验研究

目的 探讨赖氨酰氧化酶(LOX)在不同侵袭、转移潜能的乳腺癌细胞株的表达及LOX与MMP-2、MMP-9的关系.方法 以RT-PCR检测LOX mRNA在乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7的表达水平.40只裸鼠随机分为2组,每组裸鼠的乳腺脂肪垫内分别接种上述不同的细胞,建立人乳腺癌原位移植瘤模型.6周后测定肿瘤体积,SP免疫组织化学法检测移植瘤中LOX、MMP-2、MMP-9的表达情况,并对数据进行统计学处理.结果 高侵袭、转移潜能的乳腺癌细胞后第6天均有肿瘤形成,至6周时MDA-MB-231组肿瘤体积为(758.84±241.08)mm3,MCF-7组为(210.36±101.06)mm3,差异有统计学意义(P＜0.01).LOX与MMP-2、MMP-9的表达呈正相关(P＜0.01).结论 乳腺癌细胞高侵袭、转移的潜能可能与LOX、MMP-2、MMP-9的高表达及其相互之间协同作用相关.     

人乳腺癌裸鼠移植瘤组织Duffy抗原趋化因子受体与Her-2蛋白表达相关性的探讨

目的:探讨人乳腺癌裸鼠移植瘤组织Duffy抗原趋化因子受体(DARC)与Her-2蛋白表达的相关性.方法:建立人乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型,按细胞类型分为DARC低表达的MDA-MB-231裸鼠移植瘤、转染空质粒的MDA-MB-231(MDA-MB-231-vect)裸鼠移植瘤及转染DARC cDNA的MDA-MB-231(MDA-MB-231-DARC)裸鼠移植瘤.隔天观察裸小鼠的健康状况和肿瘤细胞的成瘤性,成瘤后每周测量1次各移植瘤的体积,至第2周及第4周时,分别处死各组实验动物8只,获取移植瘤,免疫组化检测原位移植瘤组织中DARC及Her-2蛋白表达;选取中国福利会国际和平妇幼保健院乳腺癌临床组织标本80例,通过免疫组化技术检测DARC和Her-2蛋白表达,并对其相关性进行分析.结果:虽然各组动物的成瘤率均为100%,但DARC转染后的 MDA-MB-231移植瘤(MDA-MB-231-DARC移植瘤)生长明显减慢(P=0.007),且裸鼠移植瘤组织中Her-2蛋白呈低表达,转染与未转染DARC的裸鼠移植瘤组织中Her-2蛋白表达差异有统计学意义,χ2=69.83,P=0.045;对人乳腺癌临床组织标本免疫组化检测结果显示,Her-2蛋白表达与DARC蛋白呈负相关,r=-0.464,P=0.026.结论:人乳腺癌裸鼠移植瘤组织中DARC的过表达抑制Her-2蛋白表达.     

RSK4对乳腺癌细胞增殖侵袭黏附相关基因表达水平的影响

[目的]探讨核糖体S6蛋白激酶4(ribosomal protein S6 kinase 4 gene,RSK4)基因对乳腺癌细胞Ki-67、cyclinD1、CXCR4、HIF-1 α、E-cadherin基因转录影响.[方法]分别构建RSK4干扰载体、过表达载体转染至乳腺癌MCF-7细胞及MDA-MB-231细胞中,RT-PCR比较实验组和对照组Ki-67、cyclinD1、CXCR4、HIF-1α及E-cadherin mRNA表达水平.[结果]干扰组CXCR4、HIF-1α、cyclinD1及Ki-67mRNA的转录水平分别为2.238±0.0711、1.672 ±0.0833、1.540±0.0115、1.390±0.0902,与空白对照组、阴性对照组相比均升高,但Ecadherin mRNA的转录水平明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).过表达组Ki-67、cyclinD1、CXCR4和HIF-1α转录水平分别是0.603±0.0066、0.460±0.0155、0.424±0.0198、0.205±0.0082,与空白对照组、阴性对照组相比均降低,而E-cadherin mRNA转录水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05).[结论] RSK4基因表达影响乳腺癌细胞增殖黏附相关基因Ki-67、cyclinD1、CXCR4、HIF-1α和E-cadherin mRNA转录水平.     

姜黄素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤放射增敏的作用

背景与目的:姜黄素(curcumin)能有效增强放射线对肿瘤的作用,但其作用机制尚不清楚。该研究旨在探讨姜黄素是否对人乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤有放射增敏效应,并探讨其协同抑制效应的机制。方法:人乳腺癌裸鼠移植瘤模型建立成功后,将裸鼠随机分为4组:对照组、药物组、放射组和联合组(姜黄素+放射),每组6只;检测裸鼠移植瘤的体积及体质量,计算抑瘤率,并绘制移植瘤的生长曲线;免疫组织化学法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)及缺氧诱导因子-1α(hypoxiainducible factor-1α,HIF-1α)的蛋白表达。结果:联合组的抑瘤率[(71.62±6.11)%]显著高于放射组[(41.76±5.84)%](P<0.05)。免疫组化结果显示,单纯放射不能使VEGF表达下调(P>0.05),姜黄素联合放射能明显抑制VEGF的表达(P<0.01)。Western blot结果显示,姜黄素与放射均可抑制MMP-9的表达,两者联用较单纯放射效果更加显著(P<0.05);单纯放射不能抑制HIF-1α的表达(P>0.05),姜黄素联合放射HIF-1α蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:姜黄素可以增强乳腺癌裸鼠移植瘤的放射敏感性,其机制可能是通过下调VEGF、MMP-9和HIF-1α的蛋白表达而发挥作用。     

PAMAM-NK4纳米复合物对乳腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨新型纳米材料聚酰胺-胺型树枝状高聚合物(polyamidoamine dendrimer,PAMAM)介导NK4基因对乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞生长的抑制作用及对MDA-MB-231细胞移植瘤裸鼠模型的治疗作用.方法:制备PAMAM-NK4纳米复合物颗粒,纳米复合物和空载体PAMAM分别转染MDA-MB-231和MCF-7细胞作为实验组和对照组.MTT实验、West-ern blotting和流式细胞术分别检测转染PAMAM-NK4对细胞增殖、NK4蛋白表达和细胞凋亡的影响.40只雌性裸鼠经皮下注射建立MDA-MB-231细胞移植瘤裸鼠模型,随机分成4组,每组10只裸鼠:空白组肿瘤接种部位旁皮下注射0.2 ml 0.9％NaCl溶液、空载体组注射0.2ml含100μg PAMAM-LacZ质粒的溶液、给药组注射0.2 ml含100 μg PAMAM-NK4质粒的溶液、阳性对照组腹腔注射0.2 ml多柔比星(100 μg)溶液.连续注射7d,第30天处死裸鼠,完整摘除肿瘤,测量肿瘤体积和质量.Western blotting检测各组移植瘤组织NK4蛋白表达.结果:PAMAM-NK4纳米粒转染MDA-MB-231、MCF-7细胞后能够稳定表达NK4蛋白、抑制细胞增殖和增加细胞凋亡率.成功建立MDA-MB-231细胞移植瘤裸鼠模型,给药组和阳性对照组肿瘤体积及质量显著低于空白组(P＜0.05),且安全性良好;给药组NK4蛋白表达显著高于空白组(P＜0.05).结论:PAMAM-NK4纳米粒对乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞生长具有抑制作用,并对人乳腺癌细胞移植瘤裸鼠模型具有治疗作用.     

HIF-1α基因沉默对人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤生长及survivin表达的影响

目的观察缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）基因沉默对肺癌的抑瘤效应和survivin表达的影响。方法将实验用肺腺癌A549细胞分为空白对照组、无意义序列转染组和实验组,接种裸鼠,建立裸鼠荷瘤模型,观测HIF-1α-MiRNA对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制作用和对survivin表达的影响。采用免疫组化SP法,检测HIF-1α和survivin蛋白在裸鼠移植瘤中的表达。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测HIF-1α和survivin mRNA的表达。采用原位末端标记（TUNEL）法检测肿瘤组织中细胞凋亡。结果实验组裸鼠肿瘤的生长速度较空白对照组、无意义序列转染组明显减慢（P〈0.05）。接种60 d后处死裸鼠,实验组裸鼠的肿瘤重量为（0.59±0.28）g,明显轻于空白对照组[（1.90±0.18）g]和无意义序列转染组[（1.66±0.24）g,P〈0.01]。实验组肿瘤组织中HIF-1αmRNA和蛋白的相对表达量分别为（0.45±0.04）%和（24.56±5.83）%,survivin mRNA和蛋白的相对表达量分别为（0.32±0.02）%和（29.08±3.99）%,均明显低于空白对照组、无意义序列转染组（P均〈0.05）。但实验组肿瘤组织中凋亡细胞的数量显著高于对照组。结论以HIF-1α为靶点的基因治疗,可能通过下调靶基因survivin的表达促进肺癌细胞凋亡,发挥抑制肿瘤生长的作用。     

藏红花素对乳腺癌血管生成作用的实验研究

目的 探讨藏红花素（Crocin）对乳腺癌血管生成作用及可能机制。方法 MTT法检测Crocin对人乳腺癌细胞MDA-MB-231及人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的增殖抑制作用,并筛选出合适的Crocin浓度;流式细胞术检测Crocin对MDA-MB-231细胞凋亡和周期的影响;Transwell及小管形成实验检测Crocin对HUVEC细胞迁移和小管形成的抑制作用;构建乳腺癌MDA-MB-231裸鼠移植瘤模型,给予7次Crocin（5 mg/ml）治疗,免疫组化检测Crocin治疗后裸鼠移植瘤组织中CD34及Ki-67的表达。结果 MTT法检测显示,Crocin对乳腺癌细胞MDA-MB-231有显著的增殖抑制作用（P＜0.05）,其48 h的半数抑制浓度（IC50）为5.0 mg／ml;而Crocin作用24 h时对HUVEC细胞有轻度增殖抑制作用,但不呈剂量依赖性,当Crocin作用48 h和72 h时,其增殖抑制作用明显增加,呈剂量依赖性,其48 h的IC50为5.97 mg／ml。流式细胞仪检测显示,Crocin可诱导MDA-MB-231细胞凋亡（P＜0.05）,还可诱导细胞阻滞于G2／M期,呈剂量依赖性（P＜0.05）。Transwell及小管形成实验显示,Crocin可抑制HUVEC细胞迁移（P＜0.05）和小管形成（P＜0.05）,均呈剂量依赖性。裸鼠皮下移植瘤实验显示,Crocin 5.0 mg／ml治疗后,治疗组较空白对照组移植瘤生长缓慢。空白对照组与治疗组CD34表达量分别为26.00±2.65和14.67±4.16（P＜0.05）,Ki-67表达量分别为502.67±88.48和262.67±75.08,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 Crocin具有一定的抗血管生成作用,可能与其可以在体内抑制肿瘤细胞增殖、降低微血管密度,在体外可抑制血管内皮细胞增殖、迁移和小管形成的作用相关,具体的分子机制还有待进一步研究。     

延龄草总皂苷抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231裸鼠移植瘤的增殖和促进凋亡作用

目的:观察延龄草总皂苷对乳腺癌细胞MDA-MB-231裸鼠皮下移植瘤的影响及相关机制。方法:培养乳腺癌细胞MDA-MB-231,接种至BALB/c裸鼠背部皮下。接种后第5天通过腹腔注射的方式给裸鼠予延龄草总皂苷治疗,每隔3天测量移植瘤的体积以及裸鼠的体重;实验结束时,采用TUNEL试剂盒检测移植瘤细胞的凋亡情况;Western blot法检测凋亡相关蛋白剪切型caspase-3,8,9表达的变化。结果:延龄草总皂苷可有效地抑制裸鼠移植瘤的增殖,实验结束时,肿瘤的体积分别为:模型组(1142.24±164.32)mm3,延龄草总皂苷(5 mg/kg)(552.90±49.71)mm3,延龄草总皂苷(10 mg/kg)(269.78±48.84)mm3。延龄草总皂苷能诱导移植瘤细胞的凋亡,可浓度依赖性地促进细胞中剪切型caspase-3,9的表达。结论:延龄草总皂苷可有效地抑制MDA-MB-231裸鼠移植瘤的增殖,其方式可能通过caspase依赖的方式促使MDA-MB-231发生凋亡。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Management of intracranial metastases of differentiated carcinoma of thyroid

Summary Brain metastases in differentiated carinoma of the thyroid is a rare occurrence. We treated five documented cases of carcinoma of thyroid with brain metastases out of 400 cases of thyroid cancer treated between 1972 to 1993. 4 were females out of which one was pregnant during the appearance of brain metastases. All cases were treated with thyroidectomy, and radioiodine as primary therapy. Brain metastases developed 6 months to 11 years following treatment of the primary and were treated with radiotherapy and suppressive levothyroxine. We observed the beneficial effect of suppressive thyroxine and the poor prognosis associated with pregnancy and withdrawl of thyroid replacement therapy. 3 of the 5 patients are alive 12–23 months after treatment for brain metastases, while 2 patients died at 4 months and 7 years post brain metastases due to pulmonary and hepatic failure, respectively.     

胆囊腺瘤癌变的相关因素分析

目的:探讨胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性。方法:应用ROC曲线,计算胆囊腺瘤癌变的肿瘤大小临界值。应用χ2独立性检验,计算胆囊腺瘤癌变与临床因素的相关性、临床表现与肿瘤位置的相关性。结果:肿瘤良恶性临界值为2.27 cm。胆囊腺瘤癌变与患者的性别、年龄、是否合并结石无明显相关性（P＞0.05）,而与肿瘤大小、肿瘤数目、形态、超声下是否有血流(P＜0.05)等临床病理特征有明显相关性。临床症状与肿瘤是否位于胆囊颈部有明显相关性(P＜0.05)。结论:胆囊腺瘤在超声扫描下表现为单发、无蒂、有血流、直径大于2.27 cm,应高度怀疑已有恶变。肿瘤位于胆囊颈部可引起右上腹胀痛、疼痛向右背部放射、恶心呕吐等临床表现。     

乳腺叶状囊肉瘤320例诊治分析

目的探讨乳腺叶状囊肉瘤临床诊断和治疗方法。方法回顾分析经手术病理确诊为乳腺叶状囊肉瘤的320例患者的诊断和治疗情况。结果行乳腺X片检查121例,B超检查25例,近红外检查21例,针吸细胞学检查42例;15例(12.4%)乳腺X片检查及3例(14.3%)近红外检查诊断为乳腺叶状囊肉瘤。临床诊断正确率为17.5%(56/320),误诊率为82.5%(264/320)。随访253例患者,其中局部复发45例(17.8%),远处转移死亡13例(5.1%)。结论乳腺叶状囊肉瘤诊断需常规病理检查,治疗宜行局部广泛切除或全乳切除。     

恶性肿瘤肝转移假性肝硬化发生机制及诊疗的研究进展

随着对恶性肿瘤的深入研究,越来越多的肿瘤患者接受到更规范更多线的治疗.更多线的化疗及靶向治疗,使一部分恶性肿瘤肝转移患者的肝脏发生类似肝硬化的形态学及临床改变,称之为假性肝硬化.由于假性肝硬化罕见,对于它的认识多来自于个案报道.因此,本文通过综述国内外关于假性肝硬化的个案报道及相关研究,对其发生机制、影像学及临床表现和...